血清癌相关蛋白与喉癌的相关性研究
作者：钱欣梅 张向阳 郑美桦 宋风竹 论 宁 董风增
单位：钱欣梅 郑美桦 宋风竹 董风增 济宁市第一人民医院耳鼻喉科,272111；张向阳 论 宁 济宁医学院生物化学教研室
关键词：喉肿瘤；癌相关蛋白；薄层聚丙烯酰胺凝胶电泳
山东医大基础医学院学报990401 内容提要 为探讨喉癌血清中癌相关蛋白的检测方法及其与喉癌的关系,采用微量薄层垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测了喉癌患者53例、喉部良性疾病患者51例和正常人48例的血清癌相关蛋白,并对喉癌的不同分级、有无转移及手术前后作了比较。结果显示,微量薄层垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳能检出与喉癌相关的3条癌相关蛋白带,喉癌患者、非癌患者和正常人的血清癌相关蛋白检出阳性率分别为71.70%、11.76%和8.33%,转移喉癌和非转移喉癌的阳性率分别为92.86%和64.10%。手术后1月复查,45%的喉癌患者血清癌相关蛋白转阴性。表明用微量薄层垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳检测喉癌患者血清癌相关蛋白诊断喉癌是一种简便、准确、实用的方法。
, 百拇医药
中图分类号 R 739.65
THE RELATION BETWEEN THE CANCER ASSOCIATED
PROTEINS(CAP)IN SERUM AND LARYNGEAL CANCER
Qian Xinmei,Zhang Xiangyang Zheng Meihua,et al
(Dept. of Otorhinolaryngology,the First People′s hospital of Jining,272111)
Abstract To explore a simple,precise and useful method for examing CAP in serum of laryngeal cancer and the relation of CAP to laryngeal cancer.CAP in serum, studied by ultrathin polyacrylamid gel electrophoresis(PAGE) in 53 cases of laryngeal cancer,were compared with that in 51 patients of benign group and 48 normal persons of control group,meanwhile,the changes of the CAP were observed on the degree of differentiation,metastasis and results after laryngotomy.Three bands of CAP in serum were discovered in laryngeal cancer by ultrathin PAGE. The positive rates of CAP in laryngeal cancer,in benign patients and in normal persons were 71.70%,11.76% and 8.33% respectively,the positive rates of CAP in metastasis and non-metastasis were 92.86% and 64.10%,45.00% of CAP turned to negative after laryngotomy.Thus a conclusion can be got that determination of the CAP in serum by ultrathin PAGE technique is a simple,precise and useful method for laryngeal cancer diagnosis.
, 百拇医药
Key words Laryngeal neoplasms;Cancer associated proteins;Ultrathin PAGE
