新型病毒TTV与乙型肝炎病毒混合感染的初步探讨*
作者：陈永鹏 章廉 卢桥生 骆抗先 冯筱榕
单位：第一军医大学南方医院感染内科，广州，510515
关键词：关键词：乙型肝炎病毒；TTV；混合感染
新型病毒TTV与乙型肝炎病毒混合感染的初步探讨 摘要：目的 了解新型肝炎病毒TTV与乙型肝炎病毒(HBV)混合感染对肝脏病变及HBV复制状态的影响。方法 套式聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清TTV DNA并对检测结果和临床资料进行统计学分析。结果 177例慢性HBV感染者中32例TTV DNA阳性，阳性率18.1%；其中无症状携带者5/52(9.6%)，慢性肝炎7/46(15.2%)，重型肝炎9/39(23.1%)，活动性肝硬化9/40(22.5%)，各组间无统计学差异；在慢性肝炎、重型肝炎及活动性肝硬化病人中，TTV阳性者与TTV阴性者的各项肝功能指标及血清HBeAg阳性率无统计学差异；但HBV、TTV混合感染的重型肝炎死亡率较高，具有统计学意义。结论 TTV混合感染似乎不影响HBV所致的肝脏病变及其复制状态，但可能影响重型肝炎的预后。
, http://www.100md.com
中图分类号：R511
Clinical analysis of transfusion transmitted virus co-infection in hepatitis B virus infected patients
Chen Yongpeng，Zhang Lian，Lu Qiaosheng，Luo Kangxian，Feng Xiaorong
(Department of Infectious Disease，Nanfang Hospital，First Military Medical University，Guangzhou，510515)
Abstract：Objective Recently，a novel DNA virus (transfusion-transmitted virus，TTV) was found in the cryptogenic hepatitis patients.The aim of this study was to find out the influence of TTV co-infection on the pathological process and virus replication in hepatitis B virus-infected patients.Methods Serum TTV DNA was tested by nested PCR，and the results and clinical data were statistically analyzed.Results Of 177 hepatitis B virus-infected patients，32(18.1%) were co-infected with TTV.Among them，5/52 (9.6%) asymptotic carriers，7/46 (15.2%) patients with chronic hepatitis B，9/40(22.5%) with active liver cirrhosis，and 9/39 (23.1%) with fulminant hepatitis were TTV positive，but there was no statistical difference between the groups (X2=5.997，0.10
Key words：hepatitis B virus;TTV;co-infection
TTV是最近日本和国内学者在部分病原不明的急性肝炎中发现的一类新型DNA病毒，可能是一种新的肝炎病毒[1-3]，对肝脏有致病可能性。为了解乙型肝炎病毒(HBV)混合感染TTV后对肝脏病变的影响，我们调查了177例慢性HBV感染者的TTV感染情况，并对HBV感染以及TTV、HBV混合感染导致的肝病患者的病情进行比较分析，现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象 177例HBV感染者均为本院近5年内的住院或门诊病人，其中无症状携带者(ASC)52例，慢性乙型肝炎(CHB)46例，重型乙型肝炎(FH)39例，活动性肝硬化(ALC)40例，诊断符合1995年5月北京第五次全国传染病与寄生虫病会议修订的病毒性肝炎诊断标准[4]，所有病人除HBV感染标志物阳性外，均排除其他已知肝炎病毒感染可能性。
, http://www.100md.com
1.2 试剂来源 Taq酶、dNTP均购自加拿大Genda公司，PCR引物由上海生物工程有限公司合成。
