非淋菌性尿道炎的病原学研究①
作者：余 平 熊国强② 石歆莹③
单位：免疫学教研室 长沙 410078
关键词：非淋菌性尿道炎；沙眼衣原体；支原体；金黄色葡萄球菌；念珠菌
湖南医科大学学报990309 提要 应用分离培养法和免疫荧光法对1157份泌尿生殖道标本进行常见病原学检测。结果表明：沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)、人型支原体(Mh)、念珠菌(Cd)、金黄色葡萄球菌(金葡菌)的检测阳性率分别为27.8%，33.5%，25.6%，11.5%，23%；两种以上病原的混合感染率为19.8%。该患者90%在20～40岁。本文就病原检出的有关因素进行了探讨。
中国图书分类号 R691.3
Study on etiology of Nongonococcal Urethritis
, http://www.100md.com
Yu Ping Xiong Guoqiang Shi Xinying
(Department of Immunology, Hunan Medical University, Changsha 410078)
One thousand one hundred and fifty-seven samples from urogenital tract were detected by isolating culture and immunofluorescence. The positive rates of Chlamydia trachomatis(CT)， Ureaplasma Urealyticum(UU)，Mycoplasma hominis(Mh)，Candida(Cd)， Staphylococcus aureus were 27.8%,33.5%,25.6%,11.5%,23% respectively. The rate of mixed infection caused by at least two pathogens was 19.8%. About 90% of the infected patients were from 20 to 40 years old. The related factors of pathogen detection were also studied.
, http://www.100md.com
Key words nongonococcal urethritis; Chlamydia trachomatis; Mycoplasma hominis;Staphylococcus aureus; Candida
非淋菌性尿道炎(Nongonococcal urethritis, NGU)是主要的性传播疾病之一。为了较全面了解引起NGU的病原菌，给临床诊断、治疗和性病防治工作提供科学依据。为此，本研究收集了1157例泌尿生殖道感染病人标本，进行了沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis, CT)、解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum, UU)、人型支原体(Mycoplasma hominis, Mh)、念珠菌(Candida, Cd)和细菌学检测，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 诊断指标及对象 参考1990年WHO关于STD、密螺旋会议及Bowie等所用指标[1]：①有婚外性生活史，②有尿道不适感和尿道或阴道异常分泌物，③尿常规或尿道拭子/宫颈拭子白细胞，男性>5个/HP，女性>10个/HP，④淋球菌检查阴性。根据以上指标，收集从1995年6月～1998年12月在长沙市级医院、湘雅医院、湖南医科大学性病专科门诊等处的患者1157例，其中男716例，女441例；年龄16～62岁，均系初诊，拟诊为NGU者以及淋球菌性尿道炎、宫颈炎患者，经药物治疗后尿频、尿痛等状况仍持续存在的复诊病人。
, http://www.100md.com
1.2 材料 支原体培养基，由衡阳医学院提供；衣原体荧光单克隆抗体诊断试剂盒，由中山医科大学提供；CT传送液、营养液，由本室自制；淋球菌培养基、血琼脂培养基、沙氏培养基，由本室自制。
1.3 方法
