血吸虫病肝纤维化兔血浆肿瘤坏死因子水平的动态变化
作者：彭雁忠 詹春华 黄其通 邓 斌 杨丽华
单位：湖北医科大学附属第一医院(武汉 430060)
关键词：肝硬化；血吸虫病；肿瘤坏死因子
湖南医学/990407 摘 要 【目的】研究兔血吸虫病肝纤维化时血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)的动态变化。【方法】将36只家兔随机分为正常组、感染组。于感染尾蚴后第70,100,130 d，每组随机选6只取血和肝，进行免疫、生化、病理观察。【结果】感染组血浆TNF-α、透明质酸(HA)、肝组织羟脯氨酸(HYP)、肝胶原纤维含量、肝胶原纤维分布面积百分比均显著高于正常组(P<0.01)，血浆TNF-α与血浆HA、肝组织HYP、肝胶原纤维含量、肝胶原纤维分布面积百分比均呈正相关关系。【结论】TNF-α参与了血吸虫病肝纤维化的形成过程。
Dynamic Observation on the Levels of Tumor Necrosis Factor in Plasma of Rabbits with Schistosomatic Liver Fibrosis
, 百拇医药
PENG Yanzhong,ZHAN Chunhua,HUANG Qitong,et al
The First Affiliated Hospital,Hubei Medical University,Wuhan,430060
Abstract 【Objective】To Observe the dynamic changes of plasma tumors necrosis factor (TNF-α) levels in rabbits with schistosomatic liver fibrosis.【Methods】Thirty-sixty domestic rabbits were randomly and equally divided into normal group and infected group .On the 70th,100th,130th day after infection with cercariae, 6 rabbits were taken randomly from each group and killed. Their blood and liver tissues were collected for immunological,biochemical and pathological observation.【Results】The plasma levels of TNF-α and hyaluronic acid(HA),the hepatic contents of hydroxyproline (HYP)and collagenic fiber and the area percentages of liver collagenic fiber distribution in infected group were dramatically higher than those of normal group(P<0.01)，the plasma level of TNF-α was positively correlated to plasma level of HA and other 3 hepatic criteria.【Conclusion】These results suggest that TNF-α participates in the formation process of schistosomatic liver fibrosis.
, 百拇医药
Key words liver cirrhosis; schistosomiasis; tumor necrosis factor
为探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)在兔血吸虫病肝纤维化时血浆中的动态变化，对家兔作以下实验研究。
1 材料和方法
1.1 研究对象 日本家兔36只，同龄，体重2.0～2.5 kg，随机分为正常组、感染组，每组18只，雌雄各半。感染组将尾蚴(100±1)条通过兔腹部皮肤感染，感染30 d后，每兔饲喂吡喹酮，剂量为300 mg/kg。
1.2 标本的采集与保存 于感染尾蚴后的第70，100，130天共3次分别对正常组、感染组各随机选6只家兔抽血、取肝。其血浆加PMSF后置-20 ℃下冰箱备用，肝组织用肝素处理后置-20 ℃下备用。
, 百拇医药
1.3 测定指标和方法 ①血浆TNF-α：采用RA-100型仪器用ELISA法在室温下测定；②血浆透明质酸(HA)：采用γ-计算机计数，用RIA法在室温下测定；③肝组织羟脯氨酸(HYP)，用紫外分光光度法测定；④肝组织胶原纤维(HCF，含虫卵)：用潘孺孙法[1]测定；⑤肝组织胶原纤维分布面积百分比(PCFDA)：用计算机图像分析法测定。
1.4 统计分析 本实验所得数据用x±s表示，多个样本均数比较用方差分析，两两比较用q检验，两因素之间的关系用直线相关分析。
2 结果
2.1 两组各阶段血浆TNF-α含量 见附表，正常组TNF-α各阶段间差异无显著性(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染后70 d(P<0.01)；感染组各阶段均高于正常组(P<0.01)。
