豚鼠应激性胃溃疡模型的制作与验证的实验研究
作者：翁泰来 张锡流 叶星江 赵利华
单位：翁泰来 张锡流 叶星江 赵利华(广西中医学院 南宁 530001)
关键词：豚鼠；应激性胃溃疡；指数；动物模型
广西中医学院学报990243 摘 要 该实验首次应用豚鼠水浸拘束法制作应激性胃溃疡的模型，从胃溃疡指数、应激前后胃电活动的变化、胃粘膜病理改变等方面观察应激性胃溃疡的发生、发展过程。该实验模型易制作，重复性好，适合应用于应激性胃溃疡的实验研究。
中图分类号 R-332
Experiment on preparation and verification of Guinea-pig Model for Stress Gastric Ulcer
, 百拇医药
Wong Tailai, et al
(Guangxi College of TCM Nanning 530001)
Abstract In the experment ,guinea-pig was first used to make in to a model with stress gastric ulcer by soaking guinea-pig into the water at 23 ±1℃ degree centigrade for 8 hours . The observation on occurring and developme nt of stress gastric ulcer was made from the aspects of the gastric ulcer index. the changes of the gastric electric amplitude and frequency before and after st ress and pathological changes in gastric mucous membrane. The experimental model proves easy to be prepared and the method can be used repetitively for experime ntal study on stress gastric ulcer.
, 百拇医药
Key words guinea-pig stress gastric ulcer index animal model
应激性溃疡(Stress-Ulcer,SU)是机体在应激状态下，胃、十二指肠等消化道发生粘膜急性糜烂、溃疡出血，是临床许多疾患如败血症、脑出血、休克、烧伤、大手术后时常合并的一种急性并发症。由它导致胃肠道出血和穿孔，严重影响病人的生命。为探讨本病的发病机制及治疗方法，目前常采用的动物和方法有大鼠〔1〕、小鼠〔2〕束缚水浸法及家兔股骨粉碎性骨折等，未见有豚鼠模型。我们首次成功地制作豚鼠应激性胃溃疡模型，为开展SU的防治提供新的动物模型，并观察生理状态，应激前后胃电活动(Electrical Gastric Activity,EGA)变化及溃疡自然愈合情况。
1 材料和方法
1.1 动物及分组
, 百拇医药
首先选100只体重260～300g豚鼠(由广西中医学院动物研究中心提供)，雌雄不拘，记录生理状态的空腹EGA。然后，从中随机选取体重260～300g豚鼠24只，雌雄不拘，随机分为5组:①应激组12只，另外12只应激后分为②24h观察组3只，③36h观察组3只，④48h观察组4只，⑤72h观察组2只。
1.2 造模方法和实验步骤
造模前禁食不断水24h，将豚鼠四肢绑扎固定于木板上，记录完造模前EGA后，将动物直立浸于(23±1)℃的恒温水槽中，液面保持在胸骨剑突水平浸泡8h，然后描记造模后EGA，接着将应激组12只当即断颈处死取胃，用清水漂洗胃内血液、胃液及食物残渣等。并在解剖显微镜下测量胃粘膜的溃疡指数〔4〕，溃疡面积大于1mm的按实际长度计算，小于1mm的按0.5计算。最后将鼠胃用95%酒精固定，石蜡包埋，制成了3～4μm切片，H*E染色观察病理改变(附照片并与正常鼠胃对照)。另外四组分别在造模后24h、36h、48h、72h按上述同样的方法步骤观察处理(附文后照片)。
