多发性骨髓瘤浆细胞核中AgNOR检测的临床意义
作者：詹竹英 韩秋珍 曾宪昌 曾庆斌 金小君
单位：湖北医科大学附属第二医院血液科 武汉 430071
关键词：嗜银蛋白染色；多发性骨髓瘤
医学新知杂志990303 摘要 为研究多发性骨髓瘤(MM)与反应性浆细胞增多症(RP)、MMⅡB与MMⅢA以及MM治疗前后的骨髓浆细胞嗜银蛋白染色(AgNOR)形态颗粒数量的变化，用AgNOR技术，测定各组AgNOR形态及颗粒数量。结果显示，AgNOR形态在MM组中有单一型、弥漫型、聚集型、核仁形，在RP组中只有单一型，AgNOR颗粒均数在MM组中为6.21±4.12，RP组为2.02±0.63，两组间有非常显著性差异(P<0.001)；MMⅢB和ⅢA组，形态及颗粒均数无差异。17例MM治疗前、后各种形态中颗粒比较差别有显著性(P<0.001)。提示骨髓中浆细胞AgNOR形态及颗粒数量对鉴别良、恶性浆细胞具有一定临床意义，同时也证实了AgNOR法对了解MM中浆细胞增殖水平及预后是一个简单有效的参考指标。
, 百拇医药
Clinical Significance of AgNOR Examination
in Patients with Multiple Myeloma
Zhan zhuying, Han Qiuzhen, Zeng Xianchang，et al
Department of Hematology, The Second AffiliatedHospital,Hubei Medical University, Wuhan 430071
Abstract Objective To explore the clinical significance of argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) examination in multiple myeloma(MM) and reactive plasmacytosys(RP). Method Grain number and morpholoical types of AgNOR were studied using AgNOR staining technique. Results: There were 4 morphological types of AgNOR in cells from MM including nucleolar, diffused,clustered and intranucleolar types, but a singular nucleolar type was found in RP. The mean grain number of AgNOR is much higher in cells from MM (6.21±4.12) than RP (2.02±0.63) (P<0.001), and it reduced sharply after effective treatment in 17 cases of MM (P<0.001). Conclusion The results indicated that AgNOR examinition is helpful in differentiation of MM and RP, and may be related to prognosis of MM. It also proved that AgNOR staining is a simple and useful index to judge the proliferation level of plasma cells.
, 百拇医药
Key words Argyrophilic Nucleolar Organize Region (AgNOR);Multiple Myeloma
由于AgNOR的变化与细胞增殖有密切关系，因此它被广泛用于肿瘤的研究并作为良恶性肿瘤的分级标准。本研究对反应性浆细胞增多症10例(RP组)，多发性骨髓瘤的初治57例(MM组)，治疗有效的17例患者浆细胞核内AgNOR形态、数量进行观察，以探讨其临床意义。
1 临床资料与方法
1.1 资料来源 RP组：10例中男7例，女3例，年龄44～64(52.5±7.72)岁。其诊断和临床特征是：①急、慢性再生障碍性贫血5例，肝硬化2例，伤寒1例，粒缺合并感染2例；②无多发性骨髓瘤的临床表现和诊断依据；③骨髓浆细胞数均在5%以上。MM组：我院1980年1月～1997年8月收治MM 57例。均符合美日西南诊断MM标准及1992年Drine 分期标准。初治组57例中男36例，女21例，年龄40～73(55.2±5.8)岁。骨髓瘤细胞30%～88%。ⅢA型13例，ⅢB型44例。并对其中17例治疗有效后骨髓中浆细胞数>20%以上进行AgNOR形态、数量观察。
, 百拇医药
1.2 AgNOR 法
