冠心病患者血管紧张素转换酶基因插入／缺失多态性分析
作者：贾永平 杨 笛 杨志健 耿 苗 朱铁兵 张寄南 马文珠
单位：南京医科大学第一附属医院心脏科 邮政编码：210029
关键词：冠心病 基因多态性 血管紧张素转换酶
江苏医药990405 摘要 运用PCR技术检测104例心肌梗塞(MI)、83例心绞痛患者，对照104例正常人、56例冠状动脉造影阴性者的血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失多态性，并分组比较该基因多态性与冠状动脉病变的关系。结果显示ACE缺失等位基因频率与MI发病、冠脉病变程度及病变支数无明显关系(P>0.05)，尚不能确定ACE缺失多态性是我国人群冠心病的危险因素。
血管紧张素转换酶(ACE)是肾素-血管紧张素系统(RAS)的重要组成部分，随着对ACE的深入研究，发现ACE基因16内含子有一个287bp的插入/缺失(I/D)多态性，国内外学者对该多态性与冠心病(CHD)的关系研究较多，但结果不尽相同[1～5]。本研究旨在探讨苏皖地区人群中ACE基因多态性与CHD的关系。
, 百拇医药
资料与方法
一、研究对象：
1.CHD组：(1)心肌梗塞(MI)组104例，男90例，女14例，为我院心脏科确诊的急性MI后存活的病人(符合1978年WHO的MI诊断标准)。(2)心绞痛组83例，男74例，女9例，为1997年3月至1998年5月在我院行冠状动脉造影(CAG)病人，临床有心绞痛症状，造影证实至少有一支主要冠状动脉狭窄≥75%。
2.对照组：(1)正常对照组104例，男84例，女20例，为本院同期进行健康体检者，经病史询问、体格检查和心电图检查排除心血管疾病者。(2)CAG阴性者56例，男39例，女17例，与心绞痛组同期行CAG，主要冠状动脉无明显病变。
二、方法：
1.人基因组DNA的提取：肘静脉血5ml，EDTA抗凝，离心10分，分离上层血浆冻存于-25℃供脂质测定，下层白细胞供基因型分析。用酚-氯仿法提取白细胞基因组DNA。
, 百拇医药
2.ACE基因I/D多态性检测：目的片段扩增参照Rigat BK的方法[6]设计一对引物，上游引物5’-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3’，下游引物5’-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T-3’。Taq酶购自华美生物工程公司。PCR程序：94℃，1min；58℃，1min；72℃，1min30sec，循环36次，运用PE480DNA合成仪扩增。PCR产物经2%琼脂糖电泳，EB染色，紫外灯下观察并拍照分析。
3.统计学分析：组间均数值比较运用t检验，组间频数比较采用χ2检验。
结果
一、ACE基因I/D多态性：
位于ACE基因第16内含子的缺失/插入多态性经PCR扩增可产生两种长度的片段，即490bp的插入片段(Ⅰ)和190bp的缺失片段(D)，紫外灯下可呈现三种条带：II型(仅有490bp带型)，DD型(仅有190bp带型)，ID型(含有490bp和190bp两种带型)。
, 百拇医药
二、各项临床资料的比较：
1.MI组与正常对照组的比较：显示MI组收缩压(SBP)，胆固醇(TC)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，载脂蛋白B((ApoB)较对照组高，而载脂蛋白A(ApoA)较对照组低，其他指标则两组间无显著差异，见表1。
表1 MI组与正常对照组临床资料比较(
±s)
MI组
(n＝104)
对照组
(n＝104)
, 百拇医药
P值
BMI(kg/m2)
24.3±5.0
23.3±3.3
>0.05
SBP(kPa)
19.7±4.8
17.6±2.6
<0.05
DBP(kPa)
10.9±1.4
10.7±1.1
, 百拇医药
>0.05
TC(mmol/L)
5.38±1.09
4.84±0.93
<0.01
TG(mmol/L)
1.77±0.94
1.69±0.96
>0.05
HDL-C(mmol/L)
1.18±0.32
1.20±0.24
, 百拇医药
>0.05
LDL-C(mmol/L)
3.37±1.05
2.87±0.96
<0.01
ApoA(g/L)
1.13±0.28
1.45±0.36
<0.01
ApoB(g/L)
1.35±0.28
1.03±0.24
, 百拇医药
<0.01
LP(a)(mg/L)
217.5±2.7
