庚型肝炎病毒感染患者自身抗体分析*
作者：熊 华 齐 名 王艾丽 虞 伟 江 舟 武建国
单位：南京军区南京总医院全军医学检验中心 江苏省南京市 210002
关键词：庚型肝炎病毒；自身抗体；肝炎病毒性
世界华人消化杂志990409 摘 要
目的 探讨庚型肝炎病毒(HGV)感染与机体自身免疫的关系.
方法 抗HGV IgG抗体阳性(ELISA法)的各类肝病及其他疾病患者93例. 部分慢性肝炎患者用RT-PCR检测证实为HGV RNA阳性. 用ELISA检测血清中类风湿因子(RF)、抗双链DNA(ds-DNA Ab)抗体、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)4种自身抗体. 同时用ELISA检测乙型肝炎病毒(HBV)5项血清标志物(HBsAg,抗HBs,HBeAg,抗HBe,抗HBc IgG)和丙型肝炎病毒标志物(抗HCV IgG和抗HCV IgM).
, http://www.100md.com
结果 研究对象93例中有25例检测出1种以上自身抗体的阳性率为26.9%. 其中自身抗体阳性率在单独抗HGV阳性者中为13.6%(3/22)；抗HGV阳性合并HBV标志物阳性者为17.9%(5/28)；抗HGV阳性合并抗HCV阳性者为40.0%(10/25)；HGV，HBV，HCV标志物全阳性者为38.9%(7/18). 对照组：自身抗体阳性率为26.1%(31/119). 其中HGV，HBV，HCV标志物全阴性者为16.0%(4/25)；HBV标志物阳性者为25.0%(7/28)；HCV标志物阳性者为27.3%(9/33)；HBV，HCV标志物均阳性者为33.3%(11/33). 虽然抗HGV阳性合并抗HCV阳性者组和HGV，HBV，HCV标志物全阳性者组的自身抗体阳性率(40.0%和38.9%)分别高于对照组中的HCV标志物阳性者组和HBV，HCV标志物均阳性者组(27.3%和33.3%)，但相应的研究组和对照组之间均无显著性差异(P>0.05).
结论 HGV血清标志物(抗HGV IgG抗体)阳性与各类疾病患者的4种自身免疫标志物无明显相关.
, http://www.100md.com
中国图书资料分类号 R512.6
Autoimmune antibodies in patients with hepatitis G virus infection*
XIONG Hua, QI Ming, WANG Ai-Li, YU Wei, JIANG Zhou and WU Jian-Guo
Center of Medical Laboratory Sciences, Chinese PLA Nanjing General Hospital of Nanjing Command Area, Nanjing 210002, Jiangsu Province, China
Subject headings hepatitis G virus; autoimmune antibody; hepatitis, viral
, http://www.100md.com
AIM To explore the correlation between infection of HGV and autoimmunity.
METHODS Ninety-three patients with hepatitis G and other diseases with positive anti-HGV IgG antibodies were investigated. Autoimmune markers, i.e., rheumatoid factors (RF), anti-double strain DNA antibody (ds-DNA Ab), anti-thyroglobulin antibody (TG Ab) and anti-thyromicrosome antibody (TM Ab) in the patient sera were determined by ELISA. The serum markers of hepatitis B virus (HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe and anti-HBc IgG) and hepatitis C virus (anti-HCV IgG and IgM) were detected by ELISA simultaneously.
, http://www.100md.com
RESULTS One type or more than 1 types of autoimmune antibodies were determined as positive in 26.9% (25/93) of patients, while in 26.1% (31/119) of controls. No significant difference was found (P>0.05) between the two groups as well as the matched subgroups, i.e., ①positive anti-HGV IgG alone and all negative hepatitis virus markers; ②positive anti-HGV IgG plus HBV markers and positive HBV markers alone; ③positive anti-HGV IgG plus HCV markers and positive HCV markers alone; and ④positive anti-HGV IgG plus HBV markers plus HCV markers and positive HBV markers plus HCV markers alone.
, 百拇医药
CONCLUSION No correlation is found between the HGV serum marker (anti-HGV IgG) and 4 types of autoimmune markers.
