改良三甲散对东莨菪碱诱导小鼠学习记忆障碍的影响
作者：刘 涛 卞慧敏 刘学凤
单位：刘 涛 卞慧敏 刘学凤(南京中医药大学 南京 210019)
关键词：
中国中医基础医学杂志990207 摘 要 目的 观察中药复方对小鼠学习记忆障碍的影响。方法 以东莨菪碱3mg/kg腹腔注射复制小鼠学习记忆障碍模型，并以脑复康0.5g/kg灌胃作为对照，观察了改良三甲散1g/kg、2g/kg灌胃对实验动物学习记忆能力的影响。结果 改良三甲散能够提高东莨菪碱所诱发的学习记忆障碍小鼠电迷宫测试成绩，拮抗实验动物脑胆碱酯酶活性的升高。结论 改良三甲散具有一定的益智抗痴呆作用。
INFLUENCE OF REFORMATIVE SANJIASAN ON BAULK OF STUDY AND
MEMORY OF MICE INDUCED BY SCOPOLAMINI
, http://www.100md.com
Liu Tao et al
Abstrct:The baulk model of study and memory of mice was reconstructed by adbominal ijection of 3mg/kg scopolamini, and the control group took 0.5g/kg Naofukang orally, the influence of 1g/kg and 2g/kg reformative Sanjiasan for oral use on the ability of study and memory of experienced animals was observed. The result showed:the reformative Sanjiasan can increase the electric labyrith test Pcore of mice which was induced the baulk of study and memory by scopolamini, and suppress the increase of cerebral Che so it remind that the reformative sanjiasan has a certain effect of promoting intelligence and resisting dementia.
, http://www.100md.com
Key words:
改良三甲散免煎颗粒剂具有滋肾填精、活血化痰、补脑益智的功效。经临床初步观察，对老年期痴呆特别是老年血管性痴呆具有明显的疗效。为了探讨其作用原理，我们观察了该药对小鼠学习记忆能力的影响。
实验材料
1 药品与试剂
改良三甲散免煎颗粒剂，方药组成：龟板、鳖甲、牡蛎、地鳖虫、地龙、何首乌、刺五加、当归等；江阴天江制药有限公司生产，批号：970111。氢溴酸东莨菪碱注射液，上海禾丰制药有限公司生产，批号：96092。脑复康片，南京第二制药厂生产，批号：960701。胆碱酯酶测定试剂盒(速率法，分析仪专用)，由浙江省宁波市慈城生化试剂厂制造。
2 动物
昆明种小白鼠，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证：苏动(质)95040，苏动(环)95099。
, http://www.100md.com
3 仪器
MG-2型迷宫刺激器，由江苏省张家港市生物医学仪器厂生产。SC-921型半自动生化分析仪，重庆生化分析仪器研究所制造。
方法与结果
1 改良三甲散颗粒剂对小鼠电迷宫测试的影响
将改良三甲散颗粒剂和脑复康片碾碎，以温开水溶解，分别配制成2.5%脑复康、5%改良三甲散、10%改良三甲散混悬液。
