部分氨基糖苷类抗生素含量的快速测定法
作者：钱树德
单位：江苏省苏州市药品检验所(215006)
关键词：
首都医药990426 氨基糖苷类抗生素的质控及分析测定，主要集中于各组分的快速准确分离测定的研究，除经典的微生物测定含量的方法外，还有TLC法，HPLC法，用HPLC法进行测定时，多以氨基糖苷类衍生化反应制成紫外吸收衍生物或荧光衍生物后，才便于检测，其衍生化试剂有邻苯二醛巯基化合物，荧光胺，2.4-二硝基氟苯，2，4，6-三硝基苯磺酸试剂等。本文根据部分氨基糖苷类抗生素中的伯氨基在一定条件下可与甲醛、乙酰丙酮组成的衍生化试剂进行Hantzsch反应，对其进行含量测定，本文对丁胺卡那霉素(Ⅰ)、卡那霉素(Ⅱ)，核糖霉素(Ⅲ)，妥布霉素(Ⅳ)，巴龙霉素(Ⅴ)，小诺霉素(Ⅵ)，通过与衍生化试剂反应后，在356nm波长处(此不为最大吸收)测定吸收度，可分别测定其含量。为了减少误差，用其标准品或对照品进行平行操作，经对标准品定量加入和样品按处方定量配制进行回收率测定，其(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)、(Ⅳ)、(Ⅴ)、(Ⅵ)的标准品回收率(%)分别为99.01，98.71，99.42，98.60，99.12，99.30，CV值(%)分别为0.85，0.48，0.58，0.67，1.20，0.80(n=4)。样品回收率分别为99.20，99.00，98.82，98.83，98.92，99.80，CV值(%)分别为1.24，0.80，0.96，1.12，0.95，0.80(n=4)。
1 测定方法
1.1 衍生化试剂配制：取缓冲液(配制含醋酸、硼酸和磷酸均为0.2mol/L的溶液，用约1mol/L的氢氧化钠溶液调节至pH2.5±0.1)100ml，加入乙酰丙酮(AR) 8ml，甲醛溶液(36%AR)20ml，充分混匀，放置，用水稀释至300ml，摇匀，临用时新鲜配制。
1.2 标准溶液和样品溶液配制：分别配制(Ⅰ)，(Ⅱ)，(Ⅲ)，(Ⅳ)，(Ⅴ)，(Ⅵ)浓度分别为50μg/ml，40μg/ml，60μg/ml，40μg/ml，50μg/ml，60μg/ml的标准溶液和样品溶液，(固体制剂按标示量折算)。
1.3 标准曲线制备，分别精密量取(Ⅰ)，(Ⅱ)，(Ⅲ)，(Ⅳ)，(Ⅴ)，(Ⅵ)标准溶液各0.50，1.0，1.5，2.0，2.5(ml)，按1.4项中自“置10ml量瓶中……起操作”，绘制标准曲线，求得回归方程。实验表明，其吸收值与浓度在0μg/ml～20μg/ml范围内呈线性关系。
1.4 测定法：分别精密吸取(Ⅰ)，(Ⅱ)，(Ⅲ)，(Ⅳ)，(Ⅴ)，(Ⅵ)标准溶液和样品溶液2.0ml，分别置10ml容量瓶中，各加入衍生化试剂3.0ml，封塞，置沸水浴中加热20min，冷却至室温，加水至刻度，以水为空白，于356nm波长处分别测定吸收度，以样品溶液与标准品溶液的吸收度之比计算样品溶液的浓度=标准溶液实际浓度×Aa/As。Aa和As分别为样品溶液和标准溶液的吸光度。
实验结果表明，同一样品分别用本法和《中国药典》1995年版微生物检定法测定含量，两法的测定结果经t检验P>0.05，无显著性差异。
本法具有简便，快速，取样量小，对原料和各种制剂均能测定等优点，尤其适用于生产中的(中间体)快速分析和质量监控。, 百拇医药
