卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变
作者：周龙书 杨日普
单位：广州军区广州总医院妇产科，广州，510010
关键词：卵巢恶性肿瘤；腹水；NK细胞活性；T淋巴细胞亚群
第一军医大学学报990409 摘要：目的 了解卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况的改变，并探讨其与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度以及临床分期的关系。方法 采用放射性同位素掺入法及OKT单克隆抗体分别检测卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及 T淋巴细胞亚群，并采用妇科良性肿瘤患者腹水或腹腔液作对照。结果 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性显著低于妇科良性肿瘤患者腹水或腹腔液组(P<0.01)，且OKT4细胞减少(P<0.05)，OKT8细胞增多(P<0.05)，OKT4/OKT8比值减小(P<0.05)。卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度均无关(P>0.05)，但与临床分期有关(P<0.05)。结论 卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况是低下的，且临床分期越晚，免疫功能越低。
, 百拇医药
中图分类号：Q571；Q461
Alterations of NK cell activity and T-lymphocyte subset in the ascites of the patients with ovarian malignant tumors
Zhou Longshu，Yang Ripu
(Department of Gynemetrics，General Hospital of Guangzhou Command，Guangzhou，510010)
Abstract：Objective To study the alterations of immune function of pelvic and peritoneal cavity in the patients with ovarian malignant tumors and to research the relationship between the alterations and histological types of the tumors，the differential degree of the tumor cells and clinical stage.Methods Using a radioisotope incorporation method and OKT monoclonal antibodies，NK cell activity and T-lymphocyte subset in ascites were detected in the patients with ovarian malignant tumors，and the results were compared with those of the patients with gynecologic benign tumors.Results NK cell activity in the ascites from the patients with ovarian malignant tumors were lower than that from the patients with gynecologic benign tumors (P<0.01).The OKT4 cells of the patients with ovarian cancer were decreased (P<0.01)，the OKT8 cells increased (P<0.01)，and the ratio of OKT4/OKT8 was reduced (P<0.05).There was no significant difference in the alterations of NK cell activity and T-lymphocyte subset among various histological types of the tumor (P>0.05).There was no difference among various differential degrees of the tumor (P>0.05).But the alterations of NK cell activity and T-lymphocyte subset were relative to the clinical stage (P<0.05).Conclusions The immune function of pelvic and peritoneal cavity in the patients with ovarian malignant tumors was lower.The later the clinical stage，the lower the immune function.
, 百拇医药
Key words：ovarian malignant tumor;ascites;NK cell activity;T-lymphocyte subsets
肿瘤免疫学的研究表明，肿瘤的发生发展与机体的免疫状况密切相关，特别与自然杀伤细胞(NK细胞)、T淋巴细胞功能有关[1]。由于卵巢恶性肿瘤极易发生盆腹腔内种植转移，且近年来对患者盆腹腔内局部免疫功能的改变研究较少，故作者分别采用放射性同位素掺入法及OKT单克隆抗体检测卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群，并采用妇科良性疾病患者腹水或腹腔液作对照，旨在了解卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况的改变，并探讨其与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度以及临床分期的关系。
1 病人与方法
