乳腺良恶性病变组织c-met蛋白和转化生长因子α的表达及意义
作者：陈显玉 喻梅英 杨竹林 文继舫 颜亚晖
单位：陈显玉 喻梅英 杨竹林 湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011)；文继舫 颜亚晖 湖南医科大学病理学教研室
关键词：乳腺肿瘤；c-met原癌基因蛋白；转化生长因子；免疫组织化学
中国普外基础与临床杂志990207 摘要 应用免疫组化法测定50例乳腺癌和12例乳腺良性病变组织中c-met蛋白及转化生长因子α(TGF-α)的表达。结果：乳腺癌组织中c-met蛋白及TGF-α表达阳性率分别为26.0%和42.0%，乳腺良性病变组织中两者表达阳性率分别为8.3%和25.0%；组织学分级为Ⅰ级，雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及癌胚抗原(CEA)为阴性的病例中，c-met蛋白及TGF-α表达阳性率明显低于组织学分级Ⅲ级，ER、PR及CEA为阳性者(c-met及PR P<0.01；TGF-α、PR和CEA P<0.05；余P>0.05)。本实验结果提示：c-met蛋白及TGF-α表达可能与乳腺癌发生发展及体机内分泌状态有较密切关系。
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THE EXPRESSIONS AND SIGNIFICANCE OF C-MET ONCOPROTEIN, TRANSFORMING GROWTH FACTOR-α IN BENIGN AND MALIGNANT LESIONS OF BREAST
Chen Xianyu, Yu Meiying, Yang Zhulin, et al.
Department of General Surgery, The Second Affiliated Hospital of Hunan Medical University, Changsha 410011
Abstract The expressions and significance of c-met oncoprotein and transforming growth factor-α (TGF-α) were studied by immunohistochemical method in 50 cases of breast cancer (BC) and 12 cases of benign lesions of breast (BL). The positive rate of c-met, TGF-α in BC was 26.0% and 25.0% respectively, in BL was 8.3% and 25.0% respectively. The positive rate of c-met oncoprotein was lower in the cases of histologic Grade Ⅰ, positive of ER and PR or CEA than that of histologic Grade Ⅲ, negative of ER and PR or CEA. The positive rate of TGF-α was lower in the cases of histologic Grade Ⅰ, negative of ER and PR or CEA than that of histologic Grade Ⅲ, positive of ER and PR or CEA. These results suggest the expression of c-met and TGF-α might be related to the carcinogenesis and development or endocrine state of BC.
, 百拇医药
Key words Breast neoplasm C-met oncoprotein Transforming growth factor Immunohistochemistry
已证实c-met原癌基因编码的c-met蛋白为肝细胞生长因子(HGF)的特异性受体，两者结合后发挥其特异性功能〔1〕。c-met蛋白过度表达与肝癌、胃癌等发生发展及生物学行为有密切关系〔1，2〕。转化生长因子-α(TGF-α)与表皮生长因子结合发挥细胞生长信息传递作用，其表达与大肠癌发生发展及生物学行为有较密切关系〔3，4〕。本研究应用ABC免疫组化法检测乳腺癌和乳腺良性病变组织中c-met蛋白及TGF-α的表达，以探讨其在乳腺癌发生发展中的生物学意义。
1 材料与方法
1.1 标本
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收集我院手术并经病理学证实的女性原发性乳腺癌标本50例，其中浸润性导管癌44例，腺癌和导管内癌各2例，粘液癌和小叶癌各1例。组织学分级参照Bloom和Richardson评分法，分为Ⅰ级18例，Ⅱ级21例和Ⅲ级11例。50例中行乳腺癌组织雌激素受体(ER)及孕酮受体(PR)检测36例，其中ER和PR阳性各17例；行癌胚抗原(CEA)检测33例，其中CEA阳性25例。另外收集了乳腺良性病变标本12例，其中单纯小叶增生6例，伴不典型增生的乳腺囊性增生症6例。上述标本均常规制作石蜡切片，厚4μm，分别行HE染色及ABC免疫组化染色。
1.2 试剂和方法
兔抗人c-met蛋白(1/100)抗体、兔抗人TGF-α(1/100)抗体、生物素标记单抗兔IgG(1/300)及ABC试剂(1/500)均购自Dako公司，DAB为瑞士进口分装。c-met蛋白和TGF-α染色方法均为ABC免疫组化法。细胞内呈棕黄色或深棕黄色为c-met蛋白和TGF-α阳性细胞，切片中阳性细胞率≥20%为阳性病例，<20%为阴性病例；以0.001 M PBS液(pH 7.4)替代一抗作为每次染色的阴性对照。统计学处理为χ2检验或直接概率法。
