乳腺癌及其转移性淋巴结中CD44变异体表达的初探
作者：许 奕 仇生龙
单位：许 奕(上海市第一人民医院(上海 200080)放射科放疗室) 仇生龙(普外科)
关键词：CD44变异体；乳腺肿瘤；淋巴结转移；逆转录-聚合酶链反应
肿瘤990203 目的 研究CD44变异体在乳腺癌诊断中的价值。 方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例乳腺癌原发灶和10例腋窝转移性淋巴结，以及30例乳腺良性肿块周边正常组织的标本中CD44变异体的表达。 结果 20例乳腺癌原发灶中18例及10例腋窝转移淋巴结中10例有275 bp CD44变异体表达，而30例乳腺良性肿块周边正常组织均无275 bp CD44变异体表达。 结论 CD44变异体的检测可以作为乳腺癌诊断的指标。
, 百拇医药
A PRELIMINARY STUDY ON CD44 VARIANT EXPRESSION IN PRIMARY BREAST CANCER AND ITS METASTATIC AXILLARY NODES
Xu Yi,Qiu Shenlong,Room of Radiation Oncology,Department of General Surgery,Shanghai First People Hospital 200080
Objective：To study the value of CD44 variant in the diagnosis of breast cancer.Methods：Expression of 275 bp CD44 variant was detected for in normal tissue from benign breast disease and tumor tissue from primary spot and metastatic axillary nodes with breast cancer by using RT-PCR.Results：18/20 cases of primary breast cancer and 10/10 cases of metastatic axillary nodes expressed 275 bp CD44 variant,whereas no expression in normal tissue.Conclusion：CD44 variant might be a reliable marker for diagnosis of breast cancer.
, 百拇医药
Key words CD44 variant Breast neoplasms Lymph nodes metastasis Reverse transcription-polymerase chain reaction
CD44是一组功能和结构很复杂的细胞膜表面糖蛋白，包括吞噬细胞的糖蛋白，Lutheran抑制物，Hermes抗原，HUTCH-1和胞外的基质受体(ECM-Ⅲ)等。CD44的编码基因定位于人类第十一号染色体短臂，有20个外显子，其长度达50 kb。由于其第6到第14个外显子可以随机拼接，因此，其基因产物的分子量可以从82到260 kD。CD44蛋白有四个特征性的区域：相对恒定的氨基端，可以随机拼接的可变区，膜区以及胞浆区。正是由于可变的随机拼接，才产生了大量的CD44变异体。
CD44标准型及变异体在一系列的人类正常组织和某些肿瘤组织中表达都被进行过研究[1]。不同的癌肿间CD44变异体的表达结果并不相同，可能提示CD44变异体在各种肿瘤发生机制中的作用不同。
, 百拇医药
目前，关于乳腺癌病人中CD44变异体表达的文献报道极少。本研究拟通过对乳腺癌病人的肿瘤组织及正常对照组组织中的CD44变异体表达研究，探讨CD44变异体表达在乳腺癌发生中的作用，以及为诊断学提供一定的理论依据和实验手段。
材料和方法
材料 收集我院(1996年2月～1996年9月)20例乳腺癌及10例乳腺癌同侧腋窝转移性淋巴结标本；另取同期乳腺良性肿块周边正常组织30例作对照，均经病理证实。
方法 RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)。逆转物引物采用Oligo-T。主要试剂AMV逆转录酶来自Promega公司，Taq DNA聚合酶来自中科院遗传所。Ⅰ型PCR仪由美国PE公司生产，XL型激光密度的扫描仪由瑞典LKB公司生产。其步骤为：①RNA制备，②引物设计，③逆转录：用随机引物(Random Primers)产生cDNA；PCR反应条件：95 ℃ 1 min，62 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，扩增30个循环。
, 百拇医药
PCR引物：5′-TCCCAGACGAAGACAGTCCCTGGA-3′
5′-CACTGGGGTGGAATGTGTCTTGGT-3′
扩增CD44基因可选择性剪切外显子的全部阅读框架。
PCR产物在8%的丙烯酰胺上进行电泳，EB染色观察比较扩增条带。
结 果