0 引言
庚型肝炎病毒(hepatitis G, HGV)是近年来发现的一种新的肝炎相关病毒，病毒核酸为单股正链RNA，以其基因组结构而归属于黄病毒科. HGV与黄病毒科另一成员丙型肝炎病毒(HCV)在结构上有一定的同源性. 关于HGV的分子生物学特点和流行病学特征国内外已有许多报道，但对HGV的致病性争议较多，有待于进一步研究. 关于HGV感染与自身免疫及自身免疫性肝炎关系的研究尚未见报道. 我们检测了HGV感染血清标志物(抗HGV抗体)阳性的各类疾病患者血清中的4种自身抗体，对HGV感染与机体自身免疫的关系进行了初步研究，报告如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 我院1997-11/1998-07门诊和住院的各类肝炎病毒易感疾病患者中抗HGV IgG抗体阳性者93例为研究组，包括肝病(各类病毒性肝炎、肝硬变、肝细胞癌)，血液病(再生障碍性贫血、血友病)，肾病(各类小儿肾炎、成人慢性肾功能衰竭)，有手术输血史者. 年龄3岁～78岁，男56例，女37例. 根据是否同时有HBV和HCV血清标志物阳性，再分为4组：①单独HGV血清标志物(抗HGV IgG抗体)阳性者22例；②HGV标志物合并HBV标志物阳性(HBV 5项血清标志物：HBsAg,抗HBs,HBeAg,抗HBe,抗HBc IgG至少1项阳性，不包括乙肝疫苗注射后抗HBs单项阳性者)28例；③HGV标志物合并HCV标志物(抗HCV IgG或(和)抗HCV IgM抗体)阳性25例；④HGV，HBV，HCV三者标志物同时阳性18例. 另设HGV血清标志物阴性对照组119例，也分为4组：①HGV，HBV，HCV标志物全阴性25例；②HBV标志物阳性28例；③HCV标志物阳性33例；④HBV，HCV标志物同时阳性33例. 均自静脉采血分离血清，-70℃保存待检.
, 百拇医药
1.2 方法 HBV 5项血清标志物、抗HCV酶联免疫试剂盒购自上海科华实业公司；抗HGV-IgG酶联免疫试剂盒为厦门泰伦生物试剂公司产品；HGV RT-PCR试剂为军事医学科学院产品. 类风湿因子(RF)、抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)检测试剂均为本室制备，HRP-SPA，HRP-聚合人IgG为本室标记. 酶联免疫检测仪为美国Awareness公司产品.
抗HGV-IgG，HBV 5项血清标志物、抗HCV-IgG和IgM用ELISA检测，HGV RNA用RT-PCR检测，均按说明书操作并判读结果. RF，TGAb,TMAb,抗ds-DNA均用ELISA法检测. 步骤如下：聚合人IgG，TG，TM抗原，变性DNA按优化选择最适浓度稀释后包被聚苯乙烯微量反应板，每孔0.1mL,4℃过夜. 0.01mol/L PBS-T洗5次，50mL/L小牛血清-PBS封闭，37℃ 2h，加血清标本0.1mL(1：10稀释于50mL/L小牛血清-PBS中). 另设空白、阴性、阳性对照各二孔，43℃温育30min，洗板5次. 按优化选择最适浓度分别加HRP-聚合人IgG(检测RF)、HRP-SPA(检测TGAb，TMAb，抗ds-DNA)，每孔0.1mL，43℃温育30min，TMB-H2O2呈色，2moL/L H2SO4终止反应，于450nm波长以空白调零测吸光度值，吸光度值大于2.1倍阴性对照平均吸光度值判为阳性.
, http://www.100md.com
2 结果
研究组和对照组HGV，HBV，HCV血清标志物的检测结果如前所述. 研究组中6例慢性肝炎患者用RT-PCR检测证实为HGV RNA阳性. 93例研究组患者血清标本中，有25例检出1项以上自身抗体阳性，阳性率为26.9%. 其中单独抗HGV阳性者22例中有3例检出自身抗体(13.6%)，抗HGV阳性合并HBV标志物阳性者28例中有5例检出自身抗体(17.9%)，抗HGV阳性合并抗HCV阳性者25例中有10例检出自身抗体(40.0%)，HGV，HBV，HCV三者标志物全阳性者18例中有7例检出自身抗体(38.9%). 对照组119例中有31例检出自身抗体，阳性率为26.1%. 与研究组比较无显著性差异(P>0.05). 其中全阴性者25例中有4例(16.0%)，HBV标志物阳性者28例中有7例(25.0%)，HCV标志物阳性33例中有9例(27.3%)，HBV，HCV标志物均阳性者33例中有11例(33.3%). 对照组中各组与研究组中相对应各组比较，自身抗体阳性率均无显著性差异(P>0.05，表1，图1).
