细胞因子及受体在多发性硬化发病中的作用
作者：王丽华 王维治 曹德瑞
单位：150086 哈尔滨，中国人民解放军第二一一医院神经内科(王丽华)；哈尔滨医科大学第二附属医院神经内科(王维治)；黑龙江省泰来县人民医院检验科(曹德瑞)
关键词：
中华医学杂志/990417 随着分子免疫学进展，细胞因子及受体在多发硬化(MS)免疫发病中的作用受到人们广泛的关注。为了解可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)、膜白细胞介素2受体(mIL-2R)及肿瘤 坏死因子α(TNF-α)在MS发病机制中的作用，我们对48例确诊为MS患者血清sIL-2R 及其中28例脑脊液(CSF)中的sIL-2R、血中TNF-α水平及 mIL-2R表达进行了动态检测，旨在探讨与MS发病的相关性及其与病情和病程的关系。
一、对象和方法
, http://www.100md.com 1.对象：MS患者组48例，男21例，女27例，年龄16～52岁，平均37岁。患者均符合Poser等 1983年制定的MS诊断标准。血清对照组50例，男24例，女26例，年龄25～50岁，平均38岁 ，均为正常体检者；CSF对照组30例，男14例，女16例，年龄20～60岁，平均41.0岁。包括其它非免疫神经疾病18例，外科手术腰麻患者12例。
2.样本采集：48例MS患者在用皮质类固醇治疗前及治疗后的第28天分别采静脉血5 ml；其 中3 ml注入肝素抗凝试管中，3小时内行细胞诱生实验；2 ml分离血清，置50 ℃低温冰箱中 备用。CSF按常规腰穿留取。
3.检测方法：外周血单个核细胞 (PBMCs) 诱生试验后，48小时吸取培养上清液，参照文献 [1]检测TNF-α，72小时收集培养细胞, 以间接免疫荧光法检测 mIL-2R，用酶联免疫吸附试验检测sIL-2R。
4.统计学处理：本组数据以均值±标准差表示，显著性检验采用两样本均数比较的t检 验。
, 百拇医药
二、结果
1.MS组sIL-2R水平：MS患者治疗前血清sIL-2R水平为(0.56±0.05)U/L，对照组(0.34 ±0.04)U/L，P<0.01；其中急性复发组(0.60±0.05)U/L，缓解组(0.49±0.04) U/L，P<0.01；治疗后(0.51±0.04)U/L，较治疗前(0.56±0.05)U/L明显下降 (P<0.01)。治疗后MS患者血清sIL-2R水平仍高于对照组，差异均有极显著意义(P <0.01)。治疗后急性复发组(0.55±0.03)U/L，仍显著高于缓解组(0.47±0.04)U /L (P<0.01)，治疗后急性复发组及缓解组分别低于治疗前(P<0.01及P<0.05) 。
将血清sIL-2R水平与病程进行直线相关分析，相关系数r＝0.1722(P>0.05)，无 相关性。MS患者血清sIL-2R水平与病情的关系：参照文献[2]修订的MS患者神经功能障碍 评级标准，将25例急性复发型MS患者分轻(评分≤5分)、重(评分>5分)两型，15例重型MS血清sIL-2R水平为(0.66±0.10)U/L；10例轻型为(0.59±0.04)U/L；P<0.05。
, http://www.100md.com
2.MS组CSF中的sIL-2R水平：MS组28例CSF中的sIL-2R水平为(0.17±0.05)U/L；正常组 30例(0.15±0.04)U/L，P<0.05，差异有显著性意义。
3.MS组mIL-2R表达：急性复发期MS患者血中mIL-2R表达(76.3±8.6)%，显著高于缓解期(45.9±4.1)%(P<0.01)及对照组(58.7±11.3)%(P<0.01)；缓解期MS组血中m IL-2R表达显著低于对照组(P<0.01)。MS组为(64.6±12.2)%，与对照组 比较差异无显著意义(P>0.05)。
4.MS组血TNF-α活性水平：MS患者治疗前水平为(0.035±0.006)U/L，对照组(0.028 ±0.002)U/L，P<0.01；治疗后(0.030±0.005)U/L，较治疗前水平显著下 降(P<0.01)。治疗后MS患者组水平仍高于对照组；急性复发组治疗前(0.043±0.005 )U/L和治疗后(0.036±0.004)U/L均高于缓解组，治疗前(0.025±0.004)U/L和治疗后(0 .025±0.004)U/L(P<0.01)，差异均有极显著意义；缓解组治疗前后均低于对照组( P<0.05)，差异有显著意义。缓解组治疗后虽然较治疗前水平下降(P>0.05) ，但差异无显著意义。
