大黄对烧伤模型小鼠疗效及其机理的探讨
作者：黄兴兰 贾成瑶 陈晓理 吴浩
单位：华西医科大学附属第一医院生化检验室(成都 610041) 贾成瑶；华西医科大学附属第一医院普外二(成都 610041) 陈晓理；华西医科大学附属第一医院消化内科(成都 610041) 吴浩 黄兴兰
关键词：大黄；烧伤；球蛋白
华西医学990311 摘要：本文旨在研究大黄对烧伤的疗效及其作用机理。26只Balb/c小鼠，制成烧伤模型，随机分成大黄汤剂治疗组和对照组。专人盲法测定肠道灌洗液中总蛋白和球蛋白(G)，同时送小肠病理学检查。结果发现：①治疗组小鼠存活率较对照组有所提高；②病理显示对照组，小肠绒毛变平，有破损现象，而用了大黄的小鼠肠粘膜也有破损，但可见更多的完整的肠绒毛存在，且肠绒毛较对照组高；③治疗组小鼠肠道灌洗液中，总蛋白和球蛋白的含量均明显高于对照组，其均数分别为3.72g/L和1.57g/L(P<0.05)及4.12g/L和2.13g/L(P<0.05)。提示严重烧伤可导致肠粘膜屏障损害。而大黄有促肠道球蛋白分泌作用，及减轻肠道形态学改变的作用，从而降低烧伤的死亡率。
, http://www.100md.com
[中图分类号]R282.71；R644 [文献标识码]A
Studies of the Effect and the Mechanism of Sennosides in the Burn Mice Model
HUANG Xing-lang,JIA Cheng-yao,CHEN Xiao-li,et al.
Department of Gastroenterology,First University Hospital,West China University of Medical Sciences.Chengdu 610041.
Abstract：Object：To investigate the effect and the mechanism of sennosides in the burn mice model.Methods：26 Balb/c mices were made into the model of burn mice and were classed into treatment group with decoction of sennosides and control group.The total protein and globulin in the saline which was gavaged though the whole small intestine were measured,while the tissue histologic studies of small intestine was perfurmed.Results：①The survival rate in treatment group is higher than that in control group.②The tissue histologic findings showed shortening,fragmentation and atrophy of villi in control group.Some fragmentation and degeneration were observed but the small intestine showed more intact villi and more uniform villus structure and villi were longer in treatment group.③The average number of globulin in test group and in cantrol group were 3.72g/L and 1.57g/L,respectively.There was statistical difference(P<0.05)between the groups.The average number of total protein in test group and in control group were 4.12g/L and 2.13g/L,respectively.There was statistical difference(P<0.05)between the groups.Conclusions：Severe burn injury may damage the barrier of the intestinal mucosa.Sennosides may improve the secretion of mucus and globulin of the intestine and partially prevented the morphologic alteration in the intestinal mucosa 24 hours after burn injury,which decreased the mortality rate of burn injury.