1.1 研究对象 共收集卵巢恶性肿瘤合并腹水患者32例，其中包括上皮性卵巢癌13例，生殖细胞肿瘤 8例，性索间质肿瘤6例，非特异性肿瘤5例。细胞分化程度为Ⅰ～Ⅱ级14例，Ⅱ～Ⅲ级18例。Ⅰ期患者7例，Ⅱ期患者17例，Ⅲ～Ⅳ期患者8例。年龄19～72岁，平均年龄51.5岁。以30例各种妇科良性疾病患者作为对照组，其中卵巢良性肿瘤18例，子宫肌瘤12例，年龄20～69岁，平均年龄41.5岁。两组患者均有病理诊断，检测前均无化疗或放疗病史。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 细胞的收集与制备 于术中分别收集患者腹水或腹腔液20 ml，加入淋巴细胞分离液，离心2000 r/min，20 min，收集淋巴细胞，用Hanks液洗涤3次，调至细胞含量为5×108/L备用。
1.2.2 NK细胞活性测定 分别将已制备的淋巴细胞(含NK细胞)与经3H-胸腺嘧啶标记的K562细胞(NK细胞特异性靶细胞)混合作为实验孔，另设自然释放孔(无淋巴细胞孔)。加入小牛血清0.1 ml，置5%CO2孵箱内，37℃，48 h后分别收集各孔内细胞，冲洗后经液闪计数器测定未被杀灭的K562细胞内3H-胸腺嘧啶的每分钟脉冲数(min-1)，以此观察NK细胞的活性。观察结果按下列公式计算：
, http://www.100md.com
1.2.3 T淋巴细胞亚群的检测 将制备的淋巴细胞分装于三支试管内，分别加入T3、T4和T8吸附于绵羊红细胞表面的抗人T细胞单克隆抗体(武汉生物制品研究所)，加入梅格氏染液染色及姬姆萨氏液复染后镜检。观察标准：以三个以上绵羊红细胞吸附的T细胞为阳性细胞，以阳性细胞占200个细胞的百分数表示，以OKT系列定名。
1.3 统计方法 t检验及方差分析。
2 结果
2.1 良、恶性患者腹水或腹腔液中NK细胞活性 卵巢恶性肿瘤组NK细胞活性显著低于妇科良性疾病组(P<0.01)。
2.2 良、恶性患者腹水或腹腔液中T淋巴细胞亚群 与妇科良性疾病患者比较，卵巢恶性肿瘤患者OKT4 细胞显著减少(P<0.05)，而OKT8细胞显著增多(P<0.05)，OKT4/OKT8比值显著减小(P<0.05)。
, 百拇医药
2.3 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与组织学类型的关系 上皮性卵巢癌、生殖细胞肿瘤、性索间质肿瘤及非特异性肿瘤患者NK细胞活性分别为(29.33±3.1)%，(26.88±2.9)%、(27.21±3.6)%及(25.87±2.2)% ，各组之间无显著差异(P>0.05)。各组织学类型之间OKT4细胞、OKT8细胞及OKT4/OKT8比率也无显著差异(P>0.05)。
2.4 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与肿瘤细胞分化程度的关系Ⅰ～Ⅱ级、Ⅱ～Ⅲ级NK细胞活性分别为(29.72±2.9)%、(27.39±2.3)%，两组之间无显著差异(P>0.05)。两组之间OKT4细胞、OKT8细胞及OKT4/OKT8比率也无显著差异(P>0.05)。
2.5 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与临床分期的关系Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期患者NK细胞活性有显著差异(P<0.01) ，随着临床分期增加，NK细胞活性降低。各期之间OKT4细胞、OKT8细胞及OKT4/OKT8比率均有显著差异异(P<0.01)，随着临床分期增加，OKT4细胞减少,OKT8细胞增多,OKT4/OKT8比率减小。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫功能的改变 自然杀伤细胞(NK细胞)是一种广谱的非特异性的肿瘤免疫细胞，它可以不经致敏也不需要补体的协助，反应迅速地抑制和杀灭肿瘤细胞[2]，经淋巴因子作用后，能表现出更强的杀肿瘤特性[1]。因此，NK细胞在抗肿瘤作用中占有重要的地位。与NK细胞不同，T淋巴细胞需致敏后对肿瘤细胞具有特异性的杀伤作用，在T淋巴细胞亚群内，OKT4细胞主要为具有杀伤作用的T细胞，OKT8细胞主要为抑制作用的T细胞，机体的免疫状况取决于T淋巴细胞各亚群的相对分布及比例[3]。只有在OKT4与OKT8保持正常比例时，才能发挥正常的抗肿瘤作用，故检测患者外周血OKT4、OKT8及OKT4/OKT8是评价患者免疫功能状况的一种较准确的方法[4]。本研究结果表明，卵巢恶性肿瘤患者腹水NK细胞活性显著降低，且OKT4细胞减少，OKT8细胞增多，OKT4/OKT8比值减小，提示卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内的免疫状况是低下的，因而降低了患者局部对肿瘤细胞的免疫力，使肿瘤得以持续增长。由于卵巢恶性肿瘤主要的转移途径是盆腹腔种植，占各种转移途径的78.8%，而盆腹腔内免疫功能低下可能是导致肿瘤发生盆腹腔的种植转移的重要因素，但导致其患者盆腹腔免疫功能低下的原因尚未阐明。有文献报道卵巢恶性肿瘤患者腹水中存在一种免疫抑制因子，它可抑制NK细胞活性，并且与外周血T淋巴细胞亚群的变化关系密切[5]，它可能是导致其免疫功能低下的因素之一。而此免疫抑制因子可能是由肿瘤细胞分泌的[6] 。
, 百拇医药
3.2 测定卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的临床意义 本研究结果表明，卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与肿瘤的组织学类型、肿瘤细胞分化程度均无关，而与临床分期有关，临床分期越晚，其NK细胞活性越低，OKT4细胞越少，OKT8细胞越多，OKT4/OKT8比率越小，患者盆腹腔内的免疫功能越低。研究结果提示，卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内的免疫功能与自身体内的肿瘤负荷有关，即体内的肿瘤细胞越多，产生的免疫抑制因子也越多,患者局部的免疫功能就越低。故临床上施行卵巢恶性肿瘤减灭术，尽量减少肿瘤细胞负荷，使患者的免疫功能得以提高和恢复，有利于提高疗效和改善预后。因此，检测患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群，对于了解肿瘤患者机体的免疫状况、估计预后及监视复发，具有一定的临床价值，并为指导临床治疗提供理论依据
