婴幼儿急性下呼吸道合胞病毒感染快速检测(83例分析)
作者：高凤鸣 姚华英 郭永建
单位：福建医科大学 高凤鸣：附属第一医院儿科(福州 350003)；姚华英：教务处 ；郭永建：检验系
关键词：呼吸道合胞病毒感染；儿童，学龄前
福建医科大学学报990429 小儿急性下呼吸道感染是儿科常见病、多发病，尤以1岁以内小儿多见。患儿临床表现起病急,病情重，病死率高。呼吸道合胞病毒(RSV)被人认为是本病重要病原，近10年来，国内已相继有关于RSV呼吸道感染的报告[1]。我科选择1991年9月～1992年4月确诊为急性支气管肺炎和毛细支气管炎的住院儿83例，取鼻咽分泌物标本，采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶标技术进行RSV抗原快速检测，并就检测阳性病例的临床情况进行分析，报告如下。
1 临床资料
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1.1 对象 临床确诊为急性支气管肺炎和毛细支气管炎患儿共83例，男性70例，女性13例；年龄9.4±1.1月(2 h～3岁)，其中2 h～6个月45例，6个月～1岁14例，1～2岁16例，2～3岁8例。 83例患儿均以发热、咳嗽、气喘为主诉入院。其中体温37.5～38.5℃ 39例，38.6～39.5℃ 33例，高于40℃ 5例。全部患儿均有不同程度的咳嗽、烦躁不安、气喘、鼻翼扇动、口周发青、面色苍白、全身出冷汗，部分患儿有呕吐、大便次数增多等症状。体检：双肺闻及哮鸣音及中小水泡音34例，单纯细小湿性罗音49例。临床诊断喘息性支气管炎25例，急性支气管肺炎58例。并发或并存充血性心力衰竭14例，佝偻病13例，先天性心脏病5例，中毒性脑病2例。
1.2 方法 病儿入院的当日或次日，将无菌吸氧管送至鼻咽部，通过电动吸引器负压吸取鼻咽部的分泌物(NPS)1～2 ml，(分泌物少者，先予生理盐水1～2 ml冲洗后再吸取)，收集于无菌专用试管内立即送检。留取的NPS标本经洗涤后取脱落细胞涂片，丙酮固定，操作方法见文献[2]。
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1.3 检测方法 用APAAP桥联酶免疫技术(药盒由北京262医院检验科提供)。以RSV-McAb作为第一抗体，兔抗鼠IgG为第二抗体，APAAP为第三抗体和酶复合物，坚固红为底物，显色后置于普通光学显微镜下观察，以未感染和RSV感染的人胚肺细胞作为阴性和阳性的对照。每份涂片找到3个以上典型阳性细胞者判断为RSV-抗体(RSV-Ag)阳性。
2 结 果
83例中RSV-Ag阳性者18份，阳性率为21.8%,其中临床诊断为肺炎者15例，喘息性支气管炎3例；男性15例，女性3例，年龄9.05±3.36月(1.5～6.0月)，其中1.5～6月8例，6月～1岁5例，1～2岁4例。发病季节9～10月份6例，1～4月12例。
18例RSV阳性儿临床表现均以发热、咳嗽、气喘为主。其中发热14例(<38℃ 8例，38～39℃ 5例，>40℃ 1例)；气喘15例(呼吸暂停1例，伴嗜睡1例，抽搐1例)；4例伴大便次数增多(3～5次/d)，为稀糊或稀水样便；合并佝偻病1例，贫血者12例,肝大(肋下>2 cm)10例。
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肺部体征：呼吸音粗，中湿性罗音4例，中小水泡音14例,哮鸣音10例，全部病例未出现肺实质变化。病情轻度3例，中度12例，重度3例(其中心力衰竭2例，中毒性脑病1例)。
X线改变：18例RSV阳性者中17例行胸片X线检查，16例有X线改变：双肺纹理增多、增粗6例，肺野透亮度增高示肺气肿征5例，有斑片阴影5例(为中内带小片状致密影、密度淡、边缘模糊，均无大片阴影改变)。
实验室检查：白细胞<5.0×109/L 3例，(5.0～10.0)×109/L 8例，>10.0×109/L 7例；中性粒细胞<50% 13例，>50% 5例；血红蛋白<100 g/L 14例(77.78%)。肝功能试验正常3例，余未检。3例C反应蛋白<10 mg/L。心电图示窦性心动过速2例，肢导联低电压1例。粪培养3例，1例肺炎克雷伯菌生长，1例酵母样菌生长，1例未见细菌生长。
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3 讨 论
本组检测83例临床诊断为肺炎或毛细支气管炎的患儿鼻咽分泌物，检出RSV-Ag阳性18例，阳性率为21.8%,说明福州地区RSV是小儿下呼吸道感染的重要病原之一。本报告的阳性率与侯安存等报告相近[3]，而较北京[1]和长沙[4]报道者为低。笔者认为可能与以下原因有关：(1)采样时间于发病后3～5天，一般以发病后3天采样阳性率较高；(2)部分病儿入院前已接受抗病毒治疗；(3)非流行季节；(4)标本取材部位太浅，脱落细胞过少等。
