2，2′-二硫代双苯甲酸衍生物的合成及其抗血小板聚集作用
作者：赵圣印 刘少诚 许佑军 王淑珍 张晓静
单位：赵圣印 刘少诚 许佑军 王淑珍(沈阳药科大学药物化学教研室，沈阳110015)；张晓静(内蒙集宁新特药采购供应站，集宁012000)
关键词：2，2′-二硫代双苯甲酸；TXA2/PGH2受体拮抗剂；血小板聚集抑制剂
摘 要 根据TXA2摘 要 根据TXA2/PGH2受体拮抗剂的结构特征，设计合成了16个2，2′-二硫代双苯甲酸衍生物，部分目标化合物在体外对ADP诱导的兔血小板聚集均有不同程度的抑制作用，其中化合物(I3)活性较强.
The Synthesis and Platelet Aggregation
, 百拇医药
I nhibitory Activities of 2,2′
-Dithiodibenzoic Acid Derivatives
Zhao Shengyin,Liu Shaocheng,Xu Youjun,Wang Shuzhen,Zhang Xiaojing
(Department of Medicinal Chemistry,Shenyang Pharmaceutical University,Sh enyang 110015)
Abstract In order to search for novel platelet aggregation inhibitors,together with integ ration of the structural features of TXA2/PGH2 receptor antagonists,sixteen 2 ,2′-dithiodibenzoic acid derivatives were designed and synthesized.All of them have not been reported before in the literature except(I1),(I16).The in vitro tests on the rabbit platelet aggregation induced by ADP showed six target compounds possessed excellent inhibitory activities.(I3) was the most potent compound.
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Key words 2,2′-dithiodibenzoic acid;TXA2/PGH2 receptor antagonists;platelet aggregation inhibitors
血小板聚集可以导致动脉粥样硬化、心绞痛、脑血栓等心脑血管疾病，因此研究开发新型抗血小板药具有十分重要意义.本世纪70年代末，日本学者Yamada〔1～3〕等合成了一些2，2′-二硫代双苯甲酰胺衍生物，体外筛选发现具有较强的抑制血小板聚集活性，如KF4939，对ADP、胶原、花生四烯酸、凝血酶诱导的血小板聚集抑制作用均强于对照组的阿斯匹林和罂粟碱，该化合物通过抑制磷脂酶C和磷脂酶A2的激活，阻断TXA2与其受体的结合而发挥抗血小板聚集作用，并能抑制TXA2和5-HT等引起的血管收缩作用，是一类具有研究开发价值的新型抗血小板药.
, http://www.100md.com 1 合成路线设计
根据TXA2/PGH2受体拮抗剂的结构特征：苯环必须与—SO2—(—CO—)相连，而且苯环、磺酰基(或羰基)和羧基是TXA2/PGH2药效构象所必需的，磺酰基(或羰基)与羧基相隔5个碳原子时活性最强〔4〕，而2，2′-二硫代双苯甲酸衍生物的酰胺(酯)基与二硫键处于邻位，二硫键是活性所必需的，其还原产物活性降低.据此设计合成了16个2，2′-二硫代双苯甲酸衍生物(I1)～(I16)和KF4939，除化合物(I1)，(I16)外，其余14个化合物均未见文献报道，其结构经红外光谱、核磁共振氢谱、元素分析等确证，目标化合物的合成路线见图1.
, 百拇医药
Fig.1 Routes of synthesis for the target compounds
以邻氨基苯甲酸为起始原料，经重氮化引入二硫键，制酰氯、酰胺(酯)得目的物.在制备二硫化钠时应严格控制升华硫的用量，并充分搅拌以避免多硫化物的生成，制备酰胺(I11)～(I14)一步通常采用低温反应，加入过量的原料胺以中和生成的氯化氢，反应后滤去原料胺的盐酸盐，再进行后处理；制备化合物(I2)，(I4)，(I5)时，采用Schotten-Bauman反应条件，将氨基酸溶于5%氢氧化钠溶液中生成氨基酸钠盐，再滴加酰氯的四氢呋喃溶液快速搅拌进行酰化反应，并严格控制pH值在8～9，这样可以增加酰氯在反应所用混合溶剂中的溶解度，避免水解；制备化合物(I1)，(I3)，(I6))，(I15)时，将原料胺的盐溶于碱性碳酸钠溶液中，使胺游离，用氯仿提取胺后直接用氯仿做溶剂进行反应；制备化合物(I7)～(I10)时，由于β-氨基乙醇中含有碱性氨基可以中和反应中生成的酸，酰氯直接与β-氨基乙醇在氯仿中反应，反应结束后用碳酸钠溶液洗去酸来进行制备；制备化合物(I16)，KF4939时严格控制反应温度以减少酯的生成.
