HLA-DQB位点与胃癌的相关性研究*
作者：邓建强 赖淑苹李生斌赖江华
单位：邓建强 (重庆医科大学法医学教研室 重庆 400016)；赖淑苹李生斌赖江华 西安医科大学免疫遗传中心 西安 710061
关键词：HLA；等位基因；胃癌；相关性
西安医科大学学报/990302
摘要 运用PCR-SSOP技术对中国北方汉族人群56例胃癌患者的血液和其中22例患者胃癌组织灶
的HLA-DQB位点进行研究，结果与对照组相比，两组间基因频率无显著差异，但10种等位基因型
的频率显著大于对照组，分别是0306X/0306X,0306X/0304,0306X/0401,020/020,0501/06052,0501/0606X,0501/0501,0501/0603,0307/0402,0301/0301(P<0.025)，胃癌患者血液与癌灶组织DQB位点的分型结果完全一致，符合率达100%。提示：①某些HLA-DQB基因型可能在胃癌的发病和病理过程中起一定的作用。②HLA-DQB等位基因水平未参与胃癌组织表面HLA-DQB抗原表达异常的机制。
, 百拇医药
THE STUDY OF THE ASSOCIATION BETWEEN
HLA-DQB LOCI AND GASTRIC CANCER
Deng Jianqiang, Lai Shuping, Li Shengbin et al
(Forensic Institute of Chongqing University of Medical Science)
Abstract We used PCR-SSOP technique to study the blood of 56 patients and the HLA-DQB loci in 22 cancer tissue of them. No significance was found between control group and stomach cancer group of their gene frequencies (P>0.05),but ten kinds of genotype frequency increased greatly (0306X/0306X,0306X/0304,0306X/0401,020/020,0501/06052,0501/0606X,0501/0501,0501/0603,0307/0402,0301/0301,P<0.025).The typing results of cancer tissue showed no difference to their blood, and accordance rate was 100%.Our study suggests that:①Some HLA-DQB genotypes may take actions in the pathologic of stomach cancer;②The gene level of HLA-DQB alleles is not participated in the abnormal presentation of HLA-DQB in stomach cancer tissue.
, 百拇医药
Key words HLA;allele;gastric cancer;association
胃癌为最常见的消化道恶性肿瘤，在我国北方人群中发病率极高。胃癌的发病机制目前尚不清楚，但共同的看法是：遗传背景与免疫机制的异常在其发生中起着重要的作用[1]。近年肿瘤免疫学的发展亦揭示肿瘤组织表面HLA抗原表达存在异常，但国内外尚未见从HLA-DQB的基因水平探讨胃癌发病机制的报道。
运用国际标准的PCR-SSOP技术对中国北方汉族56例胃癌患者血液和其中22例胃癌患者胃癌组织的HLA-DQB等位基因进行研究，以探讨HLA-DQB位点在胃癌发病中的作用以及胃癌组织中HLA-DQB抗原表达异常的机制。
材料和方法
1 标本 采自延安、榆林、西安、郑州的四家地级医院，均为经胃镜和细胞学检查确诊的北方汉族胃癌患者。抽取静脉血1.0ml,0.5mol/L EDTA抗凝，同时通过胃镜或手术取其中22例患者的胃癌灶组织块约2～3g，TE缓冲液浸泡。对照组的182例无关西安汉族人群血液由西安市中心血站提供。以上标本采取后均需迅速置-20℃冷冻保存待检。
