癫病人血中抗癫药物浓度的HPLC监测
作者：马振菁 邓思珊 黄炼红
单位：马振菁 邓思珊 福建省立医院神经内科(福州 350001)；黄炼红 福建省医学科学研究所，省医学测试重点实验室(福州 350001)
关键词：抗癫药；药物浓度；反相高效液相色谱法
福建医科大学学报990319 目的 测定癫
病人血中抗癫药物的浓度，以便探讨药物浓度与年龄、性别的关系。 方法 采用反相高效液相色谱法，测定192例癫病人的抗癫药物浓度，年龄17.15±10.58岁，其中男性133名，女性59名。 结果 癫病人稳态血药浓度达有效治疗浓度范围的人数为35.40%，与年龄、性别无关。 结论 癫病人疗效与达有效治疗浓度可能有关，因此在临床上对药物浓度进行监测意义重大。
, http://www.100md.com
High Performance Liquid Chromatographyfor Monitoring Antiepileptic Drug Concentration in Plasma
Ma Zhenjing1， Deng Sishan1， Huang Lianhong2
(1.Fujian Institute of Medical Sciences， Fuzhou， 350001
2.Fujian Provincial Hospital， Fuzhou， 350001)
Objective Routine concentration of antiepileptic in plasma was determined，in order to explore the relation between drug concentration and age，sex. Methods Reversed-phase high performance liquid chromatograph was used for monitoring plasma concentration of antiepilepsy in 192 patients. Their average age were 17.15±10.58 years，in them 133 were male and 59 female. Results The drug concentration arrived an effective therapeutic range in only 35.40 percent of patients. The number of arriving effective therapeutic concentration did not relate to age or sex. Conclusion Efficiency of antiepileptic treatment may be related to effective therapeutic concentration. It is important clinically to perform therapeutic drug monitoring.
, 百拇医药
Key words antiepilepsy drug; drug concentration； reversed-phase high performance liquid chromatograph
苯妥英、苯巴比妥、酰胺咪嗪、氯硝西泮、硝基安定为临床最常用的抗癫药，其血药浓度与疗效及毒副作用有密切关系，但治疗指数均较窄，血药浓度-剂量个体差异大，毒性反应与癫发作症状有时不易鉴别，尤其在合并用药后药物动力学与药效学的变化更为复杂，是临床最需要监测的一类药物[1,2]。本文报道反相高效液相色谱法(HPLC)同时测定上述5种药的血浆药物浓度，并用该法对192例癫病人进行抗癫药物浓度的监测，探讨药物浓度与年龄、性别的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 药物与仪器
苯巴比妥、苯妥英、酰胺咪嗪、氯硝西泮、硝基安定和内标非那西汀标准品均为中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，上海化学试剂研究所。二氯甲烷分析纯，上海试剂四厂。LC-4A高效液相色谱仪，SPD-2AS紫外检测器，C-R2AX数据处理机，均为日本岛津公司产品。
1.2 样品制备
精密吸取血浆0.5 ml，加入1 mol/L高氯酸0.5 ml，混匀，再加入50 μl内标，振荡1 min，3000 r/min离心10 min，取上清液加入二氯甲烷2.0 ml，提取二次，合并二氯甲烷置尖底离心管，以N2吹干，加甲醇100 μl溶解残留物，进样10 μl，采用样品与内标的峰面积比计算浓度。