225.1±2.5
>0.05
2.心绞痛组与CAG阴性组比较：83例心绞痛患者与56例CAG阴性者上述各项临床指标比较均无统计学意义(P>0.05)。
三、基因型分析：
1.MI组ID型基因比正常组显著增高，而正常组DD型基因频率比MI组显著增高(P<0.05)，D等位基因频率在两组间无显著差异(P>0.05)，见表2。表2 MI组与正常对照组ACE基因型与等位基因的频率 组别
, 百拇医药 例数
ACE基因型(%)
等位基因
II
ID
DD
I
D
正常组
104
19(18.3)
39(37.5)
46(44.2)
, 百拇医药
0.375
0.625
MI组
104
24(23.1)
55(52.9)*
25(24.0)*
0.500
0.500**
与正常组比*P<0.05 **P>0.05
2.心绞痛组与CAG阴性组ACE基因分布比较，两组间D等位基因频率及DD型基因频率均无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
3.根据CAG结果，将冠脉病变分为单支病变，多支病变(冠脉主要分支2支以上有≥75%狭窄)，两组间D等位基因频率无统计学意义(P>0.05)，见表3。表3 单支病变组与多支病变组ACE基因分布 组别
例
数
ACE基因型(%)
等位基因
II
ID
DD
I
D
单支病变
, 百拇医药
42
16(38.1)
18(42.9)
8(19.0)*
0.595
0.405*
多支病变
41
8(19.5)
21(51.2)
12(29.3)
0.451
, 百拇医药
0.549
与多支病变组比*P>0.05
4.将心绞痛组与MI组合并为CHD组，正常组与CAG阴性组合并为对照组，D等位基因频率及DD型分布在这两组中亦无显著性差异(P>0.05)，见表4。
表4 冠心病组与对照组ACE基因分布 组别
例数
ACE基因型(%)
等位基因
II
ID
DD
I
, 百拇医药
D
对照
160
47(29.4)
54(33.8)
59(36.8)
0.463
0.537
冠心病
187
46(24.6)
96(51.3)
45(24.1)*
, http://www.100md.com
0.503
0.497*
与对照组比*P>0.05讨论
国外许多文献报道[1，2，7]ACE基因I/D多态性与CHD，尤其是MI有关，并认为D等位基因可能是MI的独立危险因素，国内资料[3，4，8，9]也大多支持这种观点。但随着对该基因多态性的深入研究，也出现了一些相反的结论[5，7]，晚近Agerholm-Larsen等[5]对10150例白人受检者，通过病例―对照研究认为ACE基因多态性与冠脉病变并无关系。本研究对187例CHD病人和160例非CHD病人进行病例―对照研究以及CAG阳性组与阴性组的对比研究，均不支持CHD病人D等位基因出现频率高，亦未发现伴随D等位基因频率升高，冠脉病变支数及病变程度呈增加趋势，反而发现对照组DD型基因频率比MI组要高(P<0.05)，D等位基因两组间无差异(P>0.05)。因此我们认为对于我国人群尚不能肯定ACE基因I/D多态性与CHD有关，也不能认为D等位基因是MI的危险因素。
, 百拇医药
我们认为不同的研究结论不同，可能是由于不同的研究选择了不同的样本，也可能选择的标准以及对照组不同所致，再则不同的环境因素，不同的种族，不同的国家，不同的地区，基因分布也可能不同。
对MI组与正常对照组公认危险因素的检测，发现SBP，TC，LDL-C，ApoB在MI组比正常对照组高，而ApoA比正常组低，提示在CHD发生中，这些因素仍起着重要的作用。
参考文献
[1] Cambien F, et al. Nature 1992；369：641.
[2] Mattu RK, et al. Circulation 1995；91：270.
[3] 陆林，等.中华心血管病杂志 1997；25：30.
, 百拇医药
[4] 郑豪义，等.中华心血管病杂志 1997；25：34.
[5] Agerholm-Larsen B, et al. Circulation 1997；95：2358.
[6] Rigat BK, et al. Nucleic Acids Res 1992；20：1433.
[7] Lindpaintner K, et al. N Engl J Med 1995；332：706.
[8] 张梅，等.中华心血管病杂志 1998；26：205.
[9] 嵇晴，等.江苏医药 1998；24(4)：237.
