一种聚丙烯酰胺凝胶快速染色和脱色的方法
作者：王晓华
单位：广州医学院生化教研室，广州 510182
关键词：聚丙烯酰胺凝胶
广州医学院学报990325 提要 介绍一种聚丙烯酰胺凝胶快速高温染色和快速漂洗脱色的方法。该法简便、快速、经济、有效。使染色和脱色时间均可缩短至30～60min。
中图分类号 K503
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一项常用的分析技术，它可测定蛋白质的分子量、等电点，分离蛋白质等，电泳后它常以考马斯亮蓝、甲醇和乙酸作为染色剂和脱色剂。传统的染色和脱色时间分别为4～12h和10～48h，极为费时。本文对染色和脱色方法进行了改进，大大缩短了所需的时间，现报告如下。
1 材料与方法
蛋白质经聚丙烯酰凝胶电泳分离后，将凝胶浸泡于100～250ml(0.125%考马斯亮蓝、甲醇：乙酸：蒸馏水之比为50∶10∶40)染色液中，加盖后置55℃水浴中染色30min，不时摇动。染色完成后，将凝胶用100%甲醇溶液处理1min，然后用蒸馏水短暂冲洗，再置于200～300ml2.5%(v/v)的漂白液(5.25%次氯酸钠)中，摇床以60r/min的速度室温下脱色30～60min，脱色时应经常观察脱色情况，当可见大多数蛋白质区带时应立即倒掉漂白液，凝胶用蒸馏水彻底冲洗后，再置于蒸馏水漂洗数分钟，即可见清晰的蛋白区带。
2 结果
经本法处理的聚丙烯酰胺凝胶，染色背景明显降低，提高了检验的灵敏度，通常可测出0.2～0.5μg的蛋白质。蛋白质区带清晰可见，如附图所示，并大大缩短了染色和脱色时间。
附图 快速染色和脱色结果
3 讨论
聚丙烯酰胺凝胶染色时，考马斯亮蓝常常沉淀于凝胶表面，从而影响对较弱显色带的检测，而且不美观。染色完成后，先将凝胶用100%甲醇溶液处理1min，然后进行漂洗脱色，可有效地降低染色背景，经对照实验证明此法甚为有效，5%～20%的聚丙烯酰胺凝胶经甲醇溶液处理5min不会造成损坏。传统的脱色常用10%乙醇和10%乙酸混合液，漂洗脱色时间常需要10～48h，还要多次更换脱色液方可，极为费时不便。而改用2.5%(v/v)的漂白液作为脱色液后，脱色时间大大缩短，只需30～60min。本法与传统的方法相比，两者灵敏度相当，但前者使得背景更为清晰。应用本法需注意：(1)在高温染色时应盖紧盒子以免乙酸蒸发；(2)漂白液浓度不超过5%；(3)脱色时每隔几分钟应仔细观察一次，以免脱色过度。实验结果表明本法是一种简便、快速、有效的方法。
参考文献
1 A.T.Andrews.Electhoresis.Theory,Techniques and Biochemical and Clinical Applications,1981:46
2 Simpson,C.Fetal.Electrophoretic Techniques.1983:53
3 B.D.哈密斯，D.利克伍德.蛋白质的凝胶电泳.北京：科学出版社，1994：32～33
(收稿：1999-04-21), 百拇医药
单位：广州医学院生化教研室，广州 510182
关键词：聚丙烯酰胺凝胶
广州医学院学报990325 提要 介绍一种聚丙烯酰胺凝胶快速高温染色和快速漂洗脱色的方法。该法简便、快速、经济、有效。使染色和脱色时间均可缩短至30～60min。
中图分类号 K503
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一项常用的分析技术，它可测定蛋白质的分子量、等电点，分离蛋白质等，电泳后它常以考马斯亮蓝、甲醇和乙酸作为染色剂和脱色剂。传统的染色和脱色时间分别为4～12h和10～48h，极为费时。本文对染色和脱色方法进行了改进，大大缩短了所需的时间，现报告如下。
1 材料与方法
蛋白质经聚丙烯酰凝胶电泳分离后，将凝胶浸泡于100～250ml(0.125%考马斯亮蓝、甲醇：乙酸：蒸馏水之比为50∶10∶40)染色液中，加盖后置55℃水浴中染色30min，不时摇动。染色完成后，将凝胶用100%甲醇溶液处理1min，然后用蒸馏水短暂冲洗，再置于200～300ml2.5%(v/v)的漂白液(5.25%次氯酸钠)中，摇床以60r/min的速度室温下脱色30～60min，脱色时应经常观察脱色情况，当可见大多数蛋白质区带时应立即倒掉漂白液，凝胶用蒸馏水彻底冲洗后，再置于蒸馏水漂洗数分钟，即可见清晰的蛋白区带。
2 结果
经本法处理的聚丙烯酰胺凝胶，染色背景明显降低，提高了检验的灵敏度，通常可测出0.2～0.5μg的蛋白质。蛋白质区带清晰可见，如附图所示，并大大缩短了染色和脱色时间。
附图 快速染色和脱色结果
3 讨论
聚丙烯酰胺凝胶染色时，考马斯亮蓝常常沉淀于凝胶表面，从而影响对较弱显色带的检测，而且不美观。染色完成后，先将凝胶用100%甲醇溶液处理1min，然后进行漂洗脱色，可有效地降低染色背景，经对照实验证明此法甚为有效，5%～20%的聚丙烯酰胺凝胶经甲醇溶液处理5min不会造成损坏。传统的脱色常用10%乙醇和10%乙酸混合液，漂洗脱色时间常需要10～48h，还要多次更换脱色液方可，极为费时不便。而改用2.5%(v/v)的漂白液作为脱色液后，脱色时间大大缩短，只需30～60min。本法与传统的方法相比，两者灵敏度相当，但前者使得背景更为清晰。应用本法需注意：(1)在高温染色时应盖紧盒子以免乙酸蒸发；(2)漂白液浓度不超过5%；(3)脱色时每隔几分钟应仔细观察一次，以免脱色过度。实验结果表明本法是一种简便、快速、有效的方法。
参考文献
1 A.T.Andrews.Electhoresis.Theory,Techniques and Biochemical and Clinical Applications,1981:46
2 Simpson,C.Fetal.Electrophoretic Techniques.1983:53
3 B.D.哈密斯，D.利克伍德.蛋白质的凝胶电泳.北京：科学出版社，1994：32～33
(收稿：1999-04-21), 百拇医药