, 百拇医药
表1 抗HGV阳性患者自身抗体检出率 组别
n
自身抗体阳性
各种自身抗体阳性人数
n
(%)
R
G
D
R+G
R+M
R+D
R+G+D
, http://www.100md.com
G+M
M+D
G+M+D
研究组
93
25
(26.9)
11
2
2
3
2
1
4
, 百拇医药
单独HGV
22
3
(13.6)
1
1
1
HGV+HBV
28
5
(17.9)
3
1
, 百拇医药 HGV+HCV
25
10
(40.0)
4
2
2
1
1
HGV+HBV+HCV
18
7
(38.9)
, http://www.100md.com
3
1
1
3
对照组
119
31
(26.1)
10
4
3
3
1
1
, http://www.100md.com
2
4
1
2
全阴性
25
4
(16.0)
2
1
1
HBV
28
7
, 百拇医药
(25.0)
3
2
2
HCV
33
9
(27.3)
3
3
1
1
1
HBV+HCV
, 百拇医药
33
11
(33.3)
2
2
1
1
1
1
2
1
注：HGV为抗HGV抗体阳性，HBV为HBV标志物至少一项阳性，HCV为抗HCV IgG或IgM抗体至少一项阳性. R为RF， G为TGAb，M为TMAb，D为抗ds-DNA.
, http://www.100md.com
图1 各研究组自身抗体阳性率与相应对照组的比较.
1.全组 2.HBV和HCV标志物均阴性 3.HBV标志物阳性 4.HCV标志物阳性 5.HBV和HCV标志物均阳性
3 讨论
近年来，虽然对已知的各型肝炎病毒都建立了特异而敏感的检测方法，但仍有约10%～20%的肝炎病例不能明确分型. 流行病学调查和研究表明可能存在新的肝炎病原因子. 1995年美国Simons et al[1，2]和Linnen et al[3]分别从肝炎患者的血清中克隆出GBV-C和HGV病毒基因，得到公认. 各国随即迅速开展了对HGV和庚型肝炎的研究. 我国学者也证实国内存在庚型肝炎病毒感染[4]. 种系发生分析表明，GBV不是HCV的变异株，但与HCV关系密切[5]. 许多研究表明，该病毒主要经血及血制品等肠道外途径传播，静脉注射毒品成瘾者、血液透析患者、多次受血或使用血液制品者、各种急慢性肝炎患者、接受器官移植者以及肝炎易感疾病如再生障碍性贫血等疾病患者是HGV感染的高危人群，可致输血后肝炎及其他急慢性肝病[2，3]，这与HBV和HCV的传播途径及流行情况相似[6]. 但是，有些研究者对HGV的致病性一直持疑问态度. 有作者认为，HGV感染不是引起各型肝病的主要致病因子[7]，也不是自身免疫性肝炎的主要病因[8].
, 百拇医药
许多研究结果提示，病毒感染可能与自身免疫病的发生有密切关系[9]. HCV和HBV 感染后机体出现的自身免疫现象已多见诸文献[10，11]. 部分HCV和HBV感染者，尤其是慢性活动性肝炎和肝硬变患者，体内可检出多种自身抗体，如类风湿因子、抗核抗体、抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体等. 自身免疫性肝炎的发病机制可能也与病毒感染诱发自身免疫有关. Tepper et al[12]报道，在10例冷球蛋白阳性的患者中，有6例检出HCV RNA，其中3例同时检出HGV RNA. 表明HGV可能与冷球蛋白有关. 而冷球蛋白血症患者往往合并有自身免疫病或发展为自身免疫病. 除此之外，关于HGV感染与自身免疫及自身免疫性肝炎关系的研究尚未见有报道.
根据本结果，研究组与对照组中，自身抗体都有一定的阳性率(26.9%和26.1)%，经统计学处理，二者无显著性差异(P>0.05). HGV血清标志物(抗HGV IgG抗体)阳性与各类疾病患者的自身免疫标志物无明显相关. 对照组中全阴性者和HBV 5项血清标志物一项以上阳性者自身抗体阳性率(16.0%和30.4%)分别较单独抗HGV阳性及抗HGV阳性合并HBV标志物阳性者自身抗体阳性率(13.6%和17.9%)高. 这可能与本研究中单独抗HGV抗体阳性者中有8例为小儿肾病患者，自身抗体阳性率较低有关. 而在HGV感染者中，同时合并HCV感染者和同时合并有HCV和HBV重叠感染者的自身抗体阳性率(40%和38.9%)较相应的抗HGV抗体阴性者的自身抗体阳性率(27.3%和33.3%)为高. 可能是由于HGV与HCV二者在核酸和氨基酸序列上有一定的同源性，同时感染的机会较多；而且HGV是缺陷病毒，只有与HCV合并感染才能引起或加重机体的免疫病理损害. 而HBV在结构上与HGV和HCV差异较大，引起机体自身免疫的可能性相对较小. 由于抗HGV IgG作为HGV感染血清标志物的意义尚有待于探讨，而且本文工作所检测的自身抗体种类较少，病例数也较少，HGV感染与自身免疫的关系有待于进一步深入研究.