, 百拇医药
2 方法
2.1 基因组DNA的提取 ①组织DNA提取：用改良的酚/氯仿提取法。取0.1g组织块充分匀浆后加0.5ml DNA消化液消化2h，然后用饱和酚抽提1次，氯仿/异戊醇(24∶1)抽提1次，冷无水乙醇沉淀，75%乙醇洗1次，自然风干，加50μl TE缓冲液溶解，4℃保存备用。②血DNA提取：盐析法。取100μl EDTA抗凝血，TE洗2次，RCLB洗2次，加DSP工作液100μl，56℃消化2h，95℃灭活10min,4℃贮存待用。
2.2 PCR扩增 总反应体系为50μl。依次加入双蒸水 24.75 μl,10×PCR缓冲液5μl，引物1和引物2、dNTP各 5μl，Taq酶0.25μl，模板DNA5μl。95℃变性1min，60℃退火1min,72℃延伸1min,共循环30次，最后一个循环72℃ 10min。以上扩增试剂购自美国Lifecodes公司。加5μl PCR扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，以溴化乙锭染色观察，确定扩增产物为214bp。2.3 寡核苷酸探针杂交 用于制备探针的序列基于第11届国际组织相容性会议，其整套杂交程序及试剂均由美国Lifecodes公司提供，并严格按其步骤进行。根据特异性和探针数目，用印章印每张尼龙膜。用多头加样器将2μl PCR产物点于膜上，膜经风干、变性和中和，然后将膜置于Falcon管，加入2μl杂交液和25μl探针于每一相应Falcon管。在杂交箱中45℃杂交30min。然后依次用2×SSC液、TMAC液、2×SSC液、1×Quiklight液室温下充分漂洗。显影过程用lumiphos系统，按其操作规程运行。随后将膜封好，置之暗盒，Fuji高速X胶片的操作在暗室中进行，最后进行自显影。
, 百拇医药
2.4 统计学分析 根据显影的杂交结果，阳性和阴性对照以及反应格局做出判型，并结合电脑分析。等位基因和基因型的频率按直接计数法、相对危险度(RR)及χ2检验以P<0.05为显著差异。
结果
1 检测结果 用盐析法和酚/氯仿提取法所获的DNA经PCR扩增，用2%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物，长度为214bp，结果很好，两种方法无明显差异(图1)。杂交结果显影良好(图2、3)。
图1 扩增结果照片上下左起1、29为分子量标记，2、11、20为空白，余DNA以盲法加样
图2 杂交结果：阳性质控黑点为阳性结果，空缺点为阴性对照
, 百拇医药
图3 杂交结果
2 基因频率和基因型频率 在56例无关汉族随机胃癌人群中共检出23种等位基因，频率分布从0.89%～22.3%，8种等位基因未检出。检出31种基因型，基因型频率为1.78%～7.14%。 3 结果 和对照组正常人群相比 ( 对照组为本课题组李琳等的硕士论文资料，待发
表)，各等位基因胃癌发病相对危险度(RR)均小于4，基因频率升高和下降的差异均未达到统计学上的显著性意义(P<0.05)。但10种等位基因型频率明显高于正常组，P<0.025。它们是
0306X/0306X,0306X/0304,0306X/0401,020/020,0501/06052,0501/0606X,501/0501,0501/0603,0307/0402,0301/0301(表1，表2，图4，图5)。
表1 胃癌组和正常人群HLA-DQB等位基因频率分布比较 等位基因
, 百拇医药
正常组
胃癌组
RR P**
例数
频率
例数
频率
0501
23
6.32
10
8.93
1.50
, 百拇医药
0502
13
3.57
3
2.68
0.74
05031
11
3.02
2
1.79
0.58
05032
, 百拇医药
1
0.27
0
0
0
0504
0
0
0
0
0
0601
32
8.97
, 百拇医药
7
6.25
0.67
0602(11)
40
10.99
12
10.17
0.97
0603
1
0.27
1
, http://www.100md.com
0.89
3.29
0604
10
2.75
0
0
0
06052
1
0.27
1
0.89
