初治卵巢癌组织中的P-糖蛋白,GST-π，TopoⅡ表达及其临床意义
作者：梁 澍 孙京栋 王 琦 赵瑞霞
单位：青岛市肿瘤医院(青岛 266042)
关键词：卵巢肿瘤；P-糖蛋白；谷胱甘肽转移酶；拓扑异构酶；免疫组化
肿瘤990316 在卵巢癌的治疗中，化疗占有重要的地位。越来越多的卵巢癌产生耐药而严重妨碍了抗肿瘤药物效能的发挥。研究资料表明，肿瘤组织中P-糖蛋白(P-Glycoprotein,P-gp)，谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione-S-transferase-π，GST-π)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(DNA Topoisomerase Ⅱ，TopoⅡ)的表达与肿瘤耐药有关[1～3]。为了探讨它们在初治卵巢癌组织中的表达及与临床耐药的关系，作者采用免疫组化S-P法(Streptavidin-peroxidase, S-P法)对56例初治卵巢癌，8例卵巢腺瘤和5例正常卵巢组织中P-糖蛋白，GST-π，TopoⅡ表达进行检测，现将结果报告如下。
, http://www.100md.com
材料和方法
一、材料
56例初治卵巢癌，8例卵巢腺瘤及5例正常卵巢组织均为我院手术切除标本，术前均未进行化疗和放疗。所有标本经福尔马林固定，石蜡包埋。年龄10～71岁，平均46.12岁。56例初治卵巢癌中浆液性囊腺癌25例，粘液性囊腺癌22例，内膜样癌9例。组织学分级：1级10例，2级24例，3级22例。临床分期按照FIGO分期，Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期39例。另有卵巢腺瘤8例(5例粘液性囊腺瘤，3例浆液性囊腺瘤)及取自子宫肌瘤手术切除的正常卵巢组织5例。
二、方法
免疫组化染色采用S-P法。鼠抗人P-gp(ISB-1)，GST-π和TopoⅡ为美国Maxim公司产品，S-P试剂盒由福州迈新生物技术开发公司提拱。操作步骤严格按说明书进行，用TBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性的结肠癌组织作阳性对照。
, 百拇医药
三、结果判断
根据Volm[4]的判断标准将结果分为阴性(-)，弱阳性(+)和阳性(++)。为了便于统计，本文只分阴性(-)和阳性(+)。
四、数据处理
率的比较采用χ2检验。
结 果
一、正常卵巢组织及卵巢腺瘤免疫组化染色 P-糖蛋白，GST-π表达均为阴性，TopoⅡ表达均为阳性。
二、初治卵巢癌免疫组化染色 结果见附表。
附表 P-gp,GST-π，TopoⅡ在初治卵巢癌中的表达 组 别
, 百拇医药 例数
P-糖蛋白
GST-π
TopoⅡ
+ (%)
+ (%)
+ (%)
病理类型
浆液性囊腺癌
25
6(24.0)
17(68.0)
13(52.0)
, 百拇医药
粘液性囊腺癌
22
13(59.1)
16(72.7)
10(45.5)
内膜样癌
9
1(11.1)
5(55.5)
4(44.4)
组织学分级
1
10
, 百拇医药
3(30.3)
4(40.0)
3(30.0)
2
24
8(33.3)
17(70.8)
12(50.0)
3
22
9(40.1)
17(77.3)
12(54.5)
, 百拇医药
临床分期
早期(Ⅰ Ⅱ)
17
5(29.41)
8(47.1)
7(41.2)
晚期(Ⅲ Ⅳ)
39
15(38.46)
30(76.9)
20(51.3)
合 计
, 百拇医药 56
20(35.7)
38(67.8)
27(48.2)
1.P-糖蛋白 染棕色颗粒呈胞膜胞浆型。阳性表达20/56例(35.7%)，其中各病理类型之间阳性率差异极显著(P<0.001)。
2.GST-π 阳性棕黄色颗粒分布于胞浆，极少数伴胞核染色。阳性表达38/56例(67.8%)，阳性表达与病理类型无显著差异(P>0.05)。
3.TopoⅡ 阳性棕黄色颗粒分布于胞浆，阳性表达27/56例(48.2%)，阳性表达与卵巢癌病理类型无显著差异(P>0.05)。
4.P-糖蛋白、GST-π、TopoⅡ在初治卵巢癌的表达中与组织学分级和临床分期无显著性差异(P>0.05)。讨 论
, 百拇医药
多药耐受(Multidrug resistence,MDR)是肿瘤化疗中的重要障碍。主要表现在(1)多药耐药基因MDR，及其编码的糖蛋白(p170)的过度表达；(2)谷胱甘肽s-转移酶活性的改变；(3)DNA拓扑异构酶含量及活性改变；(4)DNA损伤后修复能力的增强[4]。
P-糖蛋白位于细胞膜上，能将细胞内一些化疗药物“泵”出细胞外，造成细胞内药物浓度下降，从而使肿瘤耐药。因而P-糖蛋白是细胞耐药的分子基础，其表达水平与耐药程度成正比[5]。本研究显示在正常卵巢及卵巢良性肿瘤中无P-糖蛋白表达，因而卵巢是非P-糖蛋白富集器官，这与有关报道相符[6]。本研究中粘液性癌P-糖蛋白表达明显高于其他两类癌，这与粘液性癌临床化疗效果差，易复发的表现相符。