, 百拇医药
Key words：sennosides；burn injury；globuline
现已发现许多危重疾病，如创伤、手术、休克等常继发肠道屏障功能受损所致的细菌移位和内毒素血症，前者导致全身感染，后者诱发多器官衰竭，均是上述疾病的主要死亡原因。近年来，大黄等中药治疗急性胰腺炎取得了明显临床效果〔1〕；有实验证实大黄对出血休克大鼠模型的肠粘膜屏障有保护作用，但大黄对烧伤的疗效及其作用机理报道甚少，故本实验旨在探讨大黄对烧伤模型小鼠治疗的疗效和机理。
1 材料和方法
26只Balb/c小鼠(18～22g)分成2组，烧伤组(即对照组)13只，烧伤+大黄组(即治疗组)13只。烧伤模型的制备：在5%水合氯醛腹腔麻醉下，将小鼠背部的毛剃光，每只小鼠用同样大小(3.5cm×5.5cm)的煤油纱布紧贴在剃光毛的小鼠背部皮肤上，其余部分用湿纱布保护，着火燃烧18秒钟，即制成烧伤面积达总体表面积的32%的烧伤模型〔2〕。烧伤后立即给20ml/kg无菌生理盐水腹腔注射复苏。治疗组给10%大黄汤剂0.3ml，每6小时管喂1次，共5次(其中烧伤前管喂第一次，余在烧伤后喂)，对照组与治疗组同时管喂等量生理盐水，24小时后处死小鼠，取全小肠称重、量长度，然后用2ml生理盐水灌洗小肠，分别收集小肠灌洗液，在常温下离心，取上清液，专人盲法，在HITACHI7170A型全自动生化分析仪上测定总蛋白度和球蛋白(G)等，并将小肠送病理学检查。统计分析：计量资料采用T检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 小鼠存活情况 对照组和治疗组分别有7只(7/13)和4只(4/13)小鼠在实验期间死亡。
2.2 球蛋白测定结果 治疗组小鼠灌洗液中，球蛋白的含量明显高于对照组，其均数分别为3.72g/L和1.57g/L，两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。
2.3 总蛋白测定结果 治疗组小肠灌洗液中总蛋白含量明显高于对照组，其均数分别为4.12g/L和2.13g/L，两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4 病理检查结果 对照组烧伤后24小时小肠粘膜结构明显异常，表现为小肠绒毛变短，有破损现象。而用了大黄的小鼠肠粘膜虽也有破损，但可见更多的完整的小肠绒毛存在，肠绒毛较对照组长。在粘膜内杯状细胞明显增生。在肠粘膜固有层中，有较多炎细胞浸润，其中浆细胞明显增多。
, 百拇医药
2.5 两组间小肠的长度、重量之差异均无统计学意义(P>0.05)。
3 讨论
烧伤出现全身感染、多器官衰竭的主要原因是肠道细菌移位和肠毒素的吸入。有动物实验表明〔3〕，严重烧伤后3小时即可发现细菌移位到MLN，4小时和24小时MLNS细菌培养阳性率分别达42%和74%。目前认为肠道细菌易位的主要促发因素有三个方面：①肠粘膜屏障功能障碍，任何原因造成粘膜缺血、萎缩、破损、脱落均给细菌入侵以可乘之机。②肠道中微生态紊乱，细菌增生过长。③机体免疫功能受损。有学者〔4〕报告，烧伤小鼠小肠粘膜明显异常，出现肠绒毛变短、萎缩和破损，此发现与我们实验结果一致，此改变为细菌移位打开了门户，是烧伤状态下易出现肠道细菌移位的主要原因之一。在细菌移位过程中，可能激活某些介质，这些介质抑制免疫，而免疫受到抑制又是一个肠道细菌移位的主要原因。如果打断这一恶性循环，增强肠粘膜屏障功能，提高免疫力，就可以减少肠道细菌移位，减少多器官衰竭，从而减少其死亡率。我们选用了大黄治疗烧伤小鼠，结果发现治疗组小鼠存活率较对照组有所提高，其存活率分别为9/13(69.2%)和6/13(46.1%)，其原因可能有以下几个方面。
, 百拇医药
①大黄有减轻烧伤所致的肠粘膜损伤的作用。从病理检查结果提示，治疗组小肠绒毛较长，肠粘膜虽有破损，但可见更多的完整的肠绒毛，说明大黄有减轻烧伤所致的肠粘膜损伤的作用。
②大黄有促进肠粘液分泌的作用。治疗组肠粘膜内杯状细胞增生，小肠灌洗液中总蛋白较对照组明显增多，均数分别为4.12g/L和2.13g/L(P<0.05)，间接说明大黄有促进肠粘液分泌的作用。有学者〔5〕采用胆碱类药物来耗竭肠粘液分泌后，再给以大肠杆菌，结果细菌移位发生率明显增加，因此认为粘液是抵抗细菌入侵的最主要的物质之一。粘液维护着肠粘膜的完整性，通常粘液层只允许分子量小于17000道尔顿的物质通过，细菌和毒素就被滞留在肠腔内。另外，粘液阻止肠腔内毒素与上皮细胞接触，从而避免上皮细胞遭受损伤。大黄可通过促进粘液分泌，增强肠粘膜屏障功能，是其提高存活率的又一原因。