, 百拇医药
1.3 EGA的记录方法及计算胃电波幅及频率
在豚鼠清醒状态下把无关针形电极插入右前肢皮下，右后肢电极接地，将单极针形记录电极插入脐中与剑突连线的上1/6处的皮下(相当于胃体部在体表的投影)，用EGEG—2B2型胃电图仪描记，走纸速度1mm/s，灵敏度150μv/10mm。电极安放好后，静卧5～10分钟，然后记录胃电5分钟，每鼠各取10个胃电波求波幅及频率的平均值。
2 结果
2.1 豚鼠的胃电幅值和频率
100只豚鼠空腹生理状态的胃电波幅幅值为(130.24±38.49)μv，频率为(5.54±1.2)次/分。
2.2 应激对豚鼠胃电参数的影响 结果见表1。
, 百拇医药
表1 应激对豚鼠胃电参数的影响(
±S) 组别
效应
振幅(μv)
频率(次/min)
例数
应激前
应激后
例数
应激前
应激后
应激组
, 百拇医药 兴奋
4
143.4±12.14
227.25±57.08
5
4.08±0.66
5.27±0.63*
抑制
8
191.58±310.09
125.44±41.27**
, 百拇医药 7
5.76±0.81
4.38±1.09*
不变
0
自愈组
兴奋
8
109.46±25.91
174.9±40.63*
, 百拇医药
4
4±0.87
5.09±1.05
抑制
4
159.53±40.31
109.05±28.43
7
5.76±1.55
4.24±1.19
不变
0
1
, 百拇医药
与应激前行t检验,*P<0.05，**P<0.01
从表1可见应激组与自愈组造模后胃电波幅及频率有兴奋和抑制〔5〕两种变化。各组造模前、后胃电幅值比较显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01)。应激组胃电频率造模前、后的变化比较有显著性差异(P<0.05)。而自愈组造模前、后胃电频率比较(0.05
2.3 应激组与自愈组溃疡指数的变化 见表2.
表2 应激组与自愈组溃疡指数的变化 组别
例数
指数(±S)
, 百拇医药
自愈率
应激组
12
15.88±13.39
自愈组
12
6.18±5.76*
61.08%
与应激组比较行t检验,*P<0.05
2.4 自愈率比较 见表3。
表3 自愈率比较 组别
, http://www.100md.com
例数
指数(±S)
自愈率
应激组
12
15.88±13.39
24h自愈组
3
10.33±4.62
34.95
36h自愈组
3
, 百拇医药
9.67±7.29
39.11
48h自愈组
4
2.93±3.35
81.74
72h自愈组
2
1.25±1.77
92.13
从表2可见应激组与整个自愈组溃疡指数比较有显著差异(P<0.05)。从表3见应激组与各个自愈组溃疡指数比较无统计学意义，可能也是样本量小所致。通过自愈率公式计算自愈率，观察各自愈组自愈情况。发现48h后自愈率由24h、36h组的34%～39%上升到81%～92%，并据病理切片观察，提示把应激性胃溃疡的治疗疗程定为2～3天。
, 百拇医药
2.5 应激组应激后胃电波幅与溃疡指数的关系 见表4。表4 应激组应激后胃电波幅与溃疡指数的相关性 观察项目
鼠 号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
, 百拇医药 11
12
胃电波幅(μv)
113.7
177.9
83.7
209.4
205.2
100.5
183
123.6
188.4
75.6
, http://www.100md.com
140.1
311.4
溃疡指数
38.8
16.7
27.5
18.8
1.5
8.1
11.5
10.6
5.3
41.5
, 百拇医药
6.6
4
γ=-0.6024 t=-2.3866 P<0.05
从表4发现应激组应激后胃电波幅与粘膜溃疡指数呈负相关性(γ＝-0.6024 t＝-2.3866.9 P<0.05)，应激后胃电波幅越高，溃疡指数越低，与胃电频率无相关关系。