1.2.1 AgNOR工作液配制 将明胶溶于1%甲酸液配成2%甲酸明胶液后，并与50%硝酸银按1∶2容积比混合成AgNOR工作液。
1.2.2 AgNOR染色方法 先将瑞氏染色骨髓片在油镜下经浆细胞分类计数后，将此片浸于甲醇中退色3 d，用蒸馏水冲洗后在20℃恒温避光潮湿环境下滴上AgNOR工作液染色35 min，用蒸馏水反复冲洗后待干。
1.2.3 计数观察 每张骨髓涂片观察100个浆细胞的核内AgNOR颗粒数，按照关于核仁组成区(AgNOR)研究工作的标准经方案(全国核仁组成学术讨论会制订的上海方案)观察其形态。
1.2.4 统计学处理 采用成组及配对设计两样本均数比较的u检验和t检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 RP组与MM组患者骨髓浆细胞核中AgNOR形态分布及颗粒均数的比较 见表1。
表1 RP组与MM组患者骨髓浆细胞核中AgNOR形态分布及颗粒均数的比较 组别
n
细胞总数
单一型(%)
弥漫型(%)
聚集型(%)
核仁内型(%)
AgNOR(
±s)
RP 组
, 百拇医药
10
1 000
100/100
—
—
—
2.02±0.63
MM组
57
5 700
502
(8.81)
2 447
, 百拇医药
(42.9)
2 073
(36.37)
678
(11.89)
6.21±4.12
MM组与RP组AgNOR均值比较： u=21.6，P<0.001，差别有显著性
2.2 MM组ⅢA与ⅢB浆细胞核中AgNOR形态及各型中AgNOR颗粒数的比较 见表2。
表2 MM组ⅢA与ⅢB AgNOR形态与颗粒数比较 组别
, 百拇医药
n
单一型
弥漫型
聚集型
核仁内型
细胞数(%)
颗粒数(±s)
细胞数(%)
颗粒数(±s)
细胞数(%)
, 百拇医药 颗粒数(±s)
细胞数(%)
颗粒数(±s)
ⅢA
13
160
(12.31)
1.99±0.62
556
(42.77)
, 百拇医药
11.55±1.82
441
(33.92)
6.52±1.43
150
(11.54)
3.83±6.46
ⅢB
44
342
(7.8)
2.68±0.68
, http://www.100md.com
1891
(42.98)
13.20±2.96
1632
(37.09)
6.24±1.43
528
(12.0)
4.01±0.92
t
0.6
0.46
0.14
, 百拇医药
0.16
p
70.05
70.05
70.05
70.5
2.3 治疗前、后AgNOR形态及各型中AgNOR颗粒比较 见表3。
表3 治疗前、后各型中AgNOR颗粒数比较(n=17，±s) 组别
单一型颗粒数
弥漫型颗粒数
, http://www.100md.com
聚集型颗粒数
核仁内型
治疗前
治疗后
t
p
2.31±0.58
1.40±0.31
8.38
<0.001
12.91±2.21
5.19±1.43
12.8
, 百拇医药
<0.001
6.85±1.39
3.83±0.68
11.0
<0.001
4.15±0.76
3.07±0.43
5.6
<0.001
3 讨论
3.1 RP组与MM组AgNOR检测 按国内关于核仁组成区(AgNOR)研究工作的标准化方案的形态分类[1]，在RP组中成熟浆细胞核中AgNOR颗粒呈圆形，界限清楚，通常每个细胞核内仅见1～3个颗粒，多位于核中央，形态规则，全为核仁型。而在MM组(57例)中，以弥漫型为主，与张永贞等[2]报道一致。AgNOR单一型8.81%；弥漫型42.93%；聚集型36.37%；核仁内型11.89%。两组间差异有高度的显著性(P<0.001)。提示AgNOR形态与颗粒计数有助于RP与MM的鉴别诊断。
, 百拇医药
3.2 MM组ⅢA与ⅢB浆细胞核中AgNOR形态颗粒变化 ⅢA与ⅢB均以弥漫型为主，而颗粒数比较P>0.05。许良中[1]认为，可改变AgNOR颗粒的数量、外形及分布等因素如下：①细胞增殖活跃，以致细胞核内核仁分解，AgNOR分散于细胞核内；②核仁融合有缺陷使AgNOR分散；③细胞染色体的倍数增加也会导致含Ag染色体的数目增多；④rDNA转录活性增多，使本来不明显的AgNOR重现。在RP组与MM组，无论是AgNOR形态或颗粒比较均有明显差异，可能因MM组中恶性浆细胞分裂快，增殖能力强，故AgNOR均数增高。MM临床分类中以有无肾功能损害分为ⅢA型与ⅢB型。但Ⅲ期无论肾功能如何，预后都差，若出现肾功能损害，提示病情迅速恶化。所以ⅢA型与ⅢB型中AgNOR形态与颗粒各型比较P>0.05，无差异。