1.3 色谱条件
, 百拇医药
色谱柱YWG C18(4.6 mm×250 mm,10 μm)，流动相为甲醇∶水∶四氢呋喃=46∶53∶1，流速1 ml/min，波长254 nm，检测器灵敏度0.005。
2 结 果
2.1 各药出峰顺序为苯巴比妥、内标、苯妥英、酰胺咪嗪、硝基安定、氯硝西泮。丙戊酸钠、安定、维生素C、维生素B12、叶酸不干扰各组分的色谱图(图1,2)。
图1 标准抗癫药物血浆色谱图
1.苯巴比妥； 2.内标； 3.苯妥英; 4.酰胺咪嗪; 5.硝基安定; 6.氯硝西泮
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图2 空白血浆色谱图
2.2 线性范围、最低检出浓度、平均回收率、重复性实验(附表)。
附表 线性范围、平均回收率、重复性和最低检出浓度 药 品
线性范围
(μg/ml)
平均回收率
(%)
日内变异
日间变异
最低检出浓度
(ng/ml)
, http://www.100md.com
苯巴比妥
1.00～36.00
96.00
3.90
5.20
500.00
苯妥英
1.00～36.00
95.00
4.40
6.01
500.00
酰胺咪嗪
, 百拇医药
0.50～20.00
90.30
6.25
7.13
250.00
硝基安定
0.05～0.30
90.10
6.43
6.57
25.00
氯硝西泮
0.01～0.50
, http://www.100md.com
89.70
7.30
8.50
5.00
2.3 临床应用 2年来，对门诊192例诊断为癫的病人进行抗癫治疗，应用本文所述的方法在常规用药情况下监测其稳态血药浓度。各药物的有效治疗浓度范围为：苯巴比妥10.00～25.00 μg/ml，苯妥英10.00～20.00 μg/ml，酰胺咪嗪3.50～8.50 μg/ml，硝基安定50.00～200.00 ng/ml，氯硝西泮5.00～70.00 ng/ml，35.42%病人血中各种抗癫药物浓度全部在有效治疗浓度范围内(简称“达到”)，而58.33%病人血中有一种或多种药物浓度低于有效治疗浓度范围(简称“低于”)，6.25%病人至少有一种血药浓度超出最高有效治疗浓度范围。
, 百拇医药
2.4 年龄、性别对达到有效治疗浓度的影响(表2)
表2 年龄、性别对达到有效的治疗浓度的影响(n) 分 组
达到
低于
达到率(%)
年龄(岁)
>15
44
59
42.70
≤15
24
, http://www.100md.com
53
31.20
性别
男
45
82
35.40
女
23
30
43.40
年龄>15岁与≤15岁达到有效治疗浓度率比较，差异无显著性(P>0.05)。
男性与女性达到有效治疗浓度率比较，差异也无显著性(P>0.05)。3 讨 论
, 百拇医药
癫患者因个体差异大，一般所服的抗癫药有一种至几种，各种药物的组合相互作用使某些药物的抗癫作用降低而毒副作用增加，如苯妥英钠的酶代谢系统易被其他药品抑制造成血药浓度过高而引起中毒[3]，此外，许多抗癫药物是肝脏药物代谢酶的有力诱导剂，如苯巴比妥与其他抗癫药物合用可因代谢加快而使他药的抗癫作用减弱[4～6]。Schmidt认为使用一种抗癫药并逐步增加剂量，直至最大耐受量后如仍未见效，方可更换另一种药或使用两种以上的药治疗，这种情况是因为当时对多种抗癫药进行监测，实验室尚未寻找到方便、可行的方法。
, 百拇医药
目前国内外用于抗癫药物检测的方法有高效液相色谱法[7,8]，酶免疫法和荧光偏振免疫法、紫外分光光度法[9]。前者虽可同时测定数种药物，但操作步骤多，分析时间较长；而酶免疫法和荧光偏振免疫法所需试剂昂贵，使其实际应用受到一定限制；紫外分光光度法，则灵敏度低，干扰大，重现性差。本文报道的采用反相高效液相色谱法具有快速、简便、灵敏、准确等特点，可同时测定五种抗癫药物，可满足临床医生的需求，以避免因盲目加药导致药物过量产生毒性作用。
有效血药浓度对癫病人来说非常重要[10～12]，笔者设想它与年龄，性别是否有关系，在这一方面国内尚未见报道，因此，本文对192例癫病人进行药物浓度监测，发现在常规用药情况下，年龄、性别不影响达到有效血药浓度，而病情是否得到控制与改善却与有效血药浓度有关，因此，在临床上要对癫病人进行药物浓度监测。
, 百拇医药
参考文献
1 吴立文. 癫痫病人血中抗癫痫药物总浓度以游离型浓度的测定. 中华神经精神科杂志， 1991;24：357
2 吴莱文，杜江波，刘 丹. 苯妥英和苯巴比妥在一例过量用药脑炎患儿组织中的分布. 湖南医科大学学报， 1993;18：146
