脑血管痉挛鼠一氧化氮和内皮素的变化及银杏叶制剂的影响
作者：孙保亮 夏作理 杨明峰 张显忠 许长庆
单位：271000 山东，泰山医学院微循环研究所神经病学教研室(孙保亮、夏作理、杨明峰、许长庆)；泰山医学院附属医院生化室(张显忠)
关键词：
中华医学杂志990329 一氧化氮(NO)和内皮素(ET)在脑血流调节中起重要作用[1]。银杏叶制剂(GBE)可扩张脑血管，增加脑血流[2，3]。我们利用大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型，观察了脑血管痉挛(CVS)时血NO、ET含量变化及GBE对其影响。
一、材料与方法
1.动物与分组：将185只Wistar大鼠分为5组：假手术组(Sham组)和单纯出血组(SAH组)各13只，生理盐水组(NS组)、尼莫地平组(ND组)和GBE组各53只。ND注射剂(山东新华制药厂，批号960302)和GBE(徐州邳州制药厂，质控指标为含银杏总黄酮27.5%，批号950322)于造成SAH前半小时腹腔注射，每6小时追加1次，剂量分别为100 μg(1 ml)/kg和15 mg(1 ml)/kg。NS以相同体积、时间和途径给予。各组均测量手术前后基底动脉(BA)管径和24小时内大脑皮层微区血流量(CBF)动态变化。后3组另检测24小时内血NO、ET含量动态改变。
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2.模型制作：将Bederson等[4]的非开颅法略作改良，自右侧颈外动脉插入经浓硝酸处理的玻璃纤维至颈内动脉颅内段，刺破Willis环前部。Sham组操作同上，但不刺破Willis环。
3.BA管径及CBF测量：经斜坡开骨窗暴露BA全程，用显微镜测微尺及摄影方法测量BA的椎基底动脉汇合处、脑桥中部和分叉处直径，取均值。于动物前囟后、中线左侧各3 mm处钻一小孔，在立体定向仪控制下，将激光多普勒血流计(LDF-Pf2型，瑞典Perimed公司)探头垂直置放于硬脑膜测量CBF[4]。
4.血NO、ET测定：在各测定时间将动物快速断头取血2 ml，分为两等份。采用铜离子活化镉还原法测定NO2-浓度(NO3-还原为NO2-)反映NO水平。ET测定应用放免法(药盒购于解放军总医院东亚免疫技术研究所)。NO/ET相对比值由每只大鼠NO值除ET值计算得出。
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5.统计学处理：配对及非配对t检验。
二、结果
1.BA管径变化(表1)
表1 各组大鼠基底动脉管径变化(μm，
±s) 组别
鼠数
术前对照
术后0.5h
假手术组
5
236±34
227±34
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单纯出血组
5
246±24
125±17*△
生理盐水组
5
253±35
128±15*△
尼莫地平组
5
256±20
173±29*▲
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银杏叶制剂组
5
241±21
183±30*▲
注：与术前对照比较，*P<0.01；与假手术组比较，△ P<0.01；与生理盐水组比较，▲ P<0.05 2.CBF变化：Sham组CBF相对恒定。SAH组和NS组造成SAH后CBF立即下降，1小时降到最低点(分别降低58.0%、56.1%)，24小时内无恢复趋势(P<0.01)。应用ND及GBE均使SAH后的CBF下降速度延缓(GBE组2小时方降至最低点)，幅度减小，并提前恢复(P<0.01)。GBE提高SAH后CBF的作用较ND为强(P<0.05和<0.01)。
3.血NO含量变化：NS组于SAH 1小时后各时间NO含量均低于术前值(P<0.01)，并低于GBE组相应时间的数值(P<0.05和<0.01)(图1)。
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图1 NS组、ND组和GBE组血清NO水平变化
4.血ET浓度变化：NS组于SAH后24小时内各时间的ET浓度均较术前明显增高(P<0.05和<0.01)，并在1小时后均高于GBE组(P<0.01)(图2)。
图2 NS组、ND组和GBE组血浆ET浓度变化
5.NO/ET比值改变：NS组NO/ET比值在SAH后各时间均较术前明显为低(P<0.01)，1小时后的各数值亦低于GBE组(P<0.01)。ND组6小时和24小时的NO/ET比值高于SAH组(P<0.05)，但低于GBE组(P<0.01)(图3)。
图3 NS组、ND组和GBE组NO/ET比值变化
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三、讨论
1.本实验采用接近人脑动脉瘤性SAH的非开颅大鼠模型，能可靠地诱导CVS产生。
2.SAH时血管舒张因子NO减少和血管收缩因子ET增多，NO/ET比值降低可能在CVS发生发展中起重要作用。
3.GBE和ND均能有效缓解实验性SAH后CVS。GBE此作用的产生可能与其减轻NO和ET含量的异常改变，从而改善NO/ET比值有关。GBE在阻止CBF下降方面优于ND，提示GBE尚可能改善脑微循环和血液流变性。因此，GBE可能较ND更有利于CVS所致脑缺血损害的防治。 参考文献
1 Akopov S,Sercombe R,Seylaz J. Cerebrovascular reactivity: Role of endothelium/platelet/leukocyte interactions. Cerebrovasc Brain Metab Rev,1996,8: 11-94.
, 百拇医药
2 Kleijinen J,Kinpchild P. Ginkgo biloba. Lancet, 1992,340: 1136-1139.
3 Oyama Y, Chilkahisa L, Toshiko U, et al. Ginkgo biloba extract protects brain neurons against oxidative stress induced by hydrogen peroxide. Brain Res, 1996, 712: 349-352.