, 百拇医药 0
0606(09,051)
5
1.37
1
0.89
3.29
06070
0
0
0
0
0
, http://www.100md.com 0608
1
0.27
0
0
0
0610
0
0
0
0
0
0612
0
, 百拇医药
0
0
0
0
0201(02,03)
52
14.29
16
14.29
1.0
0306(032)
57
15.66
, 百拇医药
25
22.32
1.77
0307
4
1.10
1
0.89
3.29
0301
64
17.58
20
, 百拇医药
17.86
1.02
0304
1
0.27
1
0.89
3.29
0302
24
6.59
1
0.89
, 百拇医药
3.29
0305
1
0.27
0
0
0
0401
10
2.75
5
4.46
1.69
, 百拇医药 0402
13
3.57
6
5.36
1.56
TOTAL
364
100.00
112
100.00
—
注：**P>0.05
, http://www.100md.com
表2 中国北方汉族胃癌人群HLA-DQB1位点基因型群体分布 基 因 型
观察值
频率
期望值
χ2
P
0306X/0601
2
3.57
1.5419
0.1361
0306X/0402
, 百拇医药
1
1.79
0.6261
0.2233
0306X/0306X
4
7.14
1.3733
5.0241
<0.005
0306X/0602
4
7.14
, 百拇医药
1.9276
2.2281
0306X/0301
2
3.57
3.0834
0.3807
0306X/0304
1
1.79
0.0474
19.1444
<0.025
, 百拇医药
0306X/020
3
5.36
2.5055
0.0792
0306X/0401
3
5.36
0.4823
13.1429
<0.025
0306X/0501
, http://www.100md.com 2
3.57
1.1081
0.7179
020/0502
2
3.57
0.5714
3.5718
020/020
2
3.57
0.0204
, 百拇医药
192.0988
<0.025
020/0501
1
1.79
1.0115
0.0001
020/0602
4
7.14
1.759
2.8551
020/0301
, http://www.100md.com
3
5.36
2.8136
0.0123
0501/06052
1
1.79
0.0191
50.3744
<0.25
0501/0606X
1
1.79
, 百拇医药
0.0970
8.4063
<0.025
0501/0501
1
1.79
0.0040
248.0040
<0.025
0501/0402
1
1.79
0.2527
, 百拇医药
2.2100
0501/0602X
1
1.79
0.7779
0.0 634
0501/0603
1
1.79
0.0191
50.3477
<0.025
0307/0402
, http://www.100md.com
1
1.79
0.0220
43.4765
<0.025
0301/05031
1
1.79
0.5946
0.2764
0301/0301
3
5.36
, 百拇医药
0.0309
285.2930
<0.025
0301/0602X
1
1.79
2.1639
0.6260
0301/0402
2
3.57
0.7029
2.3936
, 百拇医药
0301/0601
3
5.36
1.7309
0.9305
0301/0502
1
1.79
0.7029
0.1256
0401/0602X
1
1.79
, 百拇医药
0.3385
1.2927
0401/0302
1
1.79
0.2030
3.1291
0402/0601
1
1.79
0.3515
1.1965
05031/0602X
, 百拇医药
1
1.79
0.3717
1.0507
图4 胃癌组和正常人群HLA-DQB等位基因频率分布比较
□ 胃癌组
正常组
图5 10种HLA-DQB等位基因型频率分布在胃癌组和正常组之间的比较
□ 胃癌组 正常组
, http://www.100md.com
讨论