3 洪 震，瞿治平，俞丽云，等. 抗癫痫药物血药浓度监测在治疗“难治性”癫痫中的作用. 上海医科大学学报， 1992;19：233
4 三浦寿男. 抗癫痫药的治疗药物的监测和适应性[日]. 小儿内科， 1995;27:1125
5 许律西. 抗癫痫药物使用的现状与展望. 药学进展， 1996;20:78
6 周 为. 苯妥因钠，苯巴比妥的血药浓度及抗癫痫治疗中毒副反应的观察. 河南医学研究, 1997;(2):112
, 百拇医药
7 吴永麟. 同时快速测定血清苯妥英与卡马西平浓度的高效液相色谱法. 药物分析杂志， 1989;9：275
8 徐家明. 反相高效液相色谱法同时测定血清中苯妥英、卡马西平和苯巴比妥. 中国医院药学杂志， 1991;11(5)：195
9 Yukiya Saitoh. Improved microdetermination for diphenylphydantoin in blood by UV spectrophotometry. J Pharmaceutic Sci, 1973;62:206
10 尹燕秋，陈 灵，赵善瑞，等. 238例小儿癫痫临床分析. 白求恩医科大学学报， 1997;23:78
11 吴祖舜. 癫痫持续状态及其治疗：附168例报告. 脑与神经疾病杂志， 1997;5(4):215
13 唐章龙，林燕霞，徐雅春，等. 405例癫痫的临床分析和8年随访报告. 临床脑电学杂志, 1996;5:225
(收稿：1999-01-25 修回：1999-05-04), 百拇医药
单位：马振菁 邓思珊 福建省立医院神经内科(福州 350001)；黄炼红 福建省医学科学研究所，省医学测试重点实验室(福州 350001)
关键词：抗癫药；药物浓度；反相高效液相色谱法
福建医科大学学报990319 目的 测定癫
病人血中抗癫药物的浓度，以便探讨药物浓度与年龄、性别的关系。 方法 采用反相高效液相色谱法，测定192例癫病人的抗癫药物浓度，年龄17.15±10.58岁，其中男性133名，女性59名。 结果 癫病人稳态血药浓度达有效治疗浓度范围的人数为35.40%，与年龄、性别无关。 结论 癫病人疗效与达有效治疗浓度可能有关，因此在临床上对药物浓度进行监测意义重大。, http://www.100md.com
High Performance Liquid Chromatographyfor Monitoring Antiepileptic Drug Concentration in Plasma
Ma Zhenjing1， Deng Sishan1， Huang Lianhong2
(1.Fujian Institute of Medical Sciences， Fuzhou， 350001
2.Fujian Provincial Hospital， Fuzhou， 350001)
Objective Routine concentration of antiepileptic in plasma was determined，in order to explore the relation between drug concentration and age，sex. Methods Reversed-phase high performance liquid chromatograph was used for monitoring plasma concentration of antiepilepsy in 192 patients. Their average age were 17.15±10.58 years，in them 133 were male and 59 female. Results The drug concentration arrived an effective therapeutic range in only 35.40 percent of patients. The number of arriving effective therapeutic concentration did not relate to age or sex. Conclusion Efficiency of antiepileptic treatment may be related to effective therapeutic concentration. It is important clinically to perform therapeutic drug monitoring.