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2 结果
2.1 c-met蛋白及TGF-α在乳腺良恶性病变中的表达
c-met蛋白和TGF-α免疫组化阳性物质定位于胞膜和/或胞浆，其阳性细胞在癌组织中的分布呈异质性。本组50例乳腺癌组织中c-met蛋白和TGF-α表达阳性率分别为26.0%(13/50)和42.0%(21/50)；12例乳腺良性病变组织中两者表达阳性率分别为8.3%(1/12，该例为重度不典型增生的乳腺囊性增生症)和25.0%(3/12)。
2.2 c-met蛋白及TGF-α表达与乳腺癌临床病理学特征及ER、PR、CEA状态的关系
结果见附表。由附表可见，组织学分级为Ⅰ级的乳腺癌组织中，c-met蛋白表达率低于组织学分级为Ⅲ级的乳腺癌，但无显著性差异(P>0.05)；其表达阳性率在ER、PR及CEA为阳性的病例中高于阴性者，其中PR阳性与阴性病例之间存在高度显著性差异(P<0.01)。TGF-α表达阳性率在组织学分级为Ⅰ级的乳腺癌组织中低于组织学分级为Ⅲ级者(P＝0.044)；在ER、PR及CEA阳性病例中低于阴性者，其中PR及CEA阳性与阴性病例间有显著差异(P<0.05)。有淋巴结转移和肿块最大径>3cm的乳腺癌，其c-met蛋白及TGF-α表达阳性率高于无淋巴结转移及肿块最大径≤3cm者，但无显著性差异(P>0.05)。
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附表 c-met蛋白及TGF-α表达与乳腺癌临床病理特征
及ER、PR和CEA状态的关系 临床特征
例数
c-met蛋白表达阳性率(%)
TGF-α表达阳性率(%)
组织学分级
Ⅰ级
18
27.8(5/18)
22.2( 4/18)
Ⅱ级
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21
19.0(4/21)
52.4(11/21)
Ⅲ级
11
36.4(4/11)
54.5( 6/11)△
ER阳性
17
41.2(7/17)
35.3( 6/17)
ER阴性
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19
21.1(4/19)
52.6(10/19)
PR阳性
17
52.9(9/17)
29.4( 5/17)
PR阴性
19
10.5(2/19)**
57.9(11/19)*
CEA阳性
, 百拇医药
25
36.0(9/25)
20.0( 5/25)
CEA阴性
8
12.5(1/ 8)
62.5( 5/ 8)＃
淋巴结转移
阳性
12
33.3(4/12)
58.3( 7/12)
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阴性
38
23.7(9/38)
36.8(14/38)
肿瘤直径a
≤3cm
26
23.1(6/26)
34.6( 9/26)
>3cm
22
31.8(7/22)
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50.0(11/22)
与PR阳性者比较，*P<0.05，**P<0.01；与Ⅰ级比较，△P＝0.044； 与CEA阳性者比较，＃P<0.05 a: 其中有2例因直径不详未列入
3 讨论
c-met蛋白为HGF特异性受体，具有内源性酪氨酸激酶活性，HGF与c-met蛋白特异性结合对肿瘤细胞生长、分化及恶性转化可能具有重要作用〔1〕。已证实c-met蛋白表达与肝癌发生发展密切相关。Grigion等〔1〕发现肝癌组织c-met蛋白表达强度明显高于局灶结节性增生和非肿瘤切除后再生性肝组织。Biox等〔2〕发现18例肝癌中有8例过度表达c-met mRNA。杨冬华等〔3〕发现8例肝癌中有6例呈c-met蛋白高强度表达，2例呈弱表达，而正常肝组织未见表达。现已证实c-met可在其它一些恶性肿瘤中表达〔4，5〕。本实验结果显示： 26.0%乳腺癌和1例重度不典型增生乳腺囊性增生病表达c-met蛋白，6例单纯小叶增生和5例伴不典型增生的乳腺囊性增生病不表达c-met蛋白，提示c-met蛋白可能在乳腺癌发生发展方面有一定作用。在ER、PR及CEA为阳性的乳腺癌组织中c-met蛋白表达阳性率高于阴性者，提示c-met蛋白表达可能与乳腺癌激素依赖性有一定关系。组织学分级Ⅲ级、有淋巴结转移和肿块最大径>3cm之c-met蛋白表达阳性率高于组织学分级Ⅰ级，无淋巴结转移和肿块最大径≤3cm者，提示c-met蛋白表达可能与乳腺癌临床病理特征有一定关系。
, 百拇医药
TGF-α与表皮生长因子受体结合可致细胞DNA合成增加。已证实TGF-α可导致肝细胞恶变，其表达与一些恶性肿瘤发生发展及预后有较密切关系。Chu等〔5〕对肝癌及其癌旁组织行TGF-α和HBsAg双标记研究，发现两者具有共表达特征。文继舫等〔6〕发现，TGF-α表达与大肠癌细胞增殖和分化程度及预后有较密切关系，中至重度不典型增生腺瘤TGF-α表达阳性率明显高于单纯或伴轻度不典型增生腺瘤，提示TGF-α表达与大肠癌发生发展密切有关。本实验发现42.0%乳腺癌和25.0%的乳腺良性病变表达TGF-α，且组织学分级为Ⅲ级及有淋巴结转移的乳腺癌TGF-α表达阳性率明显高于组织学分级为Ⅰ级及无淋巴结转移者，提示TGF-α表达可能与乳腺癌发生发展、生物学行为及预后有较密切关系。同时还发现TGF-α表达阳性率在ER、PR及CEA为阳性的病例中明显低于阴性者，提示TGF-α表达可能与乳腺癌内分泌状况也有一定关联。
参 考 文 献
, 百拇医药