单位：江苏省苏州市药品检验所(215006)
关键词：
首都医药990426 氨基糖苷类抗生素的质控及分析测定，主要集中于各组分的快速准确分离测定的研究，除经典的微生物测定含量的方法外，还有TLC法，HPLC法，用HPLC法进行测定时，多以氨基糖苷类衍生化反应制成紫外吸收衍生物或荧光衍生物后，才便于检测，其衍生化试剂有邻苯二醛巯基化合物，荧光胺，2.4-二硝基氟苯，2，4，6-三硝基苯磺酸试剂等。本文根据部分氨基糖苷类抗生素中的伯氨基在一定条件下可与甲醛、乙酰丙酮组成的衍生化试剂进行Hantzsch反应，对其进行含量测定，本文对丁胺卡那霉素(Ⅰ)、卡那霉素(Ⅱ)，核糖霉素(Ⅲ)，妥布霉素(Ⅳ)，巴龙霉素(Ⅴ)，小诺霉素(Ⅵ)，通过与衍生化试剂反应后，在356nm波长处(此不为最大吸收)测定吸收度，可分别测定其含量。为了减少误差，用其标准品或对照品进行平行操作，经对标准品定量加入和样品按处方定量配制进行回收率测定，其(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)、(Ⅳ)、(Ⅴ)、(Ⅵ)的标准品回收率(%)分别为99.01，98.71，99.42，98.60，99.12，99.30，CV值(%)分别为0.85，0.48，0.58，0.67，1.20，0.80(n=4)。样品回收率分别为99.20，99.00，98.82，98.83，98.92，99.80，CV值(%)分别为1.24，0.80，0.96，1.12，0.95，0.80(n=4)。
1 测定方法
1.1 衍生化试剂配制：取缓冲液(配制含醋酸、硼酸和磷酸均为0.2mol/L的溶液，用约1mol/L的氢氧化钠溶液调节至pH2.5±0.1)100ml，加入乙酰丙酮(AR) 8ml，甲醛溶液(36%AR)20ml，充分混匀，放置，用水稀释至300ml，摇匀，临用时新鲜配制。
1.2 标准溶液和样品溶液配制：分别配制(Ⅰ)，(Ⅱ)，(Ⅲ)，(Ⅳ)，(Ⅴ)，(Ⅵ)浓度分别为50μg/ml，40μg/ml，60μg/ml，40μg/ml，50μg/ml，60μg/ml的标准溶液和样品溶液，(固体制剂按标示量折算)。
1.3 标准曲线制备，分别精密量取(Ⅰ)，(Ⅱ)，(Ⅲ)，(Ⅳ)，(Ⅴ)，(Ⅵ)标准溶液各0.50，1.0，1.5，2.0，2.5(ml)，按1.4项中自“置10ml量瓶中……起操作”，绘制标准曲线，求得回归方程。实验表明，其吸收值与浓度在0μg/ml～20μg/ml范围内呈线性关系。
1.4 测定法：分别精密吸取(Ⅰ)，(Ⅱ)，(Ⅲ)，(Ⅳ)，(Ⅴ)，(Ⅵ)标准溶液和样品溶液2.0ml，分别置10ml容量瓶中，各加入衍生化试剂3.0ml，封塞，置沸水浴中加热20min，冷却至室温，加水至刻度，以水为空白，于356nm波长处分别测定吸收度，以样品溶液与标准品溶液的吸收度之比计算样品溶液的浓度=标准溶液实际浓度×Aa/As。Aa和As分别为样品溶液和标准溶液的吸光度。
实验结果表明，同一样品分别用本法和《中国药典》1995年版微生物检定法测定含量，两法的测定结果经t检验P>0.05，无显著性差异。
本法具有简便，快速，取样量小，对原料和各种制剂均能测定等优点，尤其适用于生产中的(中间体)快速分析和质量监控。, 百拇医药