附表 两组不同阶段各指标比较两组不同阶段各指标比较 组别
, 百拇医药
时间
(d)
TNF-α
(pg/ml)
HA
(μg/ml)
HYP
(μg/mg肝粉)
HCF
(mg/g湿肝)
PCFDA
正常组
, http://www.100md.com 70
101.68±
41.66
2.09±
0.55
4.45±
1.11
0.43±
0.15
1.34±
0.46
100
104.18±
, 百拇医药
52.70
2.04±
0.45
4.41±
1.15
0.47±
0.16
1.35±
0.47
130
95.65±
41.63
2.11±
, 百拇医药
0.55
4.40±
1.17
0.45±
0.10
1.37±
0.44
感染组
70
418.36±
112.141)
6.72±
1.861)
, 百拇医药
5.56±
1.24
2.62±
0.381)
3.93±
0.851)
100
496.25±
115.83
7.34±
2.161)
8.55±
, http://www.100md.com
1.851)
2.92±
0.841)
4.85±
0.831)
130
537.16±
136.481)2)
10.16±
2.521)2)
10.85±
, http://www.100md.com
1.731)2)
4.63±
0.721)2)
6.14±
0.971)2)
1)与正常组比较：P<0.01；2)与70 d比较：P<0.01
2.2 两组各阶段血浆HA含量 正常组HA各阶段比较，差异无显著性(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染后70 d和100 d(均P<0.01)；感染组各阶段均高于正常组(P<0.01)，见附表。
2.3 两组各阶段肝组织HYP含量 正常组HYP各阶段间差异无显著性(P>0.05)；感染组各阶段间差异均有显著性(P<0.05～0.01)；感染组各阶段均显著高于正常组(P<0.05～0.01)，见附表。
, 百拇医药
2.4 两组各阶段肝组织胶原纤维(含虫卵)含量 正常组各阶段间差异均无显著性(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染100 d和70 d(均P<0.01)；感染组各阶段显著高于正常组(P<0.01)，见附表。
2.5 两组各阶段肝组织胶原纤维分布面积百分比 正常组各阶段间肝组织胶原纤维分布面积百分比无显著差异(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染后100 d和70 d(均P<0.01)；感染组各阶段均显著高于正常组(P<0.01)。
2.6 相关分析 血浆TNF-α与其它指标之间的直线相关分析如下。 观测指标
r
P
HA
0.518
, 百拇医药
<0.05
HYP
0.661
<0.01
HCF
0.643
<0.01
PCFDA
0.765
<0.01
3 讨论
TNF-α在肝脏由枯否细胞产生，是肝脏受损时的急性反应细胞因子之一[2]，近年来它与肝纤维化的关系受到重视。蔡卫民[3]报道晚期血吸虫患者经杀虫治疗，血TNF-α仍明显高于正常人，血单个核细胞TNF-α诱生能力明显下降，这种情况在肝纤维化重者尤为明显。本实验发现，感染组各阶段血浆TNF-α均显著高于正常组，而且呈进行性增加，即感染时间越长TNF-α增加越明显。有人[3]认为晚期患者血中高水平的TNF-α主要来自肝脏，增加的原因可能是虫卵可溶性抗原被巨噬细胞吞噬后产生的多种细胞因子作用于T，B细胞和成纤维细胞[4]，而后者又产生多种细胞因子再作用于枯否细胞，使枯否细胞产生大量的TNF-α。TNF-α可激活纤维母细胞，促进胶原的合成，1990年Yoshioka[5]用免疫组化方法发现TNF-α的分布主要在汇管区，而此区正是肝纤维化的好发部位。但TNF-α与反映肝纤维化程度的血HA、肝HYP、肝胶原纤维含量、肝胶原分布面积百分比之间的关系此前未见报道。本实验证实TNF-α与反映肝纤维化严重程度的上述指标均呈正直线相关关系，表明TNF-α的确参与了肝纤维化的形成过程。
, 百拇医药
参考文献
1 匡天兴，蔡金冠，周大勇.等.超氧化物酶减轻血吸虫病肝硬变的实验.中国寄生虫学与寄生虫
病杂志，1987，5(4)：306
2 Macher JJ,Parenchymal and Nonparenchymal cell interactions in the liver.Seminars
in Liver Disease，1993,13(1):13～18
3 蔡卫民.日本血吸虫病肝纤维化患者免疫失调有关因素的探讨.中华传染病杂志，1993，11
(2)：63～66
4 彭雁忠，黄其通，邓 斌，等.核糖核酸阻抑家兔肝纤维化的作用机制探讨.湖北医科大学学
报，1997，18(2)：112～115
5 高 峰，孔宪涛.免疫介质与肝纤维化.临床肝胆病杂志，1993，9(2)：59～61
19981021 收稿, 百拇医药
单位：湖北医科大学附属第一医院(武汉 430060)
关键词：肝硬化；血吸虫病；肿瘤坏死因子
湖南医学/990407 摘 要 【目的】研究兔血吸虫病肝纤维化时血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)的动态变化。【方法】将36只家兔随机分为正常组、感染组。于感染尾蚴后第70,100,130 d，每组随机选6只取血和肝，进行免疫、生化、病理观察。【结果】感染组血浆TNF-α、透明质酸(HA)、肝组织羟脯氨酸(HYP)、肝胶原纤维含量、肝胶原纤维分布面积百分比均显著高于正常组(P<0.01)，血浆TNF-α与血浆HA、肝组织HYP、肝胶原纤维含量、肝胶原纤维分布面积百分比均呈正相关关系。【结论】TNF-α参与了血吸虫病肝纤维化的形成过程。