谷胱甘肽S转移酶是一种催化谷胱甘肽和各种亲电子化合物包括细胞毒性制剂结合的多功能酶系[7]。作为同工酶的GST是通过催化方式降解药物来减弱化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，造成癌细胞耐药。本研究其阳性表达67.8%说明GST-π是导致肿瘤耐药的重要催化剂，也是导致化疗失败的重要原因之一。
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DNA拓扑异构酶Ⅱ是真核细胞生存所必不可少的核酶，它的作用涉及到核酸代谢的许多方面[3]。TopoⅡ是通过催化DNA螺旋局部构型改变，降低ATP与酶结合的能力；通过影响染色体分离，基因重组和转录及DNA损伤与修复在核内发挥作用[8]。许多抗癌药物特别是TopoⅡ抑制剂常以独特方式改变TopoⅡ功能或活性，使DNA断裂增加而发挥抗癌效应。肿瘤细胞内TopoⅡ水平直接影响TopoⅡ抑制剂抗肿瘤的活性，肿瘤细胞内TopoⅡ表达水平下降，使肿瘤对抗癌药物的敏感性下降，使肿瘤细胞耐药性增高[9]。本研究表明在正常卵巢及卵巢腺瘤中均为阳性表达的TopoⅡ在初治卵巢癌中仅为44%～52%。因此，TopoⅡ活性的下降是肿瘤耐药的重要机制之一。
Vilm等认为抗肿瘤药物产生耐药机制除了MDR基因或其产物P-糖蛋白高表达外，还包括GST-π升高和TopoⅡ水平的降低[4]。本研究结果类同。本研究又提示，尽管P-gp,GST-π，TopoⅡ在初治卵巢癌中表达关系间没有明显相关性，但各自的表达说明它们对肿瘤耐药从不同方面起作用。因此在初治卵巢癌的化疗药物选择时，通过联合检测P-gp.GST-π，TopoⅡ的表达是有指导意义的，对预后的判断有重要参考价值。
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第一作者简介 梁 澍，男，大学本科，副主任医师。
参 考 文 献
1 Kodama J,Hayase R,Yoshinouchi M,et al.Immunohistochemical analysis of P-glycoprotein expression in diverse histological types of epithelial ovarian tumors.Acta Med Okayama,1994,48:249
2 Hamads SI,Kamada M.Expression of glutathione S-transferase-π human ovarian cancer——an indicator of resistance to chemotherapy.Gynecol Oncol,1994,52:313
, 百拇医药
3 王龙贵，刘晓梅，籍秀娟.肿瘤化疗的重要靶点——DNA拓扑异构酶.国外医学肿瘤学分册，1990，4：193
4 Volm M,Kastel M,Mattern J,et al.Expression of resistance factors (P-glycoprotein,glutathione S-transferase-π,and topoisomerase Ⅱ)and their interrelationship to proto-oncogene products in renal cell carcinomas.Cancer,1993,71(12):3981
5 Chen CJ,Chin JE,Ueda K,et al.Internal duplication and homology with bacterial transport in the MDR(P-glycoprotein)gene form multidrug-resistant human cells.Cell,1986,47:381
, 百拇医药
6 Holzmayer TA,Hilsenbeck S,Hoff DD.et al.Clinical correlate of MDR(P-glycoprotein)gene expression in ovarian and small-cell lung carcinoma .J Natl Cancer Inst,1992,84:1468
7 Jakoby WB.The glutathione S-transferase: a group of multifunctional proteins.Adv Enzymol,1978,46:383
8 Wang JC.Recent studies of DNA topoisomerases.Biochem Biophys Acta,1987,909:1
9 张文卿.拓扑异构酶Ⅱ和肿瘤多药耐药.中国肿瘤临床，1996，23(3)：208