作者简介：周龙书,1959年出生,1994年毕业于中山医科大学;硕士,主治医师,电话86662205-53525
, 百拇医药
参考文献
1 Kane KL,Ashton FA,Schmitz JL et al.Determination of natural killer cell function by flow cytometry .Clin Diagn lab Immunol，1996，(31)3: 295
2 林飞卿，余传霖，何球藻.医学基础免疫学.上海医科大学出版社，1992.72～79
3 徐标秀.人类T辅助细胞和抑制细胞的研究近况.免疫学杂志，1986，2(3):208
4 粱连铸，顾美皎.卵巢恶性肿瘤患者细胞免疫状态的研究及临床价值.中华肿瘤杂志,1990,12(6):410
5 周龙书.卵巢恶性肿瘤腹水的免疫抑制作用与免疫功能关系探讨.解放军医学杂志，1995,6(3):209
6 Ousrud M.Immunosuppressive effects of peritoneal fluids from ovarian cancer patients.Gynecol Oncol,1986,23(3):316
(收稿日期：1998-05-06), 百拇医药
单位：广州军区广州总医院妇产科，广州，510010
关键词：卵巢恶性肿瘤；腹水；NK细胞活性；T淋巴细胞亚群
第一军医大学学报990409 摘要：目的 了解卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况的改变，并探讨其与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度以及临床分期的关系。方法 采用放射性同位素掺入法及OKT单克隆抗体分别检测卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及 T淋巴细胞亚群，并采用妇科良性肿瘤患者腹水或腹腔液作对照。结果 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性显著低于妇科良性肿瘤患者腹水或腹腔液组(P<0.01)，且OKT4细胞减少(P<0.05)，OKT8细胞增多(P<0.05)，OKT4/OKT8比值减小(P<0.05)。卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度均无关(P>0.05)，但与临床分期有关(P<0.05)。结论 卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况是低下的，且临床分期越晚，免疫功能越低。
, 百拇医药
中图分类号：Q571；Q461
Alterations of NK cell activity and T-lymphocyte subset in the ascites of the patients with ovarian malignant tumors
Zhou Longshu，Yang Ripu
(Department of Gynemetrics，General Hospital of Guangzhou Command，Guangzhou，510010)
Abstract：Objective To study the alterations of immune function of pelvic and peritoneal cavity in the patients with ovarian malignant tumors and to research the relationship between the alterations and histological types of the tumors，the differential degree of the tumor cells and clinical stage.Methods Using a radioisotope incorporation method and OKT monoclonal antibodies，NK cell activity and T-lymphocyte subset in ascites were detected in the patients with ovarian malignant tumors，and the results were compared with those of the patients with gynecologic benign tumors.Results NK cell activity in the ascites from the patients with ovarian malignant tumors were lower than that from the patients with gynecologic benign tumors (P<0.01).The OKT4 cells of the patients with ovarian cancer were decreased (P<0.01)，the OKT8 cells increased (P<0.01)，and the ratio of OKT4/OKT8 was reduced (P<0.05).There was no significant difference in the alterations of NK cell activity and T-lymphocyte subset among various histological types of the tumor (P>0.05).There was no difference among various differential degrees of the tumor (P>0.05).But the alterations of NK cell activity and T-lymphocyte subset were relative to the clinical stage (P<0.05).Conclusions The immune function of pelvic and peritoneal cavity in the patients with ovarian malignant tumors was lower.The later the clinical stage，the lower the immune function.