本组RSV感染的肺炎或毛细支气管炎均以发热、咳嗽且多数伴有气喘为特征，与北京等地报告一致。但发热(77.78%)和气喘(83.33%)，较其他报告为高。
季节特点：本组检测显示福州RSV感染有两个高峰，9～10月份和1～4月份，与北京的冬春季好发流行不一致，这可能与南方的气候潮湿有关。
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年龄特点：本组RSV感染多发于1岁以内婴儿，占13/18(72.22%),且喘憋症状明显，病情危重的3例均发生于6月内的小婴儿。有研究认为与小婴儿局部分泌型IgA缺乏，肺脏形态学尚未成熟等有关[5]。动物试验证明，局部细胞免疫功能差，会使RSV感染者病程延长，病理改变剧烈，病情危重。本组1例RSV阳性患儿系生后45天，临床有阵发性痉挛性咳嗽和反复呼吸暂停、发绀、咳嗽、喘憋等症状。
由于RSV是小儿常见的下呼吸道感染的重要病原，早期明确病原诊断有很大的意义。传统的病毒分离和抗体检测技术复杂且时间长，而IFA和PAP方法有较高的敏感性和特异性[6]。本研究采用单克隆抗体和碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法(APAPP)快速检测技术，不仅具备前二者的优点，且克服了内源酶的干扰，能在一般光学显微镜下观察结果[3]，为指导临床用药提供依据。
参考文献
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1 张梓荆,王之梁,高丽梅,等. 呼吸道合胞病肺炎病原学及临床研究. 中华儿科杂志, 1978;(2):76
2 段佩若,林 京,韩洪彦. 呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标快速诊断. 中华医学检验杂志, 1990;13:89
3 侯安存,阎田玉,龚明敏,等. 呼吸道合胞病毒肺炎88例. 中华儿科杂志, 1987;25:60
4 易著文,严淑芳,高洁生,等. 婴幼儿急性下呼吸道感染鼻咽分泌物的病原研究. 临床儿科杂志, 1987;5:380
5 刘玉生(主编). 儿科学. 第3版. 北京:人民卫生出版社, 1996:85
6 李保广,王之梁,张淑芳,等. 过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法快速诊断呼吸道合胞病毒感染. 中华儿科杂志, 1989;27:25
(收稿：1999—05—25 修回：1999—10—13), http://www.100md.com
单位：福建医科大学 高凤鸣：附属第一医院儿科(福州 350003)；姚华英：教务处 ；郭永建：检验系
关键词：呼吸道合胞病毒感染；儿童，学龄前
福建医科大学学报990429 小儿急性下呼吸道感染是儿科常见病、多发病，尤以1岁以内小儿多见。患儿临床表现起病急,病情重，病死率高。呼吸道合胞病毒(RSV)被人认为是本病重要病原，近10年来，国内已相继有关于RSV呼吸道感染的报告[1]。我科选择1991年9月～1992年4月确诊为急性支气管肺炎和毛细支气管炎的住院儿83例，取鼻咽分泌物标本，采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶标技术进行RSV抗原快速检测，并就检测阳性病例的临床情况进行分析，报告如下。
1 临床资料
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1.1 对象 临床确诊为急性支气管肺炎和毛细支气管炎患儿共83例，男性70例，女性13例；年龄9.4±1.1月(2 h～3岁)，其中2 h～6个月45例，6个月～1岁14例，1～2岁16例，2～3岁8例。 83例患儿均以发热、咳嗽、气喘为主诉入院。其中体温37.5～38.5℃ 39例，38.6～39.5℃ 33例，高于40℃ 5例。全部患儿均有不同程度的咳嗽、烦躁不安、气喘、鼻翼扇动、口周发青、面色苍白、全身出冷汗，部分患儿有呕吐、大便次数增多等症状。体检：双肺闻及哮鸣音及中小水泡音34例，单纯细小湿性罗音49例。临床诊断喘息性支气管炎25例，急性支气管肺炎58例。并发或并存充血性心力衰竭14例，佝偻病13例，先天性心脏病5例，中毒性脑病2例。
1.2 方法 病儿入院的当日或次日，将无菌吸氧管送至鼻咽部，通过电动吸引器负压吸取鼻咽部的分泌物(NPS)1～2 ml，(分泌物少者，先予生理盐水1～2 ml冲洗后再吸取)，收集于无菌专用试管内立即送检。留取的NPS标本经洗涤后取脱落细胞涂片，丙酮固定，操作方法见文献[2]。
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1.3 检测方法 用APAAP桥联酶免疫技术(药盒由北京262医院检验科提供)。以RSV-McAb作为第一抗体，兔抗鼠IgG为第二抗体，APAAP为第三抗体和酶复合物，坚固红为底物，显色后置于普通光学显微镜下观察，以未感染和RSV感染的人胚肺细胞作为阴性和阳性的对照。每份涂片找到3个以上典型阳性细胞者判断为RSV-抗体(RSV-Ag)阳性。
