子宫颈癌组织细胞凋亡、增殖细胞核抗原及P53蛋白表达的实验研究*
作者：娄 阁 钱素娟 马玉彦 周令望
单位：哈尔滨医科大学第三临床医学院(150040)
关键词：子宫颈癌；细胞凋亡；P53；PCNA
中国慢性病预防与控制990404 摘要 目的：探讨细胞凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)与子宫颈癌的关系。方法：采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡，采用免疫组化技 术检测PCNA和P53蛋白。结果：32例子宫颈鳞癌组织中，细胞凋亡、 P53蛋白和PCNA阳性率分别为62.50%，53.13%和65.63%。表达P53蛋白的细 胞与表达PCNA细胞分布区域基本一致，与细胞凋亡无明显相关性。正常子宫颈组织只有上皮 组织内有少数凋亡细胞和表达PCNA的细胞，显微镜下每视野阳性细胞数均不超过10%。结论：P53蛋白可能通过促进细胞增殖，抑制细胞凋亡而参与子宫颈癌发 生与发展。
, 百拇医药
中图分类号 R737.3302 文献标识码 A
The Experiment Study of the Apoptosis,PCNA and the Expression of P53
Protein in the Cervix Carcinoma Tissues
Lo Ge, et al；
The Third Cli nical College of Harbin Medical University (150040)
Abstract Objective:The purpose of this testWas to study the r elationship between the apoptosis and the proliferation cell nuclear antigen(PCN A).Methods:The apoptosisWas detected by tagging unselected N-end- labeled and the apoptosisWas detected by immunohistochemistry.Results:The positive rate of apoptosis P53 protein and PCNAWere 62.50%,53.13 % and 65.63% respectively in the tissues of 32 cases of cervix squamous cancer. The area of cells’distribution of expression of P53 protein and of expre ssion of PCNA,and thereWas no significantly relationWith apoptosis.ThereWere a few cells of apoptosis and of expressing PCNA only in the epithelial tissue of normal cervix tissue and the number of positive cellsWas less than 10% per mic rosopic field of vision.Conclusion:The P53protein may be parti cipated in the occurring and developing of cervix cancer by advance of cells’ p roliferation and by check of apoptosis.
, 百拇医药
Key Words Cervix cancer Apoptosis P53 PCNA
子宫颈癌是妇科比较常见的恶性肿瘤之一，其病因及发病机制不清。近年来 ，随着细胞分子生物学研究的深入，发现肿瘤的发生发展不仅取决于细胞的增殖速率，而且 与细胞凋亡(Apoptosis)有一定关系。本实验通过对宫颈癌组织P53蛋白、PCNA及凋亡 细胞进行检测，探讨宫颈癌的发病机制。
1 材料与方法
1.1 对象 选取黑龙江省肿瘤医院妇科1996年1月至1997 年12月手术切除的子宫颈鳞癌标本32例，患者年龄32～63岁，所有患者术前未进行抗肿瘤治 疗。用7例正常子宫颈组织进行对照。标本经常规石蜡包埋后连续切片，厚度为4 μm。
1.2 TUNEL法检查凋亡细胞 试剂盒由BM公司提供，操作 按说明书进行。结果判定：凋亡细胞核呈棕褐色，非凋亡细胞核呈绿色(甲基绿复染)。
, 百拇医药
1.3 免疫组化法(S-P)检测P53蛋白和PCNA 鼠抗 人P53单克隆抗体(ZYMED)和鼠抗人PCNA单克隆抗体(DAKO)以1∶40稀释，采用S-P法进行免疫组化检测。DAB显色，甲基绿复染，脱水 ，透明后封片观察。结果判定：P53 蛋白和PCNA均是核蛋白，阳性染色为棕褐色。
2 结 果