(1998年10月20日收稿 同年11月12日修回), http://www.100md.com
单位：南京医科大学第一附属医院心脏科 邮政编码：210029
关键词：冠心病 基因多态性 血管紧张素转换酶
江苏医药990405 摘要 运用PCR技术检测104例心肌梗塞(MI)、83例心绞痛患者，对照104例正常人、56例冠状动脉造影阴性者的血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失多态性，并分组比较该基因多态性与冠状动脉病变的关系。结果显示ACE缺失等位基因频率与MI发病、冠脉病变程度及病变支数无明显关系(P>0.05)，尚不能确定ACE缺失多态性是我国人群冠心病的危险因素。
血管紧张素转换酶(ACE)是肾素-血管紧张素系统(RAS)的重要组成部分，随着对ACE的深入研究，发现ACE基因16内含子有一个287bp的插入/缺失(I/D)多态性，国内外学者对该多态性与冠心病(CHD)的关系研究较多，但结果不尽相同[1～5]。本研究旨在探讨苏皖地区人群中ACE基因多态性与CHD的关系。
, 百拇医药
资料与方法
一、研究对象：
1.CHD组：(1)心肌梗塞(MI)组104例，男90例，女14例，为我院心脏科确诊的急性MI后存活的病人(符合1978年WHO的MI诊断标准)。(2)心绞痛组83例，男74例，女9例，为1997年3月至1998年5月在我院行冠状动脉造影(CAG)病人，临床有心绞痛症状，造影证实至少有一支主要冠状动脉狭窄≥75%。
2.对照组：(1)正常对照组104例，男84例，女20例，为本院同期进行健康体检者，经病史询问、体格检查和心电图检查排除心血管疾病者。(2)CAG阴性者56例，男39例，女17例，与心绞痛组同期行CAG，主要冠状动脉无明显病变。
二、方法：
1.人基因组DNA的提取：肘静脉血5ml，EDTA抗凝，离心10分，分离上层血浆冻存于-25℃供脂质测定，下层白细胞供基因型分析。用酚-氯仿法提取白细胞基因组DNA。
, 百拇医药
2.ACE基因I/D多态性检测：目的片段扩增参照Rigat BK的方法[6]设计一对引物，上游引物5’-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3’，下游引物5’-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T-3’。Taq酶购自华美生物工程公司。PCR程序：94℃，1min；58℃，1min；72℃，1min30sec，循环36次，运用PE480DNA合成仪扩增。PCR产物经2%琼脂糖电泳，EB染色，紫外灯下观察并拍照分析。
3.统计学分析：组间均数值比较运用t检验，组间频数比较采用χ2检验。
结果
一、ACE基因I/D多态性：
位于ACE基因第16内含子的缺失/插入多态性经PCR扩增可产生两种长度的片段，即490bp的插入片段(Ⅰ)和190bp的缺失片段(D)，紫外灯下可呈现三种条带：II型(仅有490bp带型)，DD型(仅有190bp带型)，ID型(含有490bp和190bp两种带型)。
, 百拇医药
二、各项临床资料的比较：
1.MI组与正常对照组的比较：显示MI组收缩压(SBP)，胆固醇(TC)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，载脂蛋白B((ApoB)较对照组高，而载脂蛋白A(ApoA)较对照组低，其他指标则两组间无显著差异，见表1。
表1 MI组与正常对照组临床资料比较(
±s)MI组
(n＝104)
对照组
(n＝104)
, 百拇医药
P值
BMI(kg/m2)
24.3±5.0
23.3±3.3
>0.05
SBP(kPa)
19.7±4.8
17.6±2.6
<0.05
DBP(kPa)
10.9±1.4
10.7±1.1
, 百拇医药
>0.05
TC(mmol/L)
5.38±1.09
4.84±0.93
<0.01
TG(mmol/L)
1.77±0.94
1.69±0.96
>0.05
HDL-C(mmol/L)
1.18±0.32
1.20±0.24
, 百拇医药
>0.05
LDL-C(mmol/L)
3.37±1.05
2.87±0.96
<0.01
ApoA(g/L)
1.13±0.28
1.45±0.36
<0.01
ApoB(g/L)
1.35±0.28
1.03±0.24
, 百拇医药
<0.01
LP(a)(mg/L)
217.5±2.7
225.1±2.5
>0.05
