骨髓增生异常综合征患者血清白细胞介素8的检测
作者：李庆山 温春光 洪文德 许多荣
单位：李庆山 广州医学院附属市第一人民医院血液科，广州 510180；温春光 洪文德 许多荣 中山医科大学第—附属医院血液科，广州 510189
关键词：骨髓增生异常综合征；白细胞介素8；预后
广州医学院学报990313
提要 目的：探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者血清白细胞介素8(IL-8)检测的临床价值。方法：夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测16例MDS患者血清IL-8，并与正常对照组比较及MDS亚型间比较。结果：MDS患者血清IL-8水平显著高于正常对照组(P<0.05)，RAEB/RAEB-t组显著高于RA/RAS组(P<0.05)。结论：IL-8在MDS的发病中有一定作用，IL-8的检测可为MDS的疗效判断及预后转归提供有价值的线索。
, http://www.100md.com
中图分类号 R555.1
Detection of Serum Interleukin-8 Level in
Patients with Myelodysplastic Sydrome
Li Qingshan,Wen Chunguang*,Hong Wende*,et al
(Department of Hematology,the Affiliated First People′s
Hospital,Guangzhou Medical College, Guangzhou510180；
*Department of Hematology,the First Affiliated Hospital,Sun Yatsen University of Medical Sciences,Guangzhou 510189)
, 百拇医药
Objective:To explore the clinical significance of the detection of serum interleukin-8 (IL-8) levels in patients with myelodysplastic syndrome (MDS).Method: 16 patients with MDS and 45 cases of control were subject to the measurement of serum IL-8 levels by sandwich enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Results:The serum IL-8 level in patients with MDS was higher than that in control group (P<0.05),and between the two subtypes of MDS that in RAEB/RAEB-t group was higher than that in RA/RAS group (P<0.05).Conclusion:IL-8 may play some role in the pathogenesis of MDS,and the analysis of serum IL-8 may be valuable for the judgement of therapeutic effectiveness and prognosis of MDS.
, 百拇医药
Key words Myelodysplastic syndrome；Interleukin-8；Prognosis
MDS是一组恶性克隆性干/祖细胞性疾病，其主要特征为无效造血所致的难治性白细胞减少和极易发展为白血病。国外少数学者报道MDS患者的预后不仅与骨髓中原始细胞数及染色体异常有关，而且与外周血中的白细胞减少及功能异常导致的致死性感染有关，体外实验证实IL-8能修复MDS患者中性粒细胞功能[1]，我们进一步对16例MDS患者血清IL-8检测，探讨其在MDS发病及疗效、预后中的意义。
1 病例与材料
1.1 一般资料 入选病例均系我科住院经临床、血象、骨髓象、组织化学染色、骨髓活检确诊的MDS患者16例。其中男10例，女6例，平均年龄46.7岁(17～92岁)，均初治。其中难治性贫血(RA)3例，难治性贫血伴环状铁粒幼细胞(RAS)4例，难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)7例，转化型难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB-t)1例，慢性粒单核细胞白血病(CMML)1例。正常对照组45例均来自本院体检健康者，其中男14例，女31例，平均年龄46.8岁(22～63岁)。所有取标本对象均于清晨空腹采血后分离血清置于低温冰箱(-30℃)冻干保存待测，避免反复冻溶。
, 百拇医药
1.2 试剂 夹心法ELISA检测IL-8试剂盒由第四军医大学免疫学教研室提供。自备试剂：(1)0.5M，pH7.4；PBS：配其它液体用。(2)包被缓冲液：0.05M，pH 9.6Na2CO3-NaHCO3缓冲液。(3)洗涤液：0.1%Tween 20-PBS。(4)封闭液：3%BSA-洗涤液(用于封闭和稀释标准品)。(5)抗体稀释液：3%PEG-洗涤液。(6)底物缓冲液：0.1M，pH5.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。(7)3%H2O2。
1.3 夹心ELISA法操作步骤：(1)包被：将稀释好的包被抗体加入ELISA板，100μl/孔，4℃放置48h。(2)封闭：洗涤液冲洗ELISA板3次，加封闭液200μl/孔，37℃，1h。(3)加待检标本：洗板3次，加待测样品，阴性对照及倍比稀释的标准品，100μl/孔，37℃，lh。标准品稀释方法：取rHu IL-8、先用封闭液稀释10倍，再倍比稀释为8个浓度：20ng/ml,10ng/ml,5ng/ml……0.156ng/ml。(4)加酶标抗体：洗板3次，加入稀释好的酶标抗体，100μl/孔，37℃，lh。(5)显色：洗板3次，加入配好的ABTS显色液，100μl/孔，室温或37℃显色15～30min。(6)ELISA读数仪测410nm处OD值，绘制标准曲线。(7)根据标准曲线，由测得OD值得出IL-8浓度。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 计量资料以均数±标准差(