目前,喉癌的发病率逐年增高,但至今尚未发现喉癌特有的肿瘤标志物(tumer marker)及实用的生化诊断方法。肿瘤标志物既可由肿瘤组织直接产生,也可由肿瘤侵犯的组织代谢改变产生并释放到血液中[1],肿瘤标志物多为蛋白质类物质,如抗原、酶等。文献报道[2，3],一般只检测血液中某一项标志物,对肿瘤诊断的灵敏度不高。采用联合检测多项标志物,可提高诊断的灵敏度,但是每一项标志物要采用一种方法检测, 检测过程过于繁杂。 为了探索一种既简便又能同时进行多项肿瘤标志物检测喉癌的新方法。 我们采用薄层平板聚丙烯酰 胺 凝 胶 电 泳 技术 [2,3] ,对53例喉癌患者进行了检测,现报道如下。
1 资料与方法
, http://www.100md.com
1.1 检测对象
1.1.1 喉癌组 具有完整记录的喉癌患者53例,其中男49例,女4例,20～74岁,平均54.15岁。经纤维喉镜检查,病理切片证实均为鳞状上皮癌。喉癌分级按UICC1987年制定的标准[4],T1期4例,无转移,T2期14例,1例转移,T3期19例,5例转移,T4期16例,8例转移。
1.1.2 对照组
1.1.2.1 非癌患者51例,18～70岁,平均43.2岁,其中男35例,女16例,均经纤维喉镜及病理证实为声带息肉和声带结节。
1.1.2.2 正常组48例,23～67岁,平均48.6岁,其中男38例,女10例。均为健康者。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 试剂 (1)凝胶液:30g丙烯酰胺,0.3gN,N′-亚甲基双丙烯酰胺,加水溶解至100ml,过滤后除去不溶物质,4℃保存;(2)制胶缓冲液(pH8.3):6.0g三羟甲基氨基甲烷,28.8g甘氨酸(AR),用水配制成1000ml;(3)电泳缓冲液(pH8.3):制胶缓冲液2份加1份水混合即得;(4)样品缓冲液:甘油与制胶缓冲液等量混合,加入少量溴酚蓝;(5)5%蔗糖溶液;(6)染色液:0.1g考马氏亮蓝G-250,50ml甲醇,7ml冰醋酸,43ml水混合溶解;(7)脱色液:80ml冰醋酸加水至1000ml;(8)催化剂和加速剂:分别为过饱和硫酸胺(AP)和四甲基乙二胺(TEMED)原液。
1.2.2 仪器 使用垂直平板电泳槽和高压稳流稳压电泳仪。
1.2.3 方法 (1)凝胶制作:制胶缓冲液4.0ml,凝胶液3.0ml,TEMED0.04ml,AP0.04ml混匀后立即灌胶,使其在1～3min内聚合,立即拔出梳子,吸去加液槽中多余的液体,注满缓冲液;(2)加样:取静脉血血清(不能溶血)1μl注入加样槽内,再加注5μl样品缓冲液后,加5μl蔗糖溶液覆盖;(3)电泳:以加样端为上端作为阴极,另一端为下端作为阳极垂直放置,稳压电泳,电泳指示剂泳动4cm左右停止电泳;(4)染色与脱色:凝胶取出后用染色液染3～4h后于90℃脱色,在脱色过程中更换3～4次脱色液。
, 百拇医药
1.2.4 电泳结果判断 癌相关蛋白带—1(CAP—1):该蛋白分子量为17.36×104U的糖蛋白与IgG、IgA、IgM等抗体均不发生作用,该带常出现在癌症患者血清中,属正瘤标,其特征为位于γ球蛋白和β球蛋白之间,该谱带浓度显著高于其邻近位置的谱带浓度,γ区表现为明显的多条谱带,前清蛋白染色较重。
癌相关蛋白带—2(CAP—2):该蛋白带位于CAP—1下方,分子量为13.89×104U的糖蛋白,癌症患者该带可缺少,故为负瘤标,该蛋白带与Akima等 发现的CAP—135相似[5]。
癌相关蛋白带—3(CAP—3):是一条很浓的蛋白带,常出现在CAP—1上方,近γ区或β区下方,正常人血清电泳蛋白带不出现,仅在癌症患者中出现,属正瘤标。
2 结 果
, http://www.100md.com 2.1 喉癌患者,非喉癌患者和正常人血清中癌相关蛋白检出阳性率 它们分别为71.70%,11.76%和8.33%。经统计学处理,喉癌患者与非癌患者相比较,χ2=38.25,P<0.01,喉癌患者与正常人相比较,χ2=41.63,P<0.01,非癌患者与正常人比较,无统计学意义,见表1。
表1 血清癌相关蛋白检测结果 分组
n
阳性
n
%
喉癌患者组
非癌患者组
正常对照组
, http://www.100md.com
53
51
48
38
6
4
71.70
11.76
8.33
2.2 不同分级的喉癌患者血清癌相关蛋白检测结果 见表2。
表2 不同分级的喉癌患者血清癌相关蛋白检测结果 分组
n
, 百拇医药
阳性
n
%
T1
T2
T3
T4
4
14
19
16
2
10
, http://www.100md.com
14
12
50.00
71.43
73.68
75.00
由表2可见,除T1血清癌相关蛋白检出率较低外,T2～T4血清癌相关蛋白检出阳性率差别不大,但是T1～T4各级间经统计学处理χ2=1.05,P>0.05,差异无显著性,表明血清癌相关蛋白检出阳性率与喉癌分级无关。