, 百拇医药
作者简介:熊华，女，1967-08-27生，湖南省桃源市人，汉族. 1989年湖南医科大学检验系毕业，主管技师，主要从事免疫性疾病的实验诊断研究，发表论文7篇.
*本课题受国家人事部科技基金资助.
中国免疫学会第三届全国学术大会，1998-07-20～26兰州.
通讯作者 熊华，210002，江苏省南京市，南京军区南京总医院全军医学检验中心.
*Supported by the Scientific Foundation of the Ministry of Personnel Administration of P.R.China
Correspondence to: XIONG Hua, Center of Medical Laboratory Sciences, Chinese PLA Nanjing General Hospital of Nanjing Command Area, Nanjing 210002, Jiangsu Province, China
, http://www.100md.com
Tel. +86.25.4829687, Fax. +86*25*4803061
E-mail wig.nj@publicl.ptt.js.cn
4 参考文献
[1] Simons JN, Leary TP, Dawson GJ, Pilot-Matias TJ, Muerhoff AS, Schlauder GG, Desai SM, Mushahwar IK. Isolation of novel virus-like sequences associated with human hepatitis. Nat Med, 1995;1:564-569
[2] Leary TP, Muerhoff AS, Simons JN, Pilot-Matias TJ, Erker JC, Chalmers ML, Schlauder GG, Dawson GJ, Desai SM, Mushahwar IK. Sequence and genomic organization of GBV-C: a novel member of the flaviviridae associated with human non-A-E hepatitis. J Med Virol, 1996;48:60-67
, 百拇医药
[3] Linnen J, Wages J Jr, Zhang-Keck ZY, Fry KE, Krawczynski KZ, Alter H, Koonin E, Gallagher M, Alter M, Hadziyannis S, Karayiannis P, Fung K, Nakatsuji Y, Shih JW, Young L, Piatak M Jr, Hoover C, Fernandez J, Chen S, Zou JC, Morris T, Hyams KC, Ismay S, Lifson JD, Kim JP. Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: a transfusion-transmissible agent. Science, 1996;27:505-508
[4] 周育森，王海涛，唐时辛，王竟，陈薇，赵秋敏，张习坦. 中国人庚型肝炎病毒部分基因的克隆和DNA序列测定. 军事医学科学院院刊，1996；2：160
, http://www.100md.com
[5] Kao JH, Chen PJ, Hsiang SC, Chen W, Chen DS. Phylogenetic analysis of GB virus C: comparison of isolates from Africa, North America and Taiwan. J Infect Dis, 1996；174：410-413
[6] Mishiro S, Okamoto H. New HCV-like agent: epidemiology in Japan and characterization of the viral genome. Ⅸ international symposium on viral hepatitis and liver disease (Abstract volume). 1996:24
[7] Nagata T, Tzampouras N, Chokshi S, Naoumov NV, Cheeseman P, Smith HM, Baker AJ, Williams R, Mieli Vergani G. Hepatitis GB virus-C/hepatitis G virus infection in liver disease. Arch Dis Child, 1997;77:223-226
, 百拇医药
[8] Heringlake S, Tillmann HL, Cordes-Temme P, Trautwein C, Hunsmann G, Manns MP. GBV-C/HGV is not the major cause of autoimmune hepatitis. J Hepatol, 1996；25：980-984
[9] 武建国主编. 实用临床免疫学检验. 第1版. 南京：江苏科学技术出版社，1989:266
[10] Kawamoto H, Sakaguchi K, Takaki A, Ogawa S, Tsuji T. Autoimmune responces as assessed by hypergammaglobulin and the presence of autoantibodies in patients with chronic hepatitis C. Acta Med Okayama, 1993；47：305-310
[11] 余宏，齐名，李保仝，武建国. 丙型肝炎感染者的自身抗体分析. 上海免疫学杂志，1998；18：98-99
[12] Tepper JL, Feinman SV, DCosta L, Sooknannan R, Pruzanski W. Hepatitis G and hepatitis C RNA viruses coexisting in cryoglobulinemia. J Rheumatol, 1998;25:925-928
收稿日期 1998-11-30, http://www.100md.com
单位：南京军区南京总医院全军医学检验中心 江苏省南京市 210002
关键词：庚型肝炎病毒；自身抗体；肝炎病毒性
世界华人消化杂志990409 摘 要
目的 探讨庚型肝炎病毒(HGV)感染与机体自身免疫的关系.