±s)表示，组间差异用t检验。以P<0.05为显著性差异界限。
2 结果
2.1 MDS患者和正常对照血清IL-8水平比较(见表1)。
表1 MDS患者和正常对照血清IL-8(μg/L) 组别
例数
血清IL-8(±s)
P
正常对照
, 百拇医药
45
0.182±0.129
MDS
16
0.543±0.281
<0.05
P值是MDS组与正常对照组比较
2.2 MDS患者亚型血清IL-8水平比较(见表2)。
表2 MDS患者亚型血清IL-8(μg/L) 组别
例数
血清IL-8(±s)
, http://www.100md.com
P
RA/RAS
7
0.32±0.190
RAEB/
RAEB-t
8
0.704±0.318
<0.05
P值是RAEB/RAEB-t组与RA/RAS组比较
3 讨论
MDS表现为早期祖细胞的异常克隆增生所致造血细胞成熟障碍，恶性克隆的增生发展，外周血细胞进一步减少，反映无效造血的发展和向白血病的发展趋势[2]。MDS的预后不仅与骨髓原始细胞数及细胞基因异常有关，而且与细胞减少所致的出血及感染的危险性密切相关。已有报道MDS原始细胞上有粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素3(IL-3)受体，上述因子可能会诱导MDS恶性克隆的增生[3，4]。现有报道，IL-8可轻度刺激正常人及MDS患者骨髓细胞培养的粒-巨噬细胞系祖细胞(CFU-GM)形成，但比GM-CSF作用弱[1]。表明IL-8在MDS的疾病过程中起着一定作用。有实验表明MDS骨髓基质细胞无论在有无脂多糖(LPS)刺激下均有IL-8 mRNA表达及IL-8的分泌，且二者水平高度相关，均高于正常对照组，并发现其中2例RAEB的IL-8 mRNA高表达者对化疗无效并迅速发展为白血病[5]。我们检测16例MDS患者血清IL-8水平显著高于正常对照组，且RAEB/RAEB-t组显著高于RA/RAS组，这可能由于前组骨髓及外周血中有较多的原始细胞，而Tobler等[6]研究发现急性髓细胞白血病(AML)的白血病细胞有IL-8 mRNA表达及IL-8分泌，显著高于正常对照组，且发现在AML中单核细胞来源的白血病细胞IL-8 mRNA表达最高，本研究结果与RAEB/RAEB-t组较多的原粒细胞表达IL-8 mRNA及分泌IL-8有关。另外，本研究中1例CMML呈高水平IL-8(0.812μg/L)可能亦与上述因素相关。Denizot[7]等亦报道8例RAEB患者，血清IL-8水平显著高于正常对照组。现已知RAEB/RAEB-t比RA/RAS易发展为白血病，前者恶性度高，后者相对稳定，这一切预示：IL-8水平高的MDS恶性度较高，本组研究亦随防3例产生高水平IL-8的RAEB患者予小剂Ara-c化疗无效，分别于3、4、6个月转化为急性粒细胞白血病，表明血清IL-8可作为MDS恶性度、疗效及预后转归的一项参考指标。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Zwierzina H,Holzinger I,Gaggl S, et al.Recombinant human interleukin-8 receptors functions in neutrophils from patients with myelodysplastic syndromes without stimulating myeloid progenitor cells. Scand J Immunol, 1993；37:322～8
2 Tricot G,Boogaerts MA,De Wolf-Peeters C,et al. The myelodyspastic syndromes:different evolution patterns based on sequential morphologic and cytogenetic investigations.Br J Haematol,1985；59:659～70
, 百拇医药
3 Begley CG,Metcalf D,Nicola NA.Primary human myeloid leukemia cells:comparative responsiveness to proliferative stimulation by GM-CSF or G-CSF and membrane expression of CSF receptors.Leukemia,1987；1:1～10
4 Budel L,Touw I,Clark s,et al. Interleukin-3 and granulocyte-monocyte colony-stimulating factor receptors on human acute myelocytic leukemia cells and relationship to the proliferative respones.Blood, 1989；74:565～71
5 Yasuo Hirayama,Yutaka Kohgo,Takuya Matsunaga,et al.Cytokine mRNA expression of bone marrow stromal cells from patients with aplastic anaemia and myelodysplastic syndrome.Br J Haematol,1993；85:676～683
, http://www.100md.com
6 Andreas Tobler,Bernhard Moser,Beatrice Dewald,et al. Constitutive expression of interleukin-8 and its receptor in human myeloid and lymphoid leukemia.Blood,1993(8):2517～2525
7 Denizot-Y,Fix-p,Liozon E,et al. Serum interleukin-8(IL-8)and IL-6 conentrations in patients with hematologic maligancies.Blood,1996；87(9):4016～7
(收稿：1999-05-18), 百拇医药