2.3 喉癌转移与非转移患者血清癌相关蛋白检测结果比较 喉癌淋巴结及其它部位转移患者与非转移患者的血清癌相关蛋白检测结果经统计学处理χ2=4.20,P<0.05,表明转移喉癌与非转移喉癌之间差异有显著性,转移喉癌的血清癌相关蛋白的检出率高于非转移喉癌,见表3。表3 喉癌转移与非转移患者血清癌相关蛋白的检测结果 分组
, 百拇医药
n
阳性
n
%
转移喉癌组
14
13
92.86
非转移喉癌组
39
25
64.10
2.4 喉癌患者手术前后血清癌相关蛋白检测结果 38例血清癌相关蛋白阳性的喉癌患者中,20例患者于手术后1月复查,9例转为阴性,转阴率为45%,见表4。表4 喉癌患者手术前后血清癌相关蛋白检测结果 分组
, http://www.100md.com
n
阳性
n
转阴率%
喉癌手术前
20
20
0
喉癌手术后
20
11
45.00
3 讨 论
, 百拇医药
目前,尚未发现特异的头颈部鳞状细胞癌的肿瘤标志物。因此,非特异肿瘤标志物的研究受到重视。文献报道的肿瘤标志物多为蛋白质,可由恶性细胞合成,也可由肿瘤侵犯或代谢改变的宿主组织反应产生〔1〕。由于这些标志物具有敏感性、特异性以及个体差异等问题,很难使用某种标志物用于所有患者的诊断。目前又无一次检测多种肿瘤的标志物,因此,这些肿瘤标志物的应用价值不高,尤其是头颈部肿瘤〔6～8〕。联合检测则具有较大的应用价值,我们采用了超薄垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳检测喉癌的多种癌相关蛋白。结果表明,喉癌患者血清癌相关蛋白的阳性率为71.7%,较非喉癌患者和正常人的11.76%和8.33%差异有显著性。这与其他肿瘤的肿瘤标志物检测阳性率相近〔9～11〕。一般情况是,病变范围越广,血清癌相关蛋白的检出率越高。但本研究结果表明,喉癌不同分级之间相比虽有一定差异,但统计学上无显著性,这也与有关报道相符〔12，13〕,说明本方法对早期喉癌具有诊断意义。
本研究还表明,转移喉癌患者的血清癌相关蛋白的阳性率显著高于非转移喉癌患者。手术前血清癌相关蛋白阳性的20例患者手术后1月复查,9例转为阴性,转阴率为45.00%,说明血清癌相关蛋白的出现与喉癌的发生、发展有关。
, 百拇医药
本方法可用于喉癌的辅助诊断,喉癌的普查,也可用于观察喉癌预后及发展。本研究方法不需特殊仪器,试剂成本低,操作简便,便于基层单位开展工作,因此,利用本方法检测喉癌患者血清癌相关蛋白诊断喉癌有实用价值。
参考文献
1 Michdel H T.肿瘤标志物.国外医学肿瘤学分册,1989;16(1):37
2 任惠敏,等.超薄板状聚丙烯酰胺凝胶电泳.生物化学与生物物理学进展,1985;4:77
3 曹兴建,等.超薄PAGE检测癌相关蛋白技术和临床应用.临床检验杂志,1989;7(4):175
4 Uicc international union against cancer.TNM classification of malignant tumors.4th ed,1987
, 百拇医药
5 Akima K,et al.Jpn J Cancer Res(Gann),1985;76:541
6 Hanna EYN,et al.Serum tumor markers of head and neck current status.Head Neck Surg,1990;12:50
7 Gustafsson H,et al.Glycoprotein tumor markers in head and neck neoplasms-A consecutive study on CA-50,CA19-9 and CEA.J Cancer Res Clin Oncol,1988;114:394
8 陈佩君,等.唾液酸与急性蛋白对鼻咽癌的诊断价值.耳鼻咽喉-头颈外科,1995;2(4):239
9 Kubota S,et al.The value of urinary polyamine assay in stomach cancer.Comparison with serum carcinoembryonic antigen.Cancer,1985;56:1630
, 百拇医药
10 Paganuzzi M,et al.Clinical evaluation of new tumor-associated antigens.In:Cimino F,et al.Human tumor markers.Berlin,NY:Walter de Gruyter,1987:643