1.3.1 标本采集 男性用无菌小棉拭子插入尿道1.5～3cm取尿道分泌物，女性用无菌棉拭子插入宫颈1～2cm缓慢转动一圈取出；每例取5支拭子，分别接种UU培养液、Mh培养液、淋球菌培养基、血琼脂培养基、CT标本传送液，置4℃冰箱保存，24h内进行细胞培养。
1.3.2 细菌学检测 将标本拭子分别接种到淋球菌培养基和血琼脂培养基上，然后用白金接种环划开，立即送5% CO2 37℃二氧化碳孵育箱中孵育24h，淋球菌经菌落特征、革兰染色镜检和氧化酶试验鉴定。普通细菌种类经菌落特征、革兰染色、血浆凝固酶等生化试验鉴定。
, 百拇医药
1.3.3 Cd检测 在血琼脂培养基上挑起表面粗糙、白色较大菌落涂片，找到孢子或芽生孢子可确定，必要时将此菌落转种到沙氏培养基上，5% CO2 37℃二氧化碳孵育箱中孵育1～3d。根据菌落特征涂片镜检找到假菌丝及芽生孢子，即可确定。
1.3.4 UU和Mh检测 将接种后的UU,Mh培养液在5% CO2 37℃二氧化碳孵育箱中孵育48h，培养基中指示剂由桔黄色变为粉红色为UU生长指征；由淡红色变为桃红色为Mh生长指征，再取0.05ml转种于固体培养基上孵育48h后，置低倍镜观察，有典型菌落(油煎蛋状)作阳性结果报告。
1.3.5 CT检测 ⑴细菌培养法分离CT：将标本传送液在振荡器上旋涡振荡2min，取上清100μl接种已长成单层的McCoy细胞瓶中，在室温下，以3000r.min-1离心1h，标本吸附4h后更换维持液，经48～72h培养后用无水甲醇固定10min碘染色，显微镜下观察McCoy细胞胞浆内>5个典型棕色包涵体即为阳性。⑵直接荧光抗体法(DFA)按常规方法(中山医科大学提供单抗)在10×40倍荧光显微镜观察，见每片>10个苹果绿色荧光圆点即为阳性。
, http://www.100md.com
1.4 统计学处理 所得数据用χ2检验进行统计分析。
2 结 果
2.1 标本检测结果 1157例NGU患者共检出CT 322株(27.8%)，UU 388株(33.5%)，Mh 296株(25.6%)，金葡菌266株(23%)，Cd 134株(11.5%)，淋球菌培养全部阴性(表1)。其他菌包括绿脓杆菌6株、链球菌22株、棒状杆菌24株、变形杆菌16株。
表1 1157例NGU患者病原微生物学检出阳性例数及其阳性率(%) 性别
总例数
CT
UU
Mh
, http://www.100md.com
Cd
金葡菌
其他菌株
男
716
195(27.2)
236(32.9)
165(23.0)
78(10.9)
164(22.9)
25(2.0)
女
441
, http://www.100md.com
127(28.8)
152(34.4)
131(29.7)
56(12.6)
102(23.1)
43(6.0)
合计
1157
322(27.8)
388(33.5)
296(25.6)
134(11.5)
, 百拇医药
266(23.0)
68(3.4)
2.2 混合感染结果分析 同时有两种以上病原微生物感染率为19.8%，其中以沙眼衣原体或支原体合并细菌感染为最常见(表2)。表2 1157例NGU患者中混合感染病原情况 类型
阳性例数
阳性检出率(%)
CT+细菌
52
4.4
CT+UU
43
3.7
, http://www.100md.com
支原体+细菌
75
6.4
UU+Mh
28
2.4
CT+支原体+细菌
32
2.5
合计
230
19.8
2.3 不同年龄组NGU患者病原体检测结果 20～40岁年龄组是NGU发病的高危人群，占全部阳性例数的92.8%(表3)。表3 1157例NGU患者不同年龄组中病原体检出阳性数及其阳性率(%) 年龄(岁)
, 百拇医药
例数
CT
UU
Mh
Cd
金葡菌
其他菌
共分离株
<19
8
1(12.5)
1(12.5)
2(25.0)
, 百拇医药
2(25.0)
2(25.0)
1(12.5)
9
20～
334
93(27.8)
103(30.8)
87(26.0)
38(11.3)
74(22.1)
27(4.2)
, 百拇医药
422
30～
471
132(28.0)
173(36.7)
119(25.2)
54(11.4)
107(22.7)
24(3.1)
609
40～
264
, 百拇医药 78(29.5)
88(33.3)
68(25.7)
30(11.3)
63(23.8)
10(2.9)
337
50～
74
18(24.3)
23(31.0)
19(25.6)
, 百拇医药
