红细胞钠-锂逆向转运活性与糖尿病肾病早期预测*
作者：杨涛 陈家伟 赵人琤 戴建国
单位：杨 涛 陈家伟 (南京医科大学附属第一医院内分泌科 南京，210029)；赵人琤 戴建国 (南京医科大学应用毒理研究所)
关键词：糖尿病肾病；红细胞钠-锂逆向转运；尿白蛋白肌酐比值
肾脏病与透析肾移植杂志990314
糖尿病肾病(DN)起病隐匿，早期诊断困难，尿微量白蛋白的检测使DN诊断提早到Ⅲ期，但更早诊断尚缺乏公认敏感指标。近年有许多备选指标在研究中，其中红细胞钠-锂逆向转运(SLC)活性为原发性高血压遗传易感指标[1]，由于有高血压或高血压家族史的糖尿病患者更易发生DN，故推测SLC为DN的遗传易感指标[2，3]。本研究采用Zerbini[4]最新提出的600 Osmmol/L高渗法测定SLC活性，旨在探讨SLC在糖尿病肾脏并发症早期预测中的价值。
, http://www.100md.com
1 对象和方法
糖尿病组85例(男41例，女44例)，年龄58.1±9.6岁，留取尿常规排除尿路感染。原发性高血压组26例(男14例，女12例)，年龄58.8±8.1岁，除外糖尿病、肾小球肾炎及继发性高血压。健康对照组24例(男13例，女11例)，年龄59.4±10.6岁，为排除糖尿病、高血压、高脂血症及糖尿病和(或)高血压阳性家族史的健康自愿者。
患者空腹采静脉血，送检FPG、Cr、TG、CHOL、HbA1c及SLC。收集24h尿液，送检尿微量白蛋白，尿肌酐。尿微量白蛋白用放射免疫法；HbA1c用亲和柱层析法；尿肌酐用苦味酸法。平均血压(MBP)为三分之一脉压差与舒张压之和。
SLC活性测定在参考Canessa法基础上[5]，采用Zerbini[4]改良的600 Osmmol/L高渗法。锂浓度测定采用日本岛津AA-6501F原子吸收分光光度仪发射光谱法。SLC计算公式如下：Lie＝(Li60-Li0)×[7+(1-Hto)×0.7]/(1000×Hto×0.7)，SLC＝Lie钠-Lie胆碱。Hto为Li+外流测定前红细胞悬液比容；Li60和Li0为60min和0min时Li外流量，单位为mmol/L；Lie为每小时Li流出量，单位为mmol/(L红细胞.h)。
, http://www.100md.com
采用t检验，方差分析，多元线性逐步回归分析作统计学处理。
2 结果
正常对照组、高血压组和糖尿病组共计135例，性别、年龄、体重指数(BMI)无显著性差异。各组SLC平均值(单位mmol/L红细胞.h-1)分别为：正常对照组0.2885±0.0987，高血压组0.4467±0.1994，糖尿病组0.4159±0.1624。高血压组(P<0.001)、糖尿病组(P<0.001)SLC值显著高于正常对照组，高血压组和糖尿病组之间差异不显著。
糖尿病组平均病程6.4±5.8年，按尿白蛋白肌酐比值(ACR)分为三个亚组：正常白蛋白尿组(<2.5 mg/mmol)，微量白蛋白尿组(2.5～25 mg/mmol)，大量白蛋白尿组(>25mg/mmol)。三组性别、年龄、体重指数差异不显著。微量白蛋白尿组(P<0.01)和大量白蛋白尿组(P<0.005)SLC值明显高于正常白蛋白尿组，见表1，但三组SLC值有较多重叠，见附图。三组平均血压依次增高，肌酐清除率(Ccr)依次下降，差异均显著；三组血TG、CHOL、HbA1c、高血压和(或)糖尿病家族史阳性率差异不显著。
, http://www.100md.com
附图 正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组SLC值分布特点
表1 三组有关指标比较(
±s)
正常白蛋白尿组
微量白蛋白尿组
大量白蛋白尿组
例数
38
26
21
病程(年)
4.9±4.7
, 百拇医药
6.5±5.7
9.1±6.7
MBP(kPa)
13.06±1.73
14.77±2.00
15.20±1.66
CHOL(mmol/L)
5.11±1.37
5.85±1.53
5.84±1.65
TG(mmol/L)
1.51±0.68
, http://www.100md.com
1.83±0.99
2.04±0.94
HbA1c(%)
8.5±2.1
9.2±1.7
8.6±1.5
Ccr
(ml/min.1.73m2)
97.98±15.71
84.28±18.84
61.54±22.13
, http://www.100md.com
SLC
0.3479±0.1617
0.4589±0.1517**
0.4858±0.1319***
(mmol/L红细胞.h-1)
与正常白蛋白尿组比较**P<0.01，***P<0.005
对尿ACR升高的可能危险因素进行逐步多元回归分析，见表2。显示病程、MBP、TG、SLC为尿ACR升高的独立危险因素，以此建立的回归方程r2＝0.385，P＝0.000(选概率临界值为0.10)，年龄、性别、BMI、高血压和(或)糖尿病家族史、HbA1c、CHOL均在0.15水平以上被剔出方程。
, http://www.100md.com
表2 尿ACR△升高危险因素的多元线性逐步回归分析 自变量