, 百拇医药
将MS血中TNF-α水平与病程进行直线相关性分析，相关系数r＝0.0821，P>0.05，，两者无相关性。16例急性复发型MS患者仍按Kutzke标准分型，10例重型患者TNF-α水 平(0.047±0.005)U/L，显著高于6例轻型患者(0.029±0.004)U/L，P<0.01。
三、讨论
本组对MS患者sIL-2R、mIL-2R 和TNF-α水平进行动态检测，发现MS患者血清sIL-2R和T NF-α水平显著高于对照组；急性复发期高于缓解期；皮质类固醇治疗后随病情好转两者水平显著下降, 但仍高于对照组。本组急性复发期重型MS患者血清sIL-2R和TNF-α水平显著高于轻型，说明MS患者血清sIL-2R水平及TNF-α水平与病情有关。MS组CSF中sIL-2R也显著高于对照组，说明中枢神经系统(CNS)内T细胞也处于活化状态。
急性复发期MS患者血中mIL-2R的表达显著高于缓解期和对照组；而缓解期MS患者血中mIL- 2R的表达及TNF-α水平显著低于对照组。因sIL-2R是mIL-2R的主要廓清形式，当mIL-2R表达增强时sIL-2R产生也增多，mIL-2R与sIL-2R同时升高常提示体内免疫细胞处于活化 状态。IL-2R是mIL-2R的α链脱落形成, 其主要成分与mIL-2R相似，sIL-2R及mIL-2R可竞争性地与IL-2结合，过量的sIL-2R 可起到类似封闭因子作用，抑制mIL-2R与IL-2结 合，使mIL-2R表达不足，明显影响细胞的激活及生物活性的发挥。其机制尚可能与该期高 水平的sIL-2R导致对mIL-2R反馈性抑制有关，MS患者血清sIL-2R和mIL-2R 的水平消 长并非始终一致。mIL-2R表达不足及TNF-α水平显著低于对照组，说明免疫抑制也在MS的 发病过程中起重要作用。
, 百拇医药
目前国外应用β干扰素(IFN-β)1b治疗MS患者，可缓解临床症状，并同时可见TNF-α分泌 减少[3]，说明TNF-α在MS缓解复发中起重要作用。
本文结果表明，MS患者外周血及CSF中sIL-2R、mIL-2R水平及血中TNF-α水平可能作为临 床判定其病情轻重或缓解复发的辅助指标。不仅在急性复发期，而且当病情好转进入缓解期 时，多数MS患者sIL-2R、mIL-2R 和TNF-α均不能恢复正常水平；T细胞处于活化状态，sIL-2R异常升高、mIL-2R表达及TNF-α水平异常升高或降低，提示本病患者的细胞免疫 功能异常是持续存在的。因而，可以认为缓解期的MS患者实际处在一个病情波动的相对静止期。此期内患者的症状和体征可能不明显，但仍存在免疫功能异常，这可能是MS复发或慢性进展的免疫病理基础。本研究为探讨MS免疫发病机制进一步提供了理论依据。
参考文献
, 百拇医药 [1] Lieberman AP. Production of tumor necrosis factor and o ther cytokines by astrocytes stimulated with lipopolysaccharide or a neurotropic virus. Proc Natl Acad Sci USA, 1989, 86: 6348.
[2] Kurtzke JF. Rating neurologic impairment in multiple sclerosis: An expanded disability status scale(EDSS). Neurology, 1983, 33:1444.
[3] Khan OA, Xia Q, Bever CT Jr, et al. Interferon beta -1b serum levels in multipl e sclerosis patients following subcutaneous administration. Neurology, 1996, 46: 1639-1643.