1 Grigioni WF, Fiorentino M， Derrico A, et al. Overexpression of c-met protooncogene product and raised ki-67 index in hepatocellular carcinomas with respect to benign liver conditions. Hepatology, 1995; 21(6)∶1543
2 Boix L, Rosa JE, Ventura E, et al. c-met mRNA overexpression in human hepatocellular carcinoma. Hepatology, 1994; 19(1)∶88
3 杨冬华，刘为纹，顾建人等. EGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体、CSF-受体(C-fms癌基因产物)在肝癌转录水平的表达. 中华消化杂志， 1993； 13(5)∶259
, 百拇医药
4 Di Renzo MF, Narsimhan RP, Olivero M, et al. Expression of the Met/HGF receptor in normal and neoplastic human tissues. Oncogene, 1991; 6(1)∶101
5 Chu CH, Constantine A, Adrian M. Transforming growth factor-alpha in human hepatocellular carcinoma and coexpression with hepatitis B surface antigen in adjacent liver. Cancer, 1992; 70(5)∶1049
6 文继舫，杨竹林，颜亚晖. 大肠腺瘤和大肠癌组织c-fos、TGF-α的表达及其意义. 中国普通外科杂志， 1996； 5(4)∶193
(1998-02-11收稿，1998-11-26修回), 百拇医药
单位：陈显玉 喻梅英 杨竹林 湖南医科大学第二附属医院普外科(长沙 410011)；文继舫 颜亚晖 湖南医科大学病理学教研室
关键词：乳腺肿瘤；c-met原癌基因蛋白；转化生长因子；免疫组织化学
中国普外基础与临床杂志990207 摘要 应用免疫组化法测定50例乳腺癌和12例乳腺良性病变组织中c-met蛋白及转化生长因子α(TGF-α)的表达。结果：乳腺癌组织中c-met蛋白及TGF-α表达阳性率分别为26.0%和42.0%，乳腺良性病变组织中两者表达阳性率分别为8.3%和25.0%；组织学分级为Ⅰ级，雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及癌胚抗原(CEA)为阴性的病例中，c-met蛋白及TGF-α表达阳性率明显低于组织学分级Ⅲ级，ER、PR及CEA为阳性者(c-met及PR P<0.01；TGF-α、PR和CEA P<0.05；余P>0.05)。本实验结果提示：c-met蛋白及TGF-α表达可能与乳腺癌发生发展及体机内分泌状态有较密切关系。
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THE EXPRESSIONS AND SIGNIFICANCE OF C-MET ONCOPROTEIN, TRANSFORMING GROWTH FACTOR-α IN BENIGN AND MALIGNANT LESIONS OF BREAST
Chen Xianyu, Yu Meiying, Yang Zhulin, et al.
Department of General Surgery, The Second Affiliated Hospital of Hunan Medical University, Changsha 410011
Abstract The expressions and significance of c-met oncoprotein and transforming growth factor-α (TGF-α) were studied by immunohistochemical method in 50 cases of breast cancer (BC) and 12 cases of benign lesions of breast (BL). The positive rate of c-met, TGF-α in BC was 26.0% and 25.0% respectively, in BL was 8.3% and 25.0% respectively. The positive rate of c-met oncoprotein was lower in the cases of histologic Grade Ⅰ, positive of ER and PR or CEA than that of histologic Grade Ⅲ, negative of ER and PR or CEA. The positive rate of TGF-α was lower in the cases of histologic Grade Ⅰ, negative of ER and PR or CEA than that of histologic Grade Ⅲ, positive of ER and PR or CEA. These results suggest the expression of c-met and TGF-α might be related to the carcinogenesis and development or endocrine state of BC.