2.6 应激组与自愈组波幅、频率的变异程度比较 见表5。
表5 应激组与自然愈合组波幅、频率的变异程度比较 组别
波幅(μv)
CV%
频率(次/min)
, 百拇医药
CV%
应激组造模前
175.52±34.90
19.88
5.06±1.12
22.13
应激组造模后
159.38±67.02
41.94
4.75±1
21.05
自愈组造模前
, http://www.100md.com
133.27±38.24
28.7
5.35±1.51
28.22
自愈组造模后
153.37±55.66
36.29
4.82±1.28
26.27
自愈几小时后
149.76±53.67
35.83
, 百拇医药
5.28±1.31
24.81
通过表5可见造模后胃电波幅的标准差(S)较造模前增大，说明病理状态下波幅的变异程度增大，而自愈组经过n小时后波幅的S变小提示其变异程度较造模后减小。造模后胃电频率的S与造模前及自愈n小时后的S比较变化不大。另外把胃电波幅与频率的变异系数(CV值)进行比较，发现造模前波幅与频率的CV值较接近，造模后及自愈n小时后二者的CV值相差较大。根据波幅与频率的标准差和变异系数分析，应激性胃溃疡的病理过程对波幅的影响大于对频率的影响，波幅波形的变化可作为判断病理转归的指征。
3 讨论
3.1 大鼠、小鼠及家兔都可作为制作应激性胃溃疡模型的动物，前两者主要采用束缚水浸法，家兔则用股骨中段粉碎性骨折法。但大鼠性格凶悍，不利于进行各种实验及治疗；小鼠则个体小，不利于进行一些体表的测量和治疗，如穴位的标定和取穴，针刺等；家兔价格较高。本实验选择豚鼠作为造模对象是因为：①豚鼠性格温驯，价格较家兔低3～4倍；②豚鼠个体较大，易于进行各种防治疗法的操作，特别是中医、针灸治疗，而且有人〔6〕已对豚鼠穴位图谱进行研究和绘制；③水浸拘束法诱发应激性溃疡成功率为100%〔1〕；④豚鼠同人的作息时间相似，即白天活动，有利于中西医开展时间医学，时间治疗学的研究。
, 百拇医药
3.2 在实验研究中笔者认为溃疡的形成虽不排除副交感作用，但应激状态下，交感兴奋起主要作用。可能由于严重而持久的应激状态导致交感系统兴奋和血液循环中儿茶酚胺水平增高使胃壁小血管发生痉挛，胃粘膜的微循环障碍，致使胃粘膜缺血、损伤、坏死〔7〕。交感系统兴奋对胃电起抑制作用，故胃电幅值及频率降低，胃粘膜缺血损伤严重，溃疡指数高。反之，交感抑制作用小则胃电波幅较高，频率也快，血管收缩作用较弱，胃粘膜缺血也相对较轻，故溃疡指数低。有人〔8〕发现交感神经兴奋能对抗因刺激迷走神经引起的胃肠道平滑肌的收缩。
3.3 笔者研制的应激性胃溃疡的动物模型从致病机制及病理学改变等方面均与人的应激性溃疡相似。由于模型制作简便，重复性好，动物温和，价格经济，并与人类作息相似，是研究应激性溃疡合适的动物模型。
作者简介：广西中医学院第一附属医院病理科，南宁，530023
, 百拇医药 参考文献
1 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.第二版.北京:人民卫生出版社，1991.58
2 程彰华，温晶媛，陈滨凌，等.灵芝对应激性溃疡的影响和抗乙酰胆碱作用.中草药.1994，25(9):472
3 董淑云，郑素琴，门秀丽，等.应激性溃疡的发生及川芎嗪的防治效应.中国中西医结合脾胃杂志.1996，4(4):218
4 沈德凯，潘朝宏，金文秀.电针对大鼠应激性溃疡的保护机制初步研究.针灸学报.1992，8(3):34
5 项立敏，朱凤仙，马颖，等.针刺胃俞、足三里抗急性应激性损害的实验研究.针刺研究.1993，18(2):53
6 李辞蓉，华兴邦，周浩良，等.豚鼠针灸穴位位图谱的研制.上海针灸杂志.1992，11(2):28
, http://www.100md.com
7 严志龙.应激性溃疡形成及防治的新进展.临床荟萃.1996，11(21):961
8 张经济.胃肠生理学.兰州:兰州医学院研究生教材，1985.18
收稿日期：1999-03-17
(1)造模后急性溃疡灶，粘膜层坏死粘膜肌层伴有急性炎症细胞浸润。