③大黄能促进肠道免疫球蛋白的分泌。治疗组小肠粘膜固有层内浆细胞增多，小肠灌洗液中球蛋白较对照组明显增多，均数分别为3.72g/L和1.57g/L(P<0.05)，而肠道中，球蛋白以sIgA为主，也就是说大黄有促进肠道sIgA分泌的作用，增加肠道局部免疫功能，减少肠道细菌移位，减少其死亡率。
, 百拇医药
总之，从本实验结果提示，严重烧伤可导致肠粘膜屏障损害，应用大黄的促粘液分泌作用，促肠道免疫球蛋白分泌作用以及减轻肠道形态学改变的作用，有利于恢复肠道的防御功能，减少肠道细菌移位，缓解多器官衰竭，最终降低烧伤的死亡率。当然，大黄的作用机理还有待进一步深入的研究。
4 参考文献
1 焦东海，沈学敏，景炳文：单味大黄治疗急性胰腺炎17年研究。中医杂志1994；35(3)：172。
2 Holder I.A, Jogan M.Enhanced Survival in burned mice treated with antiserum prepared against normal and burned skin.J.Trauma 1971；11∶1041～1046.
3 Mason AD,McManus AT,pruilt BA.Association of Burn Mortality and Bacteremia Arch surg 1986；121(9)∶1027.
, 百拇医药
4 Giandtil,Alexander J.W,Pyles Tetal.Arginine-Supplemented Diets improve Survival in gut-derived Sepsis and Peritonitis by Modulating Bacterial clearance Ann Surg 1993;217(6)∶644.
5 Albanese C.T,Cardona M,Smith S.D et al.Role of intestinal mucus in transle-pithelial passgae of bacteria across the intact ileum in vitro Surgery 1994;116∶76～82.
(收稿日期：1998-09-15)
(Received date：1998-09-15), 百拇医药
单位：华西医科大学附属第一医院生化检验室(成都 610041) 贾成瑶；华西医科大学附属第一医院普外二(成都 610041) 陈晓理；华西医科大学附属第一医院消化内科(成都 610041) 吴浩 黄兴兰
关键词：大黄；烧伤；球蛋白
华西医学990311 摘要：本文旨在研究大黄对烧伤的疗效及其作用机理。26只Balb/c小鼠，制成烧伤模型，随机分成大黄汤剂治疗组和对照组。专人盲法测定肠道灌洗液中总蛋白和球蛋白(G)，同时送小肠病理学检查。结果发现：①治疗组小鼠存活率较对照组有所提高；②病理显示对照组，小肠绒毛变平，有破损现象，而用了大黄的小鼠肠粘膜也有破损，但可见更多的完整的肠绒毛存在，且肠绒毛较对照组高；③治疗组小鼠肠道灌洗液中，总蛋白和球蛋白的含量均明显高于对照组，其均数分别为3.72g/L和1.57g/L(P<0.05)及4.12g/L和2.13g/L(P<0.05)。提示严重烧伤可导致肠粘膜屏障损害。而大黄有促肠道球蛋白分泌作用，及减轻肠道形态学改变的作用，从而降低烧伤的死亡率。
, http://www.100md.com
[中图分类号]R282.71；R644 [文献标识码]A
Studies of the Effect and the Mechanism of Sennosides in the Burn Mice Model
HUANG Xing-lang,JIA Cheng-yao,CHEN Xiao-li,et al.
Department of Gastroenterology,First University Hospital,West China University of Medical Sciences.Chengdu 610041.
