浅谈EB病毒抗体检测的质量控制和检测方法的改良
作者：梁新强
单位：广西肿瘤防治研究所(南宁市530021)
关键词：
医学文选990479
EB病毒抗体检测已常规应用于鼻咽癌的检查和早期诊断[1]，近几年来，我们应用免疫酶法检测EB病毒VCA-IgA抗体[2]，共检测了两万多人次，由于细胞片的制作、运输等原因，以及技术操作所造成的误差，常常会造成一些结果判断上的错误，有时还会出现不同时间对同一份标本的检测结果有差异的问题，甚至还相差很远。本人在工作中摸索出一套效果较好的检验方法，对检测结果出现的偏差及时进行了修正，提高了检测结果的准确率，今报告如下。
1 细胞片的染色及阳性对照
1.1 细胞片染色太浅甚至不着色措施 检测未治鼻咽癌患者血清，细胞片染色后，镜下发现背景很光亮，细胞浅黄色甚至无色，常常被误判为弱阳性或阴性，这时可以适当延长酶标的作用时间和染色时间(冬季应在37℃的水浴箱中染色)，减少新鲜H2O2的量，每20ml的Tris-Hcl溶液加1～1.5滴H2O2，这时就会发现细胞着色加深，阴阳细胞容易区别，阳性者比原来提高1～2个滴度，甚至更高。
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1.2 细胞片染色太深的修正 有些细胞片在镜下发现背景是一片黄色，全部的细胞均染上黄色，边缘更深，常被误判为强阳性。其实此时的阳性细胞应为黄-棕黄色，而且很均匀，阴性细胞虽也染成黄色，但不均匀，中间较边缘浅。染色太深一般是由于硒试剂过量造成，只要注意控制就可以避免，还有在配染色液时，应待硒试剂完全溶解后再加H2O2，否则染色液容易发黑，染色效果也会出现上述情况，这点也应注意。
1.3 阳性对照 EB病毒抗体检测结果出现的偏差，也可以由试剂本身引起[3]，所以做好阳性对照是非常必要的，每一次实验，都应该用已知滴度的血清做对照，如果阳性对照的滴度与原来一致或相差不大于一个滴度，则认为本次实验结果可靠，否则需要重做。在科研工作中，追踪同一批人群的EB病毒抗体变动时，应对采集的不同时期的血清保存起来，使用同一批号的试剂，在认真做好阳性对照的情况下同时进行检测，这样，对比同一人群前后的EB病毒抗体水平，就更科学了。
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2 微量法的改良及其意义
目前EB病毒抗体的检测标本采用静脉血清，有人使用末梢血。但我们发现，用小园滤纸片吸取末梢血，检测前用少许生理盐水或PBS缓冲液溶解，按静脉血清法检测。其缺点是无法判断滴度，只能检测阴阳性，而且标本在常温下放置到第3天阳性消失。但如果用微细塑料管吸取末梢血1～2滴，用火封闭后备测，其结果与静脉血清结果相近，可以测定滴度，常温下保存时间长，抗体不易丢失(常温下标本保存至第5天，滴度变化甚微)，方便了标本的携带。我们曾用此法由当地卫生人员采血，通过邮局邮寄标本到我们实验室进行检测，效果理想，共查出了3例早期鼻咽癌患者。如果此方法得到推广应用，将会大大地方便各地特别是一些边远山区的群众，对防癌普查工作具有非常实用的价值。
参考文献
1 曾 毅.NPC的检测和早期诊断.中华耳鼻喉科杂志，1987，22：145
2 刘育希，曾 毅，董文平.应用免酶法测定NPC病人的IgA抗体.中华肿瘤杂志，1979，1：8
3 梁新强.EB病毒VCA-IgA抗体检测结果与试剂相关性研究.医学文选，1999，18(2)：131～133, http://www.100md.com
单位：广西肿瘤防治研究所(南宁市530021)
关键词：
医学文选990479
EB病毒抗体检测已常规应用于鼻咽癌的检查和早期诊断[1]，近几年来，我们应用免疫酶法检测EB病毒VCA-IgA抗体[2]，共检测了两万多人次，由于细胞片的制作、运输等原因，以及技术操作所造成的误差，常常会造成一些结果判断上的错误，有时还会出现不同时间对同一份标本的检测结果有差异的问题，甚至还相差很远。本人在工作中摸索出一套效果较好的检验方法，对检测结果出现的偏差及时进行了修正，提高了检测结果的准确率，今报告如下。
1 细胞片的染色及阳性对照
1.1 细胞片染色太浅甚至不着色措施 检测未治鼻咽癌患者血清，细胞片染色后，镜下发现背景很光亮，细胞浅黄色甚至无色，常常被误判为弱阳性或阴性，这时可以适当延长酶标的作用时间和染色时间(冬季应在37℃的水浴箱中染色)，减少新鲜H2O2的量，每20ml的Tris-Hcl溶液加1～1.5滴H2O2，这时就会发现细胞着色加深，阴阳细胞容易区别，阳性者比原来提高1～2个滴度，甚至更高。
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1.2 细胞片染色太深的修正 有些细胞片在镜下发现背景是一片黄色，全部的细胞均染上黄色，边缘更深，常被误判为强阳性。其实此时的阳性细胞应为黄-棕黄色，而且很均匀，阴性细胞虽也染成黄色，但不均匀，中间较边缘浅。染色太深一般是由于硒试剂过量造成，只要注意控制就可以避免，还有在配染色液时，应待硒试剂完全溶解后再加H2O2，否则染色液容易发黑，染色效果也会出现上述情况，这点也应注意。
1.3 阳性对照 EB病毒抗体检测结果出现的偏差，也可以由试剂本身引起[3]，所以做好阳性对照是非常必要的，每一次实验，都应该用已知滴度的血清做对照，如果阳性对照的滴度与原来一致或相差不大于一个滴度，则认为本次实验结果可靠，否则需要重做。在科研工作中，追踪同一批人群的EB病毒抗体变动时，应对采集的不同时期的血清保存起来，使用同一批号的试剂，在认真做好阳性对照的情况下同时进行检测，这样，对比同一人群前后的EB病毒抗体水平，就更科学了。
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2 微量法的改良及其意义
目前EB病毒抗体的检测标本采用静脉血清，有人使用末梢血。但我们发现，用小园滤纸片吸取末梢血，检测前用少许生理盐水或PBS缓冲液溶解，按静脉血清法检测。其缺点是无法判断滴度，只能检测阴阳性，而且标本在常温下放置到第3天阳性消失。但如果用微细塑料管吸取末梢血1～2滴，用火封闭后备测，其结果与静脉血清结果相近，可以测定滴度，常温下保存时间长，抗体不易丢失(常温下标本保存至第5天，滴度变化甚微)，方便了标本的携带。我们曾用此法由当地卫生人员采血，通过邮局邮寄标本到我们实验室进行检测，效果理想，共查出了3例早期鼻咽癌患者。如果此方法得到推广应用，将会大大地方便各地特别是一些边远山区的群众，对防癌普查工作具有非常实用的价值。
参考文献
1 曾 毅.NPC的检测和早期诊断.中华耳鼻喉科杂志，1987，22：145
2 刘育希，曾 毅，董文平.应用免酶法测定NPC病人的IgA抗体.中华肿瘤杂志，1979，1：8
3 梁新强.EB病毒VCA-IgA抗体检测结果与试剂相关性研究.医学文选，1999，18(2)：131～133, http://www.100md.com