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Key words Breast neoplasm C-met oncoprotein Transforming growth factor Immunohistochemistry
已证实c-met原癌基因编码的c-met蛋白为肝细胞生长因子(HGF)的特异性受体，两者结合后发挥其特异性功能〔1〕。c-met蛋白过度表达与肝癌、胃癌等发生发展及生物学行为有密切关系〔1，2〕。转化生长因子-α(TGF-α)与表皮生长因子结合发挥细胞生长信息传递作用，其表达与大肠癌发生发展及生物学行为有较密切关系〔3，4〕。本研究应用ABC免疫组化法检测乳腺癌和乳腺良性病变组织中c-met蛋白及TGF-α的表达，以探讨其在乳腺癌发生发展中的生物学意义。
1 材料与方法
1.1 标本
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收集我院手术并经病理学证实的女性原发性乳腺癌标本50例，其中浸润性导管癌44例，腺癌和导管内癌各2例，粘液癌和小叶癌各1例。组织学分级参照Bloom和Richardson评分法，分为Ⅰ级18例，Ⅱ级21例和Ⅲ级11例。50例中行乳腺癌组织雌激素受体(ER)及孕酮受体(PR)检测36例，其中ER和PR阳性各17例；行癌胚抗原(CEA)检测33例，其中CEA阳性25例。另外收集了乳腺良性病变标本12例，其中单纯小叶增生6例，伴不典型增生的乳腺囊性增生症6例。上述标本均常规制作石蜡切片，厚4μm，分别行HE染色及ABC免疫组化染色。
1.2 试剂和方法
兔抗人c-met蛋白(1/100)抗体、兔抗人TGF-α(1/100)抗体、生物素标记单抗兔IgG(1/300)及ABC试剂(1/500)均购自Dako公司，DAB为瑞士进口分装。c-met蛋白和TGF-α染色方法均为ABC免疫组化法。细胞内呈棕黄色或深棕黄色为c-met蛋白和TGF-α阳性细胞，切片中阳性细胞率≥20%为阳性病例，<20%为阴性病例；以0.001 M PBS液(pH 7.4)替代一抗作为每次染色的阴性对照。统计学处理为χ2检验或直接概率法。
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2 结果
2.1 c-met蛋白及TGF-α在乳腺良恶性病变中的表达
c-met蛋白和TGF-α免疫组化阳性物质定位于胞膜和/或胞浆，其阳性细胞在癌组织中的分布呈异质性。本组50例乳腺癌组织中c-met蛋白和TGF-α表达阳性率分别为26.0%(13/50)和42.0%(21/50)；12例乳腺良性病变组织中两者表达阳性率分别为8.3%(1/12，该例为重度不典型增生的乳腺囊性增生症)和25.0%(3/12)。
2.2 c-met蛋白及TGF-α表达与乳腺癌临床病理学特征及ER、PR、CEA状态的关系
结果见附表。由附表可见，组织学分级为Ⅰ级的乳腺癌组织中，c-met蛋白表达率低于组织学分级为Ⅲ级的乳腺癌，但无显著性差异(P>0.05)；其表达阳性率在ER、PR及CEA为阳性的病例中高于阴性者，其中PR阳性与阴性病例之间存在高度显著性差异(P<0.01)。TGF-α表达阳性率在组织学分级为Ⅰ级的乳腺癌组织中低于组织学分级为Ⅲ级者(P＝0.044)；在ER、PR及CEA阳性病例中低于阴性者，其中PR及CEA阳性与阴性病例间有显著差异(P<0.05)。有淋巴结转移和肿块最大径>3cm的乳腺癌，其c-met蛋白及TGF-α表达阳性率高于无淋巴结转移及肿块最大径≤3cm者，但无显著性差异(P>0.05)。
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附表 c-met蛋白及TGF-α表达与乳腺癌临床病理特征
及ER、PR和CEA状态的关系 临床特征
例数
c-met蛋白表达阳性率(%)
TGF-α表达阳性率(%)
组织学分级
Ⅰ级
18
27.8(5/18)
22.2( 4/18)
Ⅱ级
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21
19.0(4/21)
52.4(11/21)
Ⅲ级
11
36.4(4/11)
54.5( 6/11)△
ER阳性
17
41.2(7/17)
35.3( 6/17)
ER阴性
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19
21.1(4/19)
52.6(10/19)
PR阳性
17
52.9(9/17)
29.4( 5/17)
PR阴性
19
10.5(2/19)**
57.9(11/19)*
CEA阳性
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25
36.0(9/25)
20.0( 5/25)
CEA阴性
8
12.5(1/ 8)
62.5( 5/ 8)＃
淋巴结转移
阳性
12
33.3(4/12)