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2 合成实验
熔点测定采用毛细管法，温度未经校正.化合物测试所用仪器为：CarloErba1106型元素分析仪，IFS55型傅立叶变换红外光谱仪，ARX-300型核磁共振仪.
2.1 2，2′-二硫代双苯甲酸(1)的制备
按文献〔5〕方法制备，mp284～287℃(文献〔5〕mp288～289℃).
2.2 2，2′-二硫代双苯甲酰氯(2)的制备
化合物(1)6.0g(20mmol)，苯30mL，无水吡啶4滴，滴加二氯亚砜5.0mL(70mmol)，搅拌回流4.5h，趁热抽滤，冷却，滤出固体，用苯-石油醚重结晶，得浅黄色结晶(2)5.5g，收率：81.5%，mp148～151℃(文献〔6〕mp155～156℃).
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2.3 N，N′-(2，2′-二硫代双苯甲酰)双-DL-丙氨酸乙酯(I3)的合成
氢氧化钠0.65g，DL-丙氨酸乙酯盐酸盐2.5g(16mmol)溶于10mL水中，用氯仿10mL×3提取，氯仿用无水硫酸镁干燥.化合物(2)1.0g(2.9mmol)分批加入到氯仿溶液中，5～10℃反应6h.依次用稀盐酸、10%碳酸钠和水洗涤，干燥，蒸去氯仿，得浅黄色油状物，苯重结晶得白色粉末(I3)1.26g，收率：84.0%，mp107～110℃，化合物(I1)，(I6)，(I15)按此方法合成.
2.4 N，N′-(2，2′-二硫代双苯甲酰)双-6-氨基己酸(I5)的合成
6-氨基己酸1.8g(14mmol)，水10mL，加5%氢氧化钠水溶液调pH8～9，加四氢呋喃10mL，滴加化合物(2)1.1g(3.2mmol)的10mL四氢呋喃溶液，于30～35℃反应5.5h.反应毕蒸去四氢呋喃，加盐酸调pH至5，析出粘稠状固体，硅胶柱层析分离得白色粉末(I5)0.95g，收率：54.1%，mp132～135℃，化合物(I2)，(I4)按此方法合成.
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2.5 2，2′-二硫代双苯甲酸双-β-吗啉乙酯(I9)的合成
N-(2-羟乙基)吗啉1.0mL(7.6mmol)，氯仿20mL，5～10℃加入化合物(2)0.65g(1.9mmol)反应4h.反应液用5%碳酸钠和水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出氯仿得粘稠状物，环己烷重结晶得白色粉末(I9)0.66g，收率：65.4%，mp106～108℃.化合物(I7)，(I8)，(I10)按此方法合成.
2.6 2，2′-二硫代双(N-5-氯吡啶-2-苯甲酰胺)(I11)的合成
5-氯-2-氨基吡啶1.5g(13mmol)，四氢呋喃15mL，滴加化合物(2)1.1g(3.2mmol)溶于10mL四氢呋喃的溶液，滴毕在5～10℃反应4.5h.滤去5-氯-2-氨基吡啶盐酸盐，滤液蒸出四氢呋喃，氯仿重结晶得白色粉末(I11)1.25g，收率：80.5%，mp237～240℃.化合物(I12)，(I13)，(I14)按此方法合成.
, 百拇医药
2.7 2，2′-二硫代双[(N-2-羟丙基)苯甲酰胺](KF4939)的合成
四氢呋喃20mL，异丙醇胺1.5mL(20mmol),于0～5℃搅拌下滴加化合物(2)1.7g(5mmol)溶于15mL四氢呋喃的溶液，搅拌反应6h.将反应液倒入50mL水中，析出固体，乙醇重结晶得白色粉末(KF4939)1.55g，收率：73.8%，mp175～177℃(文献〔3〕mp176～179℃)，化合物(I16)按本方法合成.所合成化合物的理化常数及波谱数据见表1.
Tab.1 Physical properties and spectral data of the target compounds
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Compd. R
Yield/%
mp/℃
Elemental analysis/%
IR(KBr)
/cm-1
1H-NMR δ
Found(Calc.)