, 百拇医药
Key words：ovarian malignant tumor;ascites;NK cell activity;T-lymphocyte subsets
肿瘤免疫学的研究表明，肿瘤的发生发展与机体的免疫状况密切相关，特别与自然杀伤细胞(NK细胞)、T淋巴细胞功能有关[1]。由于卵巢恶性肿瘤极易发生盆腹腔内种植转移，且近年来对患者盆腹腔内局部免疫功能的改变研究较少，故作者分别采用放射性同位素掺入法及OKT单克隆抗体检测卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群，并采用妇科良性疾病患者腹水或腹腔液作对照，旨在了解卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况的改变，并探讨其与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度以及临床分期的关系。
1 病人与方法
1.1 研究对象 共收集卵巢恶性肿瘤合并腹水患者32例，其中包括上皮性卵巢癌13例，生殖细胞肿瘤 8例，性索间质肿瘤6例，非特异性肿瘤5例。细胞分化程度为Ⅰ～Ⅱ级14例，Ⅱ～Ⅲ级18例。Ⅰ期患者7例，Ⅱ期患者17例，Ⅲ～Ⅳ期患者8例。年龄19～72岁，平均年龄51.5岁。以30例各种妇科良性疾病患者作为对照组，其中卵巢良性肿瘤18例，子宫肌瘤12例，年龄20～69岁，平均年龄41.5岁。两组患者均有病理诊断，检测前均无化疗或放疗病史。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 细胞的收集与制备 于术中分别收集患者腹水或腹腔液20 ml，加入淋巴细胞分离液，离心2000 r/min，20 min，收集淋巴细胞，用Hanks液洗涤3次，调至细胞含量为5×108/L备用。
1.2.2 NK细胞活性测定 分别将已制备的淋巴细胞(含NK细胞)与经3H-胸腺嘧啶标记的K562细胞(NK细胞特异性靶细胞)混合作为实验孔，另设自然释放孔(无淋巴细胞孔)。加入小牛血清0.1 ml，置5%CO2孵箱内，37℃，48 h后分别收集各孔内细胞，冲洗后经液闪计数器测定未被杀灭的K562细胞内3H-胸腺嘧啶的每分钟脉冲数(min-1)，以此观察NK细胞的活性。观察结果按下列公式计算：
, http://www.100md.com
1.2.3 T淋巴细胞亚群的检测 将制备的淋巴细胞分装于三支试管内，分别加入T3、T4和T8吸附于绵羊红细胞表面的抗人T细胞单克隆抗体(武汉生物制品研究所)，加入梅格氏染液染色及姬姆萨氏液复染后镜检。观察标准：以三个以上绵羊红细胞吸附的T细胞为阳性细胞，以阳性细胞占200个细胞的百分数表示，以OKT系列定名。
1.3 统计方法 t检验及方差分析。
2 结果
2.1 良、恶性患者腹水或腹腔液中NK细胞活性 卵巢恶性肿瘤组NK细胞活性显著低于妇科良性疾病组(P<0.01)。
2.2 良、恶性患者腹水或腹腔液中T淋巴细胞亚群 与妇科良性疾病患者比较，卵巢恶性肿瘤患者OKT4 细胞显著减少(P<0.05)，而OKT8细胞显著增多(P<0.05)，OKT4/OKT8比值显著减小(P<0.05)。
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2.3 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与组织学类型的关系 上皮性卵巢癌、生殖细胞肿瘤、性索间质肿瘤及非特异性肿瘤患者NK细胞活性分别为(29.33±3.1)%，(26.88±2.9)%、(27.21±3.6)%及(25.87±2.2)% ，各组之间无显著差异(P>0.05)。各组织学类型之间OKT4细胞、OKT8细胞及OKT4/OKT8比率也无显著差异(P>0.05)。
2.4 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与肿瘤细胞分化程度的关系Ⅰ～Ⅱ级、Ⅱ～Ⅲ级NK细胞活性分别为(29.72±2.9)%、(27.39±2.3)%，两组之间无显著差异(P>0.05)。两组之间OKT4细胞、OKT8细胞及OKT4/OKT8比率也无显著差异(P>0.05)。
2.5 卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与临床分期的关系Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期患者NK细胞活性有显著差异(P<0.01) ，随着临床分期增加，NK细胞活性降低。各期之间OKT4细胞、OKT8细胞及OKT4/OKT8比率均有显著差异异(P<0.01)，随着临床分期增加，OKT4细胞减少,OKT8细胞增多,OKT4/OKT8比率减小。