取昆明种小白鼠50只，雄性，体重20g±2g，随机分为5组，即正常对照组、东莨菪碱模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组。各组动物均按20ml/kg小白鼠体重灌胃，每日1次，共计8天。其中正常对照组和东莨菪碱模型组每日灌胃温开水，脑复康组每日按0.5g/kg体重灌胃，5%改良三甲散组每日按1g/kg体重灌胃，10%改良三甲散组每日按2g/kg体重灌胃。于实验的第8天灌胃后1小时，东莨菪碱模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组四组动物分别腹腔注射氢溴酸东莨菪碱3mg/kg，复制小鼠学习记忆障碍模型[1]，注射后15分钟，进行三臂辐射型电迷宫测试，记录20次电刺激中的正确反应次数。结果表明，东莨菪碱模型组小鼠的正确反应次数明显低于正常对照组(P<0.05)，说明氢溴酸东莨菪碱注射液3mg/kg腹腔注射造成了小鼠学习记忆障碍；脑复康和改良三甲散能够明显提高东莨菪碱诱发的学习记忆障碍小鼠的正确反应次数(P<0.05)，其中10%改良三甲散的作用尤为显著(P<0.01)，说明改良三甲散和脑复康能有效地拮抗东莨菪碱所造成的学习记忆障碍，不过改良三甲散和脑复康对东莨菪碱所诱发的学习记忆障碍的拮抗作用没有显著的差别(结果如表1)。
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2 改良三甲散颗粒剂对小鼠脑胆碱酯酶的影响
动物分组和给药方法如前所述，于实验的第8天各组动物灌胃后1小时，东莨菪碱模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组四组动物分别腹腔注射氢溴酸东莨菪碱3mg/kg，注射后15min，采用脱椎法处死动物，迅速取脑，按1克脑组织用10mL生理盐水稀释，冰冻匀浆，取匀浆液测定脑组织胆碱酯酶活性，试剂采用浙江省宁波市慈城生化试剂厂生产的胆碱酯酶测定试剂盒，测试仪器采用重庆生化分析仪器研究所制造的SC-921型半自动生化分析仪。实验结果表明：东莨菪碱模型组小鼠脑组织中胆碱酯酶的活性较正常组小鼠明显升高(P<0.01)，而脑复康组、10%改良三甲散组小鼠脑组织中胆碱酯酶的活性显著低于东莨菪碱模型组(P<0.01)，与正常对照组无明显差异；5%改良三甲散组小鼠脑胆碱酯酶的活性低于东莨菪碱模型组(P<0.05)，但高于正常对照组(P<0.05)。提示改良三甲散能够拮抗东莨菪碱诱发的脑胆碱酯酶活性升高，在其作用的效能方面脑复康和10%的改良三甲散较为显著，而5%的改良三甲散次之(结果见表2)。
, 百拇医药
表1 改良三甲散对东莨菪碱诱导的小鼠电迷宫测试成绩的影响 (
±s) 组别
动物数(n)
给药(g/kg)
正确反应次数
正常对照组
10
温水(20ml/kg)
13.000±3.055
东莨菪碱模型组
10
, http://www.100md.com 温水(20ml/kg)
10.200±1.135#
脑复康组
10
0.5g/kg
13.400±2.797*
5%改良三甲散组
10
1g/kg
14.300±2.908*
10%改良三甲散组
, http://www.100md.com
10
2g/kg
15.200±3.765**
注：#：与正常对照组比较；*与东莨菪碱模型组比较；#、*:P<0.05；**:P<0.01。表2 改良三甲散对小鼠脑胆碱酯酶活性的影响 (±s) 组别
动物数(n)
给药(g/kg)
脑胆碱酯酶(u/g)
正常对照组
10
, 百拇医药
温水(20ml/kg)
1.678±0.348
东莨菪碱模型组
10
温水(20ml/kg)
2.361±0.386##
脑复康组
11
0.5g/kg
1.917±0.270
5%改良三甲散组
, 百拇医药
11
1g/kg
2.092±0.244#
10%改良三甲散组
11
2g/kg
1.944±0.169
注：#：与正常对照组比较；*与东莨菪碱模型组比较：#、*:P<0.05；##、**:P<0.01。讨论
三甲散是明代医家吴又可创制的，主要用于治疗温病后期病邪深入营血，与营血相结，耗伤肝肾真阴，脉络凝瘀，气血不畅的虚实夹杂病证；清代医家薛生白将此方稍作加减，用来治疗温病久病气血呆滞，灵机不运而致的“默默不语，神识昏迷”[2]病证；现代常用本方治疗各种中枢神经系统感染后遗的神志呆钝、失语、肢体强直瘫痪等病证。在此基础上我们根据自身的临床体会，结合现代药理研究报道，将本方的药物组成略作调整，同时按照相应的工艺程序制成中药免煎颗粒剂，临床用于治疗老年期痴呆和其他类型学习记忆功能障碍的病证，取得了一定的疗效。为了探讨其作用原理，我们进行了动物实验。
, 百拇医药
