QK“全谱疗仪”对小鼠细胞免疫功能的影响李
作者：双河 张涛 闫冬梅 梁立春 韩秀坤 王艳 白丰沛 陈志 王祥林
单位：李双河 张涛 闫冬梅 梁立春 韩秀坤 王艳 白丰沛 陈志：佳木斯大学免疫教研室；王祥林：哈尔滨全科医疗技术发展有限公司
关键词：QK“全谱疗仪”；TLC亚群细胞；ANAE
黑龙江医药科学990313
提要 QK“全谱疗仪”具有提高机体免疫功能与疗病作用[1]。本实验研究采用QK“全谱疗仪”照射荷瘤小鼠，测定小鼠细胞免疫。结果表明对小鼠外周血LC非特异酯酶染色(ANAE)阳性细胞百分率及TLC亚群细胞均有明显增强作用(P<0.001)。
QK“全谱疗仪”提高免疫功能的机理尚不清。本实验研究采用QK“全谱疗仪”照射荷瘤鼠，测定外周血ANAE阳性细胞百分率及TLC亚群细胞百分率，结果表明对此两项免疫指标均有明显的增加作用。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 仪器与动物
昆明种小白鼠，体重(20±2)g，雌雄不拘，由佳木斯大学医学院动物室提供。QK“全谱疗仪”，由哈尔滨全科医疗技术发展有限公司提供。FACS Calibur流式细胞仪，由美国BD公司生产，哈尔滨第一医院血研所提供。
1.2 试剂
FITC标记大鼠抗小鼠CD3、CD4、CD8 TLC的McAb(美国Coulter-Immunotech公司生产)；溶血剂，美国BD公司生产；固定液，2.7%甲醛PBS液，由哈尔滨市第一医院血研所配制。
1.3 实验分组
Ⅰ组为正常对照鼠，不进行QK“全谱疗仪”照射；Ⅱ组为荷瘤(肝癌)对照鼠，也不进行QK“全谱疗仪”照射；Ⅲ组为荷瘤+QK“全谱疗仪”照射实验鼠。
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1.4 实验方法
1.4.1 小鼠外周血ANAE阳性细胞百分率[2]
取对照鼠与实验鼠眼球血，制成中等厚度推片血膜，按吴景兰报道方法，经改良，即将复染色液改为1%的孔雀绿染液。染色后在光学显微镜下，计数100~200个LC，出现胞浆内红色颗粒的LC为一个ANAE阳性细胞，并计算出ANAE阳性细胞的百分率。
1.4.2 FACS Calibur流式细胞仪测定小鼠外周血TLC亚群[3]
取实验小鼠眼球血，肝素抗凝。取抗凝血100μl，加入FITC-CD3(或CD4、CD8)的McAb 100ml，混匀，放于4℃冰箱作用30min；加入溶血剂2ml，混匀，室温放置10min。1200转/分，离心5min，弃上清；加入PBS 2ml，混匀，同上离心机后弃上清；加入固定液0.6ml，混匀，4℃放置30min后上机计数。
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2 结果
见附表
附表 QK“全谱疗仪”对荷瘤鼠TLC亚群与ANAE阳性细胞的百分率的影响(
±s) 组别(n)
TLC亚群(%)
CD4/CD8比值
ANAE+C(%)
CD3
CD4
CD8
, 百拇医药
Ⅰ(6)
70.23±10.76
43.90±4.57
26.39±10.57
1.66±0.34
71.00±3.57
Ⅱ(6)
62.66±13.68
32.73±4.94
34.37±13.31
1.07±0.41
65.33±3.01*
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Ⅲ(8)
65.07±10.63
36.59±8.34
32.87±13.24
1.34±0.62
70.33±2.94≠△
注:与Ⅰ组比较*P<0.001，≠P>0.05；与Ⅱ组比较△P<0.001
上述结果表明荷瘤鼠的CD3+TLC、CD4+TLC、CD4/CD8比值与ANAE阳性细胞百分率均较正常对照鼠为低(P<0.05)；而CD8+TLC的百分率增加(P<0.05)。经QK“全谱疗仪”照射后，对上述降低的值均有不同程度的提高、使CD4/CD8比值恢复接近正常。
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3 讨论
机体非特异性与特异性细胞免疫对抗细胞内寄生物(胞内菌、真菌、病毒与原虫)的感染、抗肿瘤，同种移植反应与迟发型超敏反应的发生、发展与结局具有重要作用。通过QK“全谱疗仪”照射荷瘤鼠，测定非特异性细胞免疫(ANAE阳性细胞)与特异性TLC亚群的百分率。结果揭示：QK“全谱疗仪”照射能改善荷瘤鼠降低了的细胞免疫功能得以恢复接受正常；并使荷瘤鼠增加的CD8+TLC的百分率受到抑制，从而使CD4/CD8比值从明显低值得到较好恢复。参照另几篇报道，我们有理由这样推论：QK“全谱疗仪”照射荷瘤鼠，通过提高机体细胞免疫，包括增强MΦ产生与分泌LZM、增加ANAE阳性细胞与TLC亚群CD3+、CD4+TLC的百分率，达到抗细胞内寄生物的感染、抗肿瘤等细胞免疫效应。是否QK“全谱疗仪”照射也能提高RBC的免疫功能，我们将通过进一步实验加以证实。
参考文献
1.哈尔滨频谱医疗技术开发有限公司.多源频谱治疗仪的治疗、康复、保健范围.1997年
2.白丰沛.Zn、Cu对老龄大鼠的免疫功能恢复作用与抗衰老的实验研究.中华微生物学免疫学杂志,1993;13(2):83
3.杨贵贞主编.医学免疫学.第3版,长青:吉林科学技术出版社,1995,111
(1999-01-11收稿), 百拇医药
