影响HE染色细胞形态的因素探讨
作者：杨枫
单位：杨枫(安徽医科大学病理学教研室，合肥 230032)
关键词：HE染色；制片
临床与实验病理学杂志990434
分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0361-01
我科自80年代以来，逐渐将HE染色中的染色后乙醇脱水、二甲苯透明步骤简化为染色后105℃烤干、中性树胶(二甲苯稀释)封片，以缩短制片时间，减少接触二甲苯的机率，取得一定效果。但该方法制出的切片，细胞有明显收缩，核浓染，细微结构不甚清晰，同时部分细胞核呈黑褐色，如“焦化”状，经缩短苏木素染色时间和用盐酸乙醇分化，都无明显改进。因此，我们针对制片程序中的其他与上述图象形成有关的因素，如烤片温度、苏木素伊红染色后直接烤干封片等设计如下实验进行探讨。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 组织及蜡块 选取腺癌及淋巴结组织，由我科按常规制成的蜡块及同样组织的外院会诊用蜡块各2枚，共4块。分别作4 μm连续切片，按设计条件同时进行烤片、染色及封片。
1.2 实验条件
1.2.1 所有切片经105℃烤15 min(本实验前我科用的烤片温度，也即漂烘仪的最高烤片温度)，然后脱蜡至水，在苏木素伊红染色后用不同方法处理：(1)过无水乙醇，105℃烤干、封片；(2)乙醇脱水，二甲苯透明、封片；(3)过无水乙醇，105℃烤干、二甲苯透明、封片。
1.2.2 所有切片用不同温度烤片后，苏木素伊红染色，再按1.2.1中(2)方法处理。烤片温度分别为(Ⅰ)62℃ 6 h；(Ⅱ)90℃ 15 min；(Ⅲ)105℃ 15 min。
, 百拇医药 1.2.3 所有切片经90℃ 15 min烤片，脱蜡至水，苏木素伊红染色后按下列不同方法脱水、透明、封片：(A)乙醇脱水、凉干、封片；(B)乙醇脱水、二甲苯透明、凉干、封片；(C)乙醇脱水、二甲苯透明、不干封片(即湿封)。
2 结果
在1.2.1中按(1)方法处理的切片(简称1号片，以下依此类推)染色质量差，细胞核浓染，核结构不清(图1)；2号切片细胞大，细胞及核结构清晰，染色质量好(图2)；3号切片同1号切片。
图1 腺癌,烤干封片.HE×400
图2 腺癌,湿封.HE×400
, http://www.100md.com
在1.2.2中，Ⅰ号切片质量最好，Ⅱ号切片次之，Ⅲ号切片更次之，但差别不十分明显。
在1.2.3中，C号切片质量最好，B号切片次之，A号切片更次之。
3 讨论
从1.2.1的结果可知，苏木素伊红染色后烤干脱水，直接封片和乙醇脱水、二甲苯透明、封片对切片的质量影响很大。80年代末流行的烤干脱水、直接封片，虽然能减少操作步骤、节约乙醇和二甲苯，减少对操作者的毒害作用，但它对切片染色质量的不良影响也很明显，说明此方法是不可取的。
从1.2.2结果可知，62℃烤片6 h效果最好，但对于标本多的单位，烤片用6 h时间会影响及时出片，若缩短烤片时间，却又容易造成脱片，因此，80℃～90℃烤15～30 min是可取的。虽然烤片温度的高低对切片质量有影响，但不影响观察结果。
, 百拇医药
由1.2.1和1.2.3的结果可知，切片经62℃烤6 h，脱蜡至水，苏木素伊红染色后经乙醇脱水、二甲苯透明，在二甲苯尚未挥发就封片是最佳方法。但是，二甲苯对操作者有毒害作用，为此，增加1.2.3。在1.2.3中C号切片与B号切片的质量有区别，在一般情况下区别不大；而A号与C号切片间区别较明显，因此，日常染色取B号切片法就可以了(即切片经90℃烤15 min、脱蜡至水、苏木素伊红染色、乙醇脱水、二甲苯透明、凉干后封片)。
此外，在1.2.3中淋巴结的B号与C号切片发现很明显的区别。长期以来，人们在某些HE切片中见到部分细胞核呈褐色或黑色，结构不清，形似“焦化”的物质，在B号切片就有此物质(图3)，在A号与C号切片均未见(图4)，提示核的此种变化与二甲苯有密切关系，但它导致该变化的机制还有待进一步的研究，可能是二甲苯挥发不净，留下的结晶；也可能与细胞核的pH值有关。
图3 淋巴结,凉干封片.HE×400
图4 淋巴结,湿封.HE×400
作者简介：杨 枫，男，39岁，主管技师
收稿日期：1999-03-10, 百拇医药
单位：杨枫(安徽医科大学病理学教研室，合肥 230032)
关键词：HE染色；制片