, 百拇医药
Key words antiepilepsy drug; drug concentration； reversed-phase high performance liquid chromatograph
苯妥英、苯巴比妥、酰胺咪嗪、氯硝西泮、硝基安定为临床最常用的抗癫
药，其血药浓度与疗效及毒副作用有密切关系，但治疗指数均较窄，血药浓度-剂量个体差异大，毒性反应与癫发作症状有时不易鉴别，尤其在合并用药后药物动力学与药效学的变化更为复杂，是临床最需要监测的一类药物[1,2]。本文报道反相高效液相色谱法(HPLC)同时测定上述5种药的血浆药物浓度，并用该法对192例癫病人进行抗癫药物浓度的监测，探讨药物浓度与年龄、性别的关系。, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 药物与仪器
苯巴比妥、苯妥英、酰胺咪嗪、氯硝西泮、硝基安定和内标非那西汀标准品均为中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，上海化学试剂研究所。二氯甲烷分析纯，上海试剂四厂。LC-4A高效液相色谱仪，SPD-2AS紫外检测器，C-R2AX数据处理机，均为日本岛津公司产品。
1.2 样品制备
精密吸取血浆0.5 ml，加入1 mol/L高氯酸0.5 ml，混匀，再加入50 μl内标，振荡1 min，3000 r/min离心10 min，取上清液加入二氯甲烷2.0 ml，提取二次，合并二氯甲烷置尖底离心管，以N2吹干，加甲醇100 μl溶解残留物，进样10 μl，采用样品与内标的峰面积比计算浓度。
1.3 色谱条件
, 百拇医药
色谱柱YWG C18(4.6 mm×250 mm,10 μm)，流动相为甲醇∶水∶四氢呋喃=46∶53∶1，流速1 ml/min，波长254 nm，检测器灵敏度0.005。
2 结 果
2.1 各药出峰顺序为苯巴比妥、内标、苯妥英、酰胺咪嗪、硝基安定、氯硝西泮。丙戊酸钠、安定、维生素C、维生素B12、叶酸不干扰各组分的色谱图(图1,2)。
图1 标准抗癫
药物血浆色谱图1.苯巴比妥； 2.内标； 3.苯妥英; 4.酰胺咪嗪; 5.硝基安定; 6.氯硝西泮
, http://www.100md.com
图2 空白血浆色谱图
2.2 线性范围、最低检出浓度、平均回收率、重复性实验(附表)。
附表 线性范围、平均回收率、重复性和最低检出浓度 药 品
线性范围
(μg/ml)
平均回收率
(%)
日内变异
日间变异
最低检出浓度
(ng/ml)
, http://www.100md.com
苯巴比妥
1.00～36.00
96.00
3.90
5.20
500.00
苯妥英
1.00～36.00
95.00
4.40
6.01
500.00
酰胺咪嗪
, 百拇医药
0.50～20.00
90.30
6.25
7.13
250.00
硝基安定
0.05～0.30
90.10
6.43
6.57
25.00
氯硝西泮
0.01～0.50
, http://www.100md.com
89.70
7.30
8.50
5.00
2.3 临床应用 2年来，对门诊192例诊断为癫
的病人进行抗癫治疗，应用本文所述的方法在常规用药情况下监测其稳态血药浓度。各药物的有效治疗浓度范围为：苯巴比妥10.00～25.00 μg/ml，苯妥英10.00～20.00 μg/ml，酰胺咪嗪3.50～8.50 μg/ml，硝基安定50.00～200.00 ng/ml，氯硝西泮5.00～70.00 ng/ml，35.42%病人血中各种抗癫药物浓度全部在有效治疗浓度范围内(简称“达到”)，而58.33%病人血中有一种或多种药物浓度低于有效治疗浓度范围(简称“低于”)，6.25%病人至少有一种血药浓度超出最高有效治疗浓度范围。, 百拇医药
2.4 年龄、性别对达到有效治疗浓度的影响(表2)
表2 年龄、性别对达到有效的治疗浓度的影响(n) 分 组