1.3 套式聚合酶链反应(PCR)检测TTV DNA DNA抽提：血清100 μl以蛋白酶K和十二烷基磺酸钠(SDS)裂解病毒，70 °C消化1 h，苯酚、氯仿抽提。PCR反应：按Okamoto等[2]报道的TTV DNA全基因序列设计引物：外引物576: 5'-GAG-ATAGAGCACCATGGCCT-3'，1305c: 5' -CACCAT-GTCACAAAGATCTG-3' ；内引物634: 5'-TGG-AGACGCAGACCATGGAG-3'，1264c: 5'-TGAA-CATTCTTGGTGCCCCT-3'。常规加模板、dNTP和Taq酶，94°C预变性150 s，按下列参数进行35次PCR循环：94°C45 s，54°C45 s，72°C60 s，最后一次循环72°C420 s；取第二轮PCR产物10°l在2%琼脂糖凝胶电泳，出现631 bp电泳带为阳性。阳性对照为质粒TTV DNA，同时设阴性对照。
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2 结果
2.1 血清TTV DNA检测结果 经套式PCR检测，TTV DNA阳性血清出现631bp电泳带，阴性血清未出现类似电泳带(图1)
图1 套式PCR检测TTV DNA电泳图
Fig.1 Electrophoresis of TTV DNA tested by nest PCR
M:Marker;1: Plasmid TTV DNA;2:Negative control;3,4:Positive samples
2.2 各类HBV感染者TTV感染率 177例HBV感染者血清共检出30例TTV DNA阳性，阳性率16.9%，其中ASC 5/52例(9.6%)、CHB 7/46例(15.2%)、ALC 9/40例(22.5%)、FH 9/39例 (23.1%)，各组间TTV检出率无统计学差异(X2=5.997、0.10
2.3 慢性肝病HBV感染与TTV、HBV混合感染的肝功能比较(表1～3) 经统计学t检验，HBV感染与HBV、TTV混合感染病人的肝功能指标(包括血清ALT、AST、蛋白A/G比值、总胆红素及凝血酶原时间)均无统计学差异。
表1 39例HBV感染与7例TTV、HBV混合感染所致慢性肝炎的肝功能比较
Tab.1 Comparison of liver function test between chronic hepatitis patientswith HBV infection and co-infection of TTV and HBV
Liver function test
HBV infection (n=39)
Co-infection (n=7)
, 百拇医药
t value
P value
ALT(U/L)
347.0±286.5
282.3±230.2
0.523
>0.50
AST(U/L)
199.9±171.8
140.8±105.3
0.742
>0.20
, 百拇医药
Protein A/G
1.240±0.276
1.255±0.123
0.140
>0.50
TBil(μmol/L)
34.06±30.64
22.82±9.30
0.883
>0.20
PT(s)
17.68±5.45
, http://www.100md.com
15.63±1.53
0.783
>0.20
PT: prothrombin time，Tbil: Total bilirubm
表2 31例HBV感染与9例TTV、HBV混合感染所致活动性肝硬化的肝功能比较
Tab.2 Comparison of liver function test between active liver cirrhosis patients with HBV infection and co-infection of TTV and HBV
Liver function test
, 百拇医药 HBV infection (n=31)
Co-infection (n=9)
t value
P value
ALT(U/L)
84.09±80.3
51.0±29.7
0.987
>0.20
AST(U/L)
144.3±120.3
119.3±117.3
, http://www.100md.com
0.497
>0.50
Protein A/G
0.764±0.195
0.758±0.173
0.083
>0.50
TBil(μmol/L)
119.3±113.4
116.5±103.7
0.071
>0.50
, 百拇医药
PT(s)
26.12±9.75
25.12±5.62
0.292
>0.50
表3 30例HBV感染与9例TTV、HBV混合感染所致重型肝炎的肝功能比较
Tab.3 comparison of liver function test between fulminant hepatitis patients with HBV infection and co-infection of TTV and HBV
Liver function test
, 百拇医药
HBV infection (n=30)
Co-infection (n=9)
t value
P value
ALT(U/L)
172.6±162.6
141.3±139.4
0.543
>0.50
ASP(U/L)
123.3±132.2
, http://www.100md.com
176.3±78.3
0.272
>0.50
Prktein A/G
0.912±0.253
0.847±0.252
0.719
>0.20
TBil(μmol/L)
