益肾、健脾和柔肝中药抗炎镇痛作用的比较研究

http://www.100md.com 《中国中医骨伤科杂志》 1999年第3期

     作者：沈培芝 汪青春 徐宇 石印玉

    单位：沈培芝 徐宇 石印玉 上海中医药大学附属曙光医院 (200021 上海)；汪青春 第一军医大学中医系

    关键词：实验研究；抗炎镇痛；佐剂性关节炎；中药

    中国中医骨伤科990303 摘要 目的：比较治疗OA常用的益肾方、健脾方和柔肝方的抗炎镇痛效应。方法：以小鼠热反法缩腿反应、耳廓肿胀度及佐剂性关节炎大鼠的踝关节肿胀指数为指标，观察益肾方、健脾方和柔肝方的抑炎镇痛效应。结果：益肾方、健脾方和柔肝方提高痛阈分别为44.6%、106.7%、145.6%；肿胀抑制率分别为8.2%、66.7%、72.6%。结论：健脾方和柔肝方对急性和亚急性炎症有较好的抑炎镇痛作用，益肾方无明显抑炎镇痛效应。

    A Comparative Study of Kidney-tonifying Formula,Spleen-reinforcing and

    Liversoftening Formula for Anti-inflammation and Analgesia Effect

    Shen Peizhi,Wang Qingchun,Xu Yu,et al

    Shuguang Hospital,Shanghai University of TCM (Shanghai 200021)

    ABSTRACT Objetive:To compare the effects of anti-inflammation and analgesia with Kidney-tomifying Formula(KTF),Spleen-reinforcing Formula(SRF) and Liver-softening Formula(LSF) on the mice and rats.Methods:The effect of anti-inflammation and analgesia of KTF,SRF and LSF were observed with methods of hot plate test,auricular swelling test on mice and ankle swelling scores on adjuvant induced arthritis (AIA) rats.Results:The pain threshold of three group (KTF,SRF and LSF) were increased 44.6%、106.7%、145.6% respectively:The swelling depressive rate were 8.2%、66.7%、72.6% respectively.Conclusions:A good results of anti-inflammation and anagesia effect were observed in two groups treated with SRF and LSF、KTF had no difference with control group.

    KEY WORDS Experimental study Anti-inflammation and anagesia AIA Chinese herbs

    骨关节炎是一种退行性疾病，软骨细胞生物功能减退，软骨基质合成与分解代谢异常为中心环节，而继发的关节滑膜等周围组织的炎症反应是出现临床症状的激发点，病人多因疼痛或肿胀而就治。本研究选择临床治疗“常用的几种治则方药，对比观察其抗炎镇痛作用。

    材料与方法

    1 动物 健康雌性成年Swiss小鼠120只，体重20±5g。健康SD大鼠70只，雌雄各半，体重200g～250g。由上海中医药大学动物实验中心提供。

    2 镇痛作用观察

    2.1 分组、药物组成及剂量 共设6组，挑选痛反应时间在5～30秒之间的Swiss小鼠60只，随机编号，每组10只。药物分别为：益肾组(仙灵脾、熟地、骨碎补等)，健脾组(生黄芪、茯苓、汉防己等)、柔肝组(杭白芍、牡蛎、生甘草等)、维骨力组(Viaril-s)、芬必得组(Fenbid)和空白对照组(双蒸水)。

    上述中药饮片由上海中医药大学益民药房提供，Fenbid由中美史克天津制药有限公司生产，Viartril-s由意大利Rotta Pharmaceutica1s生产，主要成分为硫酸氨基葡萄糖(glucosamine su1phate)。上述药物配成药液，4℃冰箱保存。按成人体表面积计算剂量，灌胃给药，剂量分别为0.96，0.89、0.35、0.16、0.13g*kg^-1空白组饲0.2ml双蒸水，每日1次，连续3天，第3天饲药后检测。

    2.2 小鼠热板法^[1]

    2.3 计算 疼痛抑制率=(T_b-T_a)/T_b×100%

    T_b表示治疗前痛反应时间；T_a：表示治疗后疼痛反应时间

    3 抗炎作用观察

    3.1 分组、药物组成及给药方法同1.2.1。

    3.2 检测方法 小鼠耳廓肿胀法^[2]

    3.4 计算 肿胀度=右耳片-重左耳片重

    肿胀抑制率=(空白组肿胀度-治疗组肿胀度)/(空白组肿胀度)×100%

    4对佐剂性关节炎的影响

    4.1 弗氏完全佐剂的配制 弗氏完全佐剂(FCA)由弗氏不完全佐剂(FIA)(Promega产品)和冻干皮内注射用卡介苗(上海市生物制品研究所生产，批号961215)配成。

    4.2 造模方法 FCA0.1ml，大鼠尾根部皮注射^[3，4]空白组注入等量PBS。

    4.3 分组、药物组成及给药方法 1.2.1六组的基础上增模型组。于造模后第10天，灌胃给药，剂量按成人与大鼠的体表面积折算，每日1次，连续喂药4周。模型组和空白组饲入等量双蒸水。

    4.4 观察指标及方法

    4.4.1 关节肿胀指数 佐剂性关节炎模型造模前后，用测微卡尺测量左后肢踝关节横径，^[5]每2天测1次，每次测2遍，求其均值。

    4.4.2 小鼠体重 FIA注射前及注射后每2天测1次，每次测2遍。

    结果

    1 镇痛作用 健脾方、柔肝方可延长小鼠对痛的反应时间，以药后1.5小时效应最长，提高痛阈分别为106.7%、145.6%，柔肝方镇痛作用较强，强度与芬必得相近，益肾方和维骨力作用不明显(图1)。