(收稿：1998-08-05 修回：1998-12-07), 百拇医药
单位：150086 哈尔滨，中国人民解放军第二一一医院神经内科(王丽华)；哈尔滨医科大学第二附属医院神经内科(王维治)；黑龙江省泰来县人民医院检验科(曹德瑞)
关键词：
中华医学杂志/990417 随着分子免疫学进展，细胞因子及受体在多发硬化(MS)免疫发病中的作用受到人们广泛的关注。为了解可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)、膜白细胞介素2受体(mIL-2R)及肿瘤 坏死因子α(TNF-α)在MS发病机制中的作用，我们对48例确诊为MS患者血清sIL-2R 及其中28例脑脊液(CSF)中的sIL-2R、血中TNF-α水平及 mIL-2R表达进行了动态检测，旨在探讨与MS发病的相关性及其与病情和病程的关系。
一、对象和方法
, http://www.100md.com 1.对象：MS患者组48例，男21例，女27例，年龄16～52岁，平均37岁。患者均符合Poser等 1983年制定的MS诊断标准。血清对照组50例，男24例，女26例，年龄25～50岁，平均38岁 ，均为正常体检者；CSF对照组30例，男14例，女16例，年龄20～60岁，平均41.0岁。包括其它非免疫神经疾病18例，外科手术腰麻患者12例。
2.样本采集：48例MS患者在用皮质类固醇治疗前及治疗后的第28天分别采静脉血5 ml；其 中3 ml注入肝素抗凝试管中，3小时内行细胞诱生实验；2 ml分离血清，置50 ℃低温冰箱中 备用。CSF按常规腰穿留取。
3.检测方法：外周血单个核细胞 (PBMCs) 诱生试验后，48小时吸取培养上清液，参照文献 [1]检测TNF-α，72小时收集培养细胞, 以间接免疫荧光法检测 mIL-2R，用酶联免疫吸附试验检测sIL-2R。
4.统计学处理：本组数据以均值±标准差表示，显著性检验采用两样本均数比较的t检 验。
, 百拇医药
二、结果
1.MS组sIL-2R水平：MS患者治疗前血清sIL-2R水平为(0.56±0.05)U/L，对照组(0.34 ±0.04)U/L，P<0.01；其中急性复发组(0.60±0.05)U/L，缓解组(0.49±0.04) U/L，P<0.01；治疗后(0.51±0.04)U/L，较治疗前(0.56±0.05)U/L明显下降 (P<0.01)。治疗后MS患者血清sIL-2R水平仍高于对照组，差异均有极显著意义(P <0.01)。治疗后急性复发组(0.55±0.03)U/L，仍显著高于缓解组(0.47±0.04)U /L (P<0.01)，治疗后急性复发组及缓解组分别低于治疗前(P<0.01及P<0.05) 。
将血清sIL-2R水平与病程进行直线相关分析，相关系数r＝0.1722(P>0.05)，无 相关性。MS患者血清sIL-2R水平与病情的关系：参照文献[2]修订的MS患者神经功能障碍 评级标准，将25例急性复发型MS患者分轻(评分≤5分)、重(评分>5分)两型，15例重型MS血清sIL-2R水平为(0.66±0.10)U/L；10例轻型为(0.59±0.04)U/L；P<0.05。
, http://www.100md.com
2.MS组CSF中的sIL-2R水平：MS组28例CSF中的sIL-2R水平为(0.17±0.05)U/L；正常组 30例(0.15±0.04)U/L，P<0.05，差异有显著性意义。
3.MS组mIL-2R表达：急性复发期MS患者血中mIL-2R表达(76.3±8.6)%，显著高于缓解期(45.9±4.1)%(P<0.01)及对照组(58.7±11.3)%(P<0.01)；缓解期MS组血中m IL-2R表达显著低于对照组(P<0.01)。MS组为(64.6±12.2)%，与对照组 比较差异无显著意义(P>0.05)。
4.MS组血TNF-α活性水平：MS患者治疗前水平为(0.035±0.006)U/L，对照组(0.028 ±0.002)U/L，P<0.01；治疗后(0.030±0.005)U/L，较治疗前水平显著下 降(P<0.01)。治疗后MS患者组水平仍高于对照组；急性复发组治疗前(0.043±0.005 )U/L和治疗后(0.036±0.004)U/L均高于缓解组，治疗前(0.025±0.004)U/L和治疗后(0 .025±0.004)U/L(P<0.01)，差异均有极显著意义；缓解组治疗前后均低于对照组( P<0.05)，差异有显著意义。缓解组治疗后虽然较治疗前水平下降(P>0.05) ，但差异无显著意义。