达到
低于
达到率(%)
年龄(岁)
>15
44
59
42.70
≤15
24
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53
31.20
性别
男
45
82
35.40
女
23
30
43.40
年龄>15岁与≤15岁达到有效治疗浓度率比较，差异无显著性(P>0.05)。
男性与女性达到有效治疗浓度率比较，差异也无显著性(P>0.05)。3 讨 论
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癫
患者因个体差异大，一般所服的抗癫药有一种至几种，各种药物的组合相互作用使某些药物的抗癫作用降低而毒副作用增加，如苯妥英钠的酶代谢系统易被其他药品抑制造成血药浓度过高而引起中毒[3]，此外，许多抗癫药物是肝脏药物代谢酶的有力诱导剂，如苯巴比妥与其他抗癫药物合用可因代谢加快而使他药的抗癫作用减弱[4～6]。Schmidt认为使用一种抗癫药并逐步增加剂量，直至最大耐受量后如仍未见效，方可更换另一种药或使用两种以上的药治疗，这种情况是因为当时对多种抗癫药进行监测，实验室尚未寻找到方便、可行的方法。, 百拇医药
目前国内外用于抗癫
药物检测的方法有高效液相色谱法[7,8]，酶免疫法和荧光偏振免疫法、紫外分光光度法[9]。前者虽可同时测定数种药物，但操作步骤多，分析时间较长；而酶免疫法和荧光偏振免疫法所需试剂昂贵，使其实际应用受到一定限制；紫外分光光度法，则灵敏度低，干扰大，重现性差。本文报道的采用反相高效液相色谱法具有快速、简便、灵敏、准确等特点，可同时测定五种抗癫药物，可满足临床医生的需求，以避免因盲目加药导致药物过量产生毒性作用。有效血药浓度对癫
病人来说非常重要[10～12]，笔者设想它与年龄，性别是否有关系，在这一方面国内尚未见报道，因此，本文对192例癫病人进行药物浓度监测，发现在常规用药情况下，年龄、性别不影响达到有效血药浓度，而病情是否得到控制与改善却与有效血药浓度有关，因此，在临床上要对癫病人进行药物浓度监测。, 百拇医药
参考文献
1 吴立文. 癫痫病人血中抗癫痫药物总浓度以游离型浓度的测定. 中华神经精神科杂志， 1991;24：357
2 吴莱文，杜江波，刘 丹. 苯妥英和苯巴比妥在一例过量用药脑炎患儿组织中的分布. 湖南医科大学学报， 1993;18：146
3 洪 震，瞿治平，俞丽云，等. 抗癫痫药物血药浓度监测在治疗“难治性”癫痫中的作用. 上海医科大学学报， 1992;19：233
4 三浦寿男. 抗癫痫药的治疗药物的监测和适应性[日]. 小儿内科， 1995;27:1125
5 许律西. 抗癫痫药物使用的现状与展望. 药学进展， 1996;20:78
6 周 为. 苯妥因钠，苯巴比妥的血药浓度及抗癫痫治疗中毒副反应的观察. 河南医学研究, 1997;(2):112
, 百拇医药
7 吴永麟. 同时快速测定血清苯妥英与卡马西平浓度的高效液相色谱法. 药物分析杂志， 1989;9：275
8 徐家明. 反相高效液相色谱法同时测定血清中苯妥英、卡马西平和苯巴比妥. 中国医院药学杂志， 1991;11(5)：195
9 Yukiya Saitoh. Improved microdetermination for diphenylphydantoin in blood by UV spectrophotometry. J Pharmaceutic Sci, 1973;62:206
10 尹燕秋，陈 灵，赵善瑞，等. 238例小儿癫痫临床分析. 白求恩医科大学学报， 1997;23:78
11 吴祖舜. 癫痫持续状态及其治疗：附168例报告. 脑与神经疾病杂志， 1997;5(4):215
13 唐章龙，林燕霞，徐雅春，等. 405例癫痫的临床分析和8年随访报告. 临床脑电学杂志, 1996;5:225
(收稿：1999-01-25 修回：1999-05-04), 百拇医药