慢性阻塞性肺疾病急性发作期痰及血清白介素-8的测定及意义
作者：钟小宁 柳广南 陆光润 邓静敏 李超乾
单位：钟小宁 柳广南 陆光润 邓静敏 李超乾 广西医科大学第一附属医院呼吸内科 南宁 530021
关键词：阻塞性；肺疾病；气道炎症；白介素-8
广西医科大学学报990315
摘要 目的:探讨白介素-8(IL-8)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用。 方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测10例COPD急性发作期和10例正常对照组痰及血清的IL-8水平。结果:COPD患者痰IL-8水平为(1982.24±901.07)ng/L、血清IL-8水平为(668.16±398.05)ng/L，明显高于正常人痰(769.6±570.14)ng/L及血清(117.78±123.61)ng/L(P<0.01及P<0.05)。COPD患者痰IL-8水平明显高于血清(P<0.01)，且无明显相关性(r=0.18,P>0.05)。COPD患者痰IL-8水平与第一秒用力肺活量百分比(FEV1)呈明显负相关(r=-0.67,P<0.01)。结论:IL-8在COPD气道炎症及气道阻塞中均起重要作用，检测痰IL-8水平较血清更能反映COPD气道炎症情况。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R562.2
DETECTION AND SIGNIFICANCE OF INTERLEUKIN-8 IN INDUCED SPUTUM AND SERUM FROM ACUTE CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE
Zhong Xiaoning,Liu Guangnan,Lu Guangrun,et al
Department of Respiratory Diseases,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021
Abstract Objective:To explore the role of interleukin-8(IL-8) in the airway inflammation of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).Method:IL-8 of induced sputum and serum in 10 patients with acute COPD and in 10 normal subjects was detected by ELISA method.Results:IL-8 of induced sputum (1982.24±901.07)ng/L and serum (668.16±398.05)ng/L in patients with cute COPD was much higher than that of induced sputum(769.6±570.14)ng/L and serum (117.78±123.61)ng/L in normal subjects (P<0.01 and P<0.05).IL-8 of induced sputum was also much higher than that of serum in COPD (P<0.01).And there was no correlation between IL-8 of induced sputum and that of serum in patients with COPD (r=0.18,P>0.05).In addition,there was high negative correlation between IL-8 of induced sputum and FEV1 in patients with COPD (r=-0.67,P<0.01).Conclusion：IL-8 play an important role in the airway inflammation and airway obstruction of COPD.Detection of the level of IL-8 in induced sputum was more capable of reflecting airway inflammation of COPD than in serum.
, http://www.100md.com
Key words obstructive;pulmonary disease;airway inflammation;interleukin-8
COPD是以小气道慢性非特异性炎症和进行性气流阻塞为特征的呼吸系统常见病，发病率和死亡率均较高。但该病发病机制十分复杂，目前认为以中性粒细胞为主的气道炎症在其发病过程中起重要作用[1]，有关细胞因子与COPD气道炎症的关系已引起人们的重视，然而至今对其气道炎症的机制仍未十分清楚。本文检测COPD 患者痰和血清的IL-8水平，以探讨IL-8在COPD发病过程中的作用。
1 对象与方法
1.1 检测对象：①COPD组：10例，男8例，女2例，年龄52～76岁，均为急性发作期住院病人，符合1997我国COPD 诊治规范(草案)诊断标准[2]；②正常对照组：10例，男7例，女3例，年龄39～67岁，均为健康成年人。
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1.2 痰、血标本收集：经质量浓度为3.5%高渗盐水雾化后留取痰液2 ml，并采集空腹静脉血，离心(4000 r/min)10 min，取上清液分装，置-30℃以下保存备用。
1.3 试剂：IL-8检测试剂盒购自美国Genzyme公司。