TUNEL法检测发现，正常子宫颈标本有2例上皮组 织中可见少数凋亡细胞，但每视野阳性细胞均不超过10%。子宫颈癌组织中，可见广泛的灶 状细胞凋亡，分布无规律性，阳性率达62.50%(20/32)(见表1、图1)。
表1 子宫颈正常组织和宫颈癌组织细胞凋亡、P53蛋白、PCNA检测结果 分组
例数
, 百拇医药
细胞凋亡(+)
P 53(+)
PCNA(+)
对照组
7
2
0
3
宫颈癌组
32
20
17
21
, 百拇医药
免疫组化法检测发现，正常子宫颈组织无P53蛋白的表达，3例上皮组织可 见数个细胞表达PCNA，阳性细胞数每视野一般不超过10%。而子宫颈癌组织中，可见广泛的 、 灶状的、 表达P53蛋白和 PCNA的细胞，阳性率分别为53.13%和65.63%。表达P53蛋白的细胞与表达PCNA细胞分布 区域基本一致，而与凋亡细胞无明显相关性。同时有细胞凋亡和PCNA表达的子宫颈癌组织有 15例，占46.88%；同时有P53蛋白和PCNA表达者有16例，占50.00%(见表1、图2、图 3)。
图1 TUNEL法检测，可见子宫颈癌组织中有
广泛的灶状细胞凋亡(×66)
, 百拇医药
图2 免疫组化法检测，可见子宫颈癌组织中
有P53蛋白表达(×66)
图3 免疫组化法检测，可见子宫颈癌组织中
有表达PCNA的细胞(×66)
3 讨 论
PCNA是DNA多聚酶δ的一种辅助蛋白，调控DNA合成及细胞增殖，可用以估计细胞或组织的增 殖活性及肿瘤的恶性潜能。本实验结果显示，虽然正常宫颈上皮组织少数细胞有PCNA的阳性 表达，但阳性数少于10%。而子宫颈癌组织中，可见PCNA的高表达，阳性率达65.63%。表达 PCNA的细胞呈广泛的灶状分布，无明显规律性，提示PCNA与子宫颈癌有关。研究认为，PCNA 的大量出现可用于估计子宫颈癌前病变，为临床诊断和治疗提供依据〔1，2〕。
, 百拇医药
细胞凋亡是近年来生命科学的研究热点。研究发现〔3〕，细胞凋亡是在基因调控下 主动发生的现象，在维持机体正常形能方面起重要作用，细胞凋亡失调参与多种疾病的发生 与发展。已经发现30多种形态及功能基因与细胞凋亡有关，P53基因是其中重要的调 控基因之一。野生型P53(WtP53)是细胞周期相关基因。正常细胞中，P53 控制着处于生长停滞状态的静止期细胞从G0期向G1期转变。近年研究发现，WtP53 起着“分子警察”的作用，当细胞DNA损伤时，WtP53蛋白可以使细胞分裂停于G1 期，以便对损伤的DNA进行修复。若损伤的DNA不能修复，WtP53可诱发细胞凋亡将其 排除。但由于WtP53蛋白半衰期过短，一般免疫组化法不易检测到。突变型P53 (mtp53)蛋白作用相反，可促进细胞增殖，与肿瘤生物学行为有关〔4〕。突 变后的P53蛋白稳定性增加。本实验结果显示，子宫颈癌组织中，有细胞凋亡和P 53蛋白的较高表达，二者阳性率分别为62.50%和53.13%，但二者之间无明显相关性。表 达P53蛋白的细胞与表达PCNA细胞的分布区域基本一致，同时有P53蛋白和PCNA 表达者占50.00%。提示P53蛋白可能通过促进子宫颈癌细胞增殖、抑制细胞凋亡而参 与子宫颈癌的发生与发展。
, 百拇医药
目前研究认为，细胞凋亡与细胞增殖均与肿瘤有关。本实验结果显示，在不同宫颈癌组织中 ，凋亡细胞与表达PCNA的细胞之间无明显相关性，二者同时有阳性检出者占46.88%，推测 二种细胞的比值(凋亡细胞/表达PCNA细胞)可能与宫颈癌预后有关。理论上，比值越大，预 后越好。相信随着研究的不断深入，子宫颈癌发病机制将不断清晰，并为临床有效治疗提供 理论依据。
*黑龙江省自然科学基金资助课题(D9728)
参考文献
1 Kobayashi I,Matsuo K,Ishibashi Y,et al.The proliferative activity in dysplasia and carcinoma in situ of the uterine cervix analyzed by proliferat ing cell nuclear immunostaining and silver-binding argyrophilic nucleolar org anizer region staining.Hum Pathol,1994,25∶198
, 百拇医药
2 薛月珍，朱美珍.子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞癌中增殖细胞核抗原和C- myc基因过度表达及其临床意义.现代妇产科进展，1997，6(3)∶204
3 Willims GT,Smith CA.Molecular regulation of apoptosis:Genetic con trols on cell death.Cell,1993,74∶727
4 Liang XH,Mungal S,Ayscue A,et al.Bcl-2 protooncogene expression incervix carcinoma cell lines containing inactive P53.J Cell Biochem,1995, 57∶509
