肺癌组织心钠素、血清降钙素含量测定及T淋巴细胞亚群浸润程度结果分析
作者：吕汉文 李锐 叶彩丽 杨清绪 赵国华 吴惠茜
单位：广东惠州市中心人民医院病理科 (516001) 吕汉文 李锐 叶彩丽；中山医科大学病理学教研室 (510080) 杨清绪 赵国华 吴惠茜
关键词：肺肿瘤；心钠素；降钙素；T淋巴细胞亚群；免疫组化；放免测定
中国现代医学杂990407 为了解4种不同组织学类型肺癌组织心钠素(ANP)，血清降钙素(CT)含量与T淋巴细胞亚群浸润相关程度，用放免分析法及免疫组化ABC法测定58例肺癌组织ANP血清CT含量T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度。结果：58例肺癌组织ANP，CT含量均明显高于对照组(P<0.01)。肺癌不同组织学类型ANP，CT含量均高于对照组(P<0.01)且有不同程度相关。肺癌相同组织学类型T3+，T4+，T8+/浸润程度不同，以T3+淋巴细胞最为明显。肺癌组织ANP，血清CT含量与T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度之间有不同程度相关。表明肺癌组织ANP，CT及T淋巴细胞浸润之间有一定内在联系。
, 百拇医药
分类号 R34.2
本文对四种不同组织类型的58例肺癌进行肺组织心钠素(ANP)，血清降钙素(Calcitonic,CT)，含量测定及T淋巴细胞亚群浸润程度比较分析。现作如下报道。
1 资料与方法
1.1 临床资料
58例肺癌标本取自本院胸外科和中山医科大学肿瘤医院胸科。其中男性38例，女性20例，年龄30～71岁。手术病理诊断：腺癌20例，鳞癌20例，小细胞癌10例，大细胞癌8例。每例均从肿瘤所在肺叶距肿瘤组织远的部位取相对正常的肺组织测定ANP含量作对照，另取一份新鲜癌组织免疫组化及HE染色。
1.2 ANP组织提取测定，血清CT测定
新鲜肺癌组织冲洗，吸干称量后，加入0.5N预冷的醋酸(w/v＝1：5～10)，在沸水浴中加热10min，摇匀，离心(12 000r/min，4℃，20min)取上清液置-45℃低温冰箱待测。ANP，CT药盒分别由中国同位素公司北方免疫试剂所和天津德普生物技术有限公司提供。测量仪器为上海日环厂SN-682B型γ计数器。
, 百拇医药
1.3 T淋巴细胞亚群免疫组化分析
将肺癌组织冰冻切片，分别作T3+、T4+、T8+及阳性对照，采用ABC法进行染色在高倍镜下数4个及中央等五个区域的阳性细胞数。所用的鼠抗人单克隆抗体由武汉生物制品所提供。
1.4 RIA质控指标
ANP：N/T：4.7% BO/T：34% A：1.937 B：-2.391 R＝-0.989 批内CV：4.1% RER：3.15% CT：N/T：5.2% BO/T：36% A：2.013 B：-2.564 R＝-0.987 批内CV：5.2% RER：4.23%。
1.5 统计学处理
结果以均数±标准差(
±s)表示，组间比较采用t检验及直线相关分析，样本均数间比较用方差分析和两两比较。
, 百拇医药
2 结果
2.1 58例肺癌组织ANP含量为(19.28±4.25)ng/g，正常对照组为(2.51±0.39)ng/g，肺癌组ANP明显高于对照组，两组间有显著差异。(t＝2.78，P<0.01)，58例CT含量为(589±85)/ng/L，对照组为(73.01±5.03)ng/L，肺癌CT明显高于对照组，两组间有显著性差异(t＝2.865 P<0.01)。不同组织学类型组织ANP与血清CT含量比较见表1。
表1 肺癌不同组织学类型组织ANP与血清CT含量比较 组 别
例数
ANP±s
CT±s
, 百拇医药
相关系数
n
ng/g组织
ng/L血清
r＝0.67
对照组
30
1.51±0.39
73.01±5.63
P<0.05
腺癌
20
18.62±1.912)
, http://www.100md.com
363.86±50.62)
r＝0.58
(t＝6.54)
(t＝5.01)
P<0.05
鳞癌
20
9.33±0.892)
934.25±108.822)
r＝-0.05
(t＝5.58)
, 百拇医药
(t＝6.61)