中医学认为，智能障碍的主要病理变化是肾精不足，髓海失充，痰瘀滞窍，脑力损伤，因而补肾填精、活血化痰、益脑通窍是重要的治疗方法。通过本项实验研究证实，改良三甲散能够明显提高东莨菪碱所致的学习记忆障碍，小鼠电迷宫测试的正确反应次数，具有拮抗东莨菪碱所诱发的小鼠学习记忆障碍，提高实验动物的学习记忆能力的作用，有着较好的益智作用，这一结果为滋肾活血化痰通窍法临床治疗多种智力障碍，特别是老年期痴呆症提供了可靠的客观依据。
学习记忆是极其复杂的生理生化过程，其影响因素很多，其中中枢胆碱能神经系统发挥着重要的作用，中枢胆碱能神经传递障碍可损伤学习和记忆功能[3]，乙酰胆碱是胆碱能神经介质，了解乙酰胆碱在脑内含量的变化，可分析药物影响学习记忆能力的作用原理，乙酰胆碱酯酶是乙酰胆碱的水解酶，测定脑内胆碱酯酶的活性可判断脑内乙酰胆碱含量的变化。本项实验测定了改良三甲散对脑胆碱酯酶的影响，结果显示改良三甲散能降低胆碱能拮抗剂东莨菪碱所致的学习记忆障碍小鼠脑胆碱酯酶的活性，表现出一定的中枢拟胆碱能作用，提示改良三甲散益智作用的原理，是通过影响中枢胆碱能神经系统的功能而实现的。
, http://www.100md.com
作者简介：刘涛，男，38岁，医学博士、副教授，南京中医药大学温病学教研室教师。多年来致力于温病治则治法在精神神经系统疾病中的运用，特别是对老年期痴呆症有着较深入地研究。先后出版、发表学术论著、论文20多部、篇。
参考文献
[1] 李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1989：171
[2] 沈凤阁，等.叶香岩外感温热篇薛生白湿热病篇阐释.南京：江苏科学技术出版社，1983：196
[3] 刘涛，等.乙酰胆碱在阿尔采未氏病中的研究进展.中国校医杂志 1996；10(6)：475
(收稿日期 1998—09—16 修回日期 1998—10—11), http://www.100md.com
单位：刘 涛 卞慧敏 刘学凤(南京中医药大学 南京 210019)
关键词：
中国中医基础医学杂志990207 摘 要 目的 观察中药复方对小鼠学习记忆障碍的影响。方法 以东莨菪碱3mg/kg腹腔注射复制小鼠学习记忆障碍模型，并以脑复康0.5g/kg灌胃作为对照，观察了改良三甲散1g/kg、2g/kg灌胃对实验动物学习记忆能力的影响。结果 改良三甲散能够提高东莨菪碱所诱发的学习记忆障碍小鼠电迷宫测试成绩，拮抗实验动物脑胆碱酯酶活性的升高。结论 改良三甲散具有一定的益智抗痴呆作用。
INFLUENCE OF REFORMATIVE SANJIASAN ON BAULK OF STUDY AND
MEMORY OF MICE INDUCED BY SCOPOLAMINI
, http://www.100md.com
Liu Tao et al
Abstrct:The baulk model of study and memory of mice was reconstructed by adbominal ijection of 3mg/kg scopolamini, and the control group took 0.5g/kg Naofukang orally, the influence of 1g/kg and 2g/kg reformative Sanjiasan for oral use on the ability of study and memory of experienced animals was observed. The result showed:the reformative Sanjiasan can increase the electric labyrith test Pcore of mice which was induced the baulk of study and memory by scopolamini, and suppress the increase of cerebral Che so it remind that the reformative sanjiasan has a certain effect of promoting intelligence and resisting dementia.