2 结 果
83例中RSV-Ag阳性者18份，阳性率为21.8%,其中临床诊断为肺炎者15例，喘息性支气管炎3例；男性15例，女性3例，年龄9.05±3.36月(1.5～6.0月)，其中1.5～6月8例，6月～1岁5例，1～2岁4例。发病季节9～10月份6例，1～4月12例。
18例RSV阳性儿临床表现均以发热、咳嗽、气喘为主。其中发热14例(<38℃ 8例，38～39℃ 5例，>40℃ 1例)；气喘15例(呼吸暂停1例，伴嗜睡1例，抽搐1例)；4例伴大便次数增多(3～5次/d)，为稀糊或稀水样便；合并佝偻病1例，贫血者12例,肝大(肋下>2 cm)10例。
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肺部体征：呼吸音粗，中湿性罗音4例，中小水泡音14例,哮鸣音10例，全部病例未出现肺实质变化。病情轻度3例，中度12例，重度3例(其中心力衰竭2例，中毒性脑病1例)。
X线改变：18例RSV阳性者中17例行胸片X线检查，16例有X线改变：双肺纹理增多、增粗6例，肺野透亮度增高示肺气肿征5例，有斑片阴影5例(为中内带小片状致密影、密度淡、边缘模糊，均无大片阴影改变)。
实验室检查：白细胞<5.0×109/L 3例，(5.0～10.0)×109/L 8例，>10.0×109/L 7例；中性粒细胞<50% 13例，>50% 5例；血红蛋白<100 g/L 14例(77.78%)。肝功能试验正常3例，余未检。3例C反应蛋白<10 mg/L。心电图示窦性心动过速2例，肢导联低电压1例。粪培养3例，1例肺炎克雷伯菌生长，1例酵母样菌生长，1例未见细菌生长。
, 百拇医药
3 讨 论
本组检测83例临床诊断为肺炎或毛细支气管炎的患儿鼻咽分泌物，检出RSV-Ag阳性18例，阳性率为21.8%,说明福州地区RSV是小儿下呼吸道感染的重要病原之一。本报告的阳性率与侯安存等报告相近[3]，而较北京[1]和长沙[4]报道者为低。笔者认为可能与以下原因有关：(1)采样时间于发病后3～5天，一般以发病后3天采样阳性率较高；(2)部分病儿入院前已接受抗病毒治疗；(3)非流行季节；(4)标本取材部位太浅，脱落细胞过少等。
本组RSV感染的肺炎或毛细支气管炎均以发热、咳嗽且多数伴有气喘为特征，与北京等地报告一致。但发热(77.78%)和气喘(83.33%)，较其他报告为高。
季节特点：本组检测显示福州RSV感染有两个高峰，9～10月份和1～4月份，与北京的冬春季好发流行不一致，这可能与南方的气候潮湿有关。
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年龄特点：本组RSV感染多发于1岁以内婴儿，占13/18(72.22%),且喘憋症状明显，病情危重的3例均发生于6月内的小婴儿。有研究认为与小婴儿局部分泌型IgA缺乏，肺脏形态学尚未成熟等有关[5]。动物试验证明，局部细胞免疫功能差，会使RSV感染者病程延长，病理改变剧烈，病情危重。本组1例RSV阳性患儿系生后45天，临床有阵发性痉挛性咳嗽和反复呼吸暂停、发绀、咳嗽、喘憋等症状。
由于RSV是小儿常见的下呼吸道感染的重要病原，早期明确病原诊断有很大的意义。传统的病毒分离和抗体检测技术复杂且时间长，而IFA和PAP方法有较高的敏感性和特异性[6]。本研究采用单克隆抗体和碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法(APAPP)快速检测技术，不仅具备前二者的优点，且克服了内源酶的干扰，能在一般光学显微镜下观察结果[3]，为指导临床用药提供依据。
参考文献
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1 张梓荆,王之梁,高丽梅,等. 呼吸道合胞病肺炎病原学及临床研究. 中华儿科杂志, 1978;(2):76
2 段佩若,林 京,韩洪彦. 呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标快速诊断. 中华医学检验杂志, 1990;13:89
3 侯安存,阎田玉,龚明敏,等. 呼吸道合胞病毒肺炎88例. 中华儿科杂志, 1987;25:60
4 易著文,严淑芳,高洁生,等. 婴幼儿急性下呼吸道感染鼻咽分泌物的病原研究. 临床儿科杂志, 1987;5:380
5 刘玉生(主编). 儿科学. 第3版. 北京:人民卫生出版社, 1996:85
6 李保广,王之梁,张淑芳,等. 过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法快速诊断呼吸道合胞病毒感染. 中华儿科杂志, 1989;27:25
(收稿：1999—05—25 修回：1999—10—13), http://www.100md.com