P>0.05
大细胞癌
8
15.14±1.721)
568.73±67.371)
r＝0.639
(t＝2.61)
(t＝2.21)
P<0.05
小细胞癌
10
, 百拇医药
28.88±2.112)
1833±105.22)
r＝0.82
(t＝2.58)
(t＝4.57)
P<0.05
注：1) 与对照组比较 P<0.05
2) 与对照组比较 P<0.01
结果表明：肺癌不同组织学类型组织ANP与CT含量均明显高于正常对照组，有显著性差异。各型间含量均不同呈中度相关，有显著差异。
2.2 58例肺癌，CT异常增高率为53%(25/58)，其中小细胞癌增高最为明显占30%(3/10)；腺癌34%(7/20)；鳞癌25%(5/20)；大细胞癌30%(3/10)。58例肺癌CT含量表明：腺癌，鳞癌，大细胞癌，小细胞癌与对照组比较有显著性差异(t＝5.01，P<0.01；t＝6.61，P<0.01；t＝2.26，P<0.05；t＝7.86；P<0.01)。
, 百拇医药
2.3 肺癌不同组织学类型免疫组化分析表明
四种癌组织中都有T3+、T4+、T8+淋巴细胞浸润，阳性率为100%。且浸润程度均有差异，肺癌不同组织学类型T淋巴细胞浸润比较见表2。
表2 肺癌不同组织学类型T淋巴细胞浸润比较
(单位：n个淋巴细胞/区域) 免疫细胞
类 型
方差分析
腺癌(20例)
鳞癌(20例)
大细胞癌(8例)
小细胞癌(10例)
, http://www.100md.com
T3+
57.33±3.08
64.42±2.12
21.67±1.23
51.29±3.95
P<0.01
T4+
44.14±2.09
54.25±3.17
19.81±2.27
34.02±3.87
P<0.05
, 百拇医药
T8+
25.49±1.67
14.18±0.82
37.55±1.91
20.07±2.19
P<0.01
2.4 肺癌相同组织学类型中T3+、T4+，T8+淋巴细胞浸润程度不同，T3+淋巴细胞浸润最为明显。
2.5 肺癌组织ANP与血清CT含量与T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度相关比较见表3。表3 四种不同肺癌组织ANP.血清CT含量与T3+、T4+、T8+
淋巴细胞浸润程度相关比较 免疫细胞
, 百拇医药
腺癌(n＝20)
鳞癌(n＝20)
大细胞癌(n＝8)
小细胞癌(n＝10)
ANP
CT
ANP
CT
ANP
CT
ANP
CT
T3+
, 百拇医药
r＝0.48
r＝0.45
r＝0.58
r＝0.65
r＝0.57
r＝0.59
r＝0.70
r＝0.75
P>0.05
P<0.05
P<0.05
P<0.01
, 百拇医药 P>0.05
P<0.05
P<0.01
P<0.01
T4+
r＝0.48
r＝0.54
r＝0.62
r＝0.60
r＝0.65
r＝0.73
r＝0.59
r＝0.60
, 百拇医药
P>0.05
P<0.05
P<0.05
P<0.05
P>0.05
P>0.05
P<0.05
P<0.05
T8+
r＝0.45
r＝0.57
r＝0.68
, http://www.100md.com r＝0.67
r＝0.52
r＝0.63
r＝0.60
r＝0.61
P>0.05
P>0.05
P>0.05
P<0.05
P<0.05
P<0.05
P<0.05
P<0.05
, http://www.100md.com
进行方差分析两两比较表明：T3+淋巴细胞浸润腺癌与小细胞癌有显著性差异(Q＝5.36，P<0.01)；T4+淋巴细胞浸润鳞癌与小细胞癌有差异(Q＝7.56，P<0.01)；T8+淋巴细胞浸润鳞癌与大细胞癌有差异(Q＝3.63，P<0.05)。3 讨论
业已证明[1]：肺癌组织中含有ANP样物质主要分布在静脉壁的近腔面的肌细胞内，每克癌组织约含几十毫微克，约是正常肺组织的几十倍，尤以小细胞肺癌为多。本文结果表明：肺癌组织存在ANP，其浓度要高于正常组织的8～22倍不等，以小细胞肺癌ANP含量最高，方差分析P<0.01；有显著性差异。肺组织内含有极丰富的颗粒性鸟苷酸环化酶，当ANP与高亲合性、特异性受体结合以后，通过细胞膜的内趋化(Endocytosis)激活细胞膜上的颗粒性鸟苷酸环化酶系统，引起肺内组织中的ANP增高[2]，肺癌患者又由于肺基因及其蛋白产物直接刺激ANP mRNA的转录和翻译过程，或其自身控制基因表达失常导致ANP增高明显。