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Key words:
改良三甲散免煎颗粒剂具有滋肾填精、活血化痰、补脑益智的功效。经临床初步观察，对老年期痴呆特别是老年血管性痴呆具有明显的疗效。为了探讨其作用原理，我们观察了该药对小鼠学习记忆能力的影响。
实验材料
1 药品与试剂
改良三甲散免煎颗粒剂，方药组成：龟板、鳖甲、牡蛎、地鳖虫、地龙、何首乌、刺五加、当归等；江阴天江制药有限公司生产，批号：970111。氢溴酸东莨菪碱注射液，上海禾丰制药有限公司生产，批号：96092。脑复康片，南京第二制药厂生产，批号：960701。胆碱酯酶测定试剂盒(速率法，分析仪专用)，由浙江省宁波市慈城生化试剂厂制造。
2 动物
昆明种小白鼠，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证：苏动(质)95040，苏动(环)95099。
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3 仪器
MG-2型迷宫刺激器，由江苏省张家港市生物医学仪器厂生产。SC-921型半自动生化分析仪，重庆生化分析仪器研究所制造。
方法与结果
1 改良三甲散颗粒剂对小鼠电迷宫测试的影响
将改良三甲散颗粒剂和脑复康片碾碎，以温开水溶解，分别配制成2.5%脑复康、5%改良三甲散、10%改良三甲散混悬液。
取昆明种小白鼠50只，雄性，体重20g±2g，随机分为5组，即正常对照组、东莨菪碱模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组。各组动物均按20ml/kg小白鼠体重灌胃，每日1次，共计8天。其中正常对照组和东莨菪碱模型组每日灌胃温开水，脑复康组每日按0.5g/kg体重灌胃，5%改良三甲散组每日按1g/kg体重灌胃，10%改良三甲散组每日按2g/kg体重灌胃。于实验的第8天灌胃后1小时，东莨菪碱模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组四组动物分别腹腔注射氢溴酸东莨菪碱3mg/kg，复制小鼠学习记忆障碍模型[1]，注射后15分钟，进行三臂辐射型电迷宫测试，记录20次电刺激中的正确反应次数。结果表明，东莨菪碱模型组小鼠的正确反应次数明显低于正常对照组(P<0.05)，说明氢溴酸东莨菪碱注射液3mg/kg腹腔注射造成了小鼠学习记忆障碍；脑复康和改良三甲散能够明显提高东莨菪碱诱发的学习记忆障碍小鼠的正确反应次数(P<0.05)，其中10%改良三甲散的作用尤为显著(P<0.01)，说明改良三甲散和脑复康能有效地拮抗东莨菪碱所造成的学习记忆障碍，不过改良三甲散和脑复康对东莨菪碱所诱发的学习记忆障碍的拮抗作用没有显著的差别(结果如表1)。
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2 改良三甲散颗粒剂对小鼠脑胆碱酯酶的影响
动物分组和给药方法如前所述，于实验的第8天各组动物灌胃后1小时，东莨菪碱模型组、脑复康组、5%改良三甲散组、10%改良三甲散组四组动物分别腹腔注射氢溴酸东莨菪碱3mg/kg，注射后15min，采用脱椎法处死动物，迅速取脑，按1克脑组织用10mL生理盐水稀释，冰冻匀浆，取匀浆液测定脑组织胆碱酯酶活性，试剂采用浙江省宁波市慈城生化试剂厂生产的胆碱酯酶测定试剂盒，测试仪器采用重庆生化分析仪器研究所制造的SC-921型半自动生化分析仪。实验结果表明：东莨菪碱模型组小鼠脑组织中胆碱酯酶的活性较正常组小鼠明显升高(P<0.01)，而脑复康组、10%改良三甲散组小鼠脑组织中胆碱酯酶的活性显著低于东莨菪碱模型组(P<0.01)，与正常对照组无明显差异；5%改良三甲散组小鼠脑胆碱酯酶的活性低于东莨菪碱模型组(P<0.05)，但高于正常对照组(P<0.05)。提示改良三甲散能够拮抗东莨菪碱诱发的脑胆碱酯酶活性升高，在其作用的效能方面脑复康和10%的改良三甲散较为显著，而5%的改良三甲散次之(结果见表2)。
, 百拇医药
表1 改良三甲散对东莨菪碱诱导的小鼠电迷宫测试成绩的影响 (
