CITP患者巨核祖细胞增殖成熟程度及与T淋巴细胞亚群的关系
作者：薛梅 邓承祺 孟文彤 吴世敏 庄杰△
单位：薛梅 空军总医院血液科*；邓承祺 孟文彤 吴世敏 庄杰△ 华西医科大学附属第一医院血液科
关键词：紫癜，特发性血小板减少性；巨核祖细胞；T淋巴细胞亚群
临床血液学杂志990306 摘要 目的：观察CITP患者骨髓巨核祖细胞增殖成熟程度及其与外周血T淋巴细胞亚群的关系。方法：采用血浆凝块法进行培养，经SZ-21单抗和免疫组化(ABC法)染色后计数巨核祖细胞集落，用电子计算机图像分析仪测定巨核祖细胞直径、面积。以免疫组化染色法检测T淋巴细胞亚群。结果：CITP患者巨核祖细胞集落数与对照组无明显差异；面积、直径低于对照组；分组比较发现，巨核细胞数正常组及T细胞亚群比值失调组巨核祖细胞集落数低于对照组；巨核祖细胞集落数的多少与T淋巴细胞亚群失调程度呈正相关。结论：CITP患者巨核祖细胞存在成熟障碍，部分患者存在增殖障碍；巨核祖细胞集落数多少与T淋巴细胞亚群变化呈正相关。
, 百拇医药
The Relationship Between Megakaryocyte Colony Growth and T Lymphocyte Subsets in Patients with CITP
Xue Mei,Deng Chengqi,Meng Wentong,et al
Department of Hematology, General Hospital of Air Force,Beijing 100036
Abstract Objective:To study the relationship between megakaryocyte colony growth and cirulating T lymphocyte susets.Methods: plasma clot cultures and GPⅢa McAb and ABC-Kit assay in vitro in 33 patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (CITP) were used.Results:The number of megakaryocyte formation unites of patients was simillar compared with that of control while the diameters. area legvels of magakaryocyte were lower in patients′ group. The maturation degrees of megakaryocyte colony formation unites were lower in patients group with the normal number megakaryocytes on bone marrow smears and with disordering of the peripheral lymphocyte subsets as compared with controls. The maturation degrees of megadaryocyte progenitors were slow in all patients. The number of colony formation unites were as normal.Conclusion:There was a significant positive correlation between the decrese of the number of megakaryocyte colony formation and the lymphocyte subsets.
, 百拇医药
Key words Idiopathic thrombocytopenic purpura T-lymphocyte subsets Megakaryocyte progenitors
慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)是常见出血性疾病之一，发病机制与免疫异常有关，并影响骨髓巨核祖细胞造血。本文体外培养33例CITP患者骨髓巨核祖细胞，观察增殖、成熟情况，同时检测T淋巴细胞亚群变化，分析二者的关系。结果如下：
1 材料与方法
1.1 研究对象 CITP患者33例，男10例，女23例，年龄14～56岁，平均37.52岁。按1994年第五届全国血栓与止血会议修订标准诊断〔1〕。正常健康人25例作对照组，男11例，女14例，年龄26～50岁，平均年龄32.69岁。
1.2 骨髓涂片巨核细胞标化检测 巨核细胞计数标化的正常值，参照文献定为7～35个/1.5 cm×3.5 cm范围内。
, 百拇医药
1.3 巨核祖细胞培养 采用血浆凝块法，培养14 d后，用甲醇、丙酮固定培养物，以GPⅢ a单克隆抗体SZ-21作为第1抗体，用ABC药盒染色，并在普通光学显微镜下检查集落数，≥3个GPⅢ a阳性细胞组成的集落定为1个普通集落(CFU-MK)，≥40个GPⅢ a阳性细胞并含2～3个集落中心所组成的集落为1个爆式集落(BFU-MK)。