1 HLA-DQB位点与胃癌的相关性 人类白细胞抗原(HLA)是目前已知最复杂的遗传多态性系统，位于人类第6号染色体短臂上，现发现它在移植排斥、免疫应答的遗传控制和调节、免疫细胞的相互识别及限制等方面有重要意义[2]。而与其相关的疾病不下50余种，新的病种尚在不断的研究中被阐述[3]，HLA-DQB位点即位于HLA的DQ区内，属于HLA-Ⅱ类基因，长214bp，编码HLA-DQ抗原β链，具高度多态性。目前已发现31种等位基因，其第二外显子的核苷酸序列不同是产生多态性的基础。过去对HLA-DQB的研究，主要运用血清学检测方法，是在其表达产物-抗原的水平进行的，但抗原与抗体反应特异性差，交叉反应多，因而误判率高。并且DR与DQ间存在强连锁不平衡，难以具体分析其作用，现已发现其在结构和功能上有许多被认为与疾病发生有重要作用的独特性，如α、β链均具有多态性，抗原表达同时遵循组织特异性和进展性阶段调控，起动子区域出现与W、Y盒一致的核心蛋白，因而认为它与疾病的相关性研究意义更大[4]。本文所检出的胃癌组和正常组间的基因频率在分布上无显著差异，但却有10种基因型频率在两组间差异显著。基因型的检测对判断某些疾病的病情和预后有重要意义[5]。某种基因型频率的升高通过何种机制来影响疾病的进程和预后目前尚无定论，比较可能的机制是基因剂量效应，即某两种等位基因中的某一种等位基因出现尚不至于引起机体对疾病的易感，但当两种等位基因同时出现则可能通过累积效应造成对疾病的易感，但这种机制尚缺乏充分的依据，有待进一步探讨[6]。
, http://www.100md.com
本文所检出的几种基因型频率的显著升高，为相关学科进一步探讨胃癌的发病、预后与HLA-DQB基因型的相关研究做了初步辅垫，但这些基因型对胃癌的病情及预后评定的意义尚需进一步的研究。
2 血液和胃癌灶组织HLA-DQB位点分型结果的比较 现代肿瘤分子生物学的发展，已经阐明肿瘤细胞表面MHC抗原的表达有着和其它正常细胞不同的特点，主要为与正常体细胞相比MHC-I类抗原表达的下降或缺如及Ⅱ类抗原表达增加，这种变化和肿瘤浸润淋巴细胞的数量明显相关[7]。现一般认为I类抗原的表达下降是细胞由正常向异常转化的关联性环节之一，下降程度与肿瘤恶性程度成正比[8]。而MHC-Ⅱ类抗原的表达异常则机制不明，目前仅有三种解释：①Ⅱ类抗原可能是组织分化早期的膜表面标志，当细胞恶变处于去分化状态时重新表达[9]；②Ⅱ类抗原在肿瘤细胞上的表达与局部浸润T细胞释放的生物活性因子有关，其表达与组织分化程度无关，而与浸润淋巴细胞的数量有关[10，11]；③可能在MHC-Ⅱ类基因区出现变异导致某种水平的调控异常[12]。而HLA-DQ的表达调控在所有MHC的表达调控机制中，是独一无二的，既受组织特异性调控，又受进展性阶段调控，不同水平、多种层次的许多因素参与了这一过程[3]。在不同的疾病中，受其疾病状态及生物活性物质的影响可各有差异[14，15]。HLA-DQB位点是否参与了胃癌组织表面MHC-Ⅱ类抗原表达升高的机制，尚未见报道。
, 百拇医药
本文对22例胃癌灶组织提取DNA分析其HLA-DQB区等位基因组情况，未发现异常或缺如，提示胃癌组织表面HLA-DQB抗原表达变化的原因不在其DNA水平，可能发生在DNA水平以下各阶段的调控。
3 HLA-DQB的检测方法 PCR-SSOP技术是一种较为成熟的方法，它可以成功地把结果显现在X线胶片上，目前国际HLA界一致认为它是一种特异性强、结果稳定、可作为大规模人类学调查的方法。从1995年美国国立骨髓供者计划对入库的490份血样进行SSOP和直接测序比较，结果只有2份有分歧，是因为出现一个新等位基因而缺少1个识别它的探针而没有被检测出。这一结果表明，SSOP的准确率完全可与测序媲美。由于生物素、地高辛等非同位素标记系统的发展，酶显色和化学发光显示技术的进步，使得PCR-SSOP技术经济、可靠，成为今天使用最广泛的HLA-DNA分型技术。被近两届国际组织相容性研讨会(11th IHW和12th IHW)工作会议指定为HLA-DNA标准的分型技术。
, 百拇医药 *国家自然科学基金资助项目(3940071)
参考文献
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(1999-01-04收稿 1999-03-02修回), 百拇医药