±s) 组别动物数(n)
给药(g/kg)
正确反应次数
正常对照组
10
温水(20ml/kg)
13.000±3.055
东莨菪碱模型组
10
, http://www.100md.com 温水(20ml/kg)
10.200±1.135#
脑复康组
10
0.5g/kg
13.400±2.797*
5%改良三甲散组
10
1g/kg
14.300±2.908*
10%改良三甲散组
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10
2g/kg
15.200±3.765**
注：#：与正常对照组比较；*与东莨菪碱模型组比较；#、*:P<0.05；**:P<0.01。表2 改良三甲散对小鼠脑胆碱酯酶活性的影响 (
±s) 组别动物数(n)
给药(g/kg)
脑胆碱酯酶(u/g)
正常对照组
10
, 百拇医药
温水(20ml/kg)
1.678±0.348
东莨菪碱模型组
10
温水(20ml/kg)
2.361±0.386##
脑复康组
11
0.5g/kg
1.917±0.270
5%改良三甲散组
, 百拇医药
11
1g/kg
2.092±0.244#
10%改良三甲散组
11
2g/kg
1.944±0.169
注：#：与正常对照组比较；*与东莨菪碱模型组比较：#、*:P<0.05；##、**:P<0.01。讨论
三甲散是明代医家吴又可创制的，主要用于治疗温病后期病邪深入营血，与营血相结，耗伤肝肾真阴，脉络凝瘀，气血不畅的虚实夹杂病证；清代医家薛生白将此方稍作加减，用来治疗温病久病气血呆滞，灵机不运而致的“默默不语，神识昏迷”[2]病证；现代常用本方治疗各种中枢神经系统感染后遗的神志呆钝、失语、肢体强直瘫痪等病证。在此基础上我们根据自身的临床体会，结合现代药理研究报道，将本方的药物组成略作调整，同时按照相应的工艺程序制成中药免煎颗粒剂，临床用于治疗老年期痴呆和其他类型学习记忆功能障碍的病证，取得了一定的疗效。为了探讨其作用原理，我们进行了动物实验。
, 百拇医药
中医学认为，智能障碍的主要病理变化是肾精不足，髓海失充，痰瘀滞窍，脑力损伤，因而补肾填精、活血化痰、益脑通窍是重要的治疗方法。通过本项实验研究证实，改良三甲散能够明显提高东莨菪碱所致的学习记忆障碍，小鼠电迷宫测试的正确反应次数，具有拮抗东莨菪碱所诱发的小鼠学习记忆障碍，提高实验动物的学习记忆能力的作用，有着较好的益智作用，这一结果为滋肾活血化痰通窍法临床治疗多种智力障碍，特别是老年期痴呆症提供了可靠的客观依据。
学习记忆是极其复杂的生理生化过程，其影响因素很多，其中中枢胆碱能神经系统发挥着重要的作用，中枢胆碱能神经传递障碍可损伤学习和记忆功能[3]，乙酰胆碱是胆碱能神经介质，了解乙酰胆碱在脑内含量的变化，可分析药物影响学习记忆能力的作用原理，乙酰胆碱酯酶是乙酰胆碱的水解酶，测定脑内胆碱酯酶的活性可判断脑内乙酰胆碱含量的变化。本项实验测定了改良三甲散对脑胆碱酯酶的影响，结果显示改良三甲散能降低胆碱能拮抗剂东莨菪碱所致的学习记忆障碍小鼠脑胆碱酯酶的活性，表现出一定的中枢拟胆碱能作用，提示改良三甲散益智作用的原理，是通过影响中枢胆碱能神经系统的功能而实现的。
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作者简介：刘涛，男，38岁，医学博士、副教授，南京中医药大学温病学教研室教师。多年来致力于温病治则治法在精神神经系统疾病中的运用，特别是对老年期痴呆症有着较深入地研究。先后出版、发表学术论著、论文20多部、篇。
参考文献
[1] 李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1989：171
[2] 沈凤阁，等.叶香岩外感温热篇薛生白湿热病篇阐释.南京：江苏科学技术出版社，1983：196
[3] 刘涛，等.乙酰胆碱在阿尔采未氏病中的研究进展.中国校医杂志 1996；10(6)：475
(收稿日期 1998—09—16 修回日期 1998—10—11), http://www.100md.com