    2 抗炎作用 健脾方、柔肝方有较强的抑炎作用，抑炎率分别为66.7%和75%柔肝方抑炎强度与芬必得(72.6%)相近，益肾方和维骨力作用不明显(见图2)。

    3 对佐剂性关节炎大鼠体重及关节肿胀的影响 所有造模大鼠注射FCA后，体重均进行性减少。模型组于药物注射后第18天体重达最低，然后缓慢增加；柔肝组、健脾组和芬必得组大鼠体重降低程度轻于模型组。模型组关节肿胀于药物注射后18天达高峰，持续3～4天，然后缓慢减退。柔肝方，健脾方组大鼠关节肿胀明显轻于模型组，与芬必得相比无明显差异；益肾方和维骨力的抑炎作用不明显(图3、图4)。

    图1 痛反应时间的比较 (±s)(n=10)

    图2 小鼠耳廓重量的变化 (±s)(n=10)

    图3 药物对佐剂性关节炎关节肿胀的影响

    注：0～18天，n=10；20～28天，n=5

    图4 佐剂性关节炎大鼠关节肿胀的比较

    讨论

    1 对照药物的选择与依据 骨关节炎的最基本病理是关节软骨细胞的功能减退。软骨基质的分解加速，软骨组织的磨耗，进而继发滑膜炎症和关节周边的骨质增生。在临床上，常表现为关节的疼痛、肿胀和功能障碍。骨关节炎的治疗，目前提倡标本兼治的方法。即不仅能抗炎止痛缓解症状，又能改善软骨细胞代谢，延缓软骨的降解，增强软骨的抗损伤及修复损伤的能力。常用的药物主要分为二类：①对症治疗-快作用缓解症状药；②慢作用缓解症状及软骨保护剂。^[6，7]

    快作用缓解症状药物主要有镇痛药和各种非甾体类抗炎止痛药(NSAIDs)。在NSA1Ds中，目前常用的有布洛芬、甲氯灭痛、萘普生、炎痛喜康、扶他林等。芬必得的主要成分为布洛芬，其抗炎止痛作用早已证实，是目前临床上治疗关节炎症时使用量较多的药物。但近来有人通过细胞培养发现，芬必得对软骨细胞有直接损害作用。维骨力是近几年开发的作为软骨保护剂和慢作用药物；临床有所使用。维骨力的主要成分是硫酸氨基葡萄糖，它是一种氨基单糖，为关节软骨中GAG的基本成分。据报道，维骨力能刺激人软骨细胞的蛋白聚糖合成，还能防止非甾体类抗炎药物引起的软骨损伤以及地塞米松对软骨细胞的损害，在OA动物模型中有软骨保护作用，^[8]然在国内尚无有关维骨力的实验研究报告。我们以芬必得作为快作用药物的参照，对三种不同治则方药以及维骨力的抗炎镇痛作用作一比较。

    2 佐剂性大鼠关节炎模型 OA是以软骨退变为中心环节的退行性疾病，这己为广大学者所认同。然近年来，关节软骨损伤退变中的自身免疫现象日益为人们所瞩目。Cooke等^[9]在OA患者的病变关节软骨部位检测到抗Ⅱ型胶原的免疫球蛋白IgG、IgA和补体C₃沉着。Donohue等^[10]提出，在胚胎和出生后的个体发育过程中，软骨组织大多处于与机体自身免疫监视系统相隔离的状态，即所谓“隐蔽抗原”假说，一旦软骨受到某种损伤，软骨成分便可被暴露出来，从而引起抗自身软骨成分的自身免疫反应，产生的抗胶原抗体可抑制软骨细胞的DNA、GAG和胶原的合成，进一步加重软骨的退变，使更多的软骨成分暴露出来，再次激发自身免疫反应，临床上所见到“呈进行性加重，可能与此有关。皮内注射弗氏佐剂诱发的关节炎是一种亚急性关节损害，^[11]表现为关节滑膜肿胀，增生肥厚，关节软骨破损，这与人类部分OA患者在急性期所表现的关节疼痛、肿胀、积液形成、ESR升高等急性或亚急性滑膜炎症类同，在一定程度上反映了OA的部分临床特征。

    3 中药抗炎镇痛作用的特点 中医药学临床治疗骨关节炎方法多样、从治则上看主要为益肾壮骨。健脾利湿和养血柔肝，另辅以祛风散寒、清热，止痛之品。^[13，14]如以益肾为主的抗骨质增生丸治疗各类OA 1000例，总有效率达90.0%；以健脾为主的健脾利湿方治疗积液型膝OA有效率达93.3%：以柔肝为主的养血柔肝方治疗膝OA改善率为92.0%，上述这些方药治疗OA的作用机制尚未明了。^{[15，16，17]}本研究的非特异性抗炎镇痛实验证实健脾方和柔肝方具有较好的急性抑炎镇痛效应，对佐剂性关节炎大鼠的继发损害有抑制作用，强度与常用的抗炎止痛药芬必得相近；临床研究发现，益肾方和维骨力有较好的疗效，^[18]但本实验并未证实两者对急性或亚急性炎症有较好的抑炎镇痛作用；另一项组织学研究发现，^[19，20]益肾方、柔肝方、维骨力可延缓OA关节软骨的退变进程，具有软骨保护作用，芬心得和健脾方延缓软骨退变的作用则不明显。软骨退变程度与炎症程度不相平行的结果提示，OA的发生、发展有多种机制参与，抑炎镇痛是中药治疗OA的作用机制之一，中药治疗OA尚存在其它重要机制。

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    (国家自然基金资助项目 39570880)

    (收稿：1998-10-7)

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