单位：邓建强 (重庆医科大学法医学教研室 重庆 400016)；赖淑苹李生斌赖江华 西安医科大学免疫遗传中心 西安 710061
关键词：HLA；等位基因；胃癌；相关性
西安医科大学学报/990302
摘要 运用PCR-SSOP技术对中国北方汉族人群56例胃癌患者的血液和其中22例患者胃癌组织灶
的HLA-DQB位点进行研究，结果与对照组相比，两组间基因频率无显著差异，但10种等位基因型
的频率显著大于对照组，分别是0306X/0306X,0306X/0304,0306X/0401,020/020,0501/06052,0501/0606X,0501/0501,0501/0603,0307/0402,0301/0301(P<0.025)，胃癌患者血液与癌灶组织DQB位点的分型结果完全一致，符合率达100%。提示：①某些HLA-DQB基因型可能在胃癌的发病和病理过程中起一定的作用。②HLA-DQB等位基因水平未参与胃癌组织表面HLA-DQB抗原表达异常的机制。
, 百拇医药
THE STUDY OF THE ASSOCIATION BETWEEN
HLA-DQB LOCI AND GASTRIC CANCER
Deng Jianqiang, Lai Shuping, Li Shengbin et al
(Forensic Institute of Chongqing University of Medical Science)
Abstract We used PCR-SSOP technique to study the blood of 56 patients and the HLA-DQB loci in 22 cancer tissue of them. No significance was found between control group and stomach cancer group of their gene frequencies (P>0.05),but ten kinds of genotype frequency increased greatly (0306X/0306X,0306X/0304,0306X/0401,020/020,0501/06052,0501/0606X,0501/0501,0501/0603,0307/0402,0301/0301,P<0.025).The typing results of cancer tissue showed no difference to their blood, and accordance rate was 100%.Our study suggests that:①Some HLA-DQB genotypes may take actions in the pathologic of stomach cancer;②The gene level of HLA-DQB alleles is not participated in the abnormal presentation of HLA-DQB in stomach cancer tissue.
, 百拇医药
Key words HLA;allele;gastric cancer;association
胃癌为最常见的消化道恶性肿瘤，在我国北方人群中发病率极高。胃癌的发病机制目前尚不清楚，但共同的看法是：遗传背景与免疫机制的异常在其发生中起着重要的作用[1]。近年肿瘤免疫学的发展亦揭示肿瘤组织表面HLA抗原表达存在异常，但国内外尚未见从HLA-DQB的基因水平探讨胃癌发病机制的报道。
运用国际标准的PCR-SSOP技术对中国北方汉族56例胃癌患者血液和其中22例胃癌患者胃癌组织的HLA-DQB等位基因进行研究，以探讨HLA-DQB位点在胃癌发病中的作用以及胃癌组织中HLA-DQB抗原表达异常的机制。
材料和方法
1 标本 采自延安、榆林、西安、郑州的四家地级医院，均为经胃镜和细胞学检查确诊的北方汉族胃癌患者。抽取静脉血1.0ml,0.5mol/L EDTA抗凝，同时通过胃镜或手术取其中22例患者的胃癌灶组织块约2～3g，TE缓冲液浸泡。对照组的182例无关西安汉族人群血液由西安市中心血站提供。以上标本采取后均需迅速置-20℃冷冻保存待检。
