用鲎试剂法检查脑维治注射液中的细菌内毒素
作者：刘晓娟 赵艳杰 褚云秋
单位：锦州医学院药学系(刘晓娟 赵艳杰)；锦州市制药五厂(褚云秋)
关键词：脑维治射液；鲎试剂；细菌内毒素；热原检查
沈阳药科大学学报990416 摘 要 用鲎试剂法对脑维治注射液中的细菌内毒素进行检测，并与《中国药典》家兔法检查热原进行对比.结果表明，脑维治注射液经适当稀释对用鲎试剂检查其中的细菌内毒素无干扰，鲎试剂法可以用于脑维治注射液细菌内毒素检测，以替代家兔法检查热原.
分类号 R94
A Method to Test the Nao Weizhi Injection for Becterial Endotoxin with TAL
Liu Xiaojuan,Zhao Yanjie,Chu Yunqiu,Department of Pharmacy,Jinzhou Medical College,Jinzhou 121001
, http://www.100md.com
Abstract We tested bacterial endotoxin in the Nao Weizhi Injection with tachypleus amebocyte lysate(TAL) and compared this method(TALT) with the rabbit′s(RT) method for the pyrogens test mentioned in pharmacopeia.The results indicated that the Nao Weizhi Injection diluted properly had no interference in TALT.So the TAL could be used to test the bacterial endotox in the Nao Weizhi Injection and substitute RT for the pyrogens test.
Key words the Nao Weizhi Injection;tachypleus amebocyte lysate (TAL):bacterial endotoxin;pyrogen test
, 百拇医药
作者参考有关文献〔1，2〕，用鲎试剂法对我院生产的脑维治注射液中的细菌内毒素进行检测，并与家兔法热原检查进行对比.
1 实验方法
实验用仪器、试剂与供试样品为旋涡混合器(上海亚荣生化仪器厂)；电热恒温水浴箱(上海医疗器械厂)；鲎试剂(灵敏度标示值λb 0.5EU/mL，0.1 mL/支，批号970906，福州东方鲎试剂厂)；鲎试剂溶解水(2 mL/支，批号960910，福州东方鲎试剂厂)；细菌内毒素工作标准品(简称R，50 EU/支，批号94007，福州东方鲎试剂厂；脑维治注射液(本院科技开发部生产，200 mg/5 mL/支)；热原检查用家兔(本院实验动物中心).
1.1 鲎试剂灵敏度复核
按文献〔1〕进行操作和结果判定(结果见表1).
, http://www.100md.com
1.2 供试品对细菌内毒素检查的干扰试验
脑维治注射液细菌内毒素限值的计算：参照脑维治注射液质量控制标准，热原检查时家兔静脉注射剂量为3 mL/kg(M)和我国R的致热阈5 EU/kg(K)〔3〕，计算出供试品细菌内毒素理论限值(L)〔3〕.L=K/M=(5 EU/kg)/(3 mL/kg)≈1.67 EU/mL.
供试品的最大有效稀释倍数(MVD)按MVD=L/λ式计算〔1〕.式中λ为本实验用鲎试剂灵敏度.故MVD=(1.67 EU/mL)/(0.5 EU/mL)≈3.3(倍).
供试品的稀释：取供试品原液(200 mg/5mL/支)3 mL，加鲎试剂溶解水至10 mL，摇匀.此溶液即为供试品的3.3倍稀释液，亦为最大有效稀释液，其浓度为12 mg/mL.
, 百拇医药
R的稀释：用供试品最大有效稀释液鲎试剂溶解水分别将R稀释，制成分别含2.0、1.0、0.5、0.25、0 λb稀释液.
供试品干扰试验：取鲎试剂若干支，按文献〔1〕操作和结果判定，共考察供试品4批干扰试验(结果见表1).
1.3 两法对比实验
取1997年生产的经兔法热原检查合格的供试品46批次，用鲎试剂法进行检查.另对1998年生产的供试品先行鲎试剂法检查，后用兔法复核对比(结果见表2).
2 结果
a.鲎试剂与内毒素产生凝胶反应的终点在0.5～2.0 λb之间，表明所用鲎试剂灵敏度与标示值一致，为0.5 EU/mL；脑维治注射液的3.3倍稀释液对灵敏度0.5 EU/mL鲎试剂与R的凝胶反应没有干扰作用，可检出内毒素，且与理论计算值相符.鲎试剂可以用于脑维治注射液中细菌内毒素检查.