11 Krolikowski FJ.et al.Serum sialic acid levels in lung cancer patients.Pharmacology,1976;14:47
12 张彬,等.肿瘤标志物CA-50 CA-242和唾液精脒在头颈部肿瘤病人中的测定.耳鼻咽喉-头颈外科,1994;1(2):95
13 崔鸿鸾,等.喉及喉咽癌雄激素受体的研究.耳鼻咽喉-头颈外科,1995;2(3):167
(收稿日期 1999-08-16), 百拇医药
单位：钱欣梅 郑美桦 宋风竹 董风增 济宁市第一人民医院耳鼻喉科,272111；张向阳 论 宁 济宁医学院生物化学教研室
关键词：喉肿瘤；癌相关蛋白；薄层聚丙烯酰胺凝胶电泳
山东医大基础医学院学报990401 内容提要 为探讨喉癌血清中癌相关蛋白的检测方法及其与喉癌的关系,采用微量薄层垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测了喉癌患者53例、喉部良性疾病患者51例和正常人48例的血清癌相关蛋白,并对喉癌的不同分级、有无转移及手术前后作了比较。结果显示,微量薄层垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳能检出与喉癌相关的3条癌相关蛋白带,喉癌患者、非癌患者和正常人的血清癌相关蛋白检出阳性率分别为71.70%、11.76%和8.33%,转移喉癌和非转移喉癌的阳性率分别为92.86%和64.10%。手术后1月复查,45%的喉癌患者血清癌相关蛋白转阴性。表明用微量薄层垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳检测喉癌患者血清癌相关蛋白诊断喉癌是一种简便、准确、实用的方法。
, 百拇医药
中图分类号 R 739.65
THE RELATION BETWEEN THE CANCER ASSOCIATED
PROTEINS(CAP)IN SERUM AND LARYNGEAL CANCER
Qian Xinmei,Zhang Xiangyang Zheng Meihua,et al
(Dept. of Otorhinolaryngology,the First People′s hospital of Jining,272111)
Abstract To explore a simple,precise and useful method for examing CAP in serum of laryngeal cancer and the relation of CAP to laryngeal cancer.CAP in serum, studied by ultrathin polyacrylamid gel electrophoresis(PAGE) in 53 cases of laryngeal cancer,were compared with that in 51 patients of benign group and 48 normal persons of control group,meanwhile,the changes of the CAP were observed on the degree of differentiation,metastasis and results after laryngotomy.Three bands of CAP in serum were discovered in laryngeal cancer by ultrathin PAGE. The positive rates of CAP in laryngeal cancer,in benign patients and in normal persons were 71.70%,11.76% and 8.33% respectively,the positive rates of CAP in metastasis and non-metastasis were 92.86% and 64.10%,45.00% of CAP turned to negative after laryngotomy.Thus a conclusion can be got that determination of the CAP in serum by ultrathin PAGE technique is a simple,precise and useful method for laryngeal cancer diagnosis.