, 百拇医药
2 方法
2.1 基因组DNA的提取 ①组织DNA提取：用改良的酚/氯仿提取法。取0.1g组织块充分匀浆后加0.5ml DNA消化液消化2h，然后用饱和酚抽提1次，氯仿/异戊醇(24∶1)抽提1次，冷无水乙醇沉淀，75%乙醇洗1次，自然风干，加50μl TE缓冲液溶解，4℃保存备用。②血DNA提取：盐析法。取100μl EDTA抗凝血，TE洗2次，RCLB洗2次，加DSP工作液100μl，56℃消化2h，95℃灭活10min,4℃贮存待用。
2.2 PCR扩增 总反应体系为50μl。依次加入双蒸水 24.75 μl,10×PCR缓冲液5μl，引物1和引物2、dNTP各 5μl，Taq酶0.25μl，模板DNA5μl。95℃变性1min，60℃退火1min,72℃延伸1min,共循环30次，最后一个循环72℃ 10min。以上扩增试剂购自美国Lifecodes公司。加5μl PCR扩增产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，以溴化乙锭染色观察，确定扩增产物为214bp。2.3 寡核苷酸探针杂交 用于制备探针的序列基于第11届国际组织相容性会议，其整套杂交程序及试剂均由美国Lifecodes公司提供，并严格按其步骤进行。根据特异性和探针数目，用印章印每张尼龙膜。用多头加样器将2μl PCR产物点于膜上，膜经风干、变性和中和，然后将膜置于Falcon管，加入2μl杂交液和25μl探针于每一相应Falcon管。在杂交箱中45℃杂交30min。然后依次用2×SSC液、TMAC液、2×SSC液、1×Quiklight液室温下充分漂洗。显影过程用lumiphos系统，按其操作规程运行。随后将膜封好，置之暗盒，Fuji高速X胶片的操作在暗室中进行，最后进行自显影。
, 百拇医药
2.4 统计学分析 根据显影的杂交结果，阳性和阴性对照以及反应格局做出判型，并结合电脑分析。等位基因和基因型的频率按直接计数法、相对危险度(RR)及χ2检验以P<0.05为显著差异。
结果
1 检测结果 用盐析法和酚/氯仿提取法所获的DNA经PCR扩增，用2%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物，长度为214bp，结果很好，两种方法无明显差异(图1)。杂交结果显影良好(图2、3)。
图1 扩增结果照片上下左起1、29为分子量标记，2、11、20为空白，余DNA以盲法加样
图2 杂交结果：阳性质控黑点为阳性结果，空缺点为阴性对照
, 百拇医药
图3 杂交结果
2 基因频率和基因型频率 在56例无关汉族随机胃癌人群中共检出23种等位基因，频率分布从0.89%～22.3%，8种等位基因未检出。检出31种基因型，基因型频率为1.78%～7.14%。 3 结果 和对照组正常人群相比 ( 对照组为本课题组李琳等的硕士论文资料，待发
表)，各等位基因胃癌发病相对危险度(RR)均小于4，基因频率升高和下降的差异均未达到统计学上的显著性意义(P<0.05)。但10种等位基因型频率明显高于正常组，P<0.025。它们是
0306X/0306X,0306X/0304,0306X/0401,020/020,0501/06052,0501/0606X,501/0501,0501/0603,0307/0402,0301/0301(表1，表2，图4，图5)。
表1 胃癌组和正常人群HLA-DQB等位基因频率分布比较 等位基因
, 百拇医药
正常组
胃癌组
RR P**
例数
频率
例数
频率
0501
23
6.32
10
8.93
1.50
, 百拇医药
0502
13
3.57
3
2.68
0.74
05031
11
3.02
2
1.79
0.58
05032
, 百拇医药
1
0.27
0
0
0
0504
0
0
0
0
0
0601
32
8.97
, 百拇医药
7
6.25
0.67
0602(11)
40
10.99
12
10.17
0.97
0603
1
0.27
1
, http://www.100md.com
0.89
3.29
0604
10
2.75
0
0
0
06052
1
0.27
1
0.89
, 百拇医药 0
0606(09,051)