2.心绞痛组与CAG阴性组比较：83例心绞痛患者与56例CAG阴性者上述各项临床指标比较均无统计学意义(P>0.05)。
三、基因型分析：
1.MI组ID型基因比正常组显著增高，而正常组DD型基因频率比MI组显著增高(P<0.05)，D等位基因频率在两组间无显著差异(P>0.05)，见表2。表2 MI组与正常对照组ACE基因型与等位基因的频率 组别
, 百拇医药 例数
ACE基因型(%)
等位基因
II
ID
DD
I
D
正常组
104
19(18.3)
39(37.5)
46(44.2)
, 百拇医药
0.375
0.625
MI组
104
24(23.1)
55(52.9)*
25(24.0)*
0.500
0.500**
与正常组比*P<0.05 **P>0.05
2.心绞痛组与CAG阴性组ACE基因分布比较，两组间D等位基因频率及DD型基因频率均无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
3.根据CAG结果，将冠脉病变分为单支病变，多支病变(冠脉主要分支2支以上有≥75%狭窄)，两组间D等位基因频率无统计学意义(P>0.05)，见表3。表3 单支病变组与多支病变组ACE基因分布 组别
例
数
ACE基因型(%)
等位基因
II
ID
DD
I
D
单支病变
, 百拇医药
42
16(38.1)
18(42.9)
8(19.0)*
0.595
0.405*
多支病变
41
8(19.5)
21(51.2)
12(29.3)
0.451
, 百拇医药
0.549
与多支病变组比*P>0.05
4.将心绞痛组与MI组合并为CHD组，正常组与CAG阴性组合并为对照组，D等位基因频率及DD型分布在这两组中亦无显著性差异(P>0.05)，见表4。
表4 冠心病组与对照组ACE基因分布 组别
例数
ACE基因型(%)
等位基因
II
ID
DD
I
, 百拇医药
D
对照
160
47(29.4)
54(33.8)
59(36.8)
0.463
0.537
冠心病
187
46(24.6)
96(51.3)
45(24.1)*
, http://www.100md.com
0.503
0.497*
与对照组比*P>0.05讨论
国外许多文献报道[1，2，7]ACE基因I/D多态性与CHD，尤其是MI有关，并认为D等位基因可能是MI的独立危险因素，国内资料[3，4，8，9]也大多支持这种观点。但随着对该基因多态性的深入研究，也出现了一些相反的结论[5，7]，晚近Agerholm-Larsen等[5]对10150例白人受检者，通过病例―对照研究认为ACE基因多态性与冠脉病变并无关系。本研究对187例CHD病人和160例非CHD病人进行病例―对照研究以及CAG阳性组与阴性组的对比研究，均不支持CHD病人D等位基因出现频率高，亦未发现伴随D等位基因频率升高，冠脉病变支数及病变程度呈增加趋势，反而发现对照组DD型基因频率比MI组要高(P<0.05)，D等位基因两组间无差异(P>0.05)。因此我们认为对于我国人群尚不能肯定ACE基因I/D多态性与CHD有关，也不能认为D等位基因是MI的危险因素。
, 百拇医药
我们认为不同的研究结论不同，可能是由于不同的研究选择了不同的样本，也可能选择的标准以及对照组不同所致，再则不同的环境因素，不同的种族，不同的国家，不同的地区，基因分布也可能不同。
对MI组与正常对照组公认危险因素的检测，发现SBP，TC，LDL-C，ApoB在MI组比正常对照组高，而ApoA比正常组低，提示在CHD发生中，这些因素仍起着重要的作用。
参考文献
[1] Cambien F, et al. Nature 1992；369：641.
[2] Mattu RK, et al. Circulation 1995；91：270.
[3] 陆林，等.中华心血管病杂志 1997；25：30.
, 百拇医药
[4] 郑豪义，等.中华心血管病杂志 1997；25：34.
[5] Agerholm-Larsen B, et al. Circulation 1997；95：2358.
[6] Rigat BK, et al. Nucleic Acids Res 1992；20：1433.
[7] Lindpaintner K, et al. N Engl J Med 1995；332：706.
[8] 张梅，等.中华心血管病杂志 1998；26：205.
[9] 嵇晴，等.江苏医药 1998；24(4)：237.
(1998年10月20日收稿 同年11月12日修回), http://www.100md.com