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3 讨论
3.1 卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫功能的改变 自然杀伤细胞(NK细胞)是一种广谱的非特异性的肿瘤免疫细胞，它可以不经致敏也不需要补体的协助，反应迅速地抑制和杀灭肿瘤细胞[2]，经淋巴因子作用后，能表现出更强的杀肿瘤特性[1]。因此，NK细胞在抗肿瘤作用中占有重要的地位。与NK细胞不同，T淋巴细胞需致敏后对肿瘤细胞具有特异性的杀伤作用，在T淋巴细胞亚群内，OKT4细胞主要为具有杀伤作用的T细胞，OKT8细胞主要为抑制作用的T细胞，机体的免疫状况取决于T淋巴细胞各亚群的相对分布及比例[3]。只有在OKT4与OKT8保持正常比例时，才能发挥正常的抗肿瘤作用，故检测患者外周血OKT4、OKT8及OKT4/OKT8是评价患者免疫功能状况的一种较准确的方法[4]。本研究结果表明，卵巢恶性肿瘤患者腹水NK细胞活性显著降低，且OKT4细胞减少，OKT8细胞增多，OKT4/OKT8比值减小，提示卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内的免疫状况是低下的，因而降低了患者局部对肿瘤细胞的免疫力，使肿瘤得以持续增长。由于卵巢恶性肿瘤主要的转移途径是盆腹腔种植，占各种转移途径的78.8%，而盆腹腔内免疫功能低下可能是导致肿瘤发生盆腹腔的种植转移的重要因素，但导致其患者盆腹腔免疫功能低下的原因尚未阐明。有文献报道卵巢恶性肿瘤患者腹水中存在一种免疫抑制因子，它可抑制NK细胞活性，并且与外周血T淋巴细胞亚群的变化关系密切[5]，它可能是导致其免疫功能低下的因素之一。而此免疫抑制因子可能是由肿瘤细胞分泌的[6] 。
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3.2 测定卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的临床意义 本研究结果表明，卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与肿瘤的组织学类型、肿瘤细胞分化程度均无关，而与临床分期有关，临床分期越晚，其NK细胞活性越低，OKT4细胞越少，OKT8细胞越多，OKT4/OKT8比率越小，患者盆腹腔内的免疫功能越低。研究结果提示，卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内的免疫功能与自身体内的肿瘤负荷有关，即体内的肿瘤细胞越多，产生的免疫抑制因子也越多,患者局部的免疫功能就越低。故临床上施行卵巢恶性肿瘤减灭术，尽量减少肿瘤细胞负荷，使患者的免疫功能得以提高和恢复，有利于提高疗效和改善预后。因此，检测患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群，对于了解肿瘤患者机体的免疫状况、估计预后及监视复发，具有一定的临床价值，并为指导临床治疗提供理论依据
作者简介：周龙书,1959年出生,1994年毕业于中山医科大学;硕士,主治医师,电话86662205-53525
, 百拇医药
参考文献
1 Kane KL,Ashton FA,Schmitz JL et al.Determination of natural killer cell function by flow cytometry .Clin Diagn lab Immunol，1996，(31)3: 295
2 林飞卿，余传霖，何球藻.医学基础免疫学.上海医科大学出版社，1992.72～79
3 徐标秀.人类T辅助细胞和抑制细胞的研究近况.免疫学杂志，1986，2(3):208
4 粱连铸，顾美皎.卵巢恶性肿瘤患者细胞免疫状态的研究及临床价值.中华肿瘤杂志,1990,12(6):410
5 周龙书.卵巢恶性肿瘤腹水的免疫抑制作用与免疫功能关系探讨.解放军医学杂志，1995,6(3):209
6 Ousrud M.Immunosuppressive effects of peritoneal fluids from ovarian cancer patients.Gynecol Oncol,1986,23(3):316
(收稿日期：1998-05-06), 百拇医药