单位：李庆山 广州医学院附属市第一人民医院血液科，广州 510180；温春光 洪文德 许多荣 中山医科大学第—附属医院血液科，广州 510189
关键词：骨髓增生异常综合征；白细胞介素8；预后
广州医学院学报990313
提要 目的：探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者血清白细胞介素8(IL-8)检测的临床价值。方法：夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测16例MDS患者血清IL-8，并与正常对照组比较及MDS亚型间比较。结果：MDS患者血清IL-8水平显著高于正常对照组(P<0.05)，RAEB/RAEB-t组显著高于RA/RAS组(P<0.05)。结论：IL-8在MDS的发病中有一定作用，IL-8的检测可为MDS的疗效判断及预后转归提供有价值的线索。
, http://www.100md.com
中图分类号 R555.1
Detection of Serum Interleukin-8 Level in
Patients with Myelodysplastic Sydrome
Li Qingshan,Wen Chunguang*,Hong Wende*,et al
(Department of Hematology,the Affiliated First People′s
Hospital,Guangzhou Medical College, Guangzhou510180；
*Department of Hematology,the First Affiliated Hospital,Sun Yatsen University of Medical Sciences,Guangzhou 510189)
, 百拇医药
Objective:To explore the clinical significance of the detection of serum interleukin-8 (IL-8) levels in patients with myelodysplastic syndrome (MDS).Method: 16 patients with MDS and 45 cases of control were subject to the measurement of serum IL-8 levels by sandwich enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Results:The serum IL-8 level in patients with MDS was higher than that in control group (P<0.05),and between the two subtypes of MDS that in RAEB/RAEB-t group was higher than that in RA/RAS group (P<0.05).Conclusion:IL-8 may play some role in the pathogenesis of MDS,and the analysis of serum IL-8 may be valuable for the judgement of therapeutic effectiveness and prognosis of MDS.
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Key words Myelodysplastic syndrome；Interleukin-8；Prognosis
MDS是一组恶性克隆性干/祖细胞性疾病，其主要特征为无效造血所致的难治性白细胞减少和极易发展为白血病。国外少数学者报道MDS患者的预后不仅与骨髓中原始细胞数及染色体异常有关，而且与外周血中的白细胞减少及功能异常导致的致死性感染有关，体外实验证实IL-8能修复MDS患者中性粒细胞功能[1]，我们进一步对16例MDS患者血清IL-8检测，探讨其在MDS发病及疗效、预后中的意义。
1 病例与材料
1.1 一般资料 入选病例均系我科住院经临床、血象、骨髓象、组织化学染色、骨髓活检确诊的MDS患者16例。其中男10例，女6例，平均年龄46.7岁(17～92岁)，均初治。其中难治性贫血(RA)3例，难治性贫血伴环状铁粒幼细胞(RAS)4例，难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)7例，转化型难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB-t)1例，慢性粒单核细胞白血病(CMML)1例。正常对照组45例均来自本院体检健康者，其中男14例，女31例，平均年龄46.8岁(22～63岁)。所有取标本对象均于清晨空腹采血后分离血清置于低温冰箱(-30℃)冻干保存待测，避免反复冻溶。
, 百拇医药
1.2 试剂 夹心法ELISA检测IL-8试剂盒由第四军医大学免疫学教研室提供。自备试剂：(1)0.5M，pH7.4；PBS：配其它液体用。(2)包被缓冲液：0.05M，pH 9.6Na2CO3-NaHCO3缓冲液。(3)洗涤液：0.1%Tween 20-PBS。(4)封闭液：3%BSA-洗涤液(用于封闭和稀释标准品)。(5)抗体稀释液：3%PEG-洗涤液。(6)底物缓冲液：0.1M，pH5.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。(7)3%H2O2。
1.3 夹心ELISA法操作步骤：(1)包被：将稀释好的包被抗体加入ELISA板，100μl/孔，4℃放置48h。(2)封闭：洗涤液冲洗ELISA板3次，加封闭液200μl/孔，37℃，1h。(3)加待检标本：洗板3次，加待测样品，阴性对照及倍比稀释的标准品，100μl/孔，37℃，lh。标准品稀释方法：取rHu IL-8、先用封闭液稀释10倍，再倍比稀释为8个浓度：20ng/ml,10ng/ml,5ng/ml……0.156ng/ml。(4)加酶标抗体：洗板3次，加入稀释好的酶标抗体，100μl/孔，37℃，lh。(5)显色：洗板3次，加入配好的ABTS显色液，100μl/孔，室温或37℃显色15～30min。(6)ELISA读数仪测410nm处OD值，绘制标准曲线。(7)根据标准曲线，由测得OD值得出IL-8浓度。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 计量资料以均数±标准差(