1.4 巨核细胞成熟度检测 用电子计算机图像分析仪Mias-1000型检测GPⅢ a阳性细胞的面积、直径。
1.5 T淋巴细胞亚群检测 CD3、CD4、CD8单克隆抗体试剂盒由军事医学科学院生物制剂发展中心提供，采用APAAP法，专人按试剂盒说明操作。
2 结果
2.1 巨核祖细胞集落生成、成熟情况 见表1。表1显示，CITP组CFU-MK、BFU-MK、总集落数与对照组比较，差异不明显(P>0.05)。但巨核祖细胞面积、直径均低于对照组(P<0.05)，差异有显著性。根据病人组骨髓涂片巨核细胞数增高与否分为巨核细胞数(MK)正常组及MK增高组。MK正常组(CFU-MK、BFU-MK、总集落数均明显低于对照组，差异有显著性)(P<0.05)。两组巨核祖细胞面积、直径均值差异不明显(P>0.05)。
, 百拇医药
表1 巨核祖细胞集落生成、成熟情况
±s 组别
n
CFU-MK
BFU-MK
总集落
面积(μm2)
直径(μm)
对照组
25
42.84±25.30
6.88±5.01
, 百拇医药
47.24±28.90
158.77±61.71
14.72±7.04
CITP组
33
39.27±21.44
5.62±3.93
43.48±23.23
134.90±63.08
12.89±3.66
MK正常组
7
, 百拇医药
19.43±7.28△
4.67±1.53△
22.57±8.46△
133.37±51.12
12.93±3.12
MK增高组
26
44.62±20.87
6.50±4.03
47.12±22.76
137.25±62.58
, 百拇医药
13.62±6.54
△P<0.05(与对照组比较)2.2 T淋巴细胞亚群变化 对30例CITP患者检测T淋巴细胞亚群变化，与正常参考值比较，CD+3细胞百分比减低者10例(33.3%)，CD+4细胞百分比减低者14例(46.7%)，CD+8细胞百分比增高者15例(50.0%)，CD+4/CD+8比值异常者18例(60.0%)。根据CD+4/CD+8比值异常与否分两组，分别比较巨核祖细胞增殖、成熟情况，见表2。
表2 T细胞亚群比值正常组、失调组巨核祖细胞集落生成、成熟情况±s 组别
, 百拇医药
n
CFU-MK
BFU-MK
总集落数
面积(μm2)
直径(μm)
对照组
25
42.84±25.30
6.88±5.01
47.24±28.90
158.77±61.71
, 百拇医药
14.72±7.04
CD+4/CD+8正常组
12
43.05±20.81
6.78±3.40
45.57±20.05
143.21±56.12
14.44±6.54
CD+4/CD+8
异常组
, 百拇医药
18
35.71±16.62△
5.12±3.05
38.34±21.60△
138.08±57.52
13.87±7.02
△P<0.05(与对照组及CD+4/CD+8正常组比较)
表2显示，T淋巴细胞比值异常组较其他组CFU-MK、总集落数明显减低(P<0.05)，差异有显著性意义；BFU-MK、巨核祖细胞面积、直积略低于其他各组，但差异无显著性意义(P>0.05)。
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2.3 相关性分析 直线相关分析显示，CITP患者骨髓巨核祖细胞集落数与T淋巴细胞亚群比例失调程度呈正相关，即比例失调程度越重，集落数也越少。r=0.7301，P<0.05。巨核祖细胞面积、直径虽有减少趋势，但无显著性相关(P>0.05)。
3 讨论
关于CITP骨髓巨核祖细胞集落生成情况报告不尽一致〔2〕，有报告增高、减少或正常。我们的实验结果显示：CITP组巨核祖细胞集落生成正常，与对照组比较，差异无显著性，提示患者巨核祖细胞增殖能力与正常对照组相似。依据骨髓涂片mk增高与否分两组比较，结果：MK增高组CFU-MK、BFU-MK、总集落数与对照组差异不明显，但MK正常组上述各值均低于对照组，提示这部分患者巨核祖细胞存在增殖障碍。巨核细胞成熟程度与其面积、直径大小、界膜系统及胞质蛋白质含量成正比，巨核细胞越成熟，面积、直径就越大。本文实验显示：CITP患者巨核细胞面积、直径均低于对照组，说明患者巨核细胞存在成熟障碍，这与有关文献报告相同〔3〕。现已证明，CITP发病机制与免疫异常有关，不仅体液免疫异常，细胞免疫也有异常，T淋巴细胞亚群比例失调，辅助T淋巴细胞(CD4)百分比减低，抑制性T淋巴细胞百分比增高(CD8)〔4〕。胡氏体外实验观察到，部分CITP患者外周T淋巴细胞对患者骨髓CFU-MK生长有不同程度抑制作用，抑制率>50.0%。本文研究显示：T淋巴细胞亚群比例失调组较非失调组及对照组之CFU-MK、总集落数低，差异显著(P<0.05)。由于体外培养巨核祖细胞时未去除单个核细胞中的T淋巴细胞，推测这部分患者T淋巴细胞对自身巨核祖细胞增殖有一定抑制作用，但面积、直径变化不大，说明T淋巴细胞亚群变化对巨核细胞成熟度无明显影响。相关性分析显示：巨核祖细胞集落数减少程度与T淋巴细胞亚群比例失调程度呈正相关，这一现象揭示细胞免疫异常对CITP患者骨髓巨核祖细胞增殖存在一定抑制作用。