B
SE B
Beta
P
病程△
0.334
0.158
0.194
0.038
MBP△
3.422
, 百拇医药
1.284
0.263
0.009
TG△
0.635
0.369
0.159
0.089
SLC
3.789
1.076
0.333
0.001
, http://www.100md.com
截距
-9.779
3.206
0.003
△为取自然对数
3 讨 论
高血压患者有较高的SLC活性，且高血压患者后代虽血压正常，但仍有较高的SLC活性[1]。Mangili[2]和Krolewski[3]发现糖尿病肾病患者较无肾病患者有较高的SCL活性，以后研究证实微量白蛋白尿DM患者平均SLC活性较正常白蛋白尿DM患者高，但也有研究得出了相反的结论。产生矛盾结果的原因主要是测定方法的差异[1]。
, 百拇医药 SLC以红细胞钠依赖的锂外流量的最大转运速率(υmax)表示，研究者多采用Canessa法[5]。但在外流液选择(氯化胆碱、KCl或MgCl2)、制霉菌素(用以缩短Li+饱和红细胞的时间)是否使用、饱和时间长短等具体方法上有所不同。Zerbini[4]发现，以往普遍采用的方法中Na+外流液浓度为150 mmol/L(渗透压约280 Osmmol/L)，不能使转运位点完全饱和，不满足Michaelis-Menten方程，故所测SLC值不是υmax，提出改进的600 Osmmol/L高渗法，将Na+外流液浓度提高至280 mmol/L，以使胞外钠位点完全饱和，测到实际υmax。故本试验采用Zerbini改良的高渗法。
本研究结果显示，高血压组和糖尿病组SLC活性明显高于正常对照组，与大多数文献报道一致。最早Canessa[5]将SLC活性正常上限定为0.4 mmol/(L红细胞.h)，但对正常人大规模研究显示，SLC在正常人群呈双峰分布特点[6]，72%的人在前峰，平均值为0.24 mmol/(L红细胞.h)，28%的人在后峰，平均值为0.42 mmol/(L红细胞.h)。本试验正常对照组例数少，无法提供有关分布特点。本试验微量、大量白蛋白尿患者比正常白蛋白尿患者确实有较高的SLC值，但从分布特点来看，有较多重叠，说明SLC提示的是一种易感倾向，目前尚不能确定一个明确的界值用于诊断。对ACR增高的各种可能危险因素进行逐步多元回归分析显示，SLC、病程、平均血压、甘油三酯为独立危险因素。提示SLC增高是糖尿病肾脏并发症发生的主要危险因素之一，同时也说明控制血压和血脂水平对肾脏并发症的防治有重要意义。钠-锂转运体在分子和基因水平及其生理功能仍不清楚，所以对其研究尚需更加深入。
, http://www.100md.com
*本课题是“九五”国家科技攻关计划(医药卫生)“糖尿病肾脏病变早期发现及防治研究”项目之一
参考文献
1 Hardman TC，Lant AF.Controversies surrounding erythrocyte sodium-lithium countertransport.J Hypertension，1996，14：695
2 Mangili R，Bending JJ，Soctt G et al.Increased sodium-lithium countertransport activity in red cells of patients with insulin-dependent diabetes and nephropathy.N Engl J Med，1988，318：146
3 Krolewski AS，Canessa M，Warram JH et al.Predisposition to hypertension and susceptibility to renal disease in insulin dependent diabetes mellitus.N Engl J Med，1988，318：140
, 百拇医药
4 Zerbini G，Ceolotto G，Gaboury C et al.Sodium-lithium countertransport has low affinity for sodium in hyperinsulinemic hypertensive subjects.Hypertension，1995，25：986
5 Canessa M.Kinetic properties of Na+/Li+ exchange and Li+/Na+，Na+/Na+，and Na+/Li+ exchange of human red cells.Methods Enzymol，1989，173：176
6 Tumer ST，Weidman WH，Michels VV et al.Distribution of Sodium-lithium countertransport and blood pressure in caucasians five to eighty-nine years of age.Hypertension，1989，13：378
(1998-12-29收稿，1999-02-03修回), http://www.100md.com