8(10.8)
18(24.3)
5(2.5)
91
>60
6
0
0
1(16.6)
2(33.3)
2(30.3)
1(16.6)
6
, 百拇医药
合计
1157
322(27.7)
388(33.5)
296(25.6)
134(11.5)
266(23.0)
68(3.4)
1474
2.4 CT细胞培养法与DFA法检测结果 1157例NGU患者中CT细胞培养阳性322例(27.8%)，其中有260例作DFA检测，CT阳性73例(28.0%)(表4)。表4 细胞培养法与DFA法检测结果 DFA法
, http://www.100md.com
细胞培养法
合计
+
-
+
70
3
73
-
1
186
187
合计
71
, 百拇医药
189
260
χ2=0.25 P>0.50
3 讨 论
NGU是一组疾病的统称，从部位说，包括了男、女性尿道和女性的宫颈及阴道的炎症，从病原学来说更为复杂，它包括除了淋菌感染外的其他致病菌引起的炎症。本研究通过对1157例NGU患者CT，UU,Mh,Cd和金葡菌感染阳性率进行比较研究，结果显示NGU男女患者5种病原体感染阳性率均较高(表1)，经χ2检验性别间CT，UU,Mh,Cd和金葡菌阳性检出率均无差异(P>0.05)，说明无论男女NGU感染均可由多种病原引起。CT，UU,Mh为NGU的重要病原体，细菌感染也是NGU不可忽视的重要病因之一[2，3]，国内有学者报道[4]，24% NGU患者为单纯金葡菌感染。Kumar[5]比较NGU患者与未发生性接触青少年的尿道带菌情况，发现金葡菌的检出率高于正常组，提示与NGU有关。本研究NGU患者金葡菌感染阳性率为23%，Cd感染阳性率为11.5%。此外，尚有链球菌、绿脓杆菌、棒状杆菌等条件致病菌。因此，在其他病原菌检查阴性时，应考虑细菌、真菌感染的可能。
, 百拇医药
从表2结果显示NGU患者存在混合感染。一个NGU患者可同时混合感染几种性病病原体。1157例患者混合感染率为19.8%，其中以CT或支原体合并细菌感染较多，阳性率分别为4.4%和6.4%。也有衣原体、支原体和细菌混合感染者，阳性率为2.5%，临床上淋病患者经抗淋菌、抗支原体和抗CT治疗后，仍有尿道炎或后尿道炎症状者应警惕细菌、真菌等混合感染，需采取及时检查和对因治疗。NGU发病的高危人群在20～40岁年龄组(表3)，由于此年龄组均为性活跃人群，占全部阳性例数的92.1%，调查中还发现40.8%和21.3%的患者有婚外恋史和不正常性行为，说明目前临床上大多NGU主要是由性传播感染。因此，开展性健康教育和病原的检测是STD防治工作中的重要环节。
本研究分别采用了CT细胞培养方法和DFA法检测了260例临床标本，CT阳性率分别为27.3%，28.0%。将两法比较，经配对卡方检验，阳性结果无差异(P>0.50)。细胞培养法检测CT感染是公认敏感的金标准，但实验技术要求高且操作繁琐，而用DFA法检测CT，则简便、快速、敏感，故临床标本可采用DFA法。
, http://www.100md.com
①湖南省卫生厅资助课题(编号95-9) ②卫生统计学教研室 ③临床微生物学教研室
作者：余平 女 46岁 副教授
参考文献
1 Bowie WR, Willetts V, Megran DW. Doseranging study of fieroxacin for treatment of uncomplicated Chalmydia trachomatis genitai infections. Antimicyob Agents Chemother, 1989,33:1774～1776
2 Speight TM, Holford NHC, Avery S. Drug treatment. 4ed. New Zeland: Adis Precs. Auckland, 1997:1545～1575
3 余平，扈凤平，石歆莹，等.慢性前列腺炎患者沙眼衣原体和解脲支原体感染的实验室诊断.湖南医科大学学报，1998，23(6)：537～539
4 王荷英，施美琴，叶顺章，等.非淋菌性尿道炎的人型支原体及尿素分解支原体的检出.中华皮肤科杂志，1991，24(5)：311～313
5 Kumar B, Bawn G, Sharma M, et al. Urethral flora in adolescent boys. Genitourin Med, 1995,71:328～330