由于CD44变异体碱基对含量不同，扩增产物经电泳后，条带显示各不相同，与标准条带比较，确定电泳后CD44变异体的表达。原发乳腺癌20例中全部在83 bp造血系统CD44变异体标准型及479 bp内皮系统CD44变异体(V8-10)有表达，而只有18例在275 bp内皮系统变异体(V8-9)有表达。腋窝转移淋巴结10例示上述三种变异体均有表达。正常组织30例在83 bp造血系统CD44变异体标准型及479 bp内皮系统CD44变异体(V8-10)有表达，而在275 bp内皮系统CD44变异体(V8-9)无表达。
, 百拇医药
CD44变异体扩增条带表达率
例数
83bp造血系统
CD44变异体
标准型
275bp内皮系统
CD44变异体
(V8-9)
479 bp内皮系统
CD44变异体
(V8-10)
, 百拇医药
原发乳腺癌
20
100%
90%
100%
腋窝转移
淋巴结
10
100%
100%
100%
正常组织
30
, 百拇医药
100%
0%
100%
讨 论
本研究分析了CD44变异体在人类乳腺癌中的表达，应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)探测了CD44异构体的主要变异形式。本实验的结果提示：CD44造血系统标准型和内皮系统CD44变异体(V8-10)在正常组、乳腺癌原发灶及转移性淋巴结中没有区别，都出现了83 bp和479 bp的扩增条带，而在原发乳腺癌和转移性淋巴结中出现了275 bp的内皮系统CD44变异体(V8-9)，在原发乳腺癌中高达90%，在转移性淋巴结中更达100%。从统计学角度分析，原发乳腺癌和转移性淋巴结的CD44变异体表达没有显著差异。
, 百拇医药
已知在不同类型的肿瘤中CD44的表达差异很大。在神经系统肿瘤、小细胞肺癌、胃腺癌和胰腺癌中CD44的变异体表达意义不明确[2]。而Canristra等[3]认为CD44可能是卵巢癌腹腔种植的重要介质，减少CD44的表达可以降低腹腔腹水中的癌细胞。Heiden[4]发现人结直肠肿瘤中CD44变异体存在于所有浸润性癌及癌转移灶中，在腺癌性息肉中它的表达与非典型增生区有关，表明与转移有关的CD44变异体在结直肠癌早期即有表达。Jalkanen等人[5]认为非霍奇金氏淋巴瘤的播散与CD44表达数量增加有关。因此，可以通过这些不同类型肿瘤之间的CD44表达差异来寻找共同的致病机制。
本实验结果提示CD44变异体在正常组织和癌肿组织中表达有明显区别，可以做为一项诊断指标为临床服务。尽管本实验结果中原发乳腺癌和转移性淋巴结中CD44均显示出变异体的高表达与无显著性统计学差异，但CD44作为细胞间基质的受体，可能成为归巢受体被肿瘤细胞利用。即肿瘤转移到某种器官有一定的倾向性，或许类似于淋巴细胞归巢机制[5]，表明CD44的表达与肿瘤转移的潜能之间存在密切联系。另外，肿瘤发生的根本机制在于调控细胞的基因失活或激活，CD44在乳腺癌中如此的高表达显示它很可能在肿瘤的发生过程中起重要作用。随着样本的扩大和研究的深入，寻找两者间的联系，使之成为预测肿瘤及转移的一种重要手段是完全可能的。
, 百拇医药
第一作者简介 许 奕，男，大学本科，主治医生。
参 考 文 献
1 Heider KH，Dammrich J,Skroch-Angel P,et al.Differential expression of CD44 splice variants in intestinal and diffuse-type human gastric carcinomas and normal gastric mucosa.Cancer Res,1993,53:4197
2 Mackay CR,Terpe HJ,Stauder R, et al.Expression and modulation of CD44 variant isoforms in humans.J Cell Biol,1994,124:71
, http://www.100md.com
3 Canristra SA，Kangas GS,Niroff J.Binds of ovarian cells to peritoneal mesothelium in vitro is partly mediated by CD44H.Cancer Res,1993,53:3830
4 Heider KH,Horfmann M,Horst E,et al. A human homologue of the rat metastasis-associated variant of CD44 is expressed in colorectal carcinomas and adenomatous polys.J Cell Biol,1992,120:623
5 Jalkanen S,Joensun H,Klemi P, et al. Lymphocyte homing and clinical behaviour of non-Hodgkin′s lymphoma.J Clin Invest,1992,87(7):1835
(收稿：1998-07-07), http://www.100md.com
单位：许 奕(上海市第一人民医院(上海 200080)放射科放疗室) 仇生龙(普外科)
关键词：CD44变异体；乳腺肿瘤；淋巴结转移；逆转录-聚合酶链反应