1.4 检测方法：IL-8的检测方法严格按试剂盒所附的操作书进行，具体步骤为：①用洗液洗反应板2次；②加入已按要求倍数稀释好的IL-8标准液100 μl(复孔)；③加80 μl稀释液到反应孔，然后加20 μl样本到反应孔，每个样本均加复孔；④加50 μl已稀释好的酶联复合物到上述反应孔，置20～25℃反应2 h；⑤用洗液洗3次，加入200 μl TMB底物到每个反应孔，置20～25℃并避光作用5～20 min；⑥用2 mol/L的硫酸终止反应；⑦用美国∑960酶标仪测定样本的吸光度，画出标准曲线，由标准曲线算出样本的IL-8水平。
1.5 统计学处理：先进行方差齐性分析，然后作t或t＇检验，并作直线相关分析，数据以
±s表示。
, 百拇医药
2 结果
2.1 COPD组和正常对照组痰、血清IL-8水平的表达情况见表1。
表1 痰及血液IL-8水平测定值(x±s，ρB/ng.L-1) 组 别
n
痰IL-8
血液IL-8
COPD组
10
1982.24±901.07*
668.16±398.05△
, 百拇医药
正常对照组
10
769.6±570.14
117.78±123.61**
*与正常对照组痰IL-8水平比较，P<0.01;**与COPD组血清IL-8比较，P<0.05；△与COPD组痰IL-8水平比较，P<0.01；COPD组痰及血清LI-8水平两者之间无相关性(r=0.18,P>0.05)。
2.2 痰液IL-8水平与FEV1的相关性分析:COPD组FEV1均值及标准差为(30.5±12.3)%,正常对照组为(87.1±8.6)%。经直线相关分析,痰IL-8水平与FEV1呈明显负相关(r=-0.67,P<0.01)。3 讨论
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IL-8作为一种中性粒细胞和T淋巴细胞的趋化因子,在炎症反应中发挥重要的调节作用。单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞以及上皮细胞等多种细胞在白细胞介素-1(IL-1)及肿瘤坏死因子(TNF)等的刺激下诱导IL-8的产生，而IL-8则通过与上述细胞表面IL-8受体结合，趋化上述细胞到达炎症部位引起炎症反应。由于COPD气道炎症是以管腔内中性粒细胞聚集为主，而管壁是以T淋巴细胞浸润为主的慢性非特异性炎症[1]，由此看来IL-8理应参与COPD气道炎症反应过程。
本组结果显示,COPD组痰液及血清IL-8水平均明显高于正常对照组,并且痰IL-8水平与FEV1呈明显的负相关关系。其它的研究结果[3，4]也表明COPD患者痰及支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-8水平和TNF均明显增高，且IL-8 与中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)的相关系数高达0.87，与FEV1亦呈高度负相关。以上均提示IL-8直接参与了COPD的气道炎症反应过程，其机制可能是TNF作为强有力的诱导剂使IL-8的合成及释放增加，导致COPD患者痰及血清中IL-8水平升高，由于IL-8的趋化作用使气道管腔内中性粒细胞聚集及管壁T淋巴细胞浸润，并使以上细胞活性增高，被激活的中性粒细胞通过脱颗粒反应、释放溶酶体和过氧化物等，从而引起致炎作用。
, 百拇医药
本研究结果显示痰液IL-8水平与FEV1下降密切相关(r=-0.67，P<0.01)。亦有文献报道COPD患者痰中性粒细胞与FEV1呈明显负相关(r=-0.62)[1]。由于气道炎症是引起气流阻塞的主要因素，并且气流阻塞随气道炎症发展而加重，FEV1的下降幅度大致可反映COPD气道炎症及气道重构的严重程度，由此可见IL-8在COPD气道重构和气道阻塞中起着至关重要的作用。
此外本组结果还显示COPD组痰液IL-8水平显著高于其血清的IL-8水平(P<0.01),且两者之间无相关(r=0.18,P>0.05)。提示痰液IL-8与血清IL-8可能来源不同，痰中IL-8升高的原因仍不清楚，可能与肺泡巨噬细胞、气道上皮细胞受到刺激而分泌有关。从本研究结果来看，痰液IL-8水平较血清能更直接反映气道炎症的情况，是判断COPD气道炎症的一个较好指标。但我们同时也注意到，不同患者之间痰及血清IL-8水平变化幅度较大，甚至COPD患者IL-8水平与正常人还有部分重叠，故单用IL-8来诊断COPD气道炎症尚有其局限性。
, 百拇医药
参考文献
1 Keatings VM,Barnes PJ.Granulocyte activation markers in induced sputum:Comarison between chronic obstructive pulmonary disease,asthma,and normal subjects. Am J Respir Crit Care Med,1997,155:449～453
2 中华医学会呼吸病学会.慢性阻塞性肺疾病诊治规范(草案).中华结核和呼吸杂志， 1997，20(4)：199～203
3 Keatings VM,Collins PD,Scott DM,et al. Differences in interleukin-8 and tumor necrosis factor-α in induced sputum from patients with chronic obstructive disease or asthma.Am Respir Crit Care Med,1996,153:530～534
4 Riise GC， Ahlstedt S,Larsson S,et al.Bronchial inflammation in chronic bronchitis assessed by measurement of cell products in bronchial lavage fluid.Thorax,1995,50:360～365
收稿日期：1998-09-30, 百拇医药
单位：钟小宁 柳广南 陆光润 邓静敏 李超乾 广西医科大学第一附属医院呼吸内科 南宁 530021
