蛇胆汁与其它动物胆汁的薄层色谱分析
作者：李学龙 王伯涛
单位：江苏省淮阴市药品检验所(223001)
关键词：蛇胆汁；薄层色谱
首都医药990321摘要 采用蛇胆川贝液标准〔1〕〔鉴别〕<1>项薄层色谱展开系统对蛇胆汁和一些易得的其它动物胆汁进行薄层色谱试验，试验结果有助于对蛇胆汁及其制剂的鉴别。
近年来，蛇胆汁类中成药日渐增多，但也存在不少问题，主要是蛇胆汁被用其它动物胆汁假冒或掺伪。目前，中国药品生物制品检定所仅提供乌梢蛇胆汁作为鉴别蛇胆汁对照药材。而生产上可用三个科蛇的胆汁投料，所以蛇胆汁的鉴别较为复杂，各地药品检验人员对此反应颇多。
本试验采用蛇胆川贝液标准〔鉴别〕<1>项方法对蛇胆汁和其它价廉易得的动物胆汁进行薄层色谱分析，其试验结果有助于蛇胆汁及其制剂的鉴别。
, 百拇医药
1 实验材料
1.1 仪器
BT-2薄层涂布器：武汉市新华分析仪器厂；电热鼓风干燥箱(NXG101-1B型)：南京第一医疗器械厂；ZX-A紫外线分析暗箱：武汉市朴诚机电设备厂。
1.2 试剂
硅胶G：青岛海洋化工厂；甲苯、异丙醇等均为分析纯。
1.3 药材与对照品
以下药材均用动物胆汁。黄鳝(Monopterus albus):黄鳝者熟后剖腹取胆汁；家兔(Oryctolagus cuniculus domes tica)：取我所动物实验中心大白兔鲜胆；猪(Sus scrofa domestica Brisson)、家鸡(Gallus gallus domestica)、鲫鱼(Carassius auratus)、鲢鱼(Hypopht halmichthy molitrix.)、赤链蛇(Dinodon rufozonatum(Cantor))、黑眉锦蛇(Elaphe taeniura Cope)、过榕树蛇(Ptyas korros (Schlegel)):均于菜市对动物鉴定〔2〕后宰取鲜胆；银环蛇(Bungarus multicinctus)、眼镜蛇(Naja naja(Linnaeus))：购自安徽省亳州市药材市场；牛磺胆酸钠、牛磺鹅去氧胆酸钠、乌梢蛇(Zaocys dhumnades(Cantor))胆汁对照药材：中国药品生物制品检定所。
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2 方法与结果
2.1 供试液的制备：取动物胆，刺破胆衣，胆汁加乙醇配成70%乙醇液，静置，过滤，取滤液作为供试品溶液。
2.2 方法与结果：吸取供试品溶液2μl～4μl，点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上，以甲苯-异丙醇-冰乙醇-甲醇-水(8∶4∶2∶3∶1)为展开剂，展开、取出后晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。薄层色谱见图1。
图1 供试品薄层色谱图
1.兔
7.仔鸡
12.眼镜蛇
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2.猪
8.鸭
13.乌梢蛇胆汁
3.鲢鱼
9.黑眉锦蛇
(对照药材)
4.鲫鱼
(又名：菜花蛇)
14.牛磺胆酸钠
5.黄鳝
10.过榕树蛇
15.牛磺鹅去氧胆酸钠
, http://www.100md.com 6.母鸡
11.银环蛇
16.胆酸
3 小结
图2 样品薄层色谱图
1.样品1(970618)，不合格
5.样品4(970501)，合格
2.样品2(970906)，合格
6.牛黄胆酸钠
3.乌梢蛇胆汁(对照药材液)
, http://www.100md.com 7.牛黄鹅去氧胆酸钠
4.样品3(980106)，不合格
8.胆酸