Abstract：Object：To investigate the effect and the mechanism of sennosides in the burn mice model.Methods：26 Balb/c mices were made into the model of burn mice and were classed into treatment group with decoction of sennosides and control group.The total protein and globulin in the saline which was gavaged though the whole small intestine were measured,while the tissue histologic studies of small intestine was perfurmed.Results：①The survival rate in treatment group is higher than that in control group.②The tissue histologic findings showed shortening,fragmentation and atrophy of villi in control group.Some fragmentation and degeneration were observed but the small intestine showed more intact villi and more uniform villus structure and villi were longer in treatment group.③The average number of globulin in test group and in cantrol group were 3.72g/L and 1.57g/L,respectively.There was statistical difference(P<0.05)between the groups.The average number of total protein in test group and in control group were 4.12g/L and 2.13g/L,respectively.There was statistical difference(P<0.05)between the groups.Conclusions：Severe burn injury may damage the barrier of the intestinal mucosa.Sennosides may improve the secretion of mucus and globulin of the intestine and partially prevented the morphologic alteration in the intestinal mucosa 24 hours after burn injury,which decreased the mortality rate of burn injury.
, 百拇医药
Key words：sennosides；burn injury；globuline
现已发现许多危重疾病，如创伤、手术、休克等常继发肠道屏障功能受损所致的细菌移位和内毒素血症，前者导致全身感染，后者诱发多器官衰竭，均是上述疾病的主要死亡原因。近年来，大黄等中药治疗急性胰腺炎取得了明显临床效果〔1〕；有实验证实大黄对出血休克大鼠模型的肠粘膜屏障有保护作用，但大黄对烧伤的疗效及其作用机理报道甚少，故本实验旨在探讨大黄对烧伤模型小鼠治疗的疗效和机理。
1 材料和方法
26只Balb/c小鼠(18～22g)分成2组，烧伤组(即对照组)13只，烧伤+大黄组(即治疗组)13只。烧伤模型的制备：在5%水合氯醛腹腔麻醉下，将小鼠背部的毛剃光，每只小鼠用同样大小(3.5cm×5.5cm)的煤油纱布紧贴在剃光毛的小鼠背部皮肤上，其余部分用湿纱布保护，着火燃烧18秒钟，即制成烧伤面积达总体表面积的32%的烧伤模型〔2〕。烧伤后立即给20ml/kg无菌生理盐水腹腔注射复苏。治疗组给10%大黄汤剂0.3ml，每6小时管喂1次，共5次(其中烧伤前管喂第一次，余在烧伤后喂)，对照组与治疗组同时管喂等量生理盐水，24小时后处死小鼠，取全小肠称重、量长度，然后用2ml生理盐水灌洗小肠，分别收集小肠灌洗液，在常温下离心，取上清液，专人盲法，在HITACHI7170A型全自动生化分析仪上测定总蛋白度和球蛋白(G)等，并将小肠送病理学检查。统计分析：计量资料采用T检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 小鼠存活情况 对照组和治疗组分别有7只(7/13)和4只(4/13)小鼠在实验期间死亡。
2.2 球蛋白测定结果 治疗组小鼠灌洗液中，球蛋白的含量明显高于对照组，其均数分别为3.72g/L和1.57g/L，两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。