方法 抗HGV IgG抗体阳性(ELISA法)的各类肝病及其他疾病患者93例. 部分慢性肝炎患者用RT-PCR检测证实为HGV RNA阳性. 用ELISA检测血清中类风湿因子(RF)、抗双链DNA(ds-DNA Ab)抗体、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)4种自身抗体. 同时用ELISA检测乙型肝炎病毒(HBV)5项血清标志物(HBsAg,抗HBs,HBeAg,抗HBe,抗HBc IgG)和丙型肝炎病毒标志物(抗HCV IgG和抗HCV IgM).
, http://www.100md.com
结果 研究对象93例中有25例检测出1种以上自身抗体的阳性率为26.9%. 其中自身抗体阳性率在单独抗HGV阳性者中为13.6%(3/22)；抗HGV阳性合并HBV标志物阳性者为17.9%(5/28)；抗HGV阳性合并抗HCV阳性者为40.0%(10/25)；HGV，HBV，HCV标志物全阳性者为38.9%(7/18). 对照组：自身抗体阳性率为26.1%(31/119). 其中HGV，HBV，HCV标志物全阴性者为16.0%(4/25)；HBV标志物阳性者为25.0%(7/28)；HCV标志物阳性者为27.3%(9/33)；HBV，HCV标志物均阳性者为33.3%(11/33). 虽然抗HGV阳性合并抗HCV阳性者组和HGV，HBV，HCV标志物全阳性者组的自身抗体阳性率(40.0%和38.9%)分别高于对照组中的HCV标志物阳性者组和HBV，HCV标志物均阳性者组(27.3%和33.3%)，但相应的研究组和对照组之间均无显著性差异(P>0.05).
结论 HGV血清标志物(抗HGV IgG抗体)阳性与各类疾病患者的4种自身免疫标志物无明显相关.
, http://www.100md.com
中国图书资料分类号 R512.6
Autoimmune antibodies in patients with hepatitis G virus infection*
XIONG Hua, QI Ming, WANG Ai-Li, YU Wei, JIANG Zhou and WU Jian-Guo
Center of Medical Laboratory Sciences, Chinese PLA Nanjing General Hospital of Nanjing Command Area, Nanjing 210002, Jiangsu Province, China
Subject headings hepatitis G virus; autoimmune antibody; hepatitis, viral
, http://www.100md.com
AIM To explore the correlation between infection of HGV and autoimmunity.
METHODS Ninety-three patients with hepatitis G and other diseases with positive anti-HGV IgG antibodies were investigated. Autoimmune markers, i.e., rheumatoid factors (RF), anti-double strain DNA antibody (ds-DNA Ab), anti-thyroglobulin antibody (TG Ab) and anti-thyromicrosome antibody (TM Ab) in the patient sera were determined by ELISA. The serum markers of hepatitis B virus (HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe and anti-HBc IgG) and hepatitis C virus (anti-HCV IgG and IgM) were detected by ELISA simultaneously.
, http://www.100md.com
RESULTS One type or more than 1 types of autoimmune antibodies were determined as positive in 26.9% (25/93) of patients, while in 26.1% (31/119) of controls. No significant difference was found (P>0.05) between the two groups as well as the matched subgroups, i.e., ①positive anti-HGV IgG alone and all negative hepatitis virus markers; ②positive anti-HGV IgG plus HBV markers and positive HBV markers alone; ③positive anti-HGV IgG plus HCV markers and positive HCV markers alone; and ④positive anti-HGV IgG plus HBV markers plus HCV markers and positive HBV markers plus HCV markers alone.
, 百拇医药
CONCLUSION No correlation is found between the HGV serum marker (anti-HGV IgG) and 4 types of autoimmune markers.