486.3±147.7
508.0±117.0
0.435
, http://www.100md.com
>0.50
PT(s)
38.19±14.08
41.16±13.47
0.576
>0.50
2.4 慢性肝病HBV、TTV混合感染对HBeAg表达的影响 HBV感染者与HBV、TTV混合感染者的血清HBeAg阳性率分别为47/98(48.0%)、15/27(55.6%)，两者无统计学差异(X2=0.489，P>0.25)。
2.5 HBV、TTV混合感染对重型乙型肝炎预后的影响 39例FH病人中9例因治疗效果差或其他原因而自动出院，在完成治疗的30例患者中，HBV、TTV混合感染者病死率高于HBV感染者，分别为6/8例(62.5%)、6/22例(27.3%)，两者经四格表的确切概率法检验有统计学意义(P=0.038)。
, 百拇医药
3 讨论
甲～戊型肝炎病毒特异性检测手段的逐步建立使大部分肝炎病人得以确诊，但目前仍有慢性肝病缺乏甲～戊型肝炎病毒感染标志[5]，许多暴发性肝衰竭也无病毒感染标志[6]；庚型肝炎病毒(HGV)部分地解释了非甲～戊型肝炎的病因，但其感染更多地发生于HBV或HCV感染患者[7]，且对肝脏的致病性尚未得到证实，提示尚有甲～戊、庚型肝炎病毒以外的病毒引起急、慢性肝炎。最近，日本学者在输血后肝炎患者中发现了一种输血传播DNA病毒(TTV)[1,2]，国内也报道了一次可能由TTV引起的肝炎流行[3]。我们在17/44例病原不明肝炎患者血清中检出TTV[8]，提示TTV可能对肝脏致病。
既往的文献多数认为，在HBV感染的基础上重叠感染其他肝炎病毒将使原有病情加重，病死率升高，同时抑制HBV病毒复制[9]。然而，我们的研究结果表明TTV混合感染似乎并不影响肝脏病变及HBV复制和表达状态。尽管在HBV感染者中部分混合感染TTV，且随着病情的加重，混合感染率逐渐增高，但无统计学意义。在CHB、ALC及FH病人中，各项肝功能指标(包括血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、蛋白A/G比值、总胆红素及凝血酶原时间)均无统计学差异，提示TTV混合感染并不影响肝功能状态。其肝脏致病性尚待证实，可能是HBV感染的伴行者，但可能影响FH病人的预后。在FH病人中，HBV、TTV混合感染病人的病死率明显高于单纯HBV感染者，两者存在统计学差异。此外，HBV与TTV混合感染时，其血清HBeAg阳性率与单纯HBV感染无统计学差异，提示TTV的混合感染也不影响HBV的复制和抗原表达。
, 百拇医药
*军队医学卫生科研基金九五重点项目资助(98z073)
作者简介：陈永鹏,男,1968年出生,1993年毕业于第一军医大学,医师,电话85147303
参考文献
1 Nishizawa T，Okamoto H，Konishi K et al.A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in post-transfusion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophy Res Commun，1997，241:92
2 Okamoto H，Nishizawa T，Kato N et al.Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus (TTV) associated with post-transfusion hepatitis of unknown etiology.Hepatol Res，1998,10:1
, http://www.100md.com
3 骆抗先，章 廉，王珊珊等.一种新型肠传性病毒性肝炎的流行病学、临床、病理和病毒学的初步研究.第一军医大学学报,1998,18(2):87
4 病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病学杂志.1995,13:241
5 Kodali VP，Gordon SC，Silverman AL et al.Cryptogenic liver disease in the United States: further evidence for non-A，non-B，non-C hepatitis.Am J Gastroenterol，1994，89:1836
6 Wright TL.Etiology of fulminant hepatic falure: is another virus involved? Gastroenterology，1993，104:640
7 Miyakawa Y，Mayumi M.Hepatitis G virus-A true hepatitis virus or an accidental tourist? N Engl J Med，1997，336:786
8 陈永鹏,章 廉,卢桥生等.新型病毒TTV感染的初步探讨.中华实验和临床病毒学杂志,1999,13(3):排印中
9 骆抗先.肝炎病毒的混合感染.见:骆抗先编著.乙型肝炎：基础与临床.北京:人民卫生出版社,1997.276
(收稿日期：1998-08-04), 百拇医药