1999-02-26, 百拇医药(余 平 熊国强② 石歆莹③)
单位：免疫学教研室 长沙 410078
关键词：非淋菌性尿道炎；沙眼衣原体；支原体；金黄色葡萄球菌；念珠菌
湖南医科大学学报990309 提要 应用分离培养法和免疫荧光法对1157份泌尿生殖道标本进行常见病原学检测。结果表明：沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)、人型支原体(Mh)、念珠菌(Cd)、金黄色葡萄球菌(金葡菌)的检测阳性率分别为27.8%，33.5%，25.6%，11.5%，23%；两种以上病原的混合感染率为19.8%。该患者90%在20～40岁。本文就病原检出的有关因素进行了探讨。
中国图书分类号 R691.3
Study on etiology of Nongonococcal Urethritis
, http://www.100md.com
Yu Ping Xiong Guoqiang Shi Xinying
(Department of Immunology, Hunan Medical University, Changsha 410078)
One thousand one hundred and fifty-seven samples from urogenital tract were detected by isolating culture and immunofluorescence. The positive rates of Chlamydia trachomatis(CT)， Ureaplasma Urealyticum(UU)，Mycoplasma hominis(Mh)，Candida(Cd)， Staphylococcus aureus were 27.8%,33.5%,25.6%,11.5%,23% respectively. The rate of mixed infection caused by at least two pathogens was 19.8%. About 90% of the infected patients were from 20 to 40 years old. The related factors of pathogen detection were also studied.
, http://www.100md.com
Key words nongonococcal urethritis; Chlamydia trachomatis; Mycoplasma hominis;Staphylococcus aureus; Candida
非淋菌性尿道炎(Nongonococcal urethritis, NGU)是主要的性传播疾病之一。为了较全面了解引起NGU的病原菌，给临床诊断、治疗和性病防治工作提供科学依据。为此，本研究收集了1157例泌尿生殖道感染病人标本，进行了沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis, CT)、解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum, UU)、人型支原体(Mycoplasma hominis, Mh)、念珠菌(Candida, Cd)和细菌学检测，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 诊断指标及对象 参考1990年WHO关于STD、密螺旋会议及Bowie等所用指标[1]：①有婚外性生活史，②有尿道不适感和尿道或阴道异常分泌物，③尿常规或尿道拭子/宫颈拭子白细胞，男性>5个/HP，女性>10个/HP，④淋球菌检查阴性。根据以上指标，收集从1995年6月～1998年12月在长沙市级医院、湘雅医院、湖南医科大学性病专科门诊等处的患者1157例，其中男716例，女441例；年龄16～62岁，均系初诊，拟诊为NGU者以及淋球菌性尿道炎、宫颈炎患者，经药物治疗后尿频、尿痛等状况仍持续存在的复诊病人。
, http://www.100md.com
1.2 材料 支原体培养基，由衡阳医学院提供；衣原体荧光单克隆抗体诊断试剂盒，由中山医科大学提供；CT传送液、营养液，由本室自制；淋球菌培养基、血琼脂培养基、沙氏培养基，由本室自制。
1.3 方法