C H N
I1
, http://www.100md.com
NHCH2COOCH2CH3
80.5
147～149
3282，1756，1638，1587，1456
7.76～7.26(m,8H,Ph-H),6.73(s,2H,NH),4.25(m,8H,CH2),1.32(t,6H,CH3)
I2
43.5
, 百拇医药
232～234
53.27
4.32
6.06
53.56
4.49
6.24
3287，3300～2500，1714，1635，1587，1458
12.63(br,2H,COOH),8.87(s,2H,NH),7.72～7.39(m,8H,Ph-H),4.42(m,2H,CH),1.36(q,6H,CH3)
I3
, 百拇医药
84.0
107～110
57.39
5.41
5.34
57.12
5.59
5.55
3265，1743，1632，1535，1455
7.75～7.23(m,8H,Ph-H),6.76(s,2H,NH),4.79
(m,2H,CH),4.24(q,4H,CH2)，1.56(q,6H,CH3)，1.32(q,6H,CH3)
, 百拇医药
I4
NH(CH2)2COOH
47.9
204～207
53.68
4.38
6.18
53.56
4.49
6.24
3280，3200～2500，1709，1637，1544，1433
, 百拇医药
12.25(br,2H,COOH),8.70(s,2H,NH),7.61～7.29(m,8H,Ph-H)，3.46(q,4H,NCH2)，2.51(m,4H,CH2CO)
I5
NH(CH2)5COOH
54.1
132～135
58.47
6.19
5.24
58.63
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6.05
5.26
3322，3200～2500，1720，1637，1540，1460
11.98(br,2H,COOH),8.61(s,2H,NH),7.60～7.26(m,8H,Ph-H)，3.24(t,4H,NCH2)，2.19(m,4H,CH2),1.54(m,8H,CH2)，1.34(m,4H,CH2)
I6
NH(CH2)5COOCH2CH3
62.5
, http://www.100md.com
98～100
60.95
6.70
4.64
61.20
6.85
4.86
3297，1731，1634，1546，1464
7.72～7.21(m,8H,Ph-H)，6.31
(br,2H,NH),4.10(q,4H,OCH2),3.41
(t,4H,NCH2)，2.31(t,4H,CH2)，1.63
, 百拇医药
(m,8H,CH2)，1.44(m,4H,CH2)，1.24
(m,6H,CH3)
I7
60.9
83～85
58.71
6.39
6.52
58.90
, 百拇医药
6.29
6.24
2947，2823，1699，1586，1459
8.07～7.20(m,8H,Ph-H),4.49(t,4H,OCH2)，2.76(t,4H,NCH2),2.35(t,12H,NCH3)
I8
73.2
92～94
, http://www.100md.com
63.33
6.72
5.35
63.61
6.86
5.30
2930，2788，1698，1586，1458
8.04～7.23(m,8H,Ph-H)，4.52
(t,4H,OCH2),2.80(t,4H,NCH2)，2.53
(m,8H,NCH2),1.59(m,8H,CH2),1.44(m,4H,CH2)
, 百拇医药
I9
65.4
106～108
58.37
6.13
5.37
58.63
6.05
5.26
2944，2859，1701，1586，1456
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8.06～7.27(m,8H,Ph-H)，4.53
(t,4H,OCH2),3.71(t,8H,OCH2)，2.82(q,4H,NCH2),2.57(q,8H,NCH2)
(tobe continued)
(Continued Tab.1)
Compd. R
Yield/%
mp/℃
Elemental analysis/%
IR(KBr)/cm-1
, 百拇医药
1H-NMR δ
Found(Calc.)