肿瘤990203 目的 研究CD44变异体在乳腺癌诊断中的价值。 方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例乳腺癌原发灶和10例腋窝转移性淋巴结，以及30例乳腺良性肿块周边正常组织的标本中CD44变异体的表达。 结果 20例乳腺癌原发灶中18例及10例腋窝转移淋巴结中10例有275 bp CD44变异体表达，而30例乳腺良性肿块周边正常组织均无275 bp CD44变异体表达。 结论 CD44变异体的检测可以作为乳腺癌诊断的指标。
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A PRELIMINARY STUDY ON CD44 VARIANT EXPRESSION IN PRIMARY BREAST CANCER AND ITS METASTATIC AXILLARY NODES
Xu Yi,Qiu Shenlong,Room of Radiation Oncology,Department of General Surgery,Shanghai First People Hospital 200080
Objective：To study the value of CD44 variant in the diagnosis of breast cancer.Methods：Expression of 275 bp CD44 variant was detected for in normal tissue from benign breast disease and tumor tissue from primary spot and metastatic axillary nodes with breast cancer by using RT-PCR.Results：18/20 cases of primary breast cancer and 10/10 cases of metastatic axillary nodes expressed 275 bp CD44 variant,whereas no expression in normal tissue.Conclusion：CD44 variant might be a reliable marker for diagnosis of breast cancer.
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Key words CD44 variant Breast neoplasms Lymph nodes metastasis Reverse transcription-polymerase chain reaction
CD44是一组功能和结构很复杂的细胞膜表面糖蛋白，包括吞噬细胞的糖蛋白，Lutheran抑制物，Hermes抗原，HUTCH-1和胞外的基质受体(ECM-Ⅲ)等。CD44的编码基因定位于人类第十一号染色体短臂，有20个外显子，其长度达50 kb。由于其第6到第14个外显子可以随机拼接，因此，其基因产物的分子量可以从82到260 kD。CD44蛋白有四个特征性的区域：相对恒定的氨基端，可以随机拼接的可变区，膜区以及胞浆区。正是由于可变的随机拼接，才产生了大量的CD44变异体。
CD44标准型及变异体在一系列的人类正常组织和某些肿瘤组织中表达都被进行过研究[1]。不同的癌肿间CD44变异体的表达结果并不相同，可能提示CD44变异体在各种肿瘤发生机制中的作用不同。
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目前，关于乳腺癌病人中CD44变异体表达的文献报道极少。本研究拟通过对乳腺癌病人的肿瘤组织及正常对照组组织中的CD44变异体表达研究，探讨CD44变异体表达在乳腺癌发生中的作用，以及为诊断学提供一定的理论依据和实验手段。
材料和方法
材料 收集我院(1996年2月～1996年9月)20例乳腺癌及10例乳腺癌同侧腋窝转移性淋巴结标本；另取同期乳腺良性肿块周边正常组织30例作对照，均经病理证实。
方法 RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)。逆转物引物采用Oligo-T。主要试剂AMV逆转录酶来自Promega公司，Taq DNA聚合酶来自中科院遗传所。Ⅰ型PCR仪由美国PE公司生产，XL型激光密度的扫描仪由瑞典LKB公司生产。其步骤为：①RNA制备，②引物设计，③逆转录：用随机引物(Random Primers)产生cDNA；PCR反应条件：95 ℃ 1 min，62 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，扩增30个循环。
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PCR引物：5′-TCCCAGACGAAGACAGTCCCTGGA-3′
5′-CACTGGGGTGGAATGTGTCTTGGT-3′
扩增CD44基因可选择性剪切外显子的全部阅读框架。
PCR产物在8%的丙烯酰胺上进行电泳，EB染色观察比较扩增条带。
结 果
由于CD44变异体碱基对含量不同，扩增产物经电泳后，条带显示各不相同，与标准条带比较，确定电泳后CD44变异体的表达。原发乳腺癌20例中全部在83 bp造血系统CD44变异体标准型及479 bp内皮系统CD44变异体(V8-10)有表达，而只有18例在275 bp内皮系统变异体(V8-9)有表达。腋窝转移淋巴结10例示上述三种变异体均有表达。正常组织30例在83 bp造血系统CD44变异体标准型及479 bp内皮系统CD44变异体(V8-10)有表达，而在275 bp内皮系统CD44变异体(V8-9)无表达。