1.3.1 标本采集 男性用无菌小棉拭子插入尿道1.5～3cm取尿道分泌物，女性用无菌棉拭子插入宫颈1～2cm缓慢转动一圈取出；每例取5支拭子，分别接种UU培养液、Mh培养液、淋球菌培养基、血琼脂培养基、CT标本传送液，置4℃冰箱保存，24h内进行细胞培养。
1.3.2 细菌学检测 将标本拭子分别接种到淋球菌培养基和血琼脂培养基上，然后用白金接种环划开，立即送5% CO2 37℃二氧化碳孵育箱中孵育24h，淋球菌经菌落特征、革兰染色镜检和氧化酶试验鉴定。普通细菌种类经菌落特征、革兰染色、血浆凝固酶等生化试验鉴定。
, 百拇医药
1.3.3 Cd检测 在血琼脂培养基上挑起表面粗糙、白色较大菌落涂片，找到孢子或芽生孢子可确定，必要时将此菌落转种到沙氏培养基上，5% CO2 37℃二氧化碳孵育箱中孵育1～3d。根据菌落特征涂片镜检找到假菌丝及芽生孢子，即可确定。
1.3.4 UU和Mh检测 将接种后的UU,Mh培养液在5% CO2 37℃二氧化碳孵育箱中孵育48h，培养基中指示剂由桔黄色变为粉红色为UU生长指征；由淡红色变为桃红色为Mh生长指征，再取0.05ml转种于固体培养基上孵育48h后，置低倍镜观察，有典型菌落(油煎蛋状)作阳性结果报告。
1.3.5 CT检测 ⑴细菌培养法分离CT：将标本传送液在振荡器上旋涡振荡2min，取上清100μl接种已长成单层的McCoy细胞瓶中，在室温下，以3000r.min-1离心1h，标本吸附4h后更换维持液，经48～72h培养后用无水甲醇固定10min碘染色，显微镜下观察McCoy细胞胞浆内>5个典型棕色包涵体即为阳性。⑵直接荧光抗体法(DFA)按常规方法(中山医科大学提供单抗)在10×40倍荧光显微镜观察，见每片>10个苹果绿色荧光圆点即为阳性。
, http://www.100md.com
1.4 统计学处理 所得数据用χ2检验进行统计分析。
2 结 果
2.1 标本检测结果 1157例NGU患者共检出CT 322株(27.8%)，UU 388株(33.5%)，Mh 296株(25.6%)，金葡菌266株(23%)，Cd 134株(11.5%)，淋球菌培养全部阴性(表1)。其他菌包括绿脓杆菌6株、链球菌22株、棒状杆菌24株、变形杆菌16株。
表1 1157例NGU患者病原微生物学检出阳性例数及其阳性率(%) 性别
总例数
CT
UU
Mh
, http://www.100md.com
Cd
金葡菌
其他菌株
男
716
195(27.2)
236(32.9)
165(23.0)
78(10.9)
164(22.9)
25(2.0)
女
441
, http://www.100md.com
127(28.8)
152(34.4)
131(29.7)
56(12.6)
102(23.1)
43(6.0)
合计
1157
322(27.8)
388(33.5)
296(25.6)
134(11.5)
, 百拇医药
266(23.0)
68(3.4)
2.2 混合感染结果分析 同时有两种以上病原微生物感染率为19.8%，其中以沙眼衣原体或支原体合并细菌感染为最常见(表2)。表2 1157例NGU患者中混合感染病原情况 类型
阳性例数
阳性检出率(%)
CT+细菌
52
4.4
CT+UU
43
3.7
, http://www.100md.com
支原体+细菌
75
6.4
UU+Mh
28
2.4
CT+支原体+细菌
32
2.5
合计
230
19.8
2.3 不同年龄组NGU患者病原体检测结果 20～40岁年龄组是NGU发病的高危人群，占全部阳性例数的92.8%(表3)。表3 1157例NGU患者不同年龄组中病原体检出阳性数及其阳性率(%) 年龄(岁)
, 百拇医药
例数
CT
UU
Mh
Cd
金葡菌
其他菌
共分离株
<19
8
1(12.5)
1(12.5)
2(25.0)
, 百拇医药
2(25.0)
2(25.0)
1(12.5)
9
20～
334
93(27.8)
103(30.8)
87(26.0)
38(11.3)
74(22.1)
27(4.2)
, 百拇医药
422
30～
471
132(28.0)
173(36.7)
119(25.2)
54(11.4)
107(22.7)
24(3.1)
609
40～
264
, 百拇医药 78(29.5)
88(33.3)
68(25.7)
30(11.3)
63(23.8)
10(2.9)
337
50～
74
18(24.3)
23(31.0)
19(25.6)
, 百拇医药
8(10.8)
18(24.3)