, http://www.100md.com
降钙素是一种可降低血浆钙离子，调节和维持血钙平衡的多肽激素[3]。本文测定58例肺癌，CT异常增高率为53%(25/58)；其中小细胞癌增高最为明显占30%(3/10)；腺癌34%(7/20)；鳞癌25%(5/20)；大细胞癌37%(3/8)。腺癌、鳞癌、大细胞癌、小细胞癌与对照组比较有显著性差异(t＝5.01，P<0.01；t＝6.61，P<0.01；t＝2.26，P<0.05；t＝4.86，P<0.01)。
肺癌患者异常CT血症，其来源有可能：肺癌组织的异位高分泌一种大分子CT，这种CT无生理活性，对血钙并无调节作用。甲状腺异常分泌。肺细支的K细胞异常高分泌，这种细胞中含有密集中心小泡，具有特殊内分泌功能因此在正常人肺中很难找到K细胞，而在肺癌，特别在小细胞癌中K细胞明显增多。因此在肺癌患者中所出现血清高CT水平可能部分来源K细胞的分泌[6]。本文58例肺癌CT含量为(589±78)ng/L与对照组(73.01±5.63)比较有显著性差异(t＝2.865，P>0.05)。不同肺癌组织ANP，与血清CT含量进行相关分析：小细胞癌ANP与CT含量相差明显，有显著性差异(r＝0.82，P<0.05)；大细胞癌ANP与CT含量中度相关(r＝0.63，P<0.05)。因此有作者提出[5]：血清CT水平在肺癌患者中，特别是小细胞肺癌患者可作为疾病活动的指标之一。
, 百拇医药
文献报道[7]：肺内存在棕色的ANP阳性反应颗粒，主要分布在肺静脉内基层，本文免疫组化分析结果表明：58例肺癌组织中均存在T3+、T4+、T8+淋巴细胞浸润，阳性率为100%，但各例浸润程度不同，肺大细胞癌组织中T3+、T4+淋巴细胞的浸润数量明显少于其它三种类型肺癌，而T8+淋巴细胞数量却明显高于其它类型肺癌。本文对四种不同类型肺癌T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度与ANP，CT含量相关比较，结果表明：T8+淋巴细胞浸润程度与鳞癌的ANP CT含量呈中度相关(r＝0.68，P<0.05；r＝0.67，P>0.05)；T4+淋巴细胞浸润程度与肺大细胞癌ANP，CT含量呈低度相关(r＝0.45，P>0.05，r＝0.41，P>0.05)；T3+淋巴细胞浸润程度与小细胞ANP，CT含量呈中度相关且有非常显著性差异(r＝0.71，P<0.01；r＝0.72，P<0.01)。本文结果提示：肺癌组织ANP，血清CT含量与T淋巴细胞亚群浸润程度之间有一定的内在联系，可能与肺癌免疫应答机制有关。
参考文献
, http://www.100md.com
1 汤 健，谢翠微编著.心纳素-心脏分泌的一种激素.北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1989：201～203
2 谢翠微，汤 健.心纳素研究的进展.中华医学杂志，1986；66(1)：171
3 安松柱，王建平，汤 健.肺癌中的心钠素免疫活性物质.中华肿瘤学杂志，1988；10(3)：171
4 Beker KL,kathleen G,Monaghan BS,et al.Immunocytoch emi cal Localization of calcitonim in Kuichitsky cells of human lung.Arch Pathol Lad Med,1980；104(1):196
5 张建平综述.降钙素与肺癌.国外医学呼吸系统分册，1995；15(3)：122
6 谢翠微，宋东力，李小蕾，等.大鼠肺内的心钠素样物质.中华医学杂志，1986；66(1)：203～204
1998-12-26收稿, 百拇医药
单位：广东惠州市中心人民医院病理科 (516001) 吕汉文 李锐 叶彩丽；中山医科大学病理学教研室 (510080) 杨清绪 赵国华 吴惠茜