4 Bederson JB, Germano M, Guarino L. Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in rats. Strok,1995,26: 1086-1089
(收稿：1998-03-24 修回：1998-12-07), 百拇医药
单位：271000 山东，泰山医学院微循环研究所神经病学教研室(孙保亮、夏作理、杨明峰、许长庆)；泰山医学院附属医院生化室(张显忠)
关键词：
中华医学杂志990329 一氧化氮(NO)和内皮素(ET)在脑血流调节中起重要作用[1]。银杏叶制剂(GBE)可扩张脑血管，增加脑血流[2，3]。我们利用大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型，观察了脑血管痉挛(CVS)时血NO、ET含量变化及GBE对其影响。
一、材料与方法
1.动物与分组：将185只Wistar大鼠分为5组：假手术组(Sham组)和单纯出血组(SAH组)各13只，生理盐水组(NS组)、尼莫地平组(ND组)和GBE组各53只。ND注射剂(山东新华制药厂，批号960302)和GBE(徐州邳州制药厂，质控指标为含银杏总黄酮27.5%，批号950322)于造成SAH前半小时腹腔注射，每6小时追加1次，剂量分别为100 μg(1 ml)/kg和15 mg(1 ml)/kg。NS以相同体积、时间和途径给予。各组均测量手术前后基底动脉(BA)管径和24小时内大脑皮层微区血流量(CBF)动态变化。后3组另检测24小时内血NO、ET含量动态改变。
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2.模型制作：将Bederson等[4]的非开颅法略作改良，自右侧颈外动脉插入经浓硝酸处理的玻璃纤维至颈内动脉颅内段，刺破Willis环前部。Sham组操作同上，但不刺破Willis环。
3.BA管径及CBF测量：经斜坡开骨窗暴露BA全程，用显微镜测微尺及摄影方法测量BA的椎基底动脉汇合处、脑桥中部和分叉处直径，取均值。于动物前囟后、中线左侧各3 mm处钻一小孔，在立体定向仪控制下，将激光多普勒血流计(LDF-Pf2型，瑞典Perimed公司)探头垂直置放于硬脑膜测量CBF[4]。
4.血NO、ET测定：在各测定时间将动物快速断头取血2 ml，分为两等份。采用铜离子活化镉还原法测定NO2-浓度(NO3-还原为NO2-)反映NO水平。ET测定应用放免法(药盒购于解放军总医院东亚免疫技术研究所)。NO/ET相对比值由每只大鼠NO值除ET值计算得出。
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5.统计学处理：配对及非配对t检验。
二、结果
1.BA管径变化(表1)
表1 各组大鼠基底动脉管径变化(μm，
±s) 组别鼠数
术前对照
术后0.5h
假手术组
5
236±34
227±34
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单纯出血组
5
246±24
125±17*△
生理盐水组
5
253±35
128±15*△
尼莫地平组
5
256±20
173±29*▲
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银杏叶制剂组
5
241±21
183±30*▲
注：与术前对照比较，*P<0.01；与假手术组比较，△ P<0.01；与生理盐水组比较，▲ P<0.05 2.CBF变化：Sham组CBF相对恒定。SAH组和NS组造成SAH后CBF立即下降，1小时降到最低点(分别降低58.0%、56.1%)，24小时内无恢复趋势(P<0.01)。应用ND及GBE均使SAH后的CBF下降速度延缓(GBE组2小时方降至最低点)，幅度减小，并提前恢复(P<0.01)。GBE提高SAH后CBF的作用较ND为强(P<0.05和<0.01)。
3.血NO含量变化：NS组于SAH 1小时后各时间NO含量均低于术前值(P<0.01)，并低于GBE组相应时间的数值(P<0.05和<0.01)(图1)。
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图1 NS组、ND组和GBE组血清NO水平变化
4.血ET浓度变化：NS组于SAH后24小时内各时间的ET浓度均较术前明显增高(P<0.05和<0.01)，并在1小时后均高于GBE组(P<0.01)(图2)。
图2 NS组、ND组和GBE组血浆ET浓度变化
5.NO/ET比值改变：NS组NO/ET比值在SAH后各时间均较术前明显为低(P<0.01)，1小时后的各数值亦低于GBE组(P<0.01)。ND组6小时和24小时的NO/ET比值高于SAH组(P<0.05)，但低于GBE组(P<0.01)(图3)。
图3 NS组、ND组和GBE组NO/ET比值变化
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三、讨论
1.本实验采用接近人脑动脉瘤性SAH的非开颅大鼠模型，能可靠地诱导CVS产生。
2.SAH时血管舒张因子NO减少和血管收缩因子ET增多，NO/ET比值降低可能在CVS发生发展中起重要作用。
3.GBE和ND均能有效缓解实验性SAH后CVS。GBE此作用的产生可能与其减轻NO和ET含量的异常改变，从而改善NO/ET比值有关。GBE在阻止CBF下降方面优于ND，提示GBE尚可能改善脑微循环和血液流变性。因此，GBE可能较ND更有利于CVS所致脑缺血损害的防治。 参考文献
1 Akopov S,Sercombe R,Seylaz J. Cerebrovascular reactivity: Role of endothelium/platelet/leukocyte interactions. Cerebrovasc Brain Metab Rev,1996,8: 11-94.
, 百拇医药
2 Kleijinen J,Kinpchild P. Ginkgo biloba. Lancet, 1992,340: 1136-1139.
3 Oyama Y, Chilkahisa L, Toshiko U, et al. Ginkgo biloba extract protects brain neurons against oxidative stress induced by hydrogen peroxide. Brain Res, 1996, 712: 349-352.
4 Bederson JB, Germano M, Guarino L. Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in rats. Strok,1995,26: 1086-1089
(收稿：1998-03-24 修回：1998-12-07), 百拇医药