(收稿：1998-09-07), 百拇医药
单位：青岛市肿瘤医院(青岛 266042)
关键词：卵巢肿瘤；P-糖蛋白；谷胱甘肽转移酶；拓扑异构酶；免疫组化
肿瘤990316 在卵巢癌的治疗中，化疗占有重要的地位。越来越多的卵巢癌产生耐药而严重妨碍了抗肿瘤药物效能的发挥。研究资料表明，肿瘤组织中P-糖蛋白(P-Glycoprotein,P-gp)，谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione-S-transferase-π，GST-π)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(DNA Topoisomerase Ⅱ，TopoⅡ)的表达与肿瘤耐药有关[1～3]。为了探讨它们在初治卵巢癌组织中的表达及与临床耐药的关系，作者采用免疫组化S-P法(Streptavidin-peroxidase, S-P法)对56例初治卵巢癌，8例卵巢腺瘤和5例正常卵巢组织中P-糖蛋白，GST-π，TopoⅡ表达进行检测，现将结果报告如下。
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材料和方法
一、材料
56例初治卵巢癌，8例卵巢腺瘤及5例正常卵巢组织均为我院手术切除标本，术前均未进行化疗和放疗。所有标本经福尔马林固定，石蜡包埋。年龄10～71岁，平均46.12岁。56例初治卵巢癌中浆液性囊腺癌25例，粘液性囊腺癌22例，内膜样癌9例。组织学分级：1级10例，2级24例，3级22例。临床分期按照FIGO分期，Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期39例。另有卵巢腺瘤8例(5例粘液性囊腺瘤，3例浆液性囊腺瘤)及取自子宫肌瘤手术切除的正常卵巢组织5例。
二、方法
免疫组化染色采用S-P法。鼠抗人P-gp(ISB-1)，GST-π和TopoⅡ为美国Maxim公司产品，S-P试剂盒由福州迈新生物技术开发公司提拱。操作步骤严格按说明书进行，用TBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性的结肠癌组织作阳性对照。
, 百拇医药
三、结果判断
根据Volm[4]的判断标准将结果分为阴性(-)，弱阳性(+)和阳性(++)。为了便于统计，本文只分阴性(-)和阳性(+)。
四、数据处理
率的比较采用χ2检验。
结 果
一、正常卵巢组织及卵巢腺瘤免疫组化染色 P-糖蛋白，GST-π表达均为阴性，TopoⅡ表达均为阳性。
二、初治卵巢癌免疫组化染色 结果见附表。
附表 P-gp,GST-π，TopoⅡ在初治卵巢癌中的表达 组 别
, 百拇医药 例数
P-糖蛋白
GST-π
TopoⅡ
+ (%)
+ (%)
+ (%)
病理类型
浆液性囊腺癌
25
6(24.0)
17(68.0)
13(52.0)
, 百拇医药
粘液性囊腺癌
22
13(59.1)
16(72.7)
10(45.5)
内膜样癌
9
1(11.1)
5(55.5)
4(44.4)
组织学分级
1
10
, 百拇医药
3(30.3)
4(40.0)
3(30.0)
2
24
8(33.3)
17(70.8)
12(50.0)
3
22
9(40.1)
17(77.3)
12(54.5)
, 百拇医药
临床分期
早期(Ⅰ Ⅱ)
17
5(29.41)
8(47.1)
7(41.2)
晚期(Ⅲ Ⅳ)
39
15(38.46)
30(76.9)
20(51.3)
合 计
, 百拇医药 56
20(35.7)
38(67.8)
27(48.2)
1.P-糖蛋白 染棕色颗粒呈胞膜胞浆型。阳性表达20/56例(35.7%)，其中各病理类型之间阳性率差异极显著(P<0.001)。
2.GST-π 阳性棕黄色颗粒分布于胞浆，极少数伴胞核染色。阳性表达38/56例(67.8%)，阳性表达与病理类型无显著差异(P>0.05)。
3.TopoⅡ 阳性棕黄色颗粒分布于胞浆，阳性表达27/56例(48.2%)，阳性表达与卵巢癌病理类型无显著差异(P>0.05)。
4.P-糖蛋白、GST-π、TopoⅡ在初治卵巢癌的表达中与组织学分级和临床分期无显著性差异(P>0.05)。讨 论
, 百拇医药
多药耐受(Multidrug resistence,MDR)是肿瘤化疗中的重要障碍。主要表现在(1)多药耐药基因MDR，及其编码的糖蛋白(p170)的过度表达；(2)谷胱甘肽s-转移酶活性的改变；(3)DNA拓扑异构酶含量及活性改变；(4)DNA损伤后修复能力的增强[4]。
P-糖蛋白位于细胞膜上，能将细胞内一些化疗药物“泵”出细胞外，造成细胞内药物浓度下降，从而使肿瘤耐药。因而P-糖蛋白是细胞耐药的分子基础，其表达水平与耐药程度成正比[5]。本研究显示在正常卵巢及卵巢良性肿瘤中无P-糖蛋白表达，因而卵巢是非P-糖蛋白富集器官，这与有关报道相符[6]。本研究中粘液性癌P-糖蛋白表达明显高于其他两类癌，这与粘液性癌临床化疗效果差，易复发的表现相符。