Dynamic Observation on the Levels of Tumor Necrosis Factor in Plasma of Rabbits with Schistosomatic Liver Fibrosis
, 百拇医药
PENG Yanzhong,ZHAN Chunhua,HUANG Qitong,et al
The First Affiliated Hospital,Hubei Medical University,Wuhan,430060
Abstract 【Objective】To Observe the dynamic changes of plasma tumors necrosis factor (TNF-α) levels in rabbits with schistosomatic liver fibrosis.【Methods】Thirty-sixty domestic rabbits were randomly and equally divided into normal group and infected group .On the 70th,100th,130th day after infection with cercariae, 6 rabbits were taken randomly from each group and killed. Their blood and liver tissues were collected for immunological,biochemical and pathological observation.【Results】The plasma levels of TNF-α and hyaluronic acid(HA),the hepatic contents of hydroxyproline (HYP)and collagenic fiber and the area percentages of liver collagenic fiber distribution in infected group were dramatically higher than those of normal group(P<0.01)，the plasma level of TNF-α was positively correlated to plasma level of HA and other 3 hepatic criteria.【Conclusion】These results suggest that TNF-α participates in the formation process of schistosomatic liver fibrosis.
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Key words liver cirrhosis; schistosomiasis; tumor necrosis factor
为探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)在兔血吸虫病肝纤维化时血浆中的动态变化，对家兔作以下实验研究。
1 材料和方法
1.1 研究对象 日本家兔36只，同龄，体重2.0～2.5 kg，随机分为正常组、感染组，每组18只，雌雄各半。感染组将尾蚴(100±1)条通过兔腹部皮肤感染，感染30 d后，每兔饲喂吡喹酮，剂量为300 mg/kg。
1.2 标本的采集与保存 于感染尾蚴后的第70，100，130天共3次分别对正常组、感染组各随机选6只家兔抽血、取肝。其血浆加PMSF后置-20 ℃下冰箱备用，肝组织用肝素处理后置-20 ℃下备用。
, 百拇医药
1.3 测定指标和方法 ①血浆TNF-α：采用RA-100型仪器用ELISA法在室温下测定；②血浆透明质酸(HA)：采用γ-计算机计数，用RIA法在室温下测定；③肝组织羟脯氨酸(HYP)，用紫外分光光度法测定；④肝组织胶原纤维(HCF，含虫卵)：用潘孺孙法[1]测定；⑤肝组织胶原纤维分布面积百分比(PCFDA)：用计算机图像分析法测定。
1.4 统计分析 本实验所得数据用x±s表示，多个样本均数比较用方差分析，两两比较用q检验，两因素之间的关系用直线相关分析。
2 结果
2.1 两组各阶段血浆TNF-α含量 见附表，正常组TNF-α各阶段间差异无显著性(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染后70 d(P<0.01)；感染组各阶段均高于正常组(P<0.01)。
附表 两组不同阶段各指标比较两组不同阶段各指标比较 组别
, 百拇医药
时间
(d)
TNF-α
(pg/ml)
HA
(μg/ml)
HYP
(μg/mg肝粉)
HCF
(mg/g湿肝)
PCFDA
正常组
, http://www.100md.com 70
101.68±
41.66
2.09±
0.55
4.45±
1.11
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0.15