3.3 MM治疗前后AgNOR形态与颗粒数比较 患者17例MM治疗前与治疗后，AgNOR形态与颗粒比较有显著性差异。观察了3例浆细胞似组织细胞(以双核、三核形态为主，偶见6核的浆细胞，AgNOR形态不一，颗粒粗大)的患者，其病情进展迅速，确诊后生存时间仅为20～38个月。另有2例年龄分别为65岁与70岁，浆细胞酷似成熟浆细胞，形状较一致，AgNOR形态多呈圆形，界限清楚。治疗后生存时间1例达8年之久，另1例生存至今已有3.5年。细胞形态近似成熟浆细胞者病程进展较慢，瘤细胞分化不良者，病程进展较快，瘤细胞是呈不同分化程度的浆细胞，分化好的酷似正常成熟浆细胞，分化差的近似组织细胞。骨髓浆细胞形态、大小和CNA/RNA比值对生存期和肾功能衰竭的预测十分重要[4，5]。因此MM骨髓中浆细胞核中AgNOR形态及颗粒计数对鉴别诊断有临床实用意义。至于AgNOR形态和颗粒计数与预后的关系还有待于进一步探讨。但是对了解浆细胞增殖水平及多发性骨髓瘤的预后是一个简单有效的参考指标。
, http://www.100md.com
参考文献
1 许良中.关于核仁组成区(AgNOR)研究工作标准化方案*中国肿瘤临床，1996，23(5)：377
2 张永贞，陈小龙，宣政华.MM浆细胞核仁形成区相关嗜银蛋白检测的初步探讨*上海医学，1995，18(10)：559～562
3 许良中.细胞核仁组成区嗜银蛋白在肿瘤病理学上的应用.肿瘤，1991，11(2)：89～91
4 邓家栋.浆细胞瘤临床血液学.上海：上海科学技术出版社，1985.781～792
5 肖 芒，孔宪涛.浆细胞免疫诊断进展*中华血液病杂志，1992，7(13)：381～383
(1998-12-01 收稿), 百拇医药
单位：湖北医科大学附属第二医院血液科 武汉 430071
关键词：嗜银蛋白染色；多发性骨髓瘤
医学新知杂志990303 摘要 为研究多发性骨髓瘤(MM)与反应性浆细胞增多症(RP)、MMⅡB与MMⅢA以及MM治疗前后的骨髓浆细胞嗜银蛋白染色(AgNOR)形态颗粒数量的变化，用AgNOR技术，测定各组AgNOR形态及颗粒数量。结果显示，AgNOR形态在MM组中有单一型、弥漫型、聚集型、核仁形，在RP组中只有单一型，AgNOR颗粒均数在MM组中为6.21±4.12，RP组为2.02±0.63，两组间有非常显著性差异(P<0.001)；MMⅢB和ⅢA组，形态及颗粒均数无差异。17例MM治疗前、后各种形态中颗粒比较差别有显著性(P<0.001)。提示骨髓中浆细胞AgNOR形态及颗粒数量对鉴别良、恶性浆细胞具有一定临床意义，同时也证实了AgNOR法对了解MM中浆细胞增殖水平及预后是一个简单有效的参考指标。
, 百拇医药
Clinical Significance of AgNOR Examination
in Patients with Multiple Myeloma
Zhan zhuying, Han Qiuzhen, Zeng Xianchang，et al
Department of Hematology, The Second AffiliatedHospital,Hubei Medical University, Wuhan 430071
Abstract Objective To explore the clinical significance of argyrophilic nucleolar organizer region (AgNOR) examination in multiple myeloma(MM) and reactive plasmacytosys(RP). Method Grain number and morpholoical types of AgNOR were studied using AgNOR staining technique. Results: There were 4 morphological types of AgNOR in cells from MM including nucleolar, diffused,clustered and intranucleolar types, but a singular nucleolar type was found in RP. The mean grain number of AgNOR is much higher in cells from MM (6.21±4.12) than RP (2.02±0.63) (P<0.001), and it reduced sharply after effective treatment in 17 cases of MM (P<0.001). Conclusion The results indicated that AgNOR examinition is helpful in differentiation of MM and RP, and may be related to prognosis of MM. It also proved that AgNOR staining is a simple and useful index to judge the proliferation level of plasma cells.