C H N
I10
58.8
76～79
60.23
6.95
10.01
60.19
, 百拇医药
6.85
10.03
2937，2791，1714，1587，1455
8.05～7.26(m,8H,Ph-H)，4.52
(q,4H,OCH2),2.84(t,4H,NCH2)，2.64
(br,8H,NCH2),2.49(br,8H,NCH2),2.29(s,6H,NCH3)
I11
, http://www.100md.com
80.5
237～240
54.65
2.69
10.31
54.65
3.05
10.62
3073，1681，1577，1455
8.64～8.10(m,6H,Ar-H)，7.98～7.77
(m,8H,Ph-H),7.49(br,2H,NH)
, 百拇医药
I12
55.5
192～196
45.53
3.65
19.71
45.71
3.84
19.99
3331，1646，1589，1451
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10.23(s,2H,NH)，8.03(s,2H，NH)，7.78～7.28(m,8H,Ph-H),6.05(br,4H,NH2)
I13
84.5
172～175
64.32
4.69
11.28
64.18
, http://www.100md.com
4.56
11.51
3290，1651，1598，1491
10.44(s,2H,NH)，8.04～6.81
(m,18H,Ph-H),6.71(br,2H,NH)
I14
71.3
240～243
57.26
, http://www.100md.com
3.59
15.13
57.34
3.70
15.43
3212，1596，1550，1478
11.00(s,2H,NH)，10.81(s,2H,NH),8.79
(d,4H,Ar-H),7.84～7.39
(m,12H,Ar-H andPh-H)
I15
NHCH2CH2ONO2
, 百拇医药
65.6
137～139
44.74
3.69
11.39
44.81
3.76
11.61
3290，1628，1545，1459，1272
8.90(s,2H,NH)，7.64～7.32
(m,8H,Ph-H),4.69(t,4H,OCH2)，3.65(t,4H,NCH2)
, 百拇医药
I16
NHCH2CH2OH
74.5
178～180
3288，1633，1540，1431，1312
8.59(s,2H,NH)，7.66～7.29
(m,8H,Ph-H),4.70(br,2H,OH)，3.54
(t,4H,OCH2),3.33(t,4H,NCH2)
KF4939
, http://www.100md.com
73.8
175～177
3299，1637，1540，1431，1275
8.92(s,2H,NH)，7.63～7.31
(m,8H,Ph-H),5.35(br,2H,OH)，3.68
(m,2H,OCH),3.47(m,4H,NCH2),1.35(d,6H,CH3)
3 药理实验
3.8%枸橼酸钠，ADP(中科院上海东风生化公司)，二甲基亚砜(天津化学试剂一厂)，家兔(体重2.6～3.0kg，雌雄兼用).以兔颈动脉取血按9∶1比例加入到装有3.8%枸橼酸钠的塑料管中，以1000r/min离心5min，分离出上清液PRP(富含血小板血浆).继而以3000r/min离心10min，分离上清液为PPP(贫含血小板血浆)，以PPP调90%，以PRP调10%，精密吸取300 μLPRP于比色管中，向其中加入不同浓度的受试化合物样品液10μL，置测试孔内，37℃温育2min，加入诱导剂ADP30μL(终浓度8μmol/L)诱导聚集，按比浊法〔7〕测定血小板最大聚集抑制率，将结果进行t检验，线性回归求出各化合物IC50值，列于表2中.Tab.2 Platelet aggregation inhibition of the title compounds
, 百拇医药
Compd.
IC50/μmol.L-1
Compd.
IC50/μmol.L-1
Compd.
IC50/μmol.L-1
I1
20
I7
, 百拇医药
>100
I13
>100
I2
>100
I8
>100
I14
>100
I3
2.5
I9
, 百拇医药
35
I15
>100
I4
>100
I10
26
I16
29
I5
>100
I11
, http://www.100md.com
>100
KF4939
6.0
I6
>100
I12
48
Daltroban②
100
①ADP-induced rabbit platelet aggregation ②the control compound 16个目标化合物中多数化合物对ADP诱导的兔血小板聚集均有不同程度的抑制作用.其中侧链为脂肪长链酰胺化合物活性强于芳香酰胺化合物，将酰胺键换成酯键如β-氨基乙醇酯类化合物也显示了较强的活性，KF4939末端羟甲基改为羧基导致活性减弱，化合物(I3)活性最强，与KF4939相当但强于达曲班(Daltroban)，深入的药理实验正在进行.上述所得初步结论可为下一步合成研究工作提供方向，即合成重点应放在脂肪族侧链酰胺(酯)衍生物上，且侧链中含有羟基、胺基等易形成氢键基团.
, 百拇医药
致谢：药理筛选工作由中国医学科学院生物医学工程研究所张永富、张毓芬等完成；山东医科大学孟昭力老师提供达曲班，在此表示感谢.