单位：李双河 张涛 闫冬梅 梁立春 韩秀坤 王艳 白丰沛 陈志：佳木斯大学免疫教研室；王祥林：哈尔滨全科医疗技术发展有限公司
关键词：QK“全谱疗仪”；TLC亚群细胞；ANAE
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提要 QK“全谱疗仪”具有提高机体免疫功能与疗病作用[1]。本实验研究采用QK“全谱疗仪”照射荷瘤小鼠，测定小鼠细胞免疫。结果表明对小鼠外周血LC非特异酯酶染色(ANAE)阳性细胞百分率及TLC亚群细胞均有明显增强作用(P<0.001)。
QK“全谱疗仪”提高免疫功能的机理尚不清。本实验研究采用QK“全谱疗仪”照射荷瘤鼠，测定外周血ANAE阳性细胞百分率及TLC亚群细胞百分率，结果表明对此两项免疫指标均有明显的增加作用。
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1 材料与方法
1.1 仪器与动物
昆明种小白鼠，体重(20±2)g，雌雄不拘，由佳木斯大学医学院动物室提供。QK“全谱疗仪”，由哈尔滨全科医疗技术发展有限公司提供。FACS Calibur流式细胞仪，由美国BD公司生产，哈尔滨第一医院血研所提供。
1.2 试剂
FITC标记大鼠抗小鼠CD3、CD4、CD8 TLC的McAb(美国Coulter-Immunotech公司生产)；溶血剂，美国BD公司生产；固定液，2.7%甲醛PBS液，由哈尔滨市第一医院血研所配制。
1.3 实验分组
Ⅰ组为正常对照鼠，不进行QK“全谱疗仪”照射；Ⅱ组为荷瘤(肝癌)对照鼠，也不进行QK“全谱疗仪”照射；Ⅲ组为荷瘤+QK“全谱疗仪”照射实验鼠。
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1.4 实验方法
1.4.1 小鼠外周血ANAE阳性细胞百分率[2]
取对照鼠与实验鼠眼球血，制成中等厚度推片血膜，按吴景兰报道方法，经改良，即将复染色液改为1%的孔雀绿染液。染色后在光学显微镜下，计数100~200个LC，出现胞浆内红色颗粒的LC为一个ANAE阳性细胞，并计算出ANAE阳性细胞的百分率。
1.4.2 FACS Calibur流式细胞仪测定小鼠外周血TLC亚群[3]
取实验小鼠眼球血，肝素抗凝。取抗凝血100μl，加入FITC-CD3(或CD4、CD8)的McAb 100ml，混匀，放于4℃冰箱作用30min；加入溶血剂2ml，混匀，室温放置10min。1200转/分，离心5min，弃上清；加入PBS 2ml，混匀，同上离心机后弃上清；加入固定液0.6ml，混匀，4℃放置30min后上机计数。
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2 结果
见附表
附表 QK“全谱疗仪”对荷瘤鼠TLC亚群与ANAE阳性细胞的百分率的影响(
±s) 组别(n)TLC亚群(%)
CD4/CD8比值
ANAE+C(%)
CD3
CD4
CD8
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Ⅰ(6)
70.23±10.76
43.90±4.57
26.39±10.57
1.66±0.34
71.00±3.57
Ⅱ(6)
62.66±13.68
32.73±4.94
34.37±13.31
1.07±0.41
65.33±3.01*
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Ⅲ(8)
65.07±10.63
36.59±8.34
32.87±13.24
1.34±0.62
70.33±2.94≠△
注:与Ⅰ组比较*P<0.001，≠P>0.05；与Ⅱ组比较△P<0.001
上述结果表明荷瘤鼠的CD3+TLC、CD4+TLC、CD4/CD8比值与ANAE阳性细胞百分率均较正常对照鼠为低(P<0.05)；而CD8+TLC的百分率增加(P<0.05)。经QK“全谱疗仪”照射后，对上述降低的值均有不同程度的提高、使CD4/CD8比值恢复接近正常。
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3 讨论
机体非特异性与特异性细胞免疫对抗细胞内寄生物(胞内菌、真菌、病毒与原虫)的感染、抗肿瘤，同种移植反应与迟发型超敏反应的发生、发展与结局具有重要作用。通过QK“全谱疗仪”照射荷瘤鼠，测定非特异性细胞免疫(ANAE阳性细胞)与特异性TLC亚群的百分率。结果揭示：QK“全谱疗仪”照射能改善荷瘤鼠降低了的细胞免疫功能得以恢复接受正常；并使荷瘤鼠增加的CD8+TLC的百分率受到抑制，从而使CD4/CD8比值从明显低值得到较好恢复。参照另几篇报道，我们有理由这样推论：QK“全谱疗仪”照射荷瘤鼠，通过提高机体细胞免疫，包括增强MΦ产生与分泌LZM、增加ANAE阳性细胞与TLC亚群CD3+、CD4+TLC的百分率，达到抗细胞内寄生物的感染、抗肿瘤等细胞免疫效应。是否QK“全谱疗仪”照射也能提高RBC的免疫功能，我们将通过进一步实验加以证实。
参考文献
1.哈尔滨频谱医疗技术开发有限公司.多源频谱治疗仪的治疗、康复、保健范围.1997年
2.白丰沛.Zn、Cu对老龄大鼠的免疫功能恢复作用与抗衰老的实验研究.中华微生物学免疫学杂志,1993;13(2):83
3.杨贵贞主编.医学免疫学.第3版,长青:吉林科学技术出版社,1995,111
(1999-01-11收稿), 百拇医药