, 百拇医药
Key words Argyrophilic Nucleolar Organize Region (AgNOR);Multiple Myeloma
由于AgNOR的变化与细胞增殖有密切关系，因此它被广泛用于肿瘤的研究并作为良恶性肿瘤的分级标准。本研究对反应性浆细胞增多症10例(RP组)，多发性骨髓瘤的初治57例(MM组)，治疗有效的17例患者浆细胞核内AgNOR形态、数量进行观察，以探讨其临床意义。
1 临床资料与方法
1.1 资料来源 RP组：10例中男7例，女3例，年龄44～64(52.5±7.72)岁。其诊断和临床特征是：①急、慢性再生障碍性贫血5例，肝硬化2例，伤寒1例，粒缺合并感染2例；②无多发性骨髓瘤的临床表现和诊断依据；③骨髓浆细胞数均在5%以上。MM组：我院1980年1月～1997年8月收治MM 57例。均符合美日西南诊断MM标准及1992年Drine 分期标准。初治组57例中男36例，女21例，年龄40～73(55.2±5.8)岁。骨髓瘤细胞30%～88%。ⅢA型13例，ⅢB型44例。并对其中17例治疗有效后骨髓中浆细胞数>20%以上进行AgNOR形态、数量观察。
, 百拇医药
1.2 AgNOR 法
1.2.1 AgNOR工作液配制 将明胶溶于1%甲酸液配成2%甲酸明胶液后，并与50%硝酸银按1∶2容积比混合成AgNOR工作液。
1.2.2 AgNOR染色方法 先将瑞氏染色骨髓片在油镜下经浆细胞分类计数后，将此片浸于甲醇中退色3 d，用蒸馏水冲洗后在20℃恒温避光潮湿环境下滴上AgNOR工作液染色35 min，用蒸馏水反复冲洗后待干。
1.2.3 计数观察 每张骨髓涂片观察100个浆细胞的核内AgNOR颗粒数，按照关于核仁组成区(AgNOR)研究工作的标准经方案(全国核仁组成学术讨论会制订的上海方案)观察其形态。
1.2.4 统计学处理 采用成组及配对设计两样本均数比较的u检验和t检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 RP组与MM组患者骨髓浆细胞核中AgNOR形态分布及颗粒均数的比较 见表1。
表1 RP组与MM组患者骨髓浆细胞核中AgNOR形态分布及颗粒均数的比较 组别
n
细胞总数
单一型(%)
弥漫型(%)
聚集型(%)
核仁内型(%)
AgNOR(
±s)RP 组
, 百拇医药
10
1 000
100/100
—
—
—
2.02±0.63
MM组
57
5 700
502
(8.81)
2 447
, 百拇医药
(42.9)
2 073
(36.37)
678
(11.89)
6.21±4.12
MM组与RP组AgNOR均值比较： u=21.6，P<0.001，差别有显著性
2.2 MM组ⅢA与ⅢB浆细胞核中AgNOR形态及各型中AgNOR颗粒数的比较 见表2。
表2 MM组ⅢA与ⅢB AgNOR形态与颗粒数比较 组别
, 百拇医药
n
单一型
弥漫型
聚集型
核仁内型
细胞数(%)
颗粒数(
±s)细胞数(%)
颗粒数(
±s)细胞数(%)
, 百拇医药 颗粒数(
±s)细胞数(%)
颗粒数(
±s)ⅢA
13
160
(12.31)
1.99±0.62
556
(42.77)
, 百拇医药
11.55±1.82
441
(33.92)
6.52±1.43
150
(11.54)
3.83±6.46
ⅢB
44
342
(7.8)
2.68±0.68
, http://www.100md.com
1891
(42.98)
13.20±2.96
1632
(37.09)
6.24±1.43
528
(12.0)
4.01±0.92
t
0.6
0.46
0.14
, 百拇医药
0.16
p
70.05
70.05
70.05
70.5
2.3 治疗前、后AgNOR形态及各型中AgNOR颗粒比较 见表3。