, 百拇医药
b.多批次样品的鲎试剂法检查细菌内毒素与兔法检查热原结果对比表明，前者+ solid gel,-liquid灵敏度高，检验阴性结果符合率高达96%.故用鲎试剂法检测样品中的内毒素限量能有效说明样品热原检查结果，用鲎试剂法检查供试品中的细菌内毒素代替兔法检查热原可行.用鲎试剂法检测部分供试品呈阳性，可能与生产中使用纤维素膜有关〔4〕.对用该法呈阳性的样品可行兔法复检，以确定样品中热原检查项是否通过.
Tab.1 The results of the tests of TAL sensitivity and sample interference Samples
Batch
number
Mumber of
test tubes
, http://www.100md.com
Concenteration of
bacterial endotoxin/(EU.mL1)
1.0
0.5
0.25
0.125
0
water
for TAL
960910
1
+
, http://www.100md.com
+
-
-
-
2
+
+
-
-
-
3
+
+
-
, http://www.100md.com
-
-
4
+
+
-
-
-
Nao
Weizhi
injection
(971205
1
, http://www.100md.com +
+
-
-
-
971128
2
+
+
-
-
-
980130
3
, http://www.100md.com
+
+
-
-
-
980412)
4
+
+
-
-
-
Tab.2 The comparison of the results between TALT and RT in 78 batches of sample Annals
, 百拇医药
Umbers
of batch
TALT
TALT
Correspondence ratio
of negative results/%
Negative
Possitive
Negative
Possitive
1997
46
, 百拇医药
44
2
46
0
95.56
1998
32
31
1
32
0
96.88
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：二部.北京：化学工业出版社，1995.附录77
2 梁希月,李仁秋.注射用头孢肟钠细菌内毒素检查方法的研究.药物分析杂志，1997，17(5)：325
3 夏振民.药品细菌内毒素检查的限值.药物分析杂志，1995，15(3)：54
4 夏振民，刘大英.特异鲎试剂研究进展.药物分析杂志，1997，17(5)：353
收稿日期:1998-08-24, http://www.100md.com
单位：锦州医学院药学系(刘晓娟 赵艳杰)；锦州市制药五厂(褚云秋)
关键词：脑维治射液；鲎试剂；细菌内毒素；热原检查
沈阳药科大学学报990416 摘 要 用鲎试剂法对脑维治注射液中的细菌内毒素进行检测，并与《中国药典》家兔法检查热原进行对比.结果表明，脑维治注射液经适当稀释对用鲎试剂检查其中的细菌内毒素无干扰，鲎试剂法可以用于脑维治注射液细菌内毒素检测，以替代家兔法检查热原.
分类号 R94
A Method to Test the Nao Weizhi Injection for Becterial Endotoxin with TAL
Liu Xiaojuan,Zhao Yanjie,Chu Yunqiu,Department of Pharmacy,Jinzhou Medical College,Jinzhou 121001
, http://www.100md.com
Abstract We tested bacterial endotoxin in the Nao Weizhi Injection with tachypleus amebocyte lysate(TAL) and compared this method(TALT) with the rabbit′s(RT) method for the pyrogens test mentioned in pharmacopeia.The results indicated that the Nao Weizhi Injection diluted properly had no interference in TALT.So the TAL could be used to test the bacterial endotox in the Nao Weizhi Injection and substitute RT for the pyrogens test.
Key words the Nao Weizhi Injection;tachypleus amebocyte lysate (TAL):bacterial endotoxin;pyrogen test
, 百拇医药
作者参考有关文献〔1，2〕，用鲎试剂法对我院生产的脑维治注射液中的细菌内毒素进行检测，并与家兔法热原检查进行对比.
1 实验方法
实验用仪器、试剂与供试样品为旋涡混合器(上海亚荣生化仪器厂)；电热恒温水浴箱(上海医疗器械厂)；鲎试剂(灵敏度标示值λb 0.5EU/mL，0.1 mL/支，批号970906，福州东方鲎试剂厂)；鲎试剂溶解水(2 mL/支，批号960910，福州东方鲎试剂厂)；细菌内毒素工作标准品(简称R，50 EU/支，批号94007，福州东方鲎试剂厂；脑维治注射液(本院科技开发部生产，200 mg/5 mL/支)；热原检查用家兔(本院实验动物中心).