收稿日期：1998-06-04, http://www.100md.com
单位：哈尔滨医科大学第三临床医学院(150040)
关键词：子宫颈癌；细胞凋亡；P53；PCNA
中国慢性病预防与控制990404 摘要 目的：探讨细胞凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)与子宫颈癌的关系。方法：采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡，采用免疫组化技 术检测PCNA和P53蛋白。结果：32例子宫颈鳞癌组织中，细胞凋亡、 P53蛋白和PCNA阳性率分别为62.50%，53.13%和65.63%。表达P53蛋白的细 胞与表达PCNA细胞分布区域基本一致，与细胞凋亡无明显相关性。正常子宫颈组织只有上皮 组织内有少数凋亡细胞和表达PCNA的细胞，显微镜下每视野阳性细胞数均不超过10%。结论：P53蛋白可能通过促进细胞增殖，抑制细胞凋亡而参与子宫颈癌发 生与发展。
, 百拇医药
中图分类号 R737.3302 文献标识码 A
The Experiment Study of the Apoptosis,PCNA and the Expression of P53
Protein in the Cervix Carcinoma Tissues
Lo Ge, et al；
The Third Cli nical College of Harbin Medical University (150040)
Abstract Objective:The purpose of this testWas to study the r elationship between the apoptosis and the proliferation cell nuclear antigen(PCN A).Methods:The apoptosisWas detected by tagging unselected N-end- labeled and the apoptosisWas detected by immunohistochemistry.Results:The positive rate of apoptosis P53 protein and PCNAWere 62.50%,53.13 % and 65.63% respectively in the tissues of 32 cases of cervix squamous cancer. The area of cells’distribution of expression of P53 protein and of expre ssion of PCNA,and thereWas no significantly relationWith apoptosis.ThereWere a few cells of apoptosis and of expressing PCNA only in the epithelial tissue of normal cervix tissue and the number of positive cellsWas less than 10% per mic rosopic field of vision.Conclusion:The P53protein may be parti cipated in the occurring and developing of cervix cancer by advance of cells’ p roliferation and by check of apoptosis.
, 百拇医药
Key Words Cervix cancer Apoptosis P53 PCNA
子宫颈癌是妇科比较常见的恶性肿瘤之一，其病因及发病机制不清。近年来 ，随着细胞分子生物学研究的深入，发现肿瘤的发生发展不仅取决于细胞的增殖速率，而且 与细胞凋亡(Apoptosis)有一定关系。本实验通过对宫颈癌组织P53蛋白、PCNA及凋亡 细胞进行检测，探讨宫颈癌的发病机制。
1 材料与方法
1.1 对象 选取黑龙江省肿瘤医院妇科1996年1月至1997 年12月手术切除的子宫颈鳞癌标本32例，患者年龄32～63岁，所有患者术前未进行抗肿瘤治 疗。用7例正常子宫颈组织进行对照。标本经常规石蜡包埋后连续切片，厚度为4 μm。
1.2 TUNEL法检查凋亡细胞 试剂盒由BM公司提供，操作 按说明书进行。结果判定：凋亡细胞核呈棕褐色，非凋亡细胞核呈绿色(甲基绿复染)。
, 百拇医药
1.3 免疫组化法(S-P)检测P53蛋白和PCNA 鼠抗 人P53单克隆抗体(ZYMED)和鼠抗人PCNA单克隆抗体(DAKO)以1∶40稀释，采用S-P法进行免疫组化检测。DAB显色，甲基绿复染，脱水 ，透明后封片观察。结果判定：P53 蛋白和PCNA均是核蛋白，阳性染色为棕褐色。
2 结 果
TUNEL法检测发现，正常子宫颈标本有2例上皮组 织中可见少数凋亡细胞，但每视野阳性细胞均不超过10%。子宫颈癌组织中，可见广泛的灶 状细胞凋亡，分布无规律性，阳性率达62.50%(20/32)(见表1、图1)。