表3 治疗前、后各型中AgNOR颗粒数比较(n=17，
±s) 组别单一型颗粒数
弥漫型颗粒数
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聚集型颗粒数
核仁内型
治疗前
治疗后
t
p
2.31±0.58
1.40±0.31
8.38
<0.001
12.91±2.21
5.19±1.43
12.8
, 百拇医药
<0.001
6.85±1.39
3.83±0.68
11.0
<0.001
4.15±0.76
3.07±0.43
5.6
<0.001
3 讨论
3.1 RP组与MM组AgNOR检测 按国内关于核仁组成区(AgNOR)研究工作的标准化方案的形态分类[1]，在RP组中成熟浆细胞核中AgNOR颗粒呈圆形，界限清楚，通常每个细胞核内仅见1～3个颗粒，多位于核中央，形态规则，全为核仁型。而在MM组(57例)中，以弥漫型为主，与张永贞等[2]报道一致。AgNOR单一型8.81%；弥漫型42.93%；聚集型36.37%；核仁内型11.89%。两组间差异有高度的显著性(P<0.001)。提示AgNOR形态与颗粒计数有助于RP与MM的鉴别诊断。
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3.2 MM组ⅢA与ⅢB浆细胞核中AgNOR形态颗粒变化 ⅢA与ⅢB均以弥漫型为主，而颗粒数比较P>0.05。许良中[1]认为，可改变AgNOR颗粒的数量、外形及分布等因素如下：①细胞增殖活跃，以致细胞核内核仁分解，AgNOR分散于细胞核内；②核仁融合有缺陷使AgNOR分散；③细胞染色体的倍数增加也会导致含Ag染色体的数目增多；④rDNA转录活性增多，使本来不明显的AgNOR重现。在RP组与MM组，无论是AgNOR形态或颗粒比较均有明显差异，可能因MM组中恶性浆细胞分裂快，增殖能力强，故AgNOR均数增高。MM临床分类中以有无肾功能损害分为ⅢA型与ⅢB型。但Ⅲ期无论肾功能如何，预后都差，若出现肾功能损害，提示病情迅速恶化。所以ⅢA型与ⅢB型中AgNOR形态与颗粒各型比较P>0.05，无差异。
3.3 MM治疗前后AgNOR形态与颗粒数比较 患者17例MM治疗前与治疗后，AgNOR形态与颗粒比较有显著性差异。观察了3例浆细胞似组织细胞(以双核、三核形态为主，偶见6核的浆细胞，AgNOR形态不一，颗粒粗大)的患者，其病情进展迅速，确诊后生存时间仅为20～38个月。另有2例年龄分别为65岁与70岁，浆细胞酷似成熟浆细胞，形状较一致，AgNOR形态多呈圆形，界限清楚。治疗后生存时间1例达8年之久，另1例生存至今已有3.5年。细胞形态近似成熟浆细胞者病程进展较慢，瘤细胞分化不良者，病程进展较快，瘤细胞是呈不同分化程度的浆细胞，分化好的酷似正常成熟浆细胞，分化差的近似组织细胞。骨髓浆细胞形态、大小和CNA/RNA比值对生存期和肾功能衰竭的预测十分重要[4，5]。因此MM骨髓中浆细胞核中AgNOR形态及颗粒计数对鉴别诊断有临床实用意义。至于AgNOR形态和颗粒计数与预后的关系还有待于进一步探讨。但是对了解浆细胞增殖水平及多发性骨髓瘤的预后是一个简单有效的参考指标。
, http://www.100md.com
参考文献
1 许良中.关于核仁组成区(AgNOR)研究工作标准化方案*中国肿瘤临床，1996，23(5)：377
2 张永贞，陈小龙，宣政华.MM浆细胞核仁形成区相关嗜银蛋白检测的初步探讨*上海医学，1995，18(10)：559～562
3 许良中.细胞核仁组成区嗜银蛋白在肿瘤病理学上的应用.肿瘤，1991，11(2)：89～91
4 邓家栋.浆细胞瘤临床血液学.上海：上海科学技术出版社，1985.781～792
5 肖 芒，孔宪涛.浆细胞免疫诊断进展*中华血液病杂志，1992，7(13)：381～383
(1998-12-01 收稿), 百拇医药