赵圣印：通讯联系人 现址：中国药科大学新药研究中心，南京210009
参考文献
1 Yamada Y,Shuto K,Nakamizo N.Inhibition of platelet aggregation by a new agent,2,2′-dithiobis-(N-2-hydropropylbenzamide)(KF 4939).Throm R es,1983,29(2):197～206
2 Yamada K,Kubo K,Shuto K,et al.Inhibition of thromboxane A2 induced vaso constriction by KF 4939,a new antiplatelet agent,in rabbit mesenteric and dog co ronary arteries.Jpn J Pharmacol,1984,36(3):283～290
, 百拇医药
3 Yamada K,Niino H,Hashimoto T,et al.2,2′-Dithiodibenzamides as inhibitor s of blood platelet aggregation.Chem Pharm Bull,1985,33(3):1214～1220
4 杨洁，华维一.血栓素受体拮抗剂药效构象研究.中国药科大学学报，1994，25(1)：61～64
5 Allen CHF,Mackay DD.Thiosalicylic acid.Org Syn.1955，Coll Vol(Ⅱ)：580～583
6 Douglass IB,Farah BS.The anhydrous chlorination of some mercapto acids and an alogous disulfides.J Org Chem,1961,26(3):351～354
7 徐叔云，卞如濂,陈修.药理实验方法学.第二版，北京：人民卫生出版社，1991.1121～1123
收稿日期:1999-05-02, 百拇医药
单位：赵圣印 刘少诚 许佑军 王淑珍(沈阳药科大学药物化学教研室，沈阳110015)；张晓静(内蒙集宁新特药采购供应站，集宁012000)
关键词：2，2′-二硫代双苯甲酸；TXA2/PGH2受体拮抗剂；血小板聚集抑制剂
摘 要 根据TXA2摘 要 根据TXA2/PGH2受体拮抗剂的结构特征，设计合成了16个2，2′-二硫代双苯甲酸衍生物，部分目标化合物在体外对ADP诱导的兔血小板聚集均有不同程度的抑制作用，其中化合物(I3)活性较强.
The Synthesis and Platelet Aggregation
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I nhibitory Activities of 2,2′
-Dithiodibenzoic Acid Derivatives
Zhao Shengyin,Liu Shaocheng,Xu Youjun,Wang Shuzhen,Zhang Xiaojing
(Department of Medicinal Chemistry,Shenyang Pharmaceutical University,Sh enyang 110015)
Abstract In order to search for novel platelet aggregation inhibitors,together with integ ration of the structural features of TXA2/PGH2 receptor antagonists,sixteen 2 ,2′-dithiodibenzoic acid derivatives were designed and synthesized.All of them have not been reported before in the literature except(I1),(I16).The in vitro tests on the rabbit platelet aggregation induced by ADP showed six target compounds possessed excellent inhibitory activities.(I3) was the most potent compound.
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Key words 2,2′-dithiodibenzoic acid;TXA2/PGH2 receptor antagonists;platelet aggregation inhibitors
血小板聚集可以导致动脉粥样硬化、心绞痛、脑血栓等心脑血管疾病，因此研究开发新型抗血小板药具有十分重要意义.本世纪70年代末，日本学者Yamada〔1～3〕等合成了一些2，2′-二硫代双苯甲酰胺衍生物，体外筛选发现具有较强的抑制血小板聚集活性，如KF4939，对ADP、胶原、花生四烯酸、凝血酶诱导的血小板聚集抑制作用均强于对照组的阿斯匹林和罂粟碱，该化合物通过抑制磷脂酶C和磷脂酶A2的激活，阻断TXA2与其受体的结合而发挥抗血小板聚集作用，并能抑制TXA2和5-HT等引起的血管收缩作用，是一类具有研究开发价值的新型抗血小板药.
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根据TXA2/PGH2受体拮抗剂的结构特征：苯环必须与—SO2—(—CO—)相连，而且苯环、磺酰基(或羰基)和羧基是TXA2/PGH2药效构象所必需的，磺酰基(或羰基)与羧基相隔5个碳原子时活性最强〔4〕，而2，2′-二硫代双苯甲酸衍生物的酰胺(酯)基与二硫键处于邻位，二硫键是活性所必需的，其还原产物活性降低.据此设计合成了16个2，2′-二硫代双苯甲酸衍生物(I1)～(I16)和KF4939，除化合物(I1)，(I16)外，其余14个化合物均未见文献报道，其结构经红外光谱、核磁共振氢谱、元素分析等确证，目标化合物的合成路线见图1.
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Fig.1 Routes of synthesis for the target compounds
以邻氨基苯甲酸为起始原料，经重氮化引入二硫键，制酰氯、酰胺(酯)得目的物.在制备二硫化钠时应严格控制升华硫的用量，并充分搅拌以避免多硫化物的生成，制备酰胺(I11)～(I14)一步通常采用低温反应，加入过量的原料胺以中和生成的氯化氢，反应后滤去原料胺的盐酸盐，再进行后处理；制备化合物(I2)，(I4)，(I5)时，采用Schotten-Bauman反应条件，将氨基酸溶于5%氢氧化钠溶液中生成氨基酸钠盐，再滴加酰氯的四氢呋喃溶液快速搅拌进行酰化反应，并严格控制pH值在8～9，这样可以增加酰氯在反应所用混合溶剂中的溶解度，避免水解；制备化合物(I1)，(I3)，(I6))，(I15)时，将原料胺的盐溶于碱性碳酸钠溶液中，使胺游离，用氯仿提取胺后直接用氯仿做溶剂进行反应；制备化合物(I7)～(I10)时，由于β-氨基乙醇中含有碱性氨基可以中和反应中生成的酸，酰氯直接与β-氨基乙醇在氯仿中反应，反应结束后用碳酸钠溶液洗去酸来进行制备；制备化合物(I16)，KF4939时严格控制反应温度以减少酯的生成.