单位：第一军医大学南方医院感染内科，广州，510515
关键词：关键词：乙型肝炎病毒；TTV；混合感染
新型病毒TTV与乙型肝炎病毒混合感染的初步探讨 摘要：目的 了解新型肝炎病毒TTV与乙型肝炎病毒(HBV)混合感染对肝脏病变及HBV复制状态的影响。方法 套式聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清TTV DNA并对检测结果和临床资料进行统计学分析。结果 177例慢性HBV感染者中32例TTV DNA阳性，阳性率18.1%；其中无症状携带者5/52(9.6%)，慢性肝炎7/46(15.2%)，重型肝炎9/39(23.1%)，活动性肝硬化9/40(22.5%)，各组间无统计学差异；在慢性肝炎、重型肝炎及活动性肝硬化病人中，TTV阳性者与TTV阴性者的各项肝功能指标及血清HBeAg阳性率无统计学差异；但HBV、TTV混合感染的重型肝炎死亡率较高，具有统计学意义。结论 TTV混合感染似乎不影响HBV所致的肝脏病变及其复制状态，但可能影响重型肝炎的预后。
, http://www.100md.com
中图分类号：R511
Clinical analysis of transfusion transmitted virus co-infection in hepatitis B virus infected patients
Chen Yongpeng，Zhang Lian，Lu Qiaosheng，Luo Kangxian，Feng Xiaorong
(Department of Infectious Disease，Nanfang Hospital，First Military Medical University，Guangzhou，510515)
Abstract：Objective Recently，a novel DNA virus (transfusion-transmitted virus，TTV) was found in the cryptogenic hepatitis patients.The aim of this study was to find out the influence of TTV co-infection on the pathological process and virus replication in hepatitis B virus-infected patients.Methods Serum TTV DNA was tested by nested PCR，and the results and clinical data were statistically analyzed.Results Of 177 hepatitis B virus-infected patients，32(18.1%) were co-infected with TTV.Among them，5/52 (9.6%) asymptotic carriers，7/46 (15.2%) patients with chronic hepatitis B，9/40(22.5%) with active liver cirrhosis，and 9/39 (23.1%) with fulminant hepatitis were TTV positive，but there was no statistical difference between the groups (X2=5.997，0.10
Key words：hepatitis B virus;TTV;co-infection
TTV是最近日本和国内学者在部分病原不明的急性肝炎中发现的一类新型DNA病毒，可能是一种新的肝炎病毒[1-3]，对肝脏有致病可能性。为了解乙型肝炎病毒(HBV)混合感染TTV后对肝脏病变的影响，我们调查了177例慢性HBV感染者的TTV感染情况，并对HBV感染以及TTV、HBV混合感染导致的肝病患者的病情进行比较分析，现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象 177例HBV感染者均为本院近5年内的住院或门诊病人，其中无症状携带者(ASC)52例，慢性乙型肝炎(CHB)46例，重型乙型肝炎(FH)39例，活动性肝硬化(ALC)40例，诊断符合1995年5月北京第五次全国传染病与寄生虫病会议修订的病毒性肝炎诊断标准[4]，所有病人除HBV感染标志物阳性外，均排除其他已知肝炎病毒感染可能性。
, http://www.100md.com
1.2 试剂来源 Taq酶、dNTP均购自加拿大Genda公司，PCR引物由上海生物工程有限公司合成。
1.3 套式聚合酶链反应(PCR)检测TTV DNA DNA抽提：血清100 μl以蛋白酶K和十二烷基磺酸钠(SDS)裂解病毒，70 °C消化1 h，苯酚、氯仿抽提。PCR反应：按Okamoto等[2]报道的TTV DNA全基因序列设计引物：外引物576: 5'-GAG-ATAGAGCACCATGGCCT-3'，1305c: 5' -CACCAT-GTCACAAAGATCTG-3' ；内引物634: 5'-TGG-AGACGCAGACCATGGAG-3'，1264c: 5'-TGAA-CATTCTTGGTGCCCCT-3'。常规加模板、dNTP和Taq酶，94°C预变性150 s，按下列参数进行35次PCR循环：94°C45 s，54°C45 s，72°C60 s，最后一次循环72°C420 s；取第二轮PCR产物10°l在2%琼脂糖凝胶电泳，出现631 bp电泳带为阳性。阳性对照为质粒TTV DNA，同时设阴性对照。