2.3 总蛋白测定结果 治疗组小肠灌洗液中总蛋白含量明显高于对照组，其均数分别为4.12g/L和2.13g/L，两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4 病理检查结果 对照组烧伤后24小时小肠粘膜结构明显异常，表现为小肠绒毛变短，有破损现象。而用了大黄的小鼠肠粘膜虽也有破损，但可见更多的完整的小肠绒毛存在，肠绒毛较对照组长。在粘膜内杯状细胞明显增生。在肠粘膜固有层中，有较多炎细胞浸润，其中浆细胞明显增多。
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2.5 两组间小肠的长度、重量之差异均无统计学意义(P>0.05)。
3 讨论
烧伤出现全身感染、多器官衰竭的主要原因是肠道细菌移位和肠毒素的吸入。有动物实验表明〔3〕，严重烧伤后3小时即可发现细菌移位到MLN，4小时和24小时MLNS细菌培养阳性率分别达42%和74%。目前认为肠道细菌易位的主要促发因素有三个方面：①肠粘膜屏障功能障碍，任何原因造成粘膜缺血、萎缩、破损、脱落均给细菌入侵以可乘之机。②肠道中微生态紊乱，细菌增生过长。③机体免疫功能受损。有学者〔4〕报告，烧伤小鼠小肠粘膜明显异常，出现肠绒毛变短、萎缩和破损，此发现与我们实验结果一致，此改变为细菌移位打开了门户，是烧伤状态下易出现肠道细菌移位的主要原因之一。在细菌移位过程中，可能激活某些介质，这些介质抑制免疫，而免疫受到抑制又是一个肠道细菌移位的主要原因。如果打断这一恶性循环，增强肠粘膜屏障功能，提高免疫力，就可以减少肠道细菌移位，减少多器官衰竭，从而减少其死亡率。我们选用了大黄治疗烧伤小鼠，结果发现治疗组小鼠存活率较对照组有所提高，其存活率分别为9/13(69.2%)和6/13(46.1%)，其原因可能有以下几个方面。
, 百拇医药
①大黄有减轻烧伤所致的肠粘膜损伤的作用。从病理检查结果提示，治疗组小肠绒毛较长，肠粘膜虽有破损，但可见更多的完整的肠绒毛，说明大黄有减轻烧伤所致的肠粘膜损伤的作用。
②大黄有促进肠粘液分泌的作用。治疗组肠粘膜内杯状细胞增生，小肠灌洗液中总蛋白较对照组明显增多，均数分别为4.12g/L和2.13g/L(P<0.05)，间接说明大黄有促进肠粘液分泌的作用。有学者〔5〕采用胆碱类药物来耗竭肠粘液分泌后，再给以大肠杆菌，结果细菌移位发生率明显增加，因此认为粘液是抵抗细菌入侵的最主要的物质之一。粘液维护着肠粘膜的完整性，通常粘液层只允许分子量小于17000道尔顿的物质通过，细菌和毒素就被滞留在肠腔内。另外，粘液阻止肠腔内毒素与上皮细胞接触，从而避免上皮细胞遭受损伤。大黄可通过促进粘液分泌，增强肠粘膜屏障功能，是其提高存活率的又一原因。
③大黄能促进肠道免疫球蛋白的分泌。治疗组小肠粘膜固有层内浆细胞增多，小肠灌洗液中球蛋白较对照组明显增多，均数分别为3.72g/L和1.57g/L(P<0.05)，而肠道中，球蛋白以sIgA为主，也就是说大黄有促进肠道sIgA分泌的作用，增加肠道局部免疫功能，减少肠道细菌移位，减少其死亡率。
, 百拇医药
总之，从本实验结果提示，严重烧伤可导致肠粘膜屏障损害，应用大黄的促粘液分泌作用，促肠道免疫球蛋白分泌作用以及减轻肠道形态学改变的作用，有利于恢复肠道的防御功能，减少肠道细菌移位，缓解多器官衰竭，最终降低烧伤的死亡率。当然，大黄的作用机理还有待进一步深入的研究。
4 参考文献
1 焦东海，沈学敏，景炳文：单味大黄治疗急性胰腺炎17年研究。中医杂志1994；35(3)：172。
2 Holder I.A, Jogan M.Enhanced Survival in burned mice treated with antiserum prepared against normal and burned skin.J.Trauma 1971；11∶1041～1046.
3 Mason AD,McManus AT,pruilt BA.Association of Burn Mortality and Bacteremia Arch surg 1986；121(9)∶1027.
, 百拇医药
4 Giandtil,Alexander J.W,Pyles Tetal.Arginine-Supplemented Diets improve Survival in gut-derived Sepsis and Peritonitis by Modulating Bacterial clearance Ann Surg 1993;217(6)∶644.
5 Albanese C.T,Cardona M,Smith S.D et al.Role of intestinal mucus in transle-pithelial passgae of bacteria across the intact ileum in vitro Surgery 1994;116∶76～82.
(收稿日期：1998-09-15)
(Received date：1998-09-15), 百拇医药