5
1.37
1
0.89
3.29
06070
0
0
0
0
0
, http://www.100md.com 0608
1
0.27
0
0
0
0610
0
0
0
0
0
0612
0
, 百拇医药
0
0
0
0
0201(02,03)
52
14.29
16
14.29
1.0
0306(032)
57
15.66
, 百拇医药
25
22.32
1.77
0307
4
1.10
1
0.89
3.29
0301
64
17.58
20
, 百拇医药
17.86
1.02
0304
1
0.27
1
0.89
3.29
0302
24
6.59
1
0.89
, 百拇医药
3.29
0305
1
0.27
0
0
0
0401
10
2.75
5
4.46
1.69
, 百拇医药 0402
13
3.57
6
5.36
1.56
TOTAL
364
100.00
112
100.00
—
注：**P>0.05
, http://www.100md.com
表2 中国北方汉族胃癌人群HLA-DQB1位点基因型群体分布 基 因 型
观察值
频率
期望值
χ2
P
0306X/0601
2
3.57
1.5419
0.1361
0306X/0402
, 百拇医药
1
1.79
0.6261
0.2233
0306X/0306X
4
7.14
1.3733
5.0241
<0.005
0306X/0602
4
7.14
, 百拇医药
1.9276
2.2281
0306X/0301
2
3.57
3.0834
0.3807
0306X/0304
1
1.79
0.0474
19.1444
<0.025
, 百拇医药
0306X/020
3
5.36
2.5055
0.0792
0306X/0401
3
5.36
0.4823
13.1429
<0.025
0306X/0501
, http://www.100md.com 2
3.57
1.1081
0.7179
020/0502
2
3.57
0.5714
3.5718
020/020
2
3.57
0.0204
, 百拇医药
192.0988
<0.025
020/0501
1
1.79
1.0115
0.0001
020/0602
4
7.14
1.759
2.8551
020/0301
, http://www.100md.com
3
5.36
2.8136
0.0123
0501/06052
1
1.79
0.0191
50.3744
<0.25
0501/0606X
1
1.79
, 百拇医药
0.0970
8.4063
<0.025
0501/0501
1
1.79
0.0040
248.0040
<0.025
0501/0402
1
1.79
0.2527
, 百拇医药
2.2100
0501/0602X
1
1.79
0.7779
0.0 634
0501/0603
1
1.79
0.0191
50.3477
<0.025
0307/0402
, http://www.100md.com
1
1.79
0.0220
43.4765
<0.025
0301/05031
1
1.79
0.5946
0.2764
0301/0301
3
5.36
, 百拇医药
0.0309
285.2930
<0.025
0301/0602X
1
1.79
2.1639
0.6260
0301/0402
2
3.57
0.7029
2.3936
, 百拇医药
0301/0601
3
5.36
1.7309
0.9305
0301/0502
1
1.79
0.7029
0.1256
0401/0602X
1
1.79
, 百拇医药
0.3385
1.2927
0401/0302
1
1.79
0.2030
3.1291
0402/0601
1
1.79
0.3515
1.1965
05031/0602X
, 百拇医药
1
1.79
0.3717
1.0507
图4 胃癌组和正常人群HLA-DQB等位基因频率分布比较
□ 胃癌组
正常组图5 10种HLA-DQB等位基因型频率分布在胃癌组和正常组之间的比较
□ 胃癌组
正常组, http://www.100md.com
讨论