关键词：阻塞性；肺疾病；气道炎症；白介素-8
广西医科大学学报990315
摘要 目的:探讨白介素-8(IL-8)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用。 方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测10例COPD急性发作期和10例正常对照组痰及血清的IL-8水平。结果:COPD患者痰IL-8水平为(1982.24±901.07)ng/L、血清IL-8水平为(668.16±398.05)ng/L，明显高于正常人痰(769.6±570.14)ng/L及血清(117.78±123.61)ng/L(P<0.01及P<0.05)。COPD患者痰IL-8水平明显高于血清(P<0.01)，且无明显相关性(r=0.18,P>0.05)。COPD患者痰IL-8水平与第一秒用力肺活量百分比(FEV1)呈明显负相关(r=-0.67,P<0.01)。结论:IL-8在COPD气道炎症及气道阻塞中均起重要作用，检测痰IL-8水平较血清更能反映COPD气道炎症情况。
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中国图书资料分类法分类号 R562.2
DETECTION AND SIGNIFICANCE OF INTERLEUKIN-8 IN INDUCED SPUTUM AND SERUM FROM ACUTE CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE
Zhong Xiaoning,Liu Guangnan,Lu Guangrun,et al
Department of Respiratory Diseases,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021
Abstract Objective:To explore the role of interleukin-8(IL-8) in the airway inflammation of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).Method:IL-8 of induced sputum and serum in 10 patients with acute COPD and in 10 normal subjects was detected by ELISA method.Results:IL-8 of induced sputum (1982.24±901.07)ng/L and serum (668.16±398.05)ng/L in patients with cute COPD was much higher than that of induced sputum(769.6±570.14)ng/L and serum (117.78±123.61)ng/L in normal subjects (P<0.01 and P<0.05).IL-8 of induced sputum was also much higher than that of serum in COPD (P<0.01).And there was no correlation between IL-8 of induced sputum and that of serum in patients with COPD (r=0.18,P>0.05).In addition,there was high negative correlation between IL-8 of induced sputum and FEV1 in patients with COPD (r=-0.67,P<0.01).Conclusion：IL-8 play an important role in the airway inflammation and airway obstruction of COPD.Detection of the level of IL-8 in induced sputum was more capable of reflecting airway inflammation of COPD than in serum.
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Key words obstructive;pulmonary disease;airway inflammation;interleukin-8
COPD是以小气道慢性非特异性炎症和进行性气流阻塞为特征的呼吸系统常见病，发病率和死亡率均较高。但该病发病机制十分复杂，目前认为以中性粒细胞为主的气道炎症在其发病过程中起重要作用[1]，有关细胞因子与COPD气道炎症的关系已引起人们的重视，然而至今对其气道炎症的机制仍未十分清楚。本文检测COPD 患者痰和血清的IL-8水平，以探讨IL-8在COPD发病过程中的作用。
1 对象与方法
1.1 检测对象：①COPD组：10例，男8例，女2例，年龄52～76岁，均为急性发作期住院病人，符合1997我国COPD 诊治规范(草案)诊断标准[2]；②正常对照组：10例，男7例，女3例，年龄39～67岁，均为健康成年人。
, http://www.100md.com
1.2 痰、血标本收集：经质量浓度为3.5%高渗盐水雾化后留取痰液2 ml，并采集空腹静脉血，离心(4000 r/min)10 min，取上清液分装，置-30℃以下保存备用。
1.3 试剂：IL-8检测试剂盒购自美国Genzyme公司。