(2)造模36h──明显急性溃疡灶，胃粘膜坏死达肌层伴有较多急性炎症细胞浸润。
(3)造模48h──未见溃疡灶，胃粘膜层血管扩张、充血。
(4)未造模──正常胃粘膜。, http://www.100md.com
单位：翁泰来 张锡流 叶星江 赵利华(广西中医学院 南宁 530001)
关键词：豚鼠；应激性胃溃疡；指数；动物模型
广西中医学院学报990243 摘 要 该实验首次应用豚鼠水浸拘束法制作应激性胃溃疡的模型，从胃溃疡指数、应激前后胃电活动的变化、胃粘膜病理改变等方面观察应激性胃溃疡的发生、发展过程。该实验模型易制作，重复性好，适合应用于应激性胃溃疡的实验研究。
中图分类号 R-332
Experiment on preparation and verification of Guinea-pig Model for Stress Gastric Ulcer
, 百拇医药
Wong Tailai, et al
(Guangxi College of TCM Nanning 530001)
Abstract In the experment ,guinea-pig was first used to make in to a model with stress gastric ulcer by soaking guinea-pig into the water at 23 ±1℃ degree centigrade for 8 hours . The observation on occurring and developme nt of stress gastric ulcer was made from the aspects of the gastric ulcer index. the changes of the gastric electric amplitude and frequency before and after st ress and pathological changes in gastric mucous membrane. The experimental model proves easy to be prepared and the method can be used repetitively for experime ntal study on stress gastric ulcer.
, 百拇医药
Key words guinea-pig stress gastric ulcer index animal model
应激性溃疡(Stress-Ulcer,SU)是机体在应激状态下，胃、十二指肠等消化道发生粘膜急性糜烂、溃疡出血，是临床许多疾患如败血症、脑出血、休克、烧伤、大手术后时常合并的一种急性并发症。由它导致胃肠道出血和穿孔，严重影响病人的生命。为探讨本病的发病机制及治疗方法，目前常采用的动物和方法有大鼠〔1〕、小鼠〔2〕束缚水浸法及家兔股骨粉碎性骨折等，未见有豚鼠模型。我们首次成功地制作豚鼠应激性胃溃疡模型，为开展SU的防治提供新的动物模型，并观察生理状态，应激前后胃电活动(Electrical Gastric Activity,EGA)变化及溃疡自然愈合情况。
1 材料和方法
1.1 动物及分组
, 百拇医药
首先选100只体重260～300g豚鼠(由广西中医学院动物研究中心提供)，雌雄不拘，记录生理状态的空腹EGA。然后，从中随机选取体重260～300g豚鼠24只，雌雄不拘，随机分为5组:①应激组12只，另外12只应激后分为②24h观察组3只，③36h观察组3只，④48h观察组4只，⑤72h观察组2只。
1.2 造模方法和实验步骤
造模前禁食不断水24h，将豚鼠四肢绑扎固定于木板上，记录完造模前EGA后，将动物直立浸于(23±1)℃的恒温水槽中，液面保持在胸骨剑突水平浸泡8h，然后描记造模后EGA，接着将应激组12只当即断颈处死取胃，用清水漂洗胃内血液、胃液及食物残渣等。并在解剖显微镜下测量胃粘膜的溃疡指数〔4〕，溃疡面积大于1mm的按实际长度计算，小于1mm的按0.5计算。最后将鼠胃用95%酒精固定，石蜡包埋，制成了3～4μm切片，H*E染色观察病理改变(附照片并与正常鼠胃对照)。另外四组分别在造模后24h、36h、48h、72h按上述同样的方法步骤观察处理(附文后照片)。