, 百拇医药
将MS血中TNF-α水平与病程进行直线相关性分析，相关系数r＝0.0821，P>0.05，，两者无相关性。16例急性复发型MS患者仍按Kutzke标准分型，10例重型患者TNF-α水 平(0.047±0.005)U/L，显著高于6例轻型患者(0.029±0.004)U/L，P<0.01。
三、讨论
本组对MS患者sIL-2R、mIL-2R 和TNF-α水平进行动态检测，发现MS患者血清sIL-2R和T NF-α水平显著高于对照组；急性复发期高于缓解期；皮质类固醇治疗后随病情好转两者水平显著下降, 但仍高于对照组。本组急性复发期重型MS患者血清sIL-2R和TNF-α水平显著高于轻型，说明MS患者血清sIL-2R水平及TNF-α水平与病情有关。MS组CSF中sIL-2R也显著高于对照组，说明中枢神经系统(CNS)内T细胞也处于活化状态。
急性复发期MS患者血中mIL-2R的表达显著高于缓解期和对照组；而缓解期MS患者血中mIL- 2R的表达及TNF-α水平显著低于对照组。因sIL-2R是mIL-2R的主要廓清形式，当mIL-2R表达增强时sIL-2R产生也增多，mIL-2R与sIL-2R同时升高常提示体内免疫细胞处于活化 状态。IL-2R是mIL-2R的α链脱落形成, 其主要成分与mIL-2R相似，sIL-2R及mIL-2R可竞争性地与IL-2结合，过量的sIL-2R 可起到类似封闭因子作用，抑制mIL-2R与IL-2结 合，使mIL-2R表达不足，明显影响细胞的激活及生物活性的发挥。其机制尚可能与该期高 水平的sIL-2R导致对mIL-2R反馈性抑制有关，MS患者血清sIL-2R和mIL-2R 的水平消 长并非始终一致。mIL-2R表达不足及TNF-α水平显著低于对照组，说明免疫抑制也在MS的 发病过程中起重要作用。
, 百拇医药
目前国外应用β干扰素(IFN-β)1b治疗MS患者，可缓解临床症状，并同时可见TNF-α分泌 减少[3]，说明TNF-α在MS缓解复发中起重要作用。
本文结果表明，MS患者外周血及CSF中sIL-2R、mIL-2R水平及血中TNF-α水平可能作为临 床判定其病情轻重或缓解复发的辅助指标。不仅在急性复发期，而且当病情好转进入缓解期 时，多数MS患者sIL-2R、mIL-2R 和TNF-α均不能恢复正常水平；T细胞处于活化状态，sIL-2R异常升高、mIL-2R表达及TNF-α水平异常升高或降低，提示本病患者的细胞免疫 功能异常是持续存在的。因而，可以认为缓解期的MS患者实际处在一个病情波动的相对静止期。此期内患者的症状和体征可能不明显，但仍存在免疫功能异常，这可能是MS复发或慢性进展的免疫病理基础。本研究为探讨MS免疫发病机制进一步提供了理论依据。
参考文献
, 百拇医药 [1] Lieberman AP. Production of tumor necrosis factor and o ther cytokines by astrocytes stimulated with lipopolysaccharide or a neurotropic virus. Proc Natl Acad Sci USA, 1989, 86: 6348.
[2] Kurtzke JF. Rating neurologic impairment in multiple sclerosis: An expanded disability status scale(EDSS). Neurology, 1983, 33:1444.
[3] Khan OA, Xia Q, Bever CT Jr, et al. Interferon beta -1b serum levels in multipl e sclerosis patients following subcutaneous administration. Neurology, 1996, 46: 1639-1643.
(收稿：1998-08-05 修回：1998-12-07), 百拇医药