58.3( 7/12)
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阴性
38
23.7(9/38)
36.8(14/38)
肿瘤直径a
≤3cm
26
23.1(6/26)
34.6( 9/26)
>3cm
22
31.8(7/22)
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50.0(11/22)
与PR阳性者比较，*P<0.05，**P<0.01；与Ⅰ级比较，△P＝0.044； 与CEA阳性者比较，＃P<0.05 a: 其中有2例因直径不详未列入
3 讨论
c-met蛋白为HGF特异性受体，具有内源性酪氨酸激酶活性，HGF与c-met蛋白特异性结合对肿瘤细胞生长、分化及恶性转化可能具有重要作用〔1〕。已证实c-met蛋白表达与肝癌发生发展密切相关。Grigion等〔1〕发现肝癌组织c-met蛋白表达强度明显高于局灶结节性增生和非肿瘤切除后再生性肝组织。Biox等〔2〕发现18例肝癌中有8例过度表达c-met mRNA。杨冬华等〔3〕发现8例肝癌中有6例呈c-met蛋白高强度表达，2例呈弱表达，而正常肝组织未见表达。现已证实c-met可在其它一些恶性肿瘤中表达〔4，5〕。本实验结果显示： 26.0%乳腺癌和1例重度不典型增生乳腺囊性增生病表达c-met蛋白，6例单纯小叶增生和5例伴不典型增生的乳腺囊性增生病不表达c-met蛋白，提示c-met蛋白可能在乳腺癌发生发展方面有一定作用。在ER、PR及CEA为阳性的乳腺癌组织中c-met蛋白表达阳性率高于阴性者，提示c-met蛋白表达可能与乳腺癌激素依赖性有一定关系。组织学分级Ⅲ级、有淋巴结转移和肿块最大径>3cm之c-met蛋白表达阳性率高于组织学分级Ⅰ级，无淋巴结转移和肿块最大径≤3cm者，提示c-met蛋白表达可能与乳腺癌临床病理特征有一定关系。
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TGF-α与表皮生长因子受体结合可致细胞DNA合成增加。已证实TGF-α可导致肝细胞恶变，其表达与一些恶性肿瘤发生发展及预后有较密切关系。Chu等〔5〕对肝癌及其癌旁组织行TGF-α和HBsAg双标记研究，发现两者具有共表达特征。文继舫等〔6〕发现，TGF-α表达与大肠癌细胞增殖和分化程度及预后有较密切关系，中至重度不典型增生腺瘤TGF-α表达阳性率明显高于单纯或伴轻度不典型增生腺瘤，提示TGF-α表达与大肠癌发生发展密切有关。本实验发现42.0%乳腺癌和25.0%的乳腺良性病变表达TGF-α，且组织学分级为Ⅲ级及有淋巴结转移的乳腺癌TGF-α表达阳性率明显高于组织学分级为Ⅰ级及无淋巴结转移者，提示TGF-α表达可能与乳腺癌发生发展、生物学行为及预后有较密切关系。同时还发现TGF-α表达阳性率在ER、PR及CEA为阳性的病例中明显低于阴性者，提示TGF-α表达可能与乳腺癌内分泌状况也有一定关联。
参 考 文 献
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1 Grigioni WF, Fiorentino M， Derrico A, et al. Overexpression of c-met protooncogene product and raised ki-67 index in hepatocellular carcinomas with respect to benign liver conditions. Hepatology, 1995; 21(6)∶1543
2 Boix L, Rosa JE, Ventura E, et al. c-met mRNA overexpression in human hepatocellular carcinoma. Hepatology, 1994; 19(1)∶88
3 杨冬华，刘为纹，顾建人等. EGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体、CSF-受体(C-fms癌基因产物)在肝癌转录水平的表达. 中华消化杂志， 1993； 13(5)∶259
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5 Chu CH, Constantine A, Adrian M. Transforming growth factor-alpha in human hepatocellular carcinoma and coexpression with hepatitis B surface antigen in adjacent liver. Cancer, 1992; 70(5)∶1049
6 文继舫，杨竹林，颜亚晖. 大肠腺瘤和大肠癌组织c-fos、TGF-α的表达及其意义. 中国普通外科杂志， 1996； 5(4)∶193
(1998-02-11收稿，1998-11-26修回), 百拇医药