0 引言
庚型肝炎病毒(hepatitis G, HGV)是近年来发现的一种新的肝炎相关病毒，病毒核酸为单股正链RNA，以其基因组结构而归属于黄病毒科. HGV与黄病毒科另一成员丙型肝炎病毒(HCV)在结构上有一定的同源性. 关于HGV的分子生物学特点和流行病学特征国内外已有许多报道，但对HGV的致病性争议较多，有待于进一步研究. 关于HGV感染与自身免疫及自身免疫性肝炎关系的研究尚未见报道. 我们检测了HGV感染血清标志物(抗HGV抗体)阳性的各类疾病患者血清中的4种自身抗体，对HGV感染与机体自身免疫的关系进行了初步研究，报告如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 我院1997-11/1998-07门诊和住院的各类肝炎病毒易感疾病患者中抗HGV IgG抗体阳性者93例为研究组，包括肝病(各类病毒性肝炎、肝硬变、肝细胞癌)，血液病(再生障碍性贫血、血友病)，肾病(各类小儿肾炎、成人慢性肾功能衰竭)，有手术输血史者. 年龄3岁～78岁，男56例，女37例. 根据是否同时有HBV和HCV血清标志物阳性，再分为4组：①单独HGV血清标志物(抗HGV IgG抗体)阳性者22例；②HGV标志物合并HBV标志物阳性(HBV 5项血清标志物：HBsAg,抗HBs,HBeAg,抗HBe,抗HBc IgG至少1项阳性，不包括乙肝疫苗注射后抗HBs单项阳性者)28例；③HGV标志物合并HCV标志物(抗HCV IgG或(和)抗HCV IgM抗体)阳性25例；④HGV，HBV，HCV三者标志物同时阳性18例. 另设HGV血清标志物阴性对照组119例，也分为4组：①HGV，HBV，HCV标志物全阴性25例；②HBV标志物阳性28例；③HCV标志物阳性33例；④HBV，HCV标志物同时阳性33例. 均自静脉采血分离血清，-70℃保存待检.
, 百拇医药
1.2 方法 HBV 5项血清标志物、抗HCV酶联免疫试剂盒购自上海科华实业公司；抗HGV-IgG酶联免疫试剂盒为厦门泰伦生物试剂公司产品；HGV RT-PCR试剂为军事医学科学院产品. 类风湿因子(RF)、抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)检测试剂均为本室制备，HRP-SPA，HRP-聚合人IgG为本室标记. 酶联免疫检测仪为美国Awareness公司产品.
抗HGV-IgG，HBV 5项血清标志物、抗HCV-IgG和IgM用ELISA检测，HGV RNA用RT-PCR检测，均按说明书操作并判读结果. RF，TGAb,TMAb,抗ds-DNA均用ELISA法检测. 步骤如下：聚合人IgG，TG，TM抗原，变性DNA按优化选择最适浓度稀释后包被聚苯乙烯微量反应板，每孔0.1mL,4℃过夜. 0.01mol/L PBS-T洗5次，50mL/L小牛血清-PBS封闭，37℃ 2h，加血清标本0.1mL(1：10稀释于50mL/L小牛血清-PBS中). 另设空白、阴性、阳性对照各二孔，43℃温育30min，洗板5次. 按优化选择最适浓度分别加HRP-聚合人IgG(检测RF)、HRP-SPA(检测TGAb，TMAb，抗ds-DNA)，每孔0.1mL，43℃温育30min，TMB-H2O2呈色，2moL/L H2SO4终止反应，于450nm波长以空白调零测吸光度值，吸光度值大于2.1倍阴性对照平均吸光度值判为阳性.
, http://www.100md.com
2 结果
研究组和对照组HGV，HBV，HCV血清标志物的检测结果如前所述. 研究组中6例慢性肝炎患者用RT-PCR检测证实为HGV RNA阳性. 93例研究组患者血清标本中，有25例检出1项以上自身抗体阳性，阳性率为26.9%. 其中单独抗HGV阳性者22例中有3例检出自身抗体(13.6%)，抗HGV阳性合并HBV标志物阳性者28例中有5例检出自身抗体(17.9%)，抗HGV阳性合并抗HCV阳性者25例中有10例检出自身抗体(40.0%)，HGV，HBV，HCV三者标志物全阳性者18例中有7例检出自身抗体(38.9%). 对照组119例中有31例检出自身抗体，阳性率为26.1%. 与研究组比较无显著性差异(P>0.05). 其中全阴性者25例中有4例(16.0%)，HBV标志物阳性者28例中有7例(25.0%)，HCV标志物阳性33例中有9例(27.3%)，HBV，HCV标志物均阳性者33例中有11例(33.3%). 对照组中各组与研究组中相对应各组比较，自身抗体阳性率均无显著性差异(P>0.05，表1，图1).