1.1 鲎试剂灵敏度复核
按文献〔1〕进行操作和结果判定(结果见表1).
, http://www.100md.com
1.2 供试品对细菌内毒素检查的干扰试验
脑维治注射液细菌内毒素限值的计算：参照脑维治注射液质量控制标准，热原检查时家兔静脉注射剂量为3 mL/kg(M)和我国R的致热阈5 EU/kg(K)〔3〕，计算出供试品细菌内毒素理论限值(L)〔3〕.L=K/M=(5 EU/kg)/(3 mL/kg)≈1.67 EU/mL.
供试品的最大有效稀释倍数(MVD)按MVD=L/λ式计算〔1〕.式中λ为本实验用鲎试剂灵敏度.故MVD=(1.67 EU/mL)/(0.5 EU/mL)≈3.3(倍).
供试品的稀释：取供试品原液(200 mg/5mL/支)3 mL，加鲎试剂溶解水至10 mL，摇匀.此溶液即为供试品的3.3倍稀释液，亦为最大有效稀释液，其浓度为12 mg/mL.
, 百拇医药
R的稀释：用供试品最大有效稀释液鲎试剂溶解水分别将R稀释，制成分别含2.0、1.0、0.5、0.25、0 λb稀释液.
供试品干扰试验：取鲎试剂若干支，按文献〔1〕操作和结果判定，共考察供试品4批干扰试验(结果见表1).
1.3 两法对比实验
取1997年生产的经兔法热原检查合格的供试品46批次，用鲎试剂法进行检查.另对1998年生产的供试品先行鲎试剂法检查，后用兔法复核对比(结果见表2).
2 结果
a.鲎试剂与内毒素产生凝胶反应的终点在0.5～2.0 λb之间，表明所用鲎试剂灵敏度与标示值一致，为0.5 EU/mL；脑维治注射液的3.3倍稀释液对灵敏度0.5 EU/mL鲎试剂与R的凝胶反应没有干扰作用，可检出内毒素，且与理论计算值相符.鲎试剂可以用于脑维治注射液中细菌内毒素检查.
, 百拇医药
b.多批次样品的鲎试剂法检查细菌内毒素与兔法检查热原结果对比表明，前者+ solid gel,-liquid灵敏度高，检验阴性结果符合率高达96%.故用鲎试剂法检测样品中的内毒素限量能有效说明样品热原检查结果，用鲎试剂法检查供试品中的细菌内毒素代替兔法检查热原可行.用鲎试剂法检测部分供试品呈阳性，可能与生产中使用纤维素膜有关〔4〕.对用该法呈阳性的样品可行兔法复检，以确定样品中热原检查项是否通过.
Tab.1 The results of the tests of TAL sensitivity and sample interference Samples
Batch
number
Mumber of
test tubes
, http://www.100md.com
Concenteration of
bacterial endotoxin/(EU.mL1)
1.0
0.5
0.25
0.125
0
water
for TAL
960910
1
+
, http://www.100md.com
+
-
-
-
2
+
+
-
-
-
3
+
+
-
, http://www.100md.com
-
-
4
+
+
-
-
-
Nao
Weizhi
injection
(971205
1
, http://www.100md.com +
+
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971128
2
+
+
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980130
3
, http://www.100md.com
+
+
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980412)
4
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Tab.2 The comparison of the results between TALT and RT in 78 batches of sample Annals
, 百拇医药
Umbers
of batch
TALT
TALT
Correspondence ratio
of negative results/%
Negative
Possitive
Negative
Possitive
1997
46
, 百拇医药
44
2
46
0
95.56
1998
32
31
1
32
0
96.88
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典：二部.北京：化学工业出版社，1995.附录77
2 梁希月,李仁秋.注射用头孢肟钠细菌内毒素检查方法的研究.药物分析杂志，1997，17(5)：325
3 夏振民.药品细菌内毒素检查的限值.药物分析杂志，1995，15(3)：54
4 夏振民，刘大英.特异鲎试剂研究进展.药物分析杂志，1997，17(5)：353
收稿日期:1998-08-24, http://www.100md.com