细胞粘附分子 CD15在乳腺癌组织中的定量研究
作者：谷化平 尚培中 胡海霞 李全华 李春光
单位：075000 张家口，中国人民解放军第二五一医院病理科(谷化平、胡海 霞、李春光)，普外科(尚培中)；第二军医大学长海医院病理科(李全华)
关键词：
中华医学杂志/990419 我们应用免疫组织化学和图像分析方法,对临床乳腺癌组织进行细胞粘附分子CD15表达及 定量检测，研究乳腺癌分化程度和淋巴结转移状况与CD15的关系，旨在为乳腺癌的发病机制 和临床防治的研究探索新的途径。
一、对象与方法
1.对象：为我院和第二军医大学长海医院作手术切除的乳腺癌患者，年龄26～76岁， 均为女性，共94例。术前均未经任何治疗。标本经0.10甲醛固定，石蜡包埋切片。按照国 家卫生部恶性肿瘤诊治规范中乳腺癌组织学分级标准，进行组织学分级，其中：Ⅰ级39例， Ⅱ级40例，Ⅲ级15例。根据有无转移分为：转移阳性组51例，转移阴性组43例。另选10例正 常乳腺组织标本为对照组。
, 百拇医药
2.试剂：鼠抗 CD15一抗和SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。
3.免疫组织化学标记：采用微波-SP法。即切片脱蜡水化后放入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L ， pH 6.0)内，置YWY781 A型医用微波仪170 W辐射5分钟。其它操作流程同常规SP法，所 不同者为三步抗原和血清孵育均用微波仪130 W各辐射5分钟、保温2分钟即可。实验设阳性 和阴性对照。DAB显色。
4.CD15阳性表达判定及定量测定：凡所测组织的腺腔缘、细胞膜和(或)细胞浆呈棕黄色反 应者为阳性(+)，不着色为阴性(-)。定量测定应用CMIAS真彩色医学图像分析仪检测所 有CD15阳性切片，每张切片随机选取5个视野(400倍)，总阳性细胞数在100个以上， 以阳性细胞平均光密度值(A)来反映CD15的阳性强度。以任意单位(AU)表示。
5.统计学处理：数据差异显著性检验应用χ2检验和t检验。
, 百拇医药
二、结果
CD15阳性物质在正常乳腺组织主要位于腺上皮游离面(图1)；在乳腺癌组织中主要位 于细胞膜和细胞浆(图2)。CD15表达及定量结果见表1。
图1 正常乳腺组织CD15染色
阳性，阳性物质
位于腺腔缘游离面，SP法 ×200
图2 乳腺癌组织CD 15染色
阳性，阳性物质
位于细胞浆膜，SP法 ×200
表1 CD15在乳腺及乳腺癌组织中的表达及含量 组别
, http://www.100md.com
例数
CD15表达
CD15含量
(A值，
±s)
阳性
例数
阳性
比例(%)
对照组
10
4
40
, http://www.100md.com
0.72±0.13
乳腺癌组
(94 )
(5)
(80*)
(3.94±2.60*)
Ⅰ级
39
27
69
2.43±3.52
Ⅱ～Ⅲ级
, 百拇医药
55
48
87**
5.67±1.43**
有淋巴结转移组
51
46
90△
6.83±3.26△
无淋巴结转移组
43
29
, http://www.100md.com
67
3.26±2.43
注；与对照比较* P<0.05，与Ⅰ级比较** P<0.05；与淋巴结转移 阴性组比较△ P<0.001
三、讨论
分子粘附(CAMs)是位于细胞表面的糖蛋白，其与配基间的结合是介导细胞与细胞或细胞 与基质间相互识别和作用的分子基础，从而在调节细胞增殖、分化、迁移等方面起着重要作 用。同样，在肿瘤发生发展过程中也大多伴有CAMs及其配基的变化，它可介导肿瘤细胞与内 皮细胞相互识别和粘附，以促进肿瘤细胞离散、游走，最终实现其转移和扩散[1] 。CD15属CAMs成员，为选择素所识别的比较确定的一个配基，由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰 葡萄糖胺组成的碳水化合物抗原[2]。研究证实，CD15表达阳性的肝癌、大肠癌 、甲 状腺髓样癌就容易发生转移，且患者死亡率高，预后差[3]。本结果显示， CD15在正常乳腺中呈弱阳性表达，阳性物质主要分布于腺上皮游离面；在乳腺癌中CD 15阳 性物质则主要位于细胞膜和(或)细胞浆，表现出明显的异质性。表明CD15表达与乳腺癌的发 生有关。我们发现，CD15表达阳性率和阳性细胞的平均A值,在乳腺癌中均显著高于正常 乳腺组织,并随着乳腺癌分级的减低和淋巴结转移的出现而显著增高。表明CD15的质和量的 变化， 在乳腺癌的发生、细胞增殖、分化和转移过程中可能发挥着重要作用。本结果表明，CD15免 疫组织化学标记和图像分析方法的应用，从一个新的途径为乳腺癌防治研究提供了较为客观 的参考依据，可以反映乳腺组织恶性生长的一个指标。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] Juliano RL, Haskill S. Adheion moleales in cancer. The nole integrins. Cur r Opin Cell Biol,1993,5:812-817.
[2] 陈金联，周同.选择素与肿瘤转移研究进展.生命科学,1996,8:31-33.
[3] Toii A, Nakayama A, Harada A, et al. Expression of the CD15 andtigen in heptocerllupar carcinoma. Cancer,1993; 71：3864-3867.