关键词：肺肿瘤；心钠素；降钙素；T淋巴细胞亚群；免疫组化；放免测定
中国现代医学杂990407 为了解4种不同组织学类型肺癌组织心钠素(ANP)，血清降钙素(CT)含量与T淋巴细胞亚群浸润相关程度，用放免分析法及免疫组化ABC法测定58例肺癌组织ANP血清CT含量T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度。结果：58例肺癌组织ANP，CT含量均明显高于对照组(P<0.01)。肺癌不同组织学类型ANP，CT含量均高于对照组(P<0.01)且有不同程度相关。肺癌相同组织学类型T3+，T4+，T8+/浸润程度不同，以T3+淋巴细胞最为明显。肺癌组织ANP，血清CT含量与T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度之间有不同程度相关。表明肺癌组织ANP，CT及T淋巴细胞浸润之间有一定内在联系。
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分类号 R34.2
本文对四种不同组织类型的58例肺癌进行肺组织心钠素(ANP)，血清降钙素(Calcitonic,CT)，含量测定及T淋巴细胞亚群浸润程度比较分析。现作如下报道。
1 资料与方法
1.1 临床资料
58例肺癌标本取自本院胸外科和中山医科大学肿瘤医院胸科。其中男性38例，女性20例，年龄30～71岁。手术病理诊断：腺癌20例，鳞癌20例，小细胞癌10例，大细胞癌8例。每例均从肿瘤所在肺叶距肿瘤组织远的部位取相对正常的肺组织测定ANP含量作对照，另取一份新鲜癌组织免疫组化及HE染色。
1.2 ANP组织提取测定，血清CT测定
新鲜肺癌组织冲洗，吸干称量后，加入0.5N预冷的醋酸(w/v＝1：5～10)，在沸水浴中加热10min，摇匀，离心(12 000r/min，4℃，20min)取上清液置-45℃低温冰箱待测。ANP，CT药盒分别由中国同位素公司北方免疫试剂所和天津德普生物技术有限公司提供。测量仪器为上海日环厂SN-682B型γ计数器。
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1.3 T淋巴细胞亚群免疫组化分析
将肺癌组织冰冻切片，分别作T3+、T4+、T8+及阳性对照，采用ABC法进行染色在高倍镜下数4个及中央等五个区域的阳性细胞数。所用的鼠抗人单克隆抗体由武汉生物制品所提供。
1.4 RIA质控指标
ANP：N/T：4.7% BO/T：34% A：1.937 B：-2.391 R＝-0.989 批内CV：4.1% RER：3.15% CT：N/T：5.2% BO/T：36% A：2.013 B：-2.564 R＝-0.987 批内CV：5.2% RER：4.23%。
1.5 统计学处理
结果以均数±标准差(
±s)表示，组间比较采用t检验及直线相关分析，样本均数间比较用方差分析和两两比较。, 百拇医药
2 结果
2.1 58例肺癌组织ANP含量为(19.28±4.25)ng/g，正常对照组为(2.51±0.39)ng/g，肺癌组ANP明显高于对照组，两组间有显著差异。(t＝2.78，P<0.01)，58例CT含量为(589±85)/ng/L，对照组为(73.01±5.03)ng/L，肺癌CT明显高于对照组，两组间有显著性差异(t＝2.865 P<0.01)。不同组织学类型组织ANP与血清CT含量比较见表1。
表1 肺癌不同组织学类型组织ANP与血清CT含量比较 组 别
例数
ANP
±sCT
±s, 百拇医药
相关系数
n
ng/g组织
ng/L血清
r＝0.67
对照组
30
1.51±0.39
73.01±5.63
P<0.05
腺癌
20
18.62±1.912)
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363.86±50.62)
r＝0.58
(t＝6.54)
(t＝5.01)
P<0.05
鳞癌
20
9.33±0.892)
934.25±108.822)
r＝-0.05
(t＝5.58)