3.1 薄层色谱表明，蛇胆汁与其它动物的胆汁存在明显差异。第一，Rf值0.40以下的色斑，蛇胆汁有2个～3个，其它动物胆汁缺少。第二，蛇胆汁Rf值0.45(a：牛磺胆酸钠斑点对应)比Rf值0.55(b:与牛磺酸鹅去氧胆酸钠斑点对应)色斑大且清晰，与文献〔3〕结论相符，其它多数动物(除黄鳝)胆汁则相反。特别是易获得的猪胆汁没有Rf值0.45牛磺胆酸钠色斑，其Rf值0.88色斑较清晰。上述差异是鉴别蛇胆汁与其它动物胆汁的关键。对蛇胆川贝液中的蛇胆汁鉴别，不少检验人员认为，蛇胆汁的来源多科多种，只要薄层色谱中供试品溶液与对照药材(乌梢蛇胆汁)液有一个斑点对应就合格，此观点显然不妥。笔者对一些厂家的蛇胆川贝液做了薄层色谱试验，色谱及结果判断如下，见图2。结果说明，目前市场上的蛇胆川贝液质量令人堪忧。
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3.2 图1中，黄鳝胆汁与蛇胆汁的a、b、c三个色斑在大小和颜色上相对应，因此说，黄鳝胆汁冒充蛇胆汁用于制剂投料，其危害具有很强的隐蔽性，应注意鉴别。不过，黄鳝胆偏小，胆汁少，且胆衣极易破损，收集存在一定困难。
3.3 上述展开系统极性较强，受温、湿度影响小，薄层色谱各斑点Rf值相对稳定。笔者长期多次实验证明，在7℃与33℃室温中展开出来的色谱斑点Rf值无显著差异。蛇胆川贝散、蛇胆陈皮散的标准〔4〕中的蛇胆汁的薄层色谱鉴别采用异戊醇-冰乙酸-水(9∶3∶1)展开剂，其极性同样很强，虽与上述展开系统展开出来的色谱斑点Rf值有差异，但斑点相对位置却不变。实际上，许多蛇胆汁制剂标准中鉴别蛇胆汁的薄层色谱展开剂所用试剂一样，配比、极性亦相似。所以本文对蛇胆汁制剂的鉴别亦有参考价值。
参考文献
1 蛇胆川贝液标准.卫生部药品标准.中药成方制剂.第九册：178
2 高士贤等.常见药用动物.上海：上海科学技术出版社
3 曾常青，梁本恒.十四种蛇胆胆汁酸成分的高效薄层色谱分析.中药材，1996，19(3)：139～141
4 卫生部药典委员会.中国药典.1995年版.一部., 百拇医药
单位：江苏省淮阴市药品检验所(223001)
关键词：蛇胆汁；薄层色谱
首都医药990321摘要 采用蛇胆川贝液标准〔1〕〔鉴别〕<1>项薄层色谱展开系统对蛇胆汁和一些易得的其它动物胆汁进行薄层色谱试验，试验结果有助于对蛇胆汁及其制剂的鉴别。
近年来，蛇胆汁类中成药日渐增多，但也存在不少问题，主要是蛇胆汁被用其它动物胆汁假冒或掺伪。目前，中国药品生物制品检定所仅提供乌梢蛇胆汁作为鉴别蛇胆汁对照药材。而生产上可用三个科蛇的胆汁投料，所以蛇胆汁的鉴别较为复杂，各地药品检验人员对此反应颇多。
本试验采用蛇胆川贝液标准〔鉴别〕<1>项方法对蛇胆汁和其它价廉易得的动物胆汁进行薄层色谱分析，其试验结果有助于蛇胆汁及其制剂的鉴别。
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1 实验材料
1.1 仪器
BT-2薄层涂布器：武汉市新华分析仪器厂；电热鼓风干燥箱(NXG101-1B型)：南京第一医疗器械厂；ZX-A紫外线分析暗箱：武汉市朴诚机电设备厂。
1.2 试剂
硅胶G：青岛海洋化工厂；甲苯、异丙醇等均为分析纯。
1.3 药材与对照品
以下药材均用动物胆汁。黄鳝(Monopterus albus):黄鳝者熟后剖腹取胆汁；家兔(Oryctolagus cuniculus domes tica)：取我所动物实验中心大白兔鲜胆；猪(Sus scrofa domestica Brisson)、家鸡(Gallus gallus domestica)、鲫鱼(Carassius auratus)、鲢鱼(Hypopht halmichthy molitrix.)、赤链蛇(Dinodon rufozonatum(Cantor))、黑眉锦蛇(Elaphe taeniura Cope)、过榕树蛇(Ptyas korros (Schlegel)):均于菜市对动物鉴定〔2〕后宰取鲜胆；银环蛇(Bungarus multicinctus)、眼镜蛇(Naja naja(Linnaeus))：购自安徽省亳州市药材市场；牛磺胆酸钠、牛磺鹅去氧胆酸钠、乌梢蛇(Zaocys dhumnades(Cantor))胆汁对照药材：中国药品生物制品检定所。