(收稿：1998-07-03 修回：1998-12-15), http://www.100md.com
单位：075000 张家口，中国人民解放军第二五一医院病理科(谷化平、胡海 霞、李春光)，普外科(尚培中)；第二军医大学长海医院病理科(李全华)
关键词：
中华医学杂志/990419 我们应用免疫组织化学和图像分析方法,对临床乳腺癌组织进行细胞粘附分子CD15表达及 定量检测，研究乳腺癌分化程度和淋巴结转移状况与CD15的关系，旨在为乳腺癌的发病机制 和临床防治的研究探索新的途径。
一、对象与方法
1.对象：为我院和第二军医大学长海医院作手术切除的乳腺癌患者，年龄26～76岁， 均为女性，共94例。术前均未经任何治疗。标本经0.10甲醛固定，石蜡包埋切片。按照国 家卫生部恶性肿瘤诊治规范中乳腺癌组织学分级标准，进行组织学分级，其中：Ⅰ级39例， Ⅱ级40例，Ⅲ级15例。根据有无转移分为：转移阳性组51例，转移阴性组43例。另选10例正 常乳腺组织标本为对照组。
, 百拇医药
2.试剂：鼠抗 CD15一抗和SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。
3.免疫组织化学标记：采用微波-SP法。即切片脱蜡水化后放入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L ， pH 6.0)内，置YWY781 A型医用微波仪170 W辐射5分钟。其它操作流程同常规SP法，所 不同者为三步抗原和血清孵育均用微波仪130 W各辐射5分钟、保温2分钟即可。实验设阳性 和阴性对照。DAB显色。
4.CD15阳性表达判定及定量测定：凡所测组织的腺腔缘、细胞膜和(或)细胞浆呈棕黄色反 应者为阳性(+)，不着色为阴性(-)。定量测定应用CMIAS真彩色医学图像分析仪检测所 有CD15阳性切片，每张切片随机选取5个视野(400倍)，总阳性细胞数在100个以上， 以阳性细胞平均光密度值(A)来反映CD15的阳性强度。以任意单位(AU)表示。
5.统计学处理：数据差异显著性检验应用χ2检验和t检验。
, 百拇医药
二、结果
CD15阳性物质在正常乳腺组织主要位于腺上皮游离面(图1)；在乳腺癌组织中主要位 于细胞膜和细胞浆(图2)。CD15表达及定量结果见表1。
图1 正常乳腺组织CD15染色
阳性，阳性物质
位于腺腔缘游离面，SP法 ×200
图2 乳腺癌组织CD 15染色
阳性，阳性物质
位于细胞浆膜，SP法 ×200
表1 CD15在乳腺及乳腺癌组织中的表达及含量 组别
, http://www.100md.com
例数
CD15表达
CD15含量
(A值，
±s)阳性
例数
阳性
比例(%)
对照组
10
4
40
, http://www.100md.com
0.72±0.13
乳腺癌组
(94 )
(5)
(80*)
(3.94±2.60*)
Ⅰ级
39
27
69
2.43±3.52
Ⅱ～Ⅲ级
, 百拇医药
55
48
87**
5.67±1.43**
有淋巴结转移组
51
46
90△
6.83±3.26△
无淋巴结转移组
43
29
, http://www.100md.com
67
3.26±2.43
注；与对照比较* P<0.05，与Ⅰ级比较** P<0.05；与淋巴结转移 阴性组比较△ P<0.001
三、讨论
分子粘附(CAMs)是位于细胞表面的糖蛋白，其与配基间的结合是介导细胞与细胞或细胞 与基质间相互识别和作用的分子基础，从而在调节细胞增殖、分化、迁移等方面起着重要作 用。同样，在肿瘤发生发展过程中也大多伴有CAMs及其配基的变化，它可介导肿瘤细胞与内 皮细胞相互识别和粘附，以促进肿瘤细胞离散、游走，最终实现其转移和扩散[1] 。CD15属CAMs成员，为选择素所识别的比较确定的一个配基，由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰 葡萄糖胺组成的碳水化合物抗原[2]。研究证实，CD15表达阳性的肝癌、大肠癌 、甲 状腺髓样癌就容易发生转移，且患者死亡率高，预后差[3]。本结果显示， CD15在正常乳腺中呈弱阳性表达，阳性物质主要分布于腺上皮游离面；在乳腺癌中CD 15阳 性物质则主要位于细胞膜和(或)细胞浆，表现出明显的异质性。表明CD15表达与乳腺癌的发 生有关。我们发现，CD15表达阳性率和阳性细胞的平均A值,在乳腺癌中均显著高于正常 乳腺组织,并随着乳腺癌分级的减低和淋巴结转移的出现而显著增高。表明CD15的质和量的 变化， 在乳腺癌的发生、细胞增殖、分化和转移过程中可能发挥着重要作用。本结果表明，CD15免 疫组织化学标记和图像分析方法的应用，从一个新的途径为乳腺癌防治研究提供了较为客观 的参考依据，可以反映乳腺组织恶性生长的一个指标。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] Juliano RL, Haskill S. Adheion moleales in cancer. The nole integrins. Cur r Opin Cell Biol,1993,5:812-817.
[2] 陈金联，周同.选择素与肿瘤转移研究进展.生命科学,1996,8:31-33.
[3] Toii A, Nakayama A, Harada A, et al. Expression of the CD15 andtigen in heptocerllupar carcinoma. Cancer,1993; 71：3864-3867.
(收稿：1998-07-03 修回：1998-12-15), http://www.100md.com