5(2.5)
91
>60
6
0
0
1(16.6)
2(33.3)
2(30.3)
1(16.6)
6
, 百拇医药
合计
1157
322(27.7)
388(33.5)
296(25.6)
134(11.5)
266(23.0)
68(3.4)
1474
2.4 CT细胞培养法与DFA法检测结果 1157例NGU患者中CT细胞培养阳性322例(27.8%)，其中有260例作DFA检测，CT阳性73例(28.0%)(表4)。表4 细胞培养法与DFA法检测结果 DFA法
, http://www.100md.com
细胞培养法
合计
+
-
+
70
3
73
-
1
186
187
合计
71
, 百拇医药
189
260
χ2=0.25 P>0.50
3 讨 论
NGU是一组疾病的统称，从部位说，包括了男、女性尿道和女性的宫颈及阴道的炎症，从病原学来说更为复杂，它包括除了淋菌感染外的其他致病菌引起的炎症。本研究通过对1157例NGU患者CT，UU,Mh,Cd和金葡菌感染阳性率进行比较研究，结果显示NGU男女患者5种病原体感染阳性率均较高(表1)，经χ2检验性别间CT，UU,Mh,Cd和金葡菌阳性检出率均无差异(P>0.05)，说明无论男女NGU感染均可由多种病原引起。CT，UU,Mh为NGU的重要病原体，细菌感染也是NGU不可忽视的重要病因之一[2，3]，国内有学者报道[4]，24% NGU患者为单纯金葡菌感染。Kumar[5]比较NGU患者与未发生性接触青少年的尿道带菌情况，发现金葡菌的检出率高于正常组，提示与NGU有关。本研究NGU患者金葡菌感染阳性率为23%，Cd感染阳性率为11.5%。此外，尚有链球菌、绿脓杆菌、棒状杆菌等条件致病菌。因此，在其他病原菌检查阴性时，应考虑细菌、真菌感染的可能。
, 百拇医药
从表2结果显示NGU患者存在混合感染。一个NGU患者可同时混合感染几种性病病原体。1157例患者混合感染率为19.8%，其中以CT或支原体合并细菌感染较多，阳性率分别为4.4%和6.4%。也有衣原体、支原体和细菌混合感染者，阳性率为2.5%，临床上淋病患者经抗淋菌、抗支原体和抗CT治疗后，仍有尿道炎或后尿道炎症状者应警惕细菌、真菌等混合感染，需采取及时检查和对因治疗。NGU发病的高危人群在20～40岁年龄组(表3)，由于此年龄组均为性活跃人群，占全部阳性例数的92.1%，调查中还发现40.8%和21.3%的患者有婚外恋史和不正常性行为，说明目前临床上大多NGU主要是由性传播感染。因此，开展性健康教育和病原的检测是STD防治工作中的重要环节。
本研究分别采用了CT细胞培养方法和DFA法检测了260例临床标本，CT阳性率分别为27.3%，28.0%。将两法比较，经配对卡方检验，阳性结果无差异(P>0.50)。细胞培养法检测CT感染是公认敏感的金标准，但实验技术要求高且操作繁琐，而用DFA法检测CT，则简便、快速、敏感，故临床标本可采用DFA法。
, http://www.100md.com
①湖南省卫生厅资助课题(编号95-9) ②卫生统计学教研室 ③临床微生物学教研室
作者：余平 女 46岁 副教授
参考文献
1 Bowie WR, Willetts V, Megran DW. Doseranging study of fieroxacin for treatment of uncomplicated Chalmydia trachomatis genitai infections. Antimicyob Agents Chemother, 1989,33:1774～1776
2 Speight TM, Holford NHC, Avery S. Drug treatment. 4ed. New Zeland: Adis Precs. Auckland, 1997:1545～1575
3 余平，扈凤平，石歆莹，等.慢性前列腺炎患者沙眼衣原体和解脲支原体感染的实验室诊断.湖南医科大学学报，1998，23(6)：537～539
4 王荷英，施美琴，叶顺章，等.非淋菌性尿道炎的人型支原体及尿素分解支原体的检出.中华皮肤科杂志，1991，24(5)：311～313
5 Kumar B, Bawn G, Sharma M, et al. Urethral flora in adolescent boys. Genitourin Med, 1995,71:328～330
1999-02-26, 百拇医药(余 平 熊国强② 石歆莹③)