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2 方法与结果
2.1 供试液的制备：取动物胆，刺破胆衣，胆汁加乙醇配成70%乙醇液，静置，过滤，取滤液作为供试品溶液。
2.2 方法与结果：吸取供试品溶液2μl～4μl，点于同一含羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上，以甲苯-异丙醇-冰乙醇-甲醇-水(8∶4∶2∶3∶1)为展开剂，展开、取出后晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。薄层色谱见图1。
图1 供试品薄层色谱图
1.兔
7.仔鸡
12.眼镜蛇
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2.猪
8.鸭
13.乌梢蛇胆汁
3.鲢鱼
9.黑眉锦蛇
(对照药材)
4.鲫鱼
(又名：菜花蛇)
14.牛磺胆酸钠
5.黄鳝
10.过榕树蛇
15.牛磺鹅去氧胆酸钠
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11.银环蛇
16.胆酸
3 小结
图2 样品薄层色谱图
1.样品1(970618)，不合格
5.样品4(970501)，合格
2.样品2(970906)，合格
6.牛黄胆酸钠
3.乌梢蛇胆汁(对照药材液)
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4.样品3(980106)，不合格
8.胆酸
3.1 薄层色谱表明，蛇胆汁与其它动物的胆汁存在明显差异。第一，Rf值0.40以下的色斑，蛇胆汁有2个～3个，其它动物胆汁缺少。第二，蛇胆汁Rf值0.45(a：牛磺胆酸钠斑点对应)比Rf值0.55(b:与牛磺酸鹅去氧胆酸钠斑点对应)色斑大且清晰，与文献〔3〕结论相符，其它多数动物(除黄鳝)胆汁则相反。特别是易获得的猪胆汁没有Rf值0.45牛磺胆酸钠色斑，其Rf值0.88色斑较清晰。上述差异是鉴别蛇胆汁与其它动物胆汁的关键。对蛇胆川贝液中的蛇胆汁鉴别，不少检验人员认为，蛇胆汁的来源多科多种，只要薄层色谱中供试品溶液与对照药材(乌梢蛇胆汁)液有一个斑点对应就合格，此观点显然不妥。笔者对一些厂家的蛇胆川贝液做了薄层色谱试验，色谱及结果判断如下，见图2。结果说明，目前市场上的蛇胆川贝液质量令人堪忧。
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3.2 图1中，黄鳝胆汁与蛇胆汁的a、b、c三个色斑在大小和颜色上相对应，因此说，黄鳝胆汁冒充蛇胆汁用于制剂投料，其危害具有很强的隐蔽性，应注意鉴别。不过，黄鳝胆偏小，胆汁少，且胆衣极易破损，收集存在一定困难。
3.3 上述展开系统极性较强，受温、湿度影响小，薄层色谱各斑点Rf值相对稳定。笔者长期多次实验证明，在7℃与33℃室温中展开出来的色谱斑点Rf值无显著差异。蛇胆川贝散、蛇胆陈皮散的标准〔4〕中的蛇胆汁的薄层色谱鉴别采用异戊醇-冰乙酸-水(9∶3∶1)展开剂，其极性同样很强，虽与上述展开系统展开出来的色谱斑点Rf值有差异，但斑点相对位置却不变。实际上，许多蛇胆汁制剂标准中鉴别蛇胆汁的薄层色谱展开剂所用试剂一样，配比、极性亦相似。所以本文对蛇胆汁制剂的鉴别亦有参考价值。
参考文献
1 蛇胆川贝液标准.卫生部药品标准.中药成方制剂.第九册：178
2 高士贤等.常见药用动物.上海：上海科学技术出版社
3 曾常青，梁本恒.十四种蛇胆胆汁酸成分的高效薄层色谱分析.中药材，1996，19(3)：139～141
4 卫生部药典委员会.中国药典.1995年版.一部., 百拇医药