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2 合成实验
熔点测定采用毛细管法，温度未经校正.化合物测试所用仪器为：CarloErba1106型元素分析仪，IFS55型傅立叶变换红外光谱仪，ARX-300型核磁共振仪.
2.1 2，2′-二硫代双苯甲酸(1)的制备
按文献〔5〕方法制备，mp284～287℃(文献〔5〕mp288～289℃).
2.2 2，2′-二硫代双苯甲酰氯(2)的制备
化合物(1)6.0g(20mmol)，苯30mL，无水吡啶4滴，滴加二氯亚砜5.0mL(70mmol)，搅拌回流4.5h，趁热抽滤，冷却，滤出固体，用苯-石油醚重结晶，得浅黄色结晶(2)5.5g，收率：81.5%，mp148～151℃(文献〔6〕mp155～156℃).
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2.3 N，N′-(2，2′-二硫代双苯甲酰)双-DL-丙氨酸乙酯(I3)的合成
氢氧化钠0.65g，DL-丙氨酸乙酯盐酸盐2.5g(16mmol)溶于10mL水中，用氯仿10mL×3提取，氯仿用无水硫酸镁干燥.化合物(2)1.0g(2.9mmol)分批加入到氯仿溶液中，5～10℃反应6h.依次用稀盐酸、10%碳酸钠和水洗涤，干燥，蒸去氯仿，得浅黄色油状物，苯重结晶得白色粉末(I3)1.26g，收率：84.0%，mp107～110℃，化合物(I1)，(I6)，(I15)按此方法合成.
2.4 N，N′-(2，2′-二硫代双苯甲酰)双-6-氨基己酸(I5)的合成
6-氨基己酸1.8g(14mmol)，水10mL，加5%氢氧化钠水溶液调pH8～9，加四氢呋喃10mL，滴加化合物(2)1.1g(3.2mmol)的10mL四氢呋喃溶液，于30～35℃反应5.5h.反应毕蒸去四氢呋喃，加盐酸调pH至5，析出粘稠状固体，硅胶柱层析分离得白色粉末(I5)0.95g，收率：54.1%，mp132～135℃，化合物(I2)，(I4)按此方法合成.
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2.5 2，2′-二硫代双苯甲酸双-β-吗啉乙酯(I9)的合成
N-(2-羟乙基)吗啉1.0mL(7.6mmol)，氯仿20mL，5～10℃加入化合物(2)0.65g(1.9mmol)反应4h.反应液用5%碳酸钠和水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸出氯仿得粘稠状物，环己烷重结晶得白色粉末(I9)0.66g，收率：65.4%，mp106～108℃.化合物(I7)，(I8)，(I10)按此方法合成.
2.6 2，2′-二硫代双(N-5-氯吡啶-2-苯甲酰胺)(I11)的合成
5-氯-2-氨基吡啶1.5g(13mmol)，四氢呋喃15mL，滴加化合物(2)1.1g(3.2mmol)溶于10mL四氢呋喃的溶液，滴毕在5～10℃反应4.5h.滤去5-氯-2-氨基吡啶盐酸盐，滤液蒸出四氢呋喃，氯仿重结晶得白色粉末(I11)1.25g，收率：80.5%，mp237～240℃.化合物(I12)，(I13)，(I14)按此方法合成.
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2.7 2，2′-二硫代双[(N-2-羟丙基)苯甲酰胺](KF4939)的合成
四氢呋喃20mL，异丙醇胺1.5mL(20mmol),于0～5℃搅拌下滴加化合物(2)1.7g(5mmol)溶于15mL四氢呋喃的溶液，搅拌反应6h.将反应液倒入50mL水中，析出固体，乙醇重结晶得白色粉末(KF4939)1.55g，收率：73.8%，mp175～177℃(文献〔3〕mp176～179℃)，化合物(I16)按本方法合成.所合成化合物的理化常数及波谱数据见表1.
Tab.1 Physical properties and spectral data of the target compounds
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Compd. R
Yield/%
mp/℃
Elemental analysis/%
IR(KBr)
/cm-11H-NMR δ
Found(Calc.)