1.4 检测方法：IL-8的检测方法严格按试剂盒所附的操作书进行，具体步骤为：①用洗液洗反应板2次；②加入已按要求倍数稀释好的IL-8标准液100 μl(复孔)；③加80 μl稀释液到反应孔，然后加20 μl样本到反应孔，每个样本均加复孔；④加50 μl已稀释好的酶联复合物到上述反应孔，置20～25℃反应2 h；⑤用洗液洗3次，加入200 μl TMB底物到每个反应孔，置20～25℃并避光作用5～20 min；⑥用2 mol/L的硫酸终止反应；⑦用美国∑960酶标仪测定样本的吸光度，画出标准曲线，由标准曲线算出样本的IL-8水平。
1.5 统计学处理：先进行方差齐性分析，然后作t或t＇检验，并作直线相关分析，数据以
±s表示。, 百拇医药
2 结果
2.1 COPD组和正常对照组痰、血清IL-8水平的表达情况见表1。
表1 痰及血液IL-8水平测定值(x±s，ρB/ng.L-1) 组 别
n
痰IL-8
血液IL-8
COPD组
10
1982.24±901.07*
668.16±398.05△
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正常对照组
10
769.6±570.14
117.78±123.61**
*与正常对照组痰IL-8水平比较，P<0.01;**与COPD组血清IL-8比较，P<0.05；△与COPD组痰IL-8水平比较，P<0.01；COPD组痰及血清LI-8水平两者之间无相关性(r=0.18,P>0.05)。
2.2 痰液IL-8水平与FEV1的相关性分析:COPD组FEV1均值及标准差为(30.5±12.3)%,正常对照组为(87.1±8.6)%。经直线相关分析,痰IL-8水平与FEV1呈明显负相关(r=-0.67,P<0.01)。3 讨论
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IL-8作为一种中性粒细胞和T淋巴细胞的趋化因子,在炎症反应中发挥重要的调节作用。单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞以及上皮细胞等多种细胞在白细胞介素-1(IL-1)及肿瘤坏死因子(TNF)等的刺激下诱导IL-8的产生，而IL-8则通过与上述细胞表面IL-8受体结合，趋化上述细胞到达炎症部位引起炎症反应。由于COPD气道炎症是以管腔内中性粒细胞聚集为主，而管壁是以T淋巴细胞浸润为主的慢性非特异性炎症[1]，由此看来IL-8理应参与COPD气道炎症反应过程。
本组结果显示,COPD组痰液及血清IL-8水平均明显高于正常对照组,并且痰IL-8水平与FEV1呈明显的负相关关系。其它的研究结果[3，4]也表明COPD患者痰及支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-8水平和TNF均明显增高，且IL-8 与中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)的相关系数高达0.87，与FEV1亦呈高度负相关。以上均提示IL-8直接参与了COPD的气道炎症反应过程，其机制可能是TNF作为强有力的诱导剂使IL-8的合成及释放增加，导致COPD患者痰及血清中IL-8水平升高，由于IL-8的趋化作用使气道管腔内中性粒细胞聚集及管壁T淋巴细胞浸润，并使以上细胞活性增高，被激活的中性粒细胞通过脱颗粒反应、释放溶酶体和过氧化物等，从而引起致炎作用。
, 百拇医药
本研究结果显示痰液IL-8水平与FEV1下降密切相关(r=-0.67，P<0.01)。亦有文献报道COPD患者痰中性粒细胞与FEV1呈明显负相关(r=-0.62)[1]。由于气道炎症是引起气流阻塞的主要因素，并且气流阻塞随气道炎症发展而加重，FEV1的下降幅度大致可反映COPD气道炎症及气道重构的严重程度，由此可见IL-8在COPD气道重构和气道阻塞中起着至关重要的作用。
此外本组结果还显示COPD组痰液IL-8水平显著高于其血清的IL-8水平(P<0.01),且两者之间无相关(r=0.18,P>0.05)。提示痰液IL-8与血清IL-8可能来源不同，痰中IL-8升高的原因仍不清楚，可能与肺泡巨噬细胞、气道上皮细胞受到刺激而分泌有关。从本研究结果来看，痰液IL-8水平较血清能更直接反映气道炎症的情况，是判断COPD气道炎症的一个较好指标。但我们同时也注意到，不同患者之间痰及血清IL-8水平变化幅度较大，甚至COPD患者IL-8水平与正常人还有部分重叠，故单用IL-8来诊断COPD气道炎症尚有其局限性。
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参考文献
1 Keatings VM,Barnes PJ.Granulocyte activation markers in induced sputum:Comarison between chronic obstructive pulmonary disease,asthma,and normal subjects. Am J Respir Crit Care Med,1997,155:449～453
2 中华医学会呼吸病学会.慢性阻塞性肺疾病诊治规范(草案).中华结核和呼吸杂志， 1997，20(4)：199～203
3 Keatings VM,Collins PD,Scott DM,et al. Differences in interleukin-8 and tumor necrosis factor-α in induced sputum from patients with chronic obstructive disease or asthma.Am Respir Crit Care Med,1996,153:530～534
4 Riise GC， Ahlstedt S,Larsson S,et al.Bronchial inflammation in chronic bronchitis assessed by measurement of cell products in bronchial lavage fluid.Thorax,1995,50:360～365
收稿日期：1998-09-30, 百拇医药