临床与实验病理学杂志990434
分类号 R446.8 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0361-01
我科自80年代以来，逐渐将HE染色中的染色后乙醇脱水、二甲苯透明步骤简化为染色后105℃烤干、中性树胶(二甲苯稀释)封片，以缩短制片时间，减少接触二甲苯的机率，取得一定效果。但该方法制出的切片，细胞有明显收缩，核浓染，细微结构不甚清晰，同时部分细胞核呈黑褐色，如“焦化”状，经缩短苏木素染色时间和用盐酸乙醇分化，都无明显改进。因此，我们针对制片程序中的其他与上述图象形成有关的因素，如烤片温度、苏木素伊红染色后直接烤干封片等设计如下实验进行探讨。
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1 材料和方法
1.1 组织及蜡块 选取腺癌及淋巴结组织，由我科按常规制成的蜡块及同样组织的外院会诊用蜡块各2枚，共4块。分别作4 μm连续切片，按设计条件同时进行烤片、染色及封片。
1.2 实验条件
1.2.1 所有切片经105℃烤15 min(本实验前我科用的烤片温度，也即漂烘仪的最高烤片温度)，然后脱蜡至水，在苏木素伊红染色后用不同方法处理：(1)过无水乙醇，105℃烤干、封片；(2)乙醇脱水，二甲苯透明、封片；(3)过无水乙醇，105℃烤干、二甲苯透明、封片。
1.2.2 所有切片用不同温度烤片后，苏木素伊红染色，再按1.2.1中(2)方法处理。烤片温度分别为(Ⅰ)62℃ 6 h；(Ⅱ)90℃ 15 min；(Ⅲ)105℃ 15 min。
, 百拇医药 1.2.3 所有切片经90℃ 15 min烤片，脱蜡至水，苏木素伊红染色后按下列不同方法脱水、透明、封片：(A)乙醇脱水、凉干、封片；(B)乙醇脱水、二甲苯透明、凉干、封片；(C)乙醇脱水、二甲苯透明、不干封片(即湿封)。
2 结果
在1.2.1中按(1)方法处理的切片(简称1号片，以下依此类推)染色质量差，细胞核浓染，核结构不清(图1)；2号切片细胞大，细胞及核结构清晰，染色质量好(图2)；3号切片同1号切片。
图1 腺癌,烤干封片.HE×400
图2 腺癌,湿封.HE×400
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在1.2.2中，Ⅰ号切片质量最好，Ⅱ号切片次之，Ⅲ号切片更次之，但差别不十分明显。
在1.2.3中，C号切片质量最好，B号切片次之，A号切片更次之。
3 讨论
从1.2.1的结果可知，苏木素伊红染色后烤干脱水，直接封片和乙醇脱水、二甲苯透明、封片对切片的质量影响很大。80年代末流行的烤干脱水、直接封片，虽然能减少操作步骤、节约乙醇和二甲苯，减少对操作者的毒害作用，但它对切片染色质量的不良影响也很明显，说明此方法是不可取的。
从1.2.2结果可知，62℃烤片6 h效果最好，但对于标本多的单位，烤片用6 h时间会影响及时出片，若缩短烤片时间，却又容易造成脱片，因此，80℃～90℃烤15～30 min是可取的。虽然烤片温度的高低对切片质量有影响，但不影响观察结果。
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由1.2.1和1.2.3的结果可知，切片经62℃烤6 h，脱蜡至水，苏木素伊红染色后经乙醇脱水、二甲苯透明，在二甲苯尚未挥发就封片是最佳方法。但是，二甲苯对操作者有毒害作用，为此，增加1.2.3。在1.2.3中C号切片与B号切片的质量有区别，在一般情况下区别不大；而A号与C号切片间区别较明显，因此，日常染色取B号切片法就可以了(即切片经90℃烤15 min、脱蜡至水、苏木素伊红染色、乙醇脱水、二甲苯透明、凉干后封片)。
此外，在1.2.3中淋巴结的B号与C号切片发现很明显的区别。长期以来，人们在某些HE切片中见到部分细胞核呈褐色或黑色，结构不清，形似“焦化”的物质，在B号切片就有此物质(图3)，在A号与C号切片均未见(图4)，提示核的此种变化与二甲苯有密切关系，但它导致该变化的机制还有待进一步的研究，可能是二甲苯挥发不净，留下的结晶；也可能与细胞核的pH值有关。
图3 淋巴结,凉干封片.HE×400
图4 淋巴结,湿封.HE×400
作者简介：杨 枫，男，39岁，主管技师
收稿日期：1999-03-10, 百拇医药