, 百拇医药
表1 抗HGV阳性患者自身抗体检出率 组别
n
自身抗体阳性
各种自身抗体阳性人数
n
(%)
R
G
D
R+G
R+M
R+D
R+G+D
, http://www.100md.com
G+M
M+D
G+M+D
研究组
93
25
(26.9)
11
2
2
3
2
1
4
, 百拇医药
单独HGV
22
3
(13.6)
1
1
1
HGV+HBV
28
5
(17.9)
3
1
, 百拇医药 HGV+HCV
25
10
(40.0)
4
2
2
1
1
HGV+HBV+HCV
18
7
(38.9)
, http://www.100md.com
3
1
1
3
对照组
119
31
(26.1)
10
4
3
3
1
1
, http://www.100md.com
2
4
1
2
全阴性
25
4
(16.0)
2
1
1
HBV
28
7
, 百拇医药
(25.0)
3
2
2
HCV
33
9
(27.3)
3
3
1
1
1
HBV+HCV
, 百拇医药
33
11
(33.3)
2
2
1
1
1
1
2
1
注：HGV为抗HGV抗体阳性，HBV为HBV标志物至少一项阳性，HCV为抗HCV IgG或IgM抗体至少一项阳性. R为RF， G为TGAb，M为TMAb，D为抗ds-DNA.
, http://www.100md.com
图1 各研究组自身抗体阳性率与相应对照组的比较.
1.全组 2.HBV和HCV标志物均阴性 3.HBV标志物阳性 4.HCV标志物阳性 5.HBV和HCV标志物均阳性
3 讨论
近年来，虽然对已知的各型肝炎病毒都建立了特异而敏感的检测方法，但仍有约10%～20%的肝炎病例不能明确分型. 流行病学调查和研究表明可能存在新的肝炎病原因子. 1995年美国Simons et al[1，2]和Linnen et al[3]分别从肝炎患者的血清中克隆出GBV-C和HGV病毒基因，得到公认. 各国随即迅速开展了对HGV和庚型肝炎的研究. 我国学者也证实国内存在庚型肝炎病毒感染[4]. 种系发生分析表明，GBV不是HCV的变异株，但与HCV关系密切[5]. 许多研究表明，该病毒主要经血及血制品等肠道外途径传播，静脉注射毒品成瘾者、血液透析患者、多次受血或使用血液制品者、各种急慢性肝炎患者、接受器官移植者以及肝炎易感疾病如再生障碍性贫血等疾病患者是HGV感染的高危人群，可致输血后肝炎及其他急慢性肝病[2，3]，这与HBV和HCV的传播途径及流行情况相似[6]. 但是，有些研究者对HGV的致病性一直持疑问态度. 有作者认为，HGV感染不是引起各型肝病的主要致病因子[7]，也不是自身免疫性肝炎的主要病因[8].
, 百拇医药
许多研究结果提示，病毒感染可能与自身免疫病的发生有密切关系[9]. HCV和HBV 感染后机体出现的自身免疫现象已多见诸文献[10，11]. 部分HCV和HBV感染者，尤其是慢性活动性肝炎和肝硬变患者，体内可检出多种自身抗体，如类风湿因子、抗核抗体、抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体等. 自身免疫性肝炎的发病机制可能也与病毒感染诱发自身免疫有关. Tepper et al[12]报道，在10例冷球蛋白阳性的患者中，有6例检出HCV RNA，其中3例同时检出HGV RNA. 表明HGV可能与冷球蛋白有关. 而冷球蛋白血症患者往往合并有自身免疫病或发展为自身免疫病. 除此之外，关于HGV感染与自身免疫及自身免疫性肝炎关系的研究尚未见有报道.
根据本结果，研究组与对照组中，自身抗体都有一定的阳性率(26.9%和26.1)%，经统计学处理，二者无显著性差异(P>0.05). HGV血清标志物(抗HGV IgG抗体)阳性与各类疾病患者的自身免疫标志物无明显相关. 对照组中全阴性者和HBV 5项血清标志物一项以上阳性者自身抗体阳性率(16.0%和30.4%)分别较单独抗HGV阳性及抗HGV阳性合并HBV标志物阳性者自身抗体阳性率(13.6%和17.9%)高. 这可能与本研究中单独抗HGV抗体阳性者中有8例为小儿肾病患者，自身抗体阳性率较低有关. 而在HGV感染者中，同时合并HCV感染者和同时合并有HCV和HBV重叠感染者的自身抗体阳性率(40%和38.9%)较相应的抗HGV抗体阴性者的自身抗体阳性率(27.3%和33.3%)为高. 可能是由于HGV与HCV二者在核酸和氨基酸序列上有一定的同源性，同时感染的机会较多；而且HGV是缺陷病毒，只有与HCV合并感染才能引起或加重机体的免疫病理损害. 而HBV在结构上与HGV和HCV差异较大，引起机体自身免疫的可能性相对较小. 由于抗HGV IgG作为HGV感染血清标志物的意义尚有待于探讨，而且本文工作所检测的自身抗体种类较少，病例数也较少，HGV感染与自身免疫的关系有待于进一步深入研究.