谷胱甘肽S转移酶是一种催化谷胱甘肽和各种亲电子化合物包括细胞毒性制剂结合的多功能酶系[7]。作为同工酶的GST是通过催化方式降解药物来减弱化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，造成癌细胞耐药。本研究其阳性表达67.8%说明GST-π是导致肿瘤耐药的重要催化剂，也是导致化疗失败的重要原因之一。
, http://www.100md.com
DNA拓扑异构酶Ⅱ是真核细胞生存所必不可少的核酶，它的作用涉及到核酸代谢的许多方面[3]。TopoⅡ是通过催化DNA螺旋局部构型改变，降低ATP与酶结合的能力；通过影响染色体分离，基因重组和转录及DNA损伤与修复在核内发挥作用[8]。许多抗癌药物特别是TopoⅡ抑制剂常以独特方式改变TopoⅡ功能或活性，使DNA断裂增加而发挥抗癌效应。肿瘤细胞内TopoⅡ水平直接影响TopoⅡ抑制剂抗肿瘤的活性，肿瘤细胞内TopoⅡ表达水平下降，使肿瘤对抗癌药物的敏感性下降，使肿瘤细胞耐药性增高[9]。本研究表明在正常卵巢及卵巢腺瘤中均为阳性表达的TopoⅡ在初治卵巢癌中仅为44%～52%。因此，TopoⅡ活性的下降是肿瘤耐药的重要机制之一。
Vilm等认为抗肿瘤药物产生耐药机制除了MDR基因或其产物P-糖蛋白高表达外，还包括GST-π升高和TopoⅡ水平的降低[4]。本研究结果类同。本研究又提示，尽管P-gp,GST-π，TopoⅡ在初治卵巢癌中表达关系间没有明显相关性，但各自的表达说明它们对肿瘤耐药从不同方面起作用。因此在初治卵巢癌的化疗药物选择时，通过联合检测P-gp.GST-π，TopoⅡ的表达是有指导意义的，对预后的判断有重要参考价值。
, http://www.100md.com
第一作者简介 梁 澍，男，大学本科，副主任医师。
参 考 文 献
1 Kodama J,Hayase R,Yoshinouchi M,et al.Immunohistochemical analysis of P-glycoprotein expression in diverse histological types of epithelial ovarian tumors.Acta Med Okayama,1994,48:249
2 Hamads SI,Kamada M.Expression of glutathione S-transferase-π human ovarian cancer——an indicator of resistance to chemotherapy.Gynecol Oncol,1994,52:313
, 百拇医药
3 王龙贵，刘晓梅，籍秀娟.肿瘤化疗的重要靶点——DNA拓扑异构酶.国外医学肿瘤学分册，1990，4：193
4 Volm M,Kastel M,Mattern J,et al.Expression of resistance factors (P-glycoprotein,glutathione S-transferase-π,and topoisomerase Ⅱ)and their interrelationship to proto-oncogene products in renal cell carcinomas.Cancer,1993,71(12):3981
5 Chen CJ,Chin JE,Ueda K,et al.Internal duplication and homology with bacterial transport in the MDR(P-glycoprotein)gene form multidrug-resistant human cells.Cell,1986,47:381
, 百拇医药
6 Holzmayer TA,Hilsenbeck S,Hoff DD.et al.Clinical correlate of MDR(P-glycoprotein)gene expression in ovarian and small-cell lung carcinoma .J Natl Cancer Inst,1992,84:1468
7 Jakoby WB.The glutathione S-transferase: a group of multifunctional proteins.Adv Enzymol,1978,46:383
8 Wang JC.Recent studies of DNA topoisomerases.Biochem Biophys Acta,1987,909:1
9 张文卿.拓扑异构酶Ⅱ和肿瘤多药耐药.中国肿瘤临床，1996，23(3)：208
(收稿：1998-09-07), 百拇医药