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CD44变异体扩增条带表达率
例数
83bp造血系统
CD44变异体
标准型
275bp内皮系统
CD44变异体
(V8-9)
479 bp内皮系统
CD44变异体
(V8-10)
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原发乳腺癌
20
100%
90%
100%
腋窝转移
淋巴结
10
100%
100%
100%
正常组织
30
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100%
0%
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本研究分析了CD44变异体在人类乳腺癌中的表达，应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)探测了CD44异构体的主要变异形式。本实验的结果提示：CD44造血系统标准型和内皮系统CD44变异体(V8-10)在正常组、乳腺癌原发灶及转移性淋巴结中没有区别，都出现了83 bp和479 bp的扩增条带，而在原发乳腺癌和转移性淋巴结中出现了275 bp的内皮系统CD44变异体(V8-9)，在原发乳腺癌中高达90%，在转移性淋巴结中更达100%。从统计学角度分析，原发乳腺癌和转移性淋巴结的CD44变异体表达没有显著差异。
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已知在不同类型的肿瘤中CD44的表达差异很大。在神经系统肿瘤、小细胞肺癌、胃腺癌和胰腺癌中CD44的变异体表达意义不明确[2]。而Canristra等[3]认为CD44可能是卵巢癌腹腔种植的重要介质，减少CD44的表达可以降低腹腔腹水中的癌细胞。Heiden[4]发现人结直肠肿瘤中CD44变异体存在于所有浸润性癌及癌转移灶中，在腺癌性息肉中它的表达与非典型增生区有关，表明与转移有关的CD44变异体在结直肠癌早期即有表达。Jalkanen等人[5]认为非霍奇金氏淋巴瘤的播散与CD44表达数量增加有关。因此，可以通过这些不同类型肿瘤之间的CD44表达差异来寻找共同的致病机制。
本实验结果提示CD44变异体在正常组织和癌肿组织中表达有明显区别，可以做为一项诊断指标为临床服务。尽管本实验结果中原发乳腺癌和转移性淋巴结中CD44均显示出变异体的高表达与无显著性统计学差异，但CD44作为细胞间基质的受体，可能成为归巢受体被肿瘤细胞利用。即肿瘤转移到某种器官有一定的倾向性，或许类似于淋巴细胞归巢机制[5]，表明CD44的表达与肿瘤转移的潜能之间存在密切联系。另外，肿瘤发生的根本机制在于调控细胞的基因失活或激活，CD44在乳腺癌中如此的高表达显示它很可能在肿瘤的发生过程中起重要作用。随着样本的扩大和研究的深入，寻找两者间的联系，使之成为预测肿瘤及转移的一种重要手段是完全可能的。
, 百拇医药
第一作者简介 许 奕，男，大学本科，主治医生。
参 考 文 献
1 Heider KH，Dammrich J,Skroch-Angel P,et al.Differential expression of CD44 splice variants in intestinal and diffuse-type human gastric carcinomas and normal gastric mucosa.Cancer Res,1993,53:4197
2 Mackay CR,Terpe HJ,Stauder R, et al.Expression and modulation of CD44 variant isoforms in humans.J Cell Biol,1994,124:71
, http://www.100md.com
3 Canristra SA，Kangas GS,Niroff J.Binds of ovarian cells to peritoneal mesothelium in vitro is partly mediated by CD44H.Cancer Res,1993,53:3830
4 Heider KH,Horfmann M,Horst E,et al. A human homologue of the rat metastasis-associated variant of CD44 is expressed in colorectal carcinomas and adenomatous polys.J Cell Biol,1992,120:623
5 Jalkanen S,Joensun H,Klemi P, et al. Lymphocyte homing and clinical behaviour of non-Hodgkin′s lymphoma.J Clin Invest,1992,87(7):1835
(收稿：1998-07-07), http://www.100md.com