单位：杨 涛 陈家伟 (南京医科大学附属第一医院内分泌科 南京，210029)；赵人琤 戴建国 (南京医科大学应用毒理研究所)
关键词：糖尿病肾病；红细胞钠-锂逆向转运；尿白蛋白肌酐比值
肾脏病与透析肾移植杂志990314
糖尿病肾病(DN)起病隐匿，早期诊断困难，尿微量白蛋白的检测使DN诊断提早到Ⅲ期，但更早诊断尚缺乏公认敏感指标。近年有许多备选指标在研究中，其中红细胞钠-锂逆向转运(SLC)活性为原发性高血压遗传易感指标[1]，由于有高血压或高血压家族史的糖尿病患者更易发生DN，故推测SLC为DN的遗传易感指标[2，3]。本研究采用Zerbini[4]最新提出的600 Osmmol/L高渗法测定SLC活性，旨在探讨SLC在糖尿病肾脏并发症早期预测中的价值。
, http://www.100md.com
1 对象和方法
糖尿病组85例(男41例，女44例)，年龄58.1±9.6岁，留取尿常规排除尿路感染。原发性高血压组26例(男14例，女12例)，年龄58.8±8.1岁，除外糖尿病、肾小球肾炎及继发性高血压。健康对照组24例(男13例，女11例)，年龄59.4±10.6岁，为排除糖尿病、高血压、高脂血症及糖尿病和(或)高血压阳性家族史的健康自愿者。
患者空腹采静脉血，送检FPG、Cr、TG、CHOL、HbA1c及SLC。收集24h尿液，送检尿微量白蛋白，尿肌酐。尿微量白蛋白用放射免疫法；HbA1c用亲和柱层析法；尿肌酐用苦味酸法。平均血压(MBP)为三分之一脉压差与舒张压之和。
SLC活性测定在参考Canessa法基础上[5]，采用Zerbini[4]改良的600 Osmmol/L高渗法。锂浓度测定采用日本岛津AA-6501F原子吸收分光光度仪发射光谱法。SLC计算公式如下：Lie＝(Li60-Li0)×[7+(1-Hto)×0.7]/(1000×Hto×0.7)，SLC＝Lie钠-Lie胆碱。Hto为Li+外流测定前红细胞悬液比容；Li60和Li0为60min和0min时Li外流量，单位为mmol/L；Lie为每小时Li流出量，单位为mmol/(L红细胞.h)。
, http://www.100md.com
采用t检验，方差分析，多元线性逐步回归分析作统计学处理。
2 结果
正常对照组、高血压组和糖尿病组共计135例，性别、年龄、体重指数(BMI)无显著性差异。各组SLC平均值(单位mmol/L红细胞.h-1)分别为：正常对照组0.2885±0.0987，高血压组0.4467±0.1994，糖尿病组0.4159±0.1624。高血压组(P<0.001)、糖尿病组(P<0.001)SLC值显著高于正常对照组，高血压组和糖尿病组之间差异不显著。
糖尿病组平均病程6.4±5.8年，按尿白蛋白肌酐比值(ACR)分为三个亚组：正常白蛋白尿组(<2.5 mg/mmol)，微量白蛋白尿组(2.5～25 mg/mmol)，大量白蛋白尿组(>25mg/mmol)。三组性别、年龄、体重指数差异不显著。微量白蛋白尿组(P<0.01)和大量白蛋白尿组(P<0.005)SLC值明显高于正常白蛋白尿组，见表1，但三组SLC值有较多重叠，见附图。三组平均血压依次增高，肌酐清除率(Ccr)依次下降，差异均显著；三组血TG、CHOL、HbA1c、高血压和(或)糖尿病家族史阳性率差异不显著。
, http://www.100md.com
附图 正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组SLC值分布特点
表1 三组有关指标比较(
±s)正常白蛋白尿组
微量白蛋白尿组
大量白蛋白尿组
例数
38
26
21
病程(年)
4.9±4.7
, 百拇医药
6.5±5.7
9.1±6.7
MBP(kPa)
13.06±1.73
14.77±2.00
15.20±1.66
CHOL(mmol/L)
5.11±1.37
5.85±1.53
5.84±1.65
TG(mmol/L)
1.51±0.68
, http://www.100md.com
1.83±0.99
2.04±0.94
HbA1c(%)
8.5±2.1
9.2±1.7
8.6±1.5
Ccr
(ml/min.1.73m2)
97.98±15.71
84.28±18.84
61.54±22.13
, http://www.100md.com
SLC
0.3479±0.1617
0.4589±0.1517**
0.4858±0.1319***
(mmol/L红细胞.h-1)
与正常白蛋白尿组比较**P<0.01，***P<0.005
对尿ACR升高的可能危险因素进行逐步多元回归分析，见表2。显示病程、MBP、TG、SLC为尿ACR升高的独立危险因素，以此建立的回归方程r2＝0.385，P＝0.000(选概率临界值为0.10)，年龄、性别、BMI、高血压和(或)糖尿病家族史、HbA1c、CHOL均在0.15水平以上被剔出方程。
, http://www.100md.com
表2 尿ACR△升高危险因素的多元线性逐步回归分析 自变量
B
SE B
Beta
P
病程△