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2 结果
2.1 血清TTV DNA检测结果 经套式PCR检测，TTV DNA阳性血清出现631bp电泳带，阴性血清未出现类似电泳带(图1)
图1 套式PCR检测TTV DNA电泳图
Fig.1 Electrophoresis of TTV DNA tested by nest PCR
M:Marker;1: Plasmid TTV DNA;2:Negative control;3,4:Positive samples
2.2 各类HBV感染者TTV感染率 177例HBV感染者血清共检出30例TTV DNA阳性，阳性率16.9%，其中ASC 5/52例(9.6%)、CHB 7/46例(15.2%)、ALC 9/40例(22.5%)、FH 9/39例 (23.1%)，各组间TTV检出率无统计学差异(X2=5.997、0.10
2.3 慢性肝病HBV感染与TTV、HBV混合感染的肝功能比较(表1～3) 经统计学t检验，HBV感染与HBV、TTV混合感染病人的肝功能指标(包括血清ALT、AST、蛋白A/G比值、总胆红素及凝血酶原时间)均无统计学差异。
表1 39例HBV感染与7例TTV、HBV混合感染所致慢性肝炎的肝功能比较
Tab.1 Comparison of liver function test between chronic hepatitis patientswith HBV infection and co-infection of TTV and HBV
Liver function test
HBV infection (n=39)
Co-infection (n=7)
, 百拇医药
t value
P value
ALT(U/L)
347.0±286.5
282.3±230.2
0.523
>0.50
AST(U/L)
199.9±171.8
140.8±105.3
0.742
>0.20
, 百拇医药
Protein A/G
1.240±0.276
1.255±0.123
0.140
>0.50
TBil(μmol/L)
34.06±30.64
22.82±9.30
0.883
>0.20
PT(s)
17.68±5.45
, http://www.100md.com
15.63±1.53
0.783
>0.20
PT: prothrombin time，Tbil: Total bilirubm
表2 31例HBV感染与9例TTV、HBV混合感染所致活动性肝硬化的肝功能比较
Tab.2 Comparison of liver function test between active liver cirrhosis patients with HBV infection and co-infection of TTV and HBV
Liver function test
, 百拇医药 HBV infection (n=31)
Co-infection (n=9)
t value
P value
ALT(U/L)
84.09±80.3
51.0±29.7
0.987
>0.20
AST(U/L)
144.3±120.3
119.3±117.3
, http://www.100md.com
0.497
>0.50
Protein A/G
0.764±0.195
0.758±0.173
0.083
>0.50
TBil(μmol/L)
119.3±113.4
116.5±103.7
0.071
>0.50
, 百拇医药
PT(s)
26.12±9.75
25.12±5.62
0.292
>0.50
表3 30例HBV感染与9例TTV、HBV混合感染所致重型肝炎的肝功能比较
Tab.3 comparison of liver function test between fulminant hepatitis patients with HBV infection and co-infection of TTV and HBV
Liver function test
, 百拇医药
HBV infection (n=30)
Co-infection (n=9)
t value
P value
ALT(U/L)
172.6±162.6
141.3±139.4
0.543
>0.50
ASP(U/L)
123.3±132.2
, http://www.100md.com
176.3±78.3
0.272
>0.50
Prktein A/G
0.912±0.253
0.847±0.252
0.719
>0.20
TBil(μmol/L)
486.3±147.7
508.0±117.0
0.435