, 百拇医药
作者简介:熊华，女，1967-08-27生，湖南省桃源市人，汉族. 1989年湖南医科大学检验系毕业，主管技师，主要从事免疫性疾病的实验诊断研究，发表论文7篇.
*本课题受国家人事部科技基金资助.
中国免疫学会第三届全国学术大会，1998-07-20～26兰州.
通讯作者 熊华，210002，江苏省南京市，南京军区南京总医院全军医学检验中心.
*Supported by the Scientific Foundation of the Ministry of Personnel Administration of P.R.China
Correspondence to: XIONG Hua, Center of Medical Laboratory Sciences, Chinese PLA Nanjing General Hospital of Nanjing Command Area, Nanjing 210002, Jiangsu Province, China
, http://www.100md.com
Tel. +86.25.4829687, Fax. +86*25*4803061
E-mail wig.nj@publicl.ptt.js.cn
4 参考文献
[1] Simons JN, Leary TP, Dawson GJ, Pilot-Matias TJ, Muerhoff AS, Schlauder GG, Desai SM, Mushahwar IK. Isolation of novel virus-like sequences associated with human hepatitis. Nat Med, 1995;1:564-569
[2] Leary TP, Muerhoff AS, Simons JN, Pilot-Matias TJ, Erker JC, Chalmers ML, Schlauder GG, Dawson GJ, Desai SM, Mushahwar IK. Sequence and genomic organization of GBV-C: a novel member of the flaviviridae associated with human non-A-E hepatitis. J Med Virol, 1996;48:60-67
, 百拇医药
[3] Linnen J, Wages J Jr, Zhang-Keck ZY, Fry KE, Krawczynski KZ, Alter H, Koonin E, Gallagher M, Alter M, Hadziyannis S, Karayiannis P, Fung K, Nakatsuji Y, Shih JW, Young L, Piatak M Jr, Hoover C, Fernandez J, Chen S, Zou JC, Morris T, Hyams KC, Ismay S, Lifson JD, Kim JP. Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: a transfusion-transmissible agent. Science, 1996;27:505-508
[4] 周育森，王海涛，唐时辛，王竟，陈薇，赵秋敏，张习坦. 中国人庚型肝炎病毒部分基因的克隆和DNA序列测定. 军事医学科学院院刊，1996；2：160
, http://www.100md.com
[5] Kao JH, Chen PJ, Hsiang SC, Chen W, Chen DS. Phylogenetic analysis of GB virus C: comparison of isolates from Africa, North America and Taiwan. J Infect Dis, 1996；174：410-413
[6] Mishiro S, Okamoto H. New HCV-like agent: epidemiology in Japan and characterization of the viral genome. Ⅸ international symposium on viral hepatitis and liver disease (Abstract volume). 1996:24
[7] Nagata T, Tzampouras N, Chokshi S, Naoumov NV, Cheeseman P, Smith HM, Baker AJ, Williams R, Mieli Vergani G. Hepatitis GB virus-C/hepatitis G virus infection in liver disease. Arch Dis Child, 1997;77:223-226
, 百拇医药
[8] Heringlake S, Tillmann HL, Cordes-Temme P, Trautwein C, Hunsmann G, Manns MP. GBV-C/HGV is not the major cause of autoimmune hepatitis. J Hepatol, 1996；25：980-984
[9] 武建国主编. 实用临床免疫学检验. 第1版. 南京：江苏科学技术出版社，1989:266
[10] Kawamoto H, Sakaguchi K, Takaki A, Ogawa S, Tsuji T. Autoimmune responces as assessed by hypergammaglobulin and the presence of autoantibodies in patients with chronic hepatitis C. Acta Med Okayama, 1993；47：305-310
[11] 余宏，齐名，李保仝，武建国. 丙型肝炎感染者的自身抗体分析. 上海免疫学杂志，1998；18：98-99
[12] Tepper JL, Feinman SV, DCosta L, Sooknannan R, Pruzanski W. Hepatitis G and hepatitis C RNA viruses coexisting in cryoglobulinemia. J Rheumatol, 1998;25:925-928
收稿日期 1998-11-30, http://www.100md.com