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*邮政编码：北京，100036
△ 皮肤科免疫室
参考文献
[1] 第五届全国血栓与止血学术会议.几种出血性疾病诊断(及疗效)标准的修订.中华血液学杂志，1995，16：331～332
[2] Abgrall TF, Berthon C, Sensebe L, et al. Decreased in vitro megaka ryocyte colong formation in chronic idiopathic thrombocytopenic purpura. Br J Haematol,1993,85:803～804
[3] 魏锦，邓承祺，孟文彤等.慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞成熟程度探讨.华西医科大学学报，1997，28：293～296
[4] 聂慧，张广森，方建珍，等. 特发性血小板减少性紫癜患者白细胞介素-2及T淋巴细胞研究.中华血液学杂志，1995，16：125～126
1998-09-08 收稿, 百拇医药
单位：薛梅 空军总医院血液科*；邓承祺 孟文彤 吴世敏 庄杰△ 华西医科大学附属第一医院血液科
关键词：紫癜，特发性血小板减少性；巨核祖细胞；T淋巴细胞亚群
临床血液学杂志990306 摘要 目的：观察CITP患者骨髓巨核祖细胞增殖成熟程度及其与外周血T淋巴细胞亚群的关系。方法：采用血浆凝块法进行培养，经SZ-21单抗和免疫组化(ABC法)染色后计数巨核祖细胞集落，用电子计算机图像分析仪测定巨核祖细胞直径、面积。以免疫组化染色法检测T淋巴细胞亚群。结果：CITP患者巨核祖细胞集落数与对照组无明显差异；面积、直径低于对照组；分组比较发现，巨核细胞数正常组及T细胞亚群比值失调组巨核祖细胞集落数低于对照组；巨核祖细胞集落数的多少与T淋巴细胞亚群失调程度呈正相关。结论：CITP患者巨核祖细胞存在成熟障碍，部分患者存在增殖障碍；巨核祖细胞集落数多少与T淋巴细胞亚群变化呈正相关。
, 百拇医药
The Relationship Between Megakaryocyte Colony Growth and T Lymphocyte Subsets in Patients with CITP
Xue Mei,Deng Chengqi,Meng Wentong,et al
Department of Hematology, General Hospital of Air Force,Beijing 100036
Abstract Objective:To study the relationship between megakaryocyte colony growth and cirulating T lymphocyte susets.Methods: plasma clot cultures and GPⅢa McAb and ABC-Kit assay in vitro in 33 patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (CITP) were used.Results:The number of megakaryocyte formation unites of patients was simillar compared with that of control while the diameters. area legvels of magakaryocyte were lower in patients′ group. The maturation degrees of megakaryocyte colony formation unites were lower in patients group with the normal number megakaryocytes on bone marrow smears and with disordering of the peripheral lymphocyte subsets as compared with controls. The maturation degrees of megadaryocyte progenitors were slow in all patients. The number of colony formation unites were as normal.Conclusion:There was a significant positive correlation between the decrese of the number of megakaryocyte colony formation and the lymphocyte subsets.