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>0.50
PT(s)
38.19±14.08
41.16±13.47
0.576
>0.50
2.4 慢性肝病HBV、TTV混合感染对HBeAg表达的影响 HBV感染者与HBV、TTV混合感染者的血清HBeAg阳性率分别为47/98(48.0%)、15/27(55.6%)，两者无统计学差异(X2=0.489，P>0.25)。
2.5 HBV、TTV混合感染对重型乙型肝炎预后的影响 39例FH病人中9例因治疗效果差或其他原因而自动出院，在完成治疗的30例患者中，HBV、TTV混合感染者病死率高于HBV感染者，分别为6/8例(62.5%)、6/22例(27.3%)，两者经四格表的确切概率法检验有统计学意义(P=0.038)。
, 百拇医药
3 讨论
甲～戊型肝炎病毒特异性检测手段的逐步建立使大部分肝炎病人得以确诊，但目前仍有慢性肝病缺乏甲～戊型肝炎病毒感染标志[5]，许多暴发性肝衰竭也无病毒感染标志[6]；庚型肝炎病毒(HGV)部分地解释了非甲～戊型肝炎的病因，但其感染更多地发生于HBV或HCV感染患者[7]，且对肝脏的致病性尚未得到证实，提示尚有甲～戊、庚型肝炎病毒以外的病毒引起急、慢性肝炎。最近，日本学者在输血后肝炎患者中发现了一种输血传播DNA病毒(TTV)[1,2]，国内也报道了一次可能由TTV引起的肝炎流行[3]。我们在17/44例病原不明肝炎患者血清中检出TTV[8]，提示TTV可能对肝脏致病。
既往的文献多数认为，在HBV感染的基础上重叠感染其他肝炎病毒将使原有病情加重，病死率升高，同时抑制HBV病毒复制[9]。然而，我们的研究结果表明TTV混合感染似乎并不影响肝脏病变及HBV复制和表达状态。尽管在HBV感染者中部分混合感染TTV，且随着病情的加重，混合感染率逐渐增高，但无统计学意义。在CHB、ALC及FH病人中，各项肝功能指标(包括血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、蛋白A/G比值、总胆红素及凝血酶原时间)均无统计学差异，提示TTV混合感染并不影响肝功能状态。其肝脏致病性尚待证实，可能是HBV感染的伴行者，但可能影响FH病人的预后。在FH病人中，HBV、TTV混合感染病人的病死率明显高于单纯HBV感染者，两者存在统计学差异。此外，HBV与TTV混合感染时，其血清HBeAg阳性率与单纯HBV感染无统计学差异，提示TTV的混合感染也不影响HBV的复制和抗原表达。
, 百拇医药
*军队医学卫生科研基金九五重点项目资助(98z073)
作者简介：陈永鹏,男,1968年出生,1993年毕业于第一军医大学,医师,电话85147303
参考文献
1 Nishizawa T，Okamoto H，Konishi K et al.A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in post-transfusion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophy Res Commun，1997，241:92
2 Okamoto H，Nishizawa T，Kato N et al.Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus (TTV) associated with post-transfusion hepatitis of unknown etiology.Hepatol Res，1998,10:1
, http://www.100md.com
3 骆抗先，章 廉，王珊珊等.一种新型肠传性病毒性肝炎的流行病学、临床、病理和病毒学的初步研究.第一军医大学学报,1998,18(2):87
4 病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病学杂志.1995,13:241
5 Kodali VP，Gordon SC，Silverman AL et al.Cryptogenic liver disease in the United States: further evidence for non-A，non-B，non-C hepatitis.Am J Gastroenterol，1994，89:1836
6 Wright TL.Etiology of fulminant hepatic falure: is another virus involved? Gastroenterology，1993，104:640
7 Miyakawa Y，Mayumi M.Hepatitis G virus-A true hepatitis virus or an accidental tourist? N Engl J Med，1997，336:786
8 陈永鹏,章 廉,卢桥生等.新型病毒TTV感染的初步探讨.中华实验和临床病毒学杂志,1999,13(3):排印中
9 骆抗先.肝炎病毒的混合感染.见:骆抗先编著.乙型肝炎：基础与临床.北京:人民卫生出版社,1997.276
(收稿日期：1998-08-04), 百拇医药