±s)表示，组间差异用t检验。以P<0.05为显著性差异界限。2 结果
2.1 MDS患者和正常对照血清IL-8水平比较(见表1)。
表1 MDS患者和正常对照血清IL-8(μg/L) 组别
例数
血清IL-8(
±s)P
正常对照
, 百拇医药
45
0.182±0.129
MDS
16
0.543±0.281
<0.05
P值是MDS组与正常对照组比较
2.2 MDS患者亚型血清IL-8水平比较(见表2)。
表2 MDS患者亚型血清IL-8(μg/L) 组别
例数
血清IL-8(
±s), http://www.100md.com
P
RA/RAS
7
0.32±0.190
RAEB/
RAEB-t
8
0.704±0.318
<0.05
P值是RAEB/RAEB-t组与RA/RAS组比较
3 讨论
MDS表现为早期祖细胞的异常克隆增生所致造血细胞成熟障碍，恶性克隆的增生发展，外周血细胞进一步减少，反映无效造血的发展和向白血病的发展趋势[2]。MDS的预后不仅与骨髓原始细胞数及细胞基因异常有关，而且与细胞减少所致的出血及感染的危险性密切相关。已有报道MDS原始细胞上有粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素3(IL-3)受体，上述因子可能会诱导MDS恶性克隆的增生[3，4]。现有报道，IL-8可轻度刺激正常人及MDS患者骨髓细胞培养的粒-巨噬细胞系祖细胞(CFU-GM)形成，但比GM-CSF作用弱[1]。表明IL-8在MDS的疾病过程中起着一定作用。有实验表明MDS骨髓基质细胞无论在有无脂多糖(LPS)刺激下均有IL-8 mRNA表达及IL-8的分泌，且二者水平高度相关，均高于正常对照组，并发现其中2例RAEB的IL-8 mRNA高表达者对化疗无效并迅速发展为白血病[5]。我们检测16例MDS患者血清IL-8水平显著高于正常对照组，且RAEB/RAEB-t组显著高于RA/RAS组，这可能由于前组骨髓及外周血中有较多的原始细胞，而Tobler等[6]研究发现急性髓细胞白血病(AML)的白血病细胞有IL-8 mRNA表达及IL-8分泌，显著高于正常对照组，且发现在AML中单核细胞来源的白血病细胞IL-8 mRNA表达最高，本研究结果与RAEB/RAEB-t组较多的原粒细胞表达IL-8 mRNA及分泌IL-8有关。另外，本研究中1例CMML呈高水平IL-8(0.812μg/L)可能亦与上述因素相关。Denizot[7]等亦报道8例RAEB患者，血清IL-8水平显著高于正常对照组。现已知RAEB/RAEB-t比RA/RAS易发展为白血病，前者恶性度高，后者相对稳定，这一切预示：IL-8水平高的MDS恶性度较高，本组研究亦随防3例产生高水平IL-8的RAEB患者予小剂Ara-c化疗无效，分别于3、4、6个月转化为急性粒细胞白血病，表明血清IL-8可作为MDS恶性度、疗效及预后转归的一项参考指标。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Zwierzina H,Holzinger I,Gaggl S, et al.Recombinant human interleukin-8 receptors functions in neutrophils from patients with myelodysplastic syndromes without stimulating myeloid progenitor cells. Scand J Immunol, 1993；37:322～8
2 Tricot G,Boogaerts MA,De Wolf-Peeters C,et al. The myelodyspastic syndromes:different evolution patterns based on sequential morphologic and cytogenetic investigations.Br J Haematol,1985；59:659～70
, 百拇医药
3 Begley CG,Metcalf D,Nicola NA.Primary human myeloid leukemia cells:comparative responsiveness to proliferative stimulation by GM-CSF or G-CSF and membrane expression of CSF receptors.Leukemia,1987；1:1～10
4 Budel L,Touw I,Clark s,et al. Interleukin-3 and granulocyte-monocyte colony-stimulating factor receptors on human acute myelocytic leukemia cells and relationship to the proliferative respones.Blood, 1989；74:565～71
5 Yasuo Hirayama,Yutaka Kohgo,Takuya Matsunaga,et al.Cytokine mRNA expression of bone marrow stromal cells from patients with aplastic anaemia and myelodysplastic syndrome.Br J Haematol,1993；85:676～683
, http://www.100md.com
6 Andreas Tobler,Bernhard Moser,Beatrice Dewald,et al. Constitutive expression of interleukin-8 and its receptor in human myeloid and lymphoid leukemia.Blood,1993(8):2517～2525
7 Denizot-Y,Fix-p,Liozon E,et al. Serum interleukin-8(IL-8)and IL-6 conentrations in patients with hematologic maligancies.Blood,1996；87(9):4016～7
(收稿：1999-05-18), 百拇医药