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(t＝6.61)
P>0.05
大细胞癌
8
15.14±1.721)
568.73±67.371)
r＝0.639
(t＝2.61)
(t＝2.21)
P<0.05
小细胞癌
10
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28.88±2.112)
1833±105.22)
r＝0.82
(t＝2.58)
(t＝4.57)
P<0.05
注：1) 与对照组比较 P<0.05
2) 与对照组比较 P<0.01
结果表明：肺癌不同组织学类型组织ANP与CT含量均明显高于正常对照组，有显著性差异。各型间含量均不同呈中度相关，有显著差异。
2.2 58例肺癌，CT异常增高率为53%(25/58)，其中小细胞癌增高最为明显占30%(3/10)；腺癌34%(7/20)；鳞癌25%(5/20)；大细胞癌30%(3/10)。58例肺癌CT含量表明：腺癌，鳞癌，大细胞癌，小细胞癌与对照组比较有显著性差异(t＝5.01，P<0.01；t＝6.61，P<0.01；t＝2.26，P<0.05；t＝7.86；P<0.01)。
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2.3 肺癌不同组织学类型免疫组化分析表明
四种癌组织中都有T3+、T4+、T8+淋巴细胞浸润，阳性率为100%。且浸润程度均有差异，肺癌不同组织学类型T淋巴细胞浸润比较见表2。
表2 肺癌不同组织学类型T淋巴细胞浸润比较
(单位：n个淋巴细胞/区域) 免疫细胞
类 型
方差分析
腺癌(20例)
鳞癌(20例)
大细胞癌(8例)
小细胞癌(10例)
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T3+
57.33±3.08
64.42±2.12
21.67±1.23
51.29±3.95
P<0.01
T4+
44.14±2.09
54.25±3.17
19.81±2.27
34.02±3.87
P<0.05
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T8+
25.49±1.67
14.18±0.82
37.55±1.91
20.07±2.19
P<0.01
2.4 肺癌相同组织学类型中T3+、T4+，T8+淋巴细胞浸润程度不同，T3+淋巴细胞浸润最为明显。
2.5 肺癌组织ANP与血清CT含量与T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度相关比较见表3。表3 四种不同肺癌组织ANP.血清CT含量与T3+、T4+、T8+
淋巴细胞浸润程度相关比较 免疫细胞
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腺癌(n＝20)
鳞癌(n＝20)
大细胞癌(n＝8)
小细胞癌(n＝10)
ANP
CT
ANP
CT
ANP
CT
ANP
CT
T3+
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r＝0.48
r＝0.45
r＝0.58
r＝0.65
r＝0.57
r＝0.59
r＝0.70
r＝0.75
P>0.05
P<0.05
P<0.05
P<0.01
, 百拇医药 P>0.05
P<0.05
P<0.01
P<0.01
T4+
r＝0.48
r＝0.54
r＝0.62
r＝0.60
r＝0.65
r＝0.73
r＝0.59
r＝0.60
, 百拇医药
P>0.05
P<0.05
P<0.05
P<0.05
P>0.05
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P<0.05
P<0.05
T8+
r＝0.45
r＝0.57
r＝0.68
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r＝0.52
r＝0.63
r＝0.60
r＝0.61
P>0.05