, 百拇医药
1.3 EGA的记录方法及计算胃电波幅及频率
在豚鼠清醒状态下把无关针形电极插入右前肢皮下，右后肢电极接地，将单极针形记录电极插入脐中与剑突连线的上1/6处的皮下(相当于胃体部在体表的投影)，用EGEG—2B2型胃电图仪描记，走纸速度1mm/s，灵敏度150μv/10mm。电极安放好后，静卧5～10分钟，然后记录胃电5分钟，每鼠各取10个胃电波求波幅及频率的平均值。
2 结果
2.1 豚鼠的胃电幅值和频率
100只豚鼠空腹生理状态的胃电波幅幅值为(130.24±38.49)μv，频率为(5.54±1.2)次/分。
2.2 应激对豚鼠胃电参数的影响 结果见表1。
, 百拇医药
表1 应激对豚鼠胃电参数的影响(
±S) 组别效应
振幅(μv)
频率(次/min)
例数
应激前
应激后
例数
应激前
应激后
应激组
, 百拇医药 兴奋
4
143.4±12.14
227.25±57.08
5
4.08±0.66
5.27±0.63*
抑制
8
191.58±310.09
125.44±41.27**
, 百拇医药 7
5.76±0.81
4.38±1.09*
不变
0
自愈组
兴奋
8
109.46±25.91
174.9±40.63*
, 百拇医药
4
4±0.87
5.09±1.05
抑制
4
159.53±40.31
109.05±28.43
7
5.76±1.55
4.24±1.19
不变
0
1
, 百拇医药
与应激前行t检验,*P<0.05，**P<0.01
从表1可见应激组与自愈组造模后胃电波幅及频率有兴奋和抑制〔5〕两种变化。各组造模前、后胃电幅值比较显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01)。应激组胃电频率造模前、后的变化比较有显著性差异(P<0.05)。而自愈组造模前、后胃电频率比较(0.05
2.3 应激组与自愈组溃疡指数的变化 见表2.
表2 应激组与自愈组溃疡指数的变化 组别
例数
指数(
±S), 百拇医药
自愈率
应激组
12
15.88±13.39
自愈组
12
6.18±5.76*
61.08%
与应激组比较行t检验,*P<0.05
2.4 自愈率比较 见表3。
表3 自愈率比较 组别
, http://www.100md.com
例数
指数(
±S)自愈率
应激组
12
15.88±13.39
24h自愈组
3
10.33±4.62
34.95
36h自愈组
3
, 百拇医药
9.67±7.29
39.11
48h自愈组
4
2.93±3.35
81.74
72h自愈组
2
1.25±1.77
92.13
从表2可见应激组与整个自愈组溃疡指数比较有显著差异(P<0.05)。从表3见应激组与各个自愈组溃疡指数比较无统计学意义，可能也是样本量小所致。通过自愈率公式计算自愈率，观察各自愈组自愈情况。发现48h后自愈率由24h、36h组的34%～39%上升到81%～92%，并据病理切片观察，提示把应激性胃溃疡的治疗疗程定为2～3天。
, 百拇医药
2.5 应激组应激后胃电波幅与溃疡指数的关系 见表4。表4 应激组应激后胃电波幅与溃疡指数的相关性 观察项目
鼠 号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
, 百拇医药 11
12
胃电波幅(μv)
113.7
177.9
83.7
209.4
205.2
100.5
183
123.6
188.4
75.6
, http://www.100md.com
140.1
311.4
溃疡指数
38.8
16.7
27.5
18.8
1.5
8.1
11.5
10.6
5.3
41.5
, 百拇医药
6.6
4
γ=-0.6024 t=-2.3866 P<0.05