1 HLA-DQB位点与胃癌的相关性 人类白细胞抗原(HLA)是目前已知最复杂的遗传多态性系统，位于人类第6号染色体短臂上，现发现它在移植排斥、免疫应答的遗传控制和调节、免疫细胞的相互识别及限制等方面有重要意义[2]。而与其相关的疾病不下50余种，新的病种尚在不断的研究中被阐述[3]，HLA-DQB位点即位于HLA的DQ区内，属于HLA-Ⅱ类基因，长214bp，编码HLA-DQ抗原β链，具高度多态性。目前已发现31种等位基因，其第二外显子的核苷酸序列不同是产生多态性的基础。过去对HLA-DQB的研究，主要运用血清学检测方法，是在其表达产物-抗原的水平进行的，但抗原与抗体反应特异性差，交叉反应多，因而误判率高。并且DR与DQ间存在强连锁不平衡，难以具体分析其作用，现已发现其在结构和功能上有许多被认为与疾病发生有重要作用的独特性，如α、β链均具有多态性，抗原表达同时遵循组织特异性和进展性阶段调控，起动子区域出现与W、Y盒一致的核心蛋白，因而认为它与疾病的相关性研究意义更大[4]。本文所检出的胃癌组和正常组间的基因频率在分布上无显著差异，但却有10种基因型频率在两组间差异显著。基因型的检测对判断某些疾病的病情和预后有重要意义[5]。某种基因型频率的升高通过何种机制来影响疾病的进程和预后目前尚无定论，比较可能的机制是基因剂量效应，即某两种等位基因中的某一种等位基因出现尚不至于引起机体对疾病的易感，但当两种等位基因同时出现则可能通过累积效应造成对疾病的易感，但这种机制尚缺乏充分的依据，有待进一步探讨[6]。
, http://www.100md.com
本文所检出的几种基因型频率的显著升高，为相关学科进一步探讨胃癌的发病、预后与HLA-DQB基因型的相关研究做了初步辅垫，但这些基因型对胃癌的病情及预后评定的意义尚需进一步的研究。
2 血液和胃癌灶组织HLA-DQB位点分型结果的比较 现代肿瘤分子生物学的发展，已经阐明肿瘤细胞表面MHC抗原的表达有着和其它正常细胞不同的特点，主要为与正常体细胞相比MHC-I类抗原表达的下降或缺如及Ⅱ类抗原表达增加，这种变化和肿瘤浸润淋巴细胞的数量明显相关[7]。现一般认为I类抗原的表达下降是细胞由正常向异常转化的关联性环节之一，下降程度与肿瘤恶性程度成正比[8]。而MHC-Ⅱ类抗原的表达异常则机制不明，目前仅有三种解释：①Ⅱ类抗原可能是组织分化早期的膜表面标志，当细胞恶变处于去分化状态时重新表达[9]；②Ⅱ类抗原在肿瘤细胞上的表达与局部浸润T细胞释放的生物活性因子有关，其表达与组织分化程度无关，而与浸润淋巴细胞的数量有关[10，11]；③可能在MHC-Ⅱ类基因区出现变异导致某种水平的调控异常[12]。而HLA-DQ的表达调控在所有MHC的表达调控机制中，是独一无二的，既受组织特异性调控，又受进展性阶段调控，不同水平、多种层次的许多因素参与了这一过程[3]。在不同的疾病中，受其疾病状态及生物活性物质的影响可各有差异[14，15]。HLA-DQB位点是否参与了胃癌组织表面MHC-Ⅱ类抗原表达升高的机制，尚未见报道。
, 百拇医药
本文对22例胃癌灶组织提取DNA分析其HLA-DQB区等位基因组情况，未发现异常或缺如，提示胃癌组织表面HLA-DQB抗原表达变化的原因不在其DNA水平，可能发生在DNA水平以下各阶段的调控。
3 HLA-DQB的检测方法 PCR-SSOP技术是一种较为成熟的方法，它可以成功地把结果显现在X线胶片上，目前国际HLA界一致认为它是一种特异性强、结果稳定、可作为大规模人类学调查的方法。从1995年美国国立骨髓供者计划对入库的490份血样进行SSOP和直接测序比较，结果只有2份有分歧，是因为出现一个新等位基因而缺少1个识别它的探针而没有被检测出。这一结果表明，SSOP的准确率完全可与测序媲美。由于生物素、地高辛等非同位素标记系统的发展，酶显色和化学发光显示技术的进步，使得PCR-SSOP技术经济、可靠，成为今天使用最广泛的HLA-DNA分型技术。被近两届国际组织相容性研讨会(11th IHW和12th IHW)工作会议指定为HLA-DNA标准的分型技术。
, 百拇医药 *国家自然科学基金资助项目(3940071)
参考文献
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(1999-01-04收稿 1999-03-02修回), 百拇医药