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Key words Idiopathic thrombocytopenic purpura T-lymphocyte subsets Megakaryocyte progenitors
慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)是常见出血性疾病之一，发病机制与免疫异常有关，并影响骨髓巨核祖细胞造血。本文体外培养33例CITP患者骨髓巨核祖细胞，观察增殖、成熟情况，同时检测T淋巴细胞亚群变化，分析二者的关系。结果如下：
1 材料与方法
1.1 研究对象 CITP患者33例，男10例，女23例，年龄14～56岁，平均37.52岁。按1994年第五届全国血栓与止血会议修订标准诊断〔1〕。正常健康人25例作对照组，男11例，女14例，年龄26～50岁，平均年龄32.69岁。
1.2 骨髓涂片巨核细胞标化检测 巨核细胞计数标化的正常值，参照文献定为7～35个/1.5 cm×3.5 cm范围内。
, 百拇医药
1.3 巨核祖细胞培养 采用血浆凝块法，培养14 d后，用甲醇、丙酮固定培养物，以GPⅢ a单克隆抗体SZ-21作为第1抗体，用ABC药盒染色，并在普通光学显微镜下检查集落数，≥3个GPⅢ a阳性细胞组成的集落定为1个普通集落(CFU-MK)，≥40个GPⅢ a阳性细胞并含2～3个集落中心所组成的集落为1个爆式集落(BFU-MK)。
1.4 巨核细胞成熟度检测 用电子计算机图像分析仪Mias-1000型检测GPⅢ a阳性细胞的面积、直径。
1.5 T淋巴细胞亚群检测 CD3、CD4、CD8单克隆抗体试剂盒由军事医学科学院生物制剂发展中心提供，采用APAAP法，专人按试剂盒说明操作。
2 结果
2.1 巨核祖细胞集落生成、成熟情况 见表1。表1显示，CITP组CFU-MK、BFU-MK、总集落数与对照组比较，差异不明显(P>0.05)。但巨核祖细胞面积、直径均低于对照组(P<0.05)，差异有显著性。根据病人组骨髓涂片巨核细胞数增高与否分为巨核细胞数(MK)正常组及MK增高组。MK正常组(CFU-MK、BFU-MK、总集落数均明显低于对照组，差异有显著性)(P<0.05)。两组巨核祖细胞面积、直径均值差异不明显(P>0.05)。
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表1 巨核祖细胞集落生成、成熟情况
±s 组别n
CFU-MK
BFU-MK
总集落
面积(μm2)
直径(μm)
对照组
25
42.84±25.30
6.88±5.01
, 百拇医药
47.24±28.90
158.77±61.71
14.72±7.04
CITP组
33
39.27±21.44
5.62±3.93
43.48±23.23
134.90±63.08
12.89±3.66
MK正常组
7
, 百拇医药
19.43±7.28△
4.67±1.53△
22.57±8.46△
133.37±51.12
12.93±3.12
MK增高组
26
44.62±20.87
6.50±4.03
47.12±22.76
137.25±62.58
, 百拇医药
13.62±6.54
△P<0.05(与对照组比较)2.2 T淋巴细胞亚群变化 对30例CITP患者检测T淋巴细胞亚群变化，与正常参考值比较，CD+3细胞百分比减低者10例(33.3%)，CD+4细胞百分比减低者14例(46.7%)，CD+8细胞百分比增高者15例(50.0%)，CD+4/CD+8比值异常者18例(60.0%)。根据CD+4/CD+8比值异常与否分两组，分别比较巨核祖细胞增殖、成熟情况，见表2。
表2 T细胞亚群比值正常组、失调组巨核祖细胞集落生成、成熟情况
±s 组别, 百拇医药
n
CFU-MK
BFU-MK
总集落数
面积(μm2)
直径(μm)
对照组