表1 子宫颈正常组织和宫颈癌组织细胞凋亡、P53蛋白、PCNA检测结果 分组
例数
, 百拇医药
细胞凋亡(+)
P 53(+)
PCNA(+)
对照组
7
2
0
3
宫颈癌组
32
20
17
21
, 百拇医药
免疫组化法检测发现，正常子宫颈组织无P53蛋白的表达，3例上皮组织可 见数个细胞表达PCNA，阳性细胞数每视野一般不超过10%。而子宫颈癌组织中，可见广泛的 、 灶状的、 表达P53蛋白和 PCNA的细胞，阳性率分别为53.13%和65.63%。表达P53蛋白的细胞与表达PCNA细胞分布 区域基本一致，而与凋亡细胞无明显相关性。同时有细胞凋亡和PCNA表达的子宫颈癌组织有 15例，占46.88%；同时有P53蛋白和PCNA表达者有16例，占50.00%(见表1、图2、图 3)。
图1 TUNEL法检测，可见子宫颈癌组织中有
广泛的灶状细胞凋亡(×66)
, 百拇医药
图2 免疫组化法检测，可见子宫颈癌组织中
有P53蛋白表达(×66)
图3 免疫组化法检测，可见子宫颈癌组织中
有表达PCNA的细胞(×66)
3 讨 论
PCNA是DNA多聚酶δ的一种辅助蛋白，调控DNA合成及细胞增殖，可用以估计细胞或组织的增 殖活性及肿瘤的恶性潜能。本实验结果显示，虽然正常宫颈上皮组织少数细胞有PCNA的阳性 表达，但阳性数少于10%。而子宫颈癌组织中，可见PCNA的高表达，阳性率达65.63%。表达 PCNA的细胞呈广泛的灶状分布，无明显规律性，提示PCNA与子宫颈癌有关。研究认为，PCNA 的大量出现可用于估计子宫颈癌前病变，为临床诊断和治疗提供依据〔1，2〕。
, 百拇医药
细胞凋亡是近年来生命科学的研究热点。研究发现〔3〕，细胞凋亡是在基因调控下 主动发生的现象，在维持机体正常形能方面起重要作用，细胞凋亡失调参与多种疾病的发生 与发展。已经发现30多种形态及功能基因与细胞凋亡有关，P53基因是其中重要的调 控基因之一。野生型P53(WtP53)是细胞周期相关基因。正常细胞中，P53 控制着处于生长停滞状态的静止期细胞从G0期向G1期转变。近年研究发现，WtP53 起着“分子警察”的作用，当细胞DNA损伤时，WtP53蛋白可以使细胞分裂停于G1 期，以便对损伤的DNA进行修复。若损伤的DNA不能修复，WtP53可诱发细胞凋亡将其 排除。但由于WtP53蛋白半衰期过短，一般免疫组化法不易检测到。突变型P53 (mtp53)蛋白作用相反，可促进细胞增殖，与肿瘤生物学行为有关〔4〕。突 变后的P53蛋白稳定性增加。本实验结果显示，子宫颈癌组织中，有细胞凋亡和P 53蛋白的较高表达，二者阳性率分别为62.50%和53.13%，但二者之间无明显相关性。表 达P53蛋白的细胞与表达PCNA细胞的分布区域基本一致，同时有P53蛋白和PCNA 表达者占50.00%。提示P53蛋白可能通过促进子宫颈癌细胞增殖、抑制细胞凋亡而参 与子宫颈癌的发生与发展。
, 百拇医药
目前研究认为，细胞凋亡与细胞增殖均与肿瘤有关。本实验结果显示，在不同宫颈癌组织中 ，凋亡细胞与表达PCNA的细胞之间无明显相关性，二者同时有阳性检出者占46.88%，推测 二种细胞的比值(凋亡细胞/表达PCNA细胞)可能与宫颈癌预后有关。理论上，比值越大，预 后越好。相信随着研究的不断深入，子宫颈癌发病机制将不断清晰，并为临床有效治疗提供 理论依据。
*黑龙江省自然科学基金资助课题(D9728)
参考文献
1 Kobayashi I,Matsuo K,Ishibashi Y,et al.The proliferative activity in dysplasia and carcinoma in situ of the uterine cervix analyzed by proliferat ing cell nuclear immunostaining and silver-binding argyrophilic nucleolar org anizer region staining.Hum Pathol,1994,25∶198
, 百拇医药
2 薛月珍，朱美珍.子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞癌中增殖细胞核抗原和C- myc基因过度表达及其临床意义.现代妇产科进展，1997，6(3)∶204
3 Willims GT,Smith CA.Molecular regulation of apoptosis:Genetic con trols on cell death.Cell,1993,74∶727
4 Liang XH,Mungal S,Ayscue A,et al.Bcl-2 protooncogene expression incervix carcinoma cell lines containing inactive P53.J Cell Biochem,1995, 57∶509
收稿日期：1998-06-04, http://www.100md.com