从表4发现应激组应激后胃电波幅与粘膜溃疡指数呈负相关性(γ＝-0.6024 t＝-2.3866.9 P<0.05)，应激后胃电波幅越高，溃疡指数越低，与胃电频率无相关关系。
2.6 应激组与自愈组波幅、频率的变异程度比较 见表5。
表5 应激组与自然愈合组波幅、频率的变异程度比较 组别
波幅(μv)
CV%
频率(次/min)
, 百拇医药
CV%
应激组造模前
175.52±34.90
19.88
5.06±1.12
22.13
应激组造模后
159.38±67.02
41.94
4.75±1
21.05
自愈组造模前
, http://www.100md.com
133.27±38.24
28.7
5.35±1.51
28.22
自愈组造模后
153.37±55.66
36.29
4.82±1.28
26.27
自愈几小时后
149.76±53.67
35.83
, 百拇医药
5.28±1.31
24.81
通过表5可见造模后胃电波幅的标准差(S)较造模前增大，说明病理状态下波幅的变异程度增大，而自愈组经过n小时后波幅的S变小提示其变异程度较造模后减小。造模后胃电频率的S与造模前及自愈n小时后的S比较变化不大。另外把胃电波幅与频率的变异系数(CV值)进行比较，发现造模前波幅与频率的CV值较接近，造模后及自愈n小时后二者的CV值相差较大。根据波幅与频率的标准差和变异系数分析，应激性胃溃疡的病理过程对波幅的影响大于对频率的影响，波幅波形的变化可作为判断病理转归的指征。
3 讨论
3.1 大鼠、小鼠及家兔都可作为制作应激性胃溃疡模型的动物，前两者主要采用束缚水浸法，家兔则用股骨中段粉碎性骨折法。但大鼠性格凶悍，不利于进行各种实验及治疗；小鼠则个体小，不利于进行一些体表的测量和治疗，如穴位的标定和取穴，针刺等；家兔价格较高。本实验选择豚鼠作为造模对象是因为：①豚鼠性格温驯，价格较家兔低3～4倍；②豚鼠个体较大，易于进行各种防治疗法的操作，特别是中医、针灸治疗，而且有人〔6〕已对豚鼠穴位图谱进行研究和绘制；③水浸拘束法诱发应激性溃疡成功率为100%〔1〕；④豚鼠同人的作息时间相似，即白天活动，有利于中西医开展时间医学，时间治疗学的研究。
, 百拇医药
3.2 在实验研究中笔者认为溃疡的形成虽不排除副交感作用，但应激状态下，交感兴奋起主要作用。可能由于严重而持久的应激状态导致交感系统兴奋和血液循环中儿茶酚胺水平增高使胃壁小血管发生痉挛，胃粘膜的微循环障碍，致使胃粘膜缺血、损伤、坏死〔7〕。交感系统兴奋对胃电起抑制作用，故胃电幅值及频率降低，胃粘膜缺血损伤严重，溃疡指数高。反之，交感抑制作用小则胃电波幅较高，频率也快，血管收缩作用较弱，胃粘膜缺血也相对较轻，故溃疡指数低。有人〔8〕发现交感神经兴奋能对抗因刺激迷走神经引起的胃肠道平滑肌的收缩。
3.3 笔者研制的应激性胃溃疡的动物模型从致病机制及病理学改变等方面均与人的应激性溃疡相似。由于模型制作简便，重复性好，动物温和，价格经济，并与人类作息相似，是研究应激性溃疡合适的动物模型。
作者简介：广西中医学院第一附属医院病理科，南宁，530023
, 百拇医药 参考文献
1 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.第二版.北京:人民卫生出版社，1991.58
2 程彰华，温晶媛，陈滨凌，等.灵芝对应激性溃疡的影响和抗乙酰胆碱作用.中草药.1994，25(9):472
3 董淑云，郑素琴，门秀丽，等.应激性溃疡的发生及川芎嗪的防治效应.中国中西医结合脾胃杂志.1996，4(4):218
4 沈德凯，潘朝宏，金文秀.电针对大鼠应激性溃疡的保护机制初步研究.针灸学报.1992，8(3):34
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收稿日期：1999-03-17
(1)造模后急性溃疡灶，粘膜层坏死粘膜肌层伴有急性炎症细胞浸润。
(2)造模36h──明显急性溃疡灶，胃粘膜坏死达肌层伴有较多急性炎症细胞浸润。
(3)造模48h──未见溃疡灶，胃粘膜层血管扩张、充血。
(4)未造模──正常胃粘膜。, http://www.100md.com