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0.46
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104.18±
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52.70
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1.15
0.47±
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130
95.65±
41.63
2.11±
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0.55
4.40±
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感染组
70
418.36±
112.141)
6.72±
1.861)
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5.56±
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100
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1)与正常组比较：P<0.01；2)与70 d比较：P<0.01
2.2 两组各阶段血浆HA含量 正常组HA各阶段比较，差异无显著性(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染后70 d和100 d(均P<0.01)；感染组各阶段均高于正常组(P<0.01)，见附表。
2.3 两组各阶段肝组织HYP含量 正常组HYP各阶段间差异无显著性(P>0.05)；感染组各阶段间差异均有显著性(P<0.05～0.01)；感染组各阶段均显著高于正常组(P<0.05～0.01)，见附表。
, 百拇医药
2.4 两组各阶段肝组织胶原纤维(含虫卵)含量 正常组各阶段间差异均无显著性(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染100 d和70 d(均P<0.01)；感染组各阶段显著高于正常组(P<0.01)，见附表。
2.5 两组各阶段肝组织胶原纤维分布面积百分比 正常组各阶段间肝组织胶原纤维分布面积百分比无显著差异(P>0.05)；感染组感染后130 d显著高于感染后100 d和70 d(均P<0.01)；感染组各阶段均显著高于正常组(P<0.01)。
2.6 相关分析 血浆TNF-α与其它指标之间的直线相关分析如下。 观测指标
r
P
HA
0.518
, 百拇医药
<0.05
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0.661
<0.01
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0.643
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0.765
<0.01
3 讨论
TNF-α在肝脏由枯否细胞产生，是肝脏受损时的急性反应细胞因子之一[2]，近年来它与肝纤维化的关系受到重视。蔡卫民[3]报道晚期血吸虫患者经杀虫治疗，血TNF-α仍明显高于正常人，血单个核细胞TNF-α诱生能力明显下降，这种情况在肝纤维化重者尤为明显。本实验发现，感染组各阶段血浆TNF-α均显著高于正常组，而且呈进行性增加，即感染时间越长TNF-α增加越明显。有人[3]认为晚期患者血中高水平的TNF-α主要来自肝脏，增加的原因可能是虫卵可溶性抗原被巨噬细胞吞噬后产生的多种细胞因子作用于T，B细胞和成纤维细胞[4]，而后者又产生多种细胞因子再作用于枯否细胞，使枯否细胞产生大量的TNF-α。TNF-α可激活纤维母细胞，促进胶原的合成，1990年Yoshioka[5]用免疫组化方法发现TNF-α的分布主要在汇管区，而此区正是肝纤维化的好发部位。但TNF-α与反映肝纤维化程度的血HA、肝HYP、肝胶原纤维含量、肝胶原分布面积百分比之间的关系此前未见报道。本实验证实TNF-α与反映肝纤维化严重程度的上述指标均呈正直线相关关系，表明TNF-α的确参与了肝纤维化的形成过程。
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参考文献
1 匡天兴，蔡金冠，周大勇.等.超氧化物酶减轻血吸虫病肝硬变的实验.中国寄生虫学与寄生虫
病杂志，1987，5(4)：306
2 Macher JJ,Parenchymal and Nonparenchymal cell interactions in the liver.Seminars
in Liver Disease，1993,13(1):13～18
3 蔡卫民.日本血吸虫病肝纤维化患者免疫失调有关因素的探讨.中华传染病杂志，1993，11
(2)：63～66
4 彭雁忠，黄其通，邓 斌，等.核糖核酸阻抑家兔肝纤维化的作用机制探讨.湖北医科大学学
报，1997，18(2)：112～115
5 高 峰，孔宪涛.免疫介质与肝纤维化.临床肝胆病杂志，1993，9(2)：59～61
19981021 收稿, 百拇医药