C H N
I1
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NHCH2COOCH2CH3
80.5
147～149
3282，1756，1638，1587，1456
7.76～7.26(m,8H,Ph-H),6.73(s,2H,NH),4.25(m,8H,CH2),1.32(t,6H,CH3)
I2
43.5
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232～234
53.27
4.32
6.06
53.56
4.49
6.24
3287，3300～2500，1714，1635，1587，1458
12.63(br,2H,COOH),8.87(s,2H,NH),7.72～7.39(m,8H,Ph-H),4.42(m,2H,CH),1.36(q,6H,CH3)
I3
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84.0
107～110
57.39
5.41
5.34
57.12
5.59
5.55
3265，1743，1632，1535，1455
7.75～7.23(m,8H,Ph-H),6.76(s,2H,NH),4.79
(m,2H,CH),4.24(q,4H,CH2)，1.56(q,6H,CH3)，1.32(q,6H,CH3)
, 百拇医药
I4
NH(CH2)2COOH
47.9
204～207
53.68
4.38
6.18
53.56
4.49
6.24
3280，3200～2500，1709，1637，1544，1433
, 百拇医药
12.25(br,2H,COOH),8.70(s,2H,NH),7.61～7.29(m,8H,Ph-H)，3.46(q,4H,NCH2)，2.51(m,4H,CH2CO)
I5
NH(CH2)5COOH
54.1
132～135
58.47
6.19
5.24
58.63
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6.05
5.26
3322，3200～2500，1720，1637，1540，1460
11.98(br,2H,COOH),8.61(s,2H,NH),7.60～7.26(m,8H,Ph-H)，3.24(t,4H,NCH2)，2.19(m,4H,CH2),1.54(m,8H,CH2)，1.34(m,4H,CH2)
I6
NH(CH2)5COOCH2CH3
62.5
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98～100
60.95
6.70
4.64
61.20
6.85
4.86
3297，1731，1634，1546，1464
7.72～7.21(m,8H,Ph-H)，6.31
(br,2H,NH),4.10(q,4H,OCH2),3.41
(t,4H,NCH2)，2.31(t,4H,CH2)，1.63
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(m,8H,CH2)，1.44(m,4H,CH2)，1.24
(m,6H,CH3)
I7
60.9
83～85
58.71
6.39
6.52
58.90
, 百拇医药
6.29
6.24
2947，2823，1699，1586，1459
8.07～7.20(m,8H,Ph-H),4.49(t,4H,OCH2)，2.76(t,4H,NCH2),2.35(t,12H,NCH3)
I8
73.2
92～94
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63.33
6.72
5.35
63.61
6.86
5.30
2930，2788，1698，1586，1458
8.04～7.23(m,8H,Ph-H)，4.52
(t,4H,OCH2),2.80(t,4H,NCH2)，2.53
(m,8H,NCH2),1.59(m,8H,CH2),1.44(m,4H,CH2)
, 百拇医药
I9
65.4
106～108
58.37
6.13
5.37
58.63
6.05
5.26
2944，2859，1701，1586，1456
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8.06～7.27(m,8H,Ph-H)，4.53
(t,4H,OCH2),3.71(t,8H,OCH2)，2.82(q,4H,NCH2),2.57(q,8H,NCH2)
(tobe continued)
(Continued Tab.1)
Compd. R
Yield/%
mp/℃
Elemental analysis/%
IR(KBr)
/cm-1, 百拇医药
1H-NMR δ
Found(Calc.)