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P<0.05
P<0.05
P<0.05
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进行方差分析两两比较表明：T3+淋巴细胞浸润腺癌与小细胞癌有显著性差异(Q＝5.36，P<0.01)；T4+淋巴细胞浸润鳞癌与小细胞癌有差异(Q＝7.56，P<0.01)；T8+淋巴细胞浸润鳞癌与大细胞癌有差异(Q＝3.63，P<0.05)。3 讨论
业已证明[1]：肺癌组织中含有ANP样物质主要分布在静脉壁的近腔面的肌细胞内，每克癌组织约含几十毫微克，约是正常肺组织的几十倍，尤以小细胞肺癌为多。本文结果表明：肺癌组织存在ANP，其浓度要高于正常组织的8～22倍不等，以小细胞肺癌ANP含量最高，方差分析P<0.01；有显著性差异。肺组织内含有极丰富的颗粒性鸟苷酸环化酶，当ANP与高亲合性、特异性受体结合以后，通过细胞膜的内趋化(Endocytosis)激活细胞膜上的颗粒性鸟苷酸环化酶系统，引起肺内组织中的ANP增高[2]，肺癌患者又由于肺基因及其蛋白产物直接刺激ANP mRNA的转录和翻译过程，或其自身控制基因表达失常导致ANP增高明显。
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降钙素是一种可降低血浆钙离子，调节和维持血钙平衡的多肽激素[3]。本文测定58例肺癌，CT异常增高率为53%(25/58)；其中小细胞癌增高最为明显占30%(3/10)；腺癌34%(7/20)；鳞癌25%(5/20)；大细胞癌37%(3/8)。腺癌、鳞癌、大细胞癌、小细胞癌与对照组比较有显著性差异(t＝5.01，P<0.01；t＝6.61，P<0.01；t＝2.26，P<0.05；t＝4.86，P<0.01)。
肺癌患者异常CT血症，其来源有可能：肺癌组织的异位高分泌一种大分子CT，这种CT无生理活性，对血钙并无调节作用。甲状腺异常分泌。肺细支的K细胞异常高分泌，这种细胞中含有密集中心小泡，具有特殊内分泌功能因此在正常人肺中很难找到K细胞，而在肺癌，特别在小细胞癌中K细胞明显增多。因此在肺癌患者中所出现血清高CT水平可能部分来源K细胞的分泌[6]。本文58例肺癌CT含量为(589±78)ng/L与对照组(73.01±5.63)比较有显著性差异(t＝2.865，P>0.05)。不同肺癌组织ANP，与血清CT含量进行相关分析：小细胞癌ANP与CT含量相差明显，有显著性差异(r＝0.82，P<0.05)；大细胞癌ANP与CT含量中度相关(r＝0.63，P<0.05)。因此有作者提出[5]：血清CT水平在肺癌患者中，特别是小细胞肺癌患者可作为疾病活动的指标之一。
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文献报道[7]：肺内存在棕色的ANP阳性反应颗粒，主要分布在肺静脉内基层，本文免疫组化分析结果表明：58例肺癌组织中均存在T3+、T4+、T8+淋巴细胞浸润，阳性率为100%，但各例浸润程度不同，肺大细胞癌组织中T3+、T4+淋巴细胞的浸润数量明显少于其它三种类型肺癌，而T8+淋巴细胞数量却明显高于其它类型肺癌。本文对四种不同类型肺癌T3+，T4+，T8+淋巴细胞浸润程度与ANP，CT含量相关比较，结果表明：T8+淋巴细胞浸润程度与鳞癌的ANP CT含量呈中度相关(r＝0.68，P<0.05；r＝0.67，P>0.05)；T4+淋巴细胞浸润程度与肺大细胞癌ANP，CT含量呈低度相关(r＝0.45，P>0.05，r＝0.41，P>0.05)；T3+淋巴细胞浸润程度与小细胞ANP，CT含量呈中度相关且有非常显著性差异(r＝0.71，P<0.01；r＝0.72，P<0.01)。本文结果提示：肺癌组织ANP，血清CT含量与T淋巴细胞亚群浸润程度之间有一定的内在联系，可能与肺癌免疫应答机制有关。
参考文献
, http://www.100md.com
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1998-12-26收稿, 百拇医药