25
42.84±25.30
6.88±5.01
47.24±28.90
158.77±61.71
, 百拇医药
14.72±7.04
CD+4/CD+8正常组
12
43.05±20.81
6.78±3.40
45.57±20.05
143.21±56.12
14.44±6.54
CD+4/CD+8
异常组
, 百拇医药
18
35.71±16.62△
5.12±3.05
38.34±21.60△
138.08±57.52
13.87±7.02
△P<0.05(与对照组及CD+4/CD+8正常组比较)
表2显示，T淋巴细胞比值异常组较其他组CFU-MK、总集落数明显减低(P<0.05)，差异有显著性意义；BFU-MK、巨核祖细胞面积、直积略低于其他各组，但差异无显著性意义(P>0.05)。
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2.3 相关性分析 直线相关分析显示，CITP患者骨髓巨核祖细胞集落数与T淋巴细胞亚群比例失调程度呈正相关，即比例失调程度越重，集落数也越少。r=0.7301，P<0.05。巨核祖细胞面积、直径虽有减少趋势，但无显著性相关(P>0.05)。
3 讨论
关于CITP骨髓巨核祖细胞集落生成情况报告不尽一致〔2〕，有报告增高、减少或正常。我们的实验结果显示：CITP组巨核祖细胞集落生成正常，与对照组比较，差异无显著性，提示患者巨核祖细胞增殖能力与正常对照组相似。依据骨髓涂片mk增高与否分两组比较，结果：MK增高组CFU-MK、BFU-MK、总集落数与对照组差异不明显，但MK正常组上述各值均低于对照组，提示这部分患者巨核祖细胞存在增殖障碍。巨核细胞成熟程度与其面积、直径大小、界膜系统及胞质蛋白质含量成正比，巨核细胞越成熟，面积、直径就越大。本文实验显示：CITP患者巨核细胞面积、直径均低于对照组，说明患者巨核细胞存在成熟障碍，这与有关文献报告相同〔3〕。现已证明，CITP发病机制与免疫异常有关，不仅体液免疫异常，细胞免疫也有异常，T淋巴细胞亚群比例失调，辅助T淋巴细胞(CD4)百分比减低，抑制性T淋巴细胞百分比增高(CD8)〔4〕。胡氏体外实验观察到，部分CITP患者外周T淋巴细胞对患者骨髓CFU-MK生长有不同程度抑制作用，抑制率>50.0%。本文研究显示：T淋巴细胞亚群比例失调组较非失调组及对照组之CFU-MK、总集落数低，差异显著(P<0.05)。由于体外培养巨核祖细胞时未去除单个核细胞中的T淋巴细胞，推测这部分患者T淋巴细胞对自身巨核祖细胞增殖有一定抑制作用，但面积、直径变化不大，说明T淋巴细胞亚群变化对巨核细胞成熟度无明显影响。相关性分析显示：巨核祖细胞集落数减少程度与T淋巴细胞亚群比例失调程度呈正相关，这一现象揭示细胞免疫异常对CITP患者骨髓巨核祖细胞增殖存在一定抑制作用。
, http://www.100md.com
*邮政编码：北京，100036
△ 皮肤科免疫室
参考文献
[1] 第五届全国血栓与止血学术会议.几种出血性疾病诊断(及疗效)标准的修订.中华血液学杂志，1995，16：331～332
[2] Abgrall TF, Berthon C, Sensebe L, et al. Decreased in vitro megaka ryocyte colong formation in chronic idiopathic thrombocytopenic purpura. Br J Haematol,1993,85:803～804
[3] 魏锦，邓承祺，孟文彤等.慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞成熟程度探讨.华西医科大学学报，1997，28：293～296
[4] 聂慧，张广森，方建珍，等. 特发性血小板减少性紫癜患者白细胞介素-2及T淋巴细胞研究.中华血液学杂志，1995，16：125～126
1998-09-08 收稿, 百拇医药