C H N
I10
58.8
76～79
60.23
6.95
10.01
60.19
, 百拇医药
6.85
10.03
2937，2791，1714，1587，1455
8.05～7.26(m,8H,Ph-H)，4.52
(q,4H,OCH2),2.84(t,4H,NCH2)，2.64
(br,8H,NCH2),2.49(br,8H,NCH2),2.29(s,6H,NCH3)
I11
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80.5
237～240
54.65
2.69
10.31
54.65
3.05
10.62
3073，1681，1577，1455
8.64～8.10(m,6H,Ar-H)，7.98～7.77
(m,8H,Ph-H),7.49(br,2H,NH)
, 百拇医药
I12
55.5
192～196
45.53
3.65
19.71
45.71
3.84
19.99
3331，1646，1589，1451
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10.23(s,2H,NH)，8.03(s,2H，NH)，7.78～7.28(m,8H,Ph-H),6.05(br,4H,NH2)
I13
84.5
172～175
64.32
4.69
11.28
64.18
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4.56
11.51
3290，1651，1598，1491
10.44(s,2H,NH)，8.04～6.81
(m,18H,Ph-H),6.71(br,2H,NH)
I14
71.3
240～243
57.26
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3.59
15.13
57.34
3.70
15.43
3212，1596，1550，1478
11.00(s,2H,NH)，10.81(s,2H,NH),8.79
(d,4H,Ar-H),7.84～7.39
(m,12H,Ar-H andPh-H)
I15
NHCH2CH2ONO2
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65.6
137～139
44.74
3.69
11.39
44.81
3.76
11.61
3290，1628，1545，1459，1272
8.90(s,2H,NH)，7.64～7.32
(m,8H,Ph-H),4.69(t,4H,OCH2)，3.65(t,4H,NCH2)
, 百拇医药
I16
NHCH2CH2OH
74.5
178～180
3288，1633，1540，1431，1312
8.59(s,2H,NH)，7.66～7.29
(m,8H,Ph-H),4.70(br,2H,OH)，3.54
(t,4H,OCH2),3.33(t,4H,NCH2)
KF4939
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73.8
175～177
3299，1637，1540，1431，1275
8.92(s,2H,NH)，7.63～7.31
(m,8H,Ph-H),5.35(br,2H,OH)，3.68
(m,2H,OCH),3.47(m,4H,NCH2),1.35(d,6H,CH3)
3 药理实验
3.8%枸橼酸钠，ADP(中科院上海东风生化公司)，二甲基亚砜(天津化学试剂一厂)，家兔(体重2.6～3.0kg，雌雄兼用).以兔颈动脉取血按9∶1比例加入到装有3.8%枸橼酸钠的塑料管中，以1000r/min离心5min，分离出上清液PRP(富含血小板血浆).继而以3000r/min离心10min，分离上清液为PPP(贫含血小板血浆)，以PPP调90%，以PRP调10%，精密吸取300 μLPRP于比色管中，向其中加入不同浓度的受试化合物样品液10μL，置测试孔内，37℃温育2min，加入诱导剂ADP30μL(终浓度8μmol/L)诱导聚集，按比浊法〔7〕测定血小板最大聚集抑制率，将结果进行t检验，线性回归求出各化合物IC50值，列于表2中.Tab.2 Platelet aggregation inhibition of the title compounds
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Compd.
IC50/μmol.L-1
Compd.
IC50/μmol.L-1
Compd.
IC50/μmol.L-1
I1
20
I7
, 百拇医药
>100
I13
>100
I2
>100
I8
>100
I14
>100
I3
2.5
I9
, 百拇医药
35
I15
>100
I4
>100
I10
26
I16
29
I5
>100
I11
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>100
KF4939
6.0
I6
>100
I12
48
Daltroban②
100
①ADP-induced rabbit platelet aggregation ②the control compound 16个目标化合物中多数化合物对ADP诱导的兔血小板聚集均有不同程度的抑制作用.其中侧链为脂肪长链酰胺化合物活性强于芳香酰胺化合物，将酰胺键换成酯键如β-氨基乙醇酯类化合物也显示了较强的活性，KF4939末端羟甲基改为羧基导致活性减弱，化合物(I3)活性最强，与KF4939相当但强于达曲班(Daltroban)，深入的药理实验正在进行.上述所得初步结论可为下一步合成研究工作提供方向，即合成重点应放在脂肪族侧链酰胺(酯)衍生物上，且侧链中含有羟基、胺基等易形成氢键基团.
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致谢：药理筛选工作由中国医学科学院生物医学工程研究所张永富、张毓芬等完成；山东医科大学孟昭力老师提供达曲班，在此表示感谢.
赵圣印：通讯联系人 现址：中国药科大学新药研究中心，南京210009
参考文献
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2 Yamada K,Kubo K,Shuto K,et al.Inhibition of thromboxane A2 induced vaso constriction by KF 4939,a new antiplatelet agent,in rabbit mesenteric and dog co ronary arteries.Jpn J Pharmacol,1984,36(3):283～290
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3 Yamada K,Niino H,Hashimoto T,et al.2,2′-Dithiodibenzamides as inhibitor s of blood platelet aggregation.Chem Pharm Bull,1985,33(3):1214～1220
4 杨洁，华维一.血栓素受体拮抗剂药效构象研究.中国药科大学学报，1994，25(1)：61～64
5 Allen CHF,Mackay DD.Thiosalicylic acid.Org Syn.1955，Coll Vol(Ⅱ)：580～583
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7 徐叔云，卞如濂,陈修.药理实验方法学.第二版，北京：人民卫生出版社，1991.1121～1123
收稿日期:1999-05-02, 百拇医药