0.334
0.158
0.194
0.038
MBP△
3.422
, 百拇医药
1.284
0.263
0.009
TG△
0.635
0.369
0.159
0.089
SLC
3.789
1.076
0.333
0.001
, http://www.100md.com
截距
-9.779
3.206
0.003
△为取自然对数
3 讨 论
高血压患者有较高的SLC活性，且高血压患者后代虽血压正常，但仍有较高的SLC活性[1]。Mangili[2]和Krolewski[3]发现糖尿病肾病患者较无肾病患者有较高的SCL活性，以后研究证实微量白蛋白尿DM患者平均SLC活性较正常白蛋白尿DM患者高，但也有研究得出了相反的结论。产生矛盾结果的原因主要是测定方法的差异[1]。
, 百拇医药 SLC以红细胞钠依赖的锂外流量的最大转运速率(υmax)表示，研究者多采用Canessa法[5]。但在外流液选择(氯化胆碱、KCl或MgCl2)、制霉菌素(用以缩短Li+饱和红细胞的时间)是否使用、饱和时间长短等具体方法上有所不同。Zerbini[4]发现，以往普遍采用的方法中Na+外流液浓度为150 mmol/L(渗透压约280 Osmmol/L)，不能使转运位点完全饱和，不满足Michaelis-Menten方程，故所测SLC值不是υmax，提出改进的600 Osmmol/L高渗法，将Na+外流液浓度提高至280 mmol/L，以使胞外钠位点完全饱和，测到实际υmax。故本试验采用Zerbini改良的高渗法。
本研究结果显示，高血压组和糖尿病组SLC活性明显高于正常对照组，与大多数文献报道一致。最早Canessa[5]将SLC活性正常上限定为0.4 mmol/(L红细胞.h)，但对正常人大规模研究显示，SLC在正常人群呈双峰分布特点[6]，72%的人在前峰，平均值为0.24 mmol/(L红细胞.h)，28%的人在后峰，平均值为0.42 mmol/(L红细胞.h)。本试验正常对照组例数少，无法提供有关分布特点。本试验微量、大量白蛋白尿患者比正常白蛋白尿患者确实有较高的SLC值，但从分布特点来看，有较多重叠，说明SLC提示的是一种易感倾向，目前尚不能确定一个明确的界值用于诊断。对ACR增高的各种可能危险因素进行逐步多元回归分析显示，SLC、病程、平均血压、甘油三酯为独立危险因素。提示SLC增高是糖尿病肾脏并发症发生的主要危险因素之一，同时也说明控制血压和血脂水平对肾脏并发症的防治有重要意义。钠-锂转运体在分子和基因水平及其生理功能仍不清楚，所以对其研究尚需更加深入。
, http://www.100md.com
*本课题是“九五”国家科技攻关计划(医药卫生)“糖尿病肾脏病变早期发现及防治研究”项目之一
参考文献
1 Hardman TC，Lant AF.Controversies surrounding erythrocyte sodium-lithium countertransport.J Hypertension，1996，14：695
2 Mangili R，Bending JJ，Soctt G et al.Increased sodium-lithium countertransport activity in red cells of patients with insulin-dependent diabetes and nephropathy.N Engl J Med，1988，318：146
3 Krolewski AS，Canessa M，Warram JH et al.Predisposition to hypertension and susceptibility to renal disease in insulin dependent diabetes mellitus.N Engl J Med，1988，318：140
, 百拇医药
4 Zerbini G，Ceolotto G，Gaboury C et al.Sodium-lithium countertransport has low affinity for sodium in hyperinsulinemic hypertensive subjects.Hypertension，1995，25：986
5 Canessa M.Kinetic properties of Na+/Li+ exchange and Li+/Na+，Na+/Na+，and Na+/Li+ exchange of human red cells.Methods Enzymol，1989，173：176
6 Tumer ST，Weidman WH，Michels VV et al.Distribution of Sodium-lithium countertransport and blood pressure in caucasians five to eighty-nine years of age.Hypertension，1989，13：378
(1998-12-29收稿，1999-02-03修回), http://www.100md.com