, 百拇医药
Key words Laryngeal neoplasms;Cancer associated proteins;Ultrathin PAGE
目前,喉癌的发病率逐年增高,但至今尚未发现喉癌特有的肿瘤标志物(tumer marker)及实用的生化诊断方法。肿瘤标志物既可由肿瘤组织直接产生,也可由肿瘤侵犯的组织代谢改变产生并释放到血液中[1],肿瘤标志物多为蛋白质类物质,如抗原、酶等。文献报道[2，3],一般只检测血液中某一项标志物,对肿瘤诊断的灵敏度不高。采用联合检测多项标志物,可提高诊断的灵敏度,但是每一项标志物要采用一种方法检测, 检测过程过于繁杂。 为了探索一种既简便又能同时进行多项肿瘤标志物检测喉癌的新方法。 我们采用薄层平板聚丙烯酰 胺 凝 胶 电 泳 技术 [2,3] ,对53例喉癌患者进行了检测,现报道如下。
1 资料与方法
, http://www.100md.com
1.1 检测对象
1.1.1 喉癌组 具有完整记录的喉癌患者53例,其中男49例,女4例,20～74岁,平均54.15岁。经纤维喉镜检查,病理切片证实均为鳞状上皮癌。喉癌分级按UICC1987年制定的标准[4],T1期4例,无转移,T2期14例,1例转移,T3期19例,5例转移,T4期16例,8例转移。
1.1.2 对照组
1.1.2.1 非癌患者51例,18～70岁,平均43.2岁,其中男35例,女16例,均经纤维喉镜及病理证实为声带息肉和声带结节。
1.1.2.2 正常组48例,23～67岁,平均48.6岁,其中男38例,女10例。均为健康者。
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1.2 方法
1.2.1 试剂 (1)凝胶液:30g丙烯酰胺,0.3gN,N′-亚甲基双丙烯酰胺,加水溶解至100ml,过滤后除去不溶物质,4℃保存;(2)制胶缓冲液(pH8.3):6.0g三羟甲基氨基甲烷,28.8g甘氨酸(AR),用水配制成1000ml;(3)电泳缓冲液(pH8.3):制胶缓冲液2份加1份水混合即得;(4)样品缓冲液:甘油与制胶缓冲液等量混合,加入少量溴酚蓝;(5)5%蔗糖溶液;(6)染色液:0.1g考马氏亮蓝G-250,50ml甲醇,7ml冰醋酸,43ml水混合溶解;(7)脱色液:80ml冰醋酸加水至1000ml;(8)催化剂和加速剂:分别为过饱和硫酸胺(AP)和四甲基乙二胺(TEMED)原液。
1.2.2 仪器 使用垂直平板电泳槽和高压稳流稳压电泳仪。
1.2.3 方法 (1)凝胶制作:制胶缓冲液4.0ml,凝胶液3.0ml,TEMED0.04ml,AP0.04ml混匀后立即灌胶,使其在1～3min内聚合,立即拔出梳子,吸去加液槽中多余的液体,注满缓冲液;(2)加样:取静脉血血清(不能溶血)1μl注入加样槽内,再加注5μl样品缓冲液后,加5μl蔗糖溶液覆盖;(3)电泳:以加样端为上端作为阴极,另一端为下端作为阳极垂直放置,稳压电泳,电泳指示剂泳动4cm左右停止电泳;(4)染色与脱色:凝胶取出后用染色液染3～4h后于90℃脱色,在脱色过程中更换3～4次脱色液。
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1.2.4 电泳结果判断 癌相关蛋白带—1(CAP—1):该蛋白分子量为17.36×104U的糖蛋白与IgG、IgA、IgM等抗体均不发生作用,该带常出现在癌症患者血清中,属正瘤标,其特征为位于γ球蛋白和β球蛋白之间,该谱带浓度显著高于其邻近位置的谱带浓度,γ区表现为明显的多条谱带,前清蛋白染色较重。
癌相关蛋白带—2(CAP—2):该蛋白带位于CAP—1下方,分子量为13.89×104U的糖蛋白,癌症患者该带可缺少,故为负瘤标,该蛋白带与Akima等 发现的CAP—135相似[5]。
癌相关蛋白带—3(CAP—3):是一条很浓的蛋白带,常出现在CAP—1上方,近γ区或β区下方,正常人血清电泳蛋白带不出现,仅在癌症患者中出现,属正瘤标。
2 结 果
, http://www.100md.com 2.1 喉癌患者,非喉癌患者和正常人血清中癌相关蛋白检出阳性率 它们分别为71.70%,11.76%和8.33%。经统计学处理,喉癌患者与非癌患者相比较,χ2=38.25,P<0.01,喉癌患者与正常人相比较,χ2=41.63,P<0.01,非癌患者与正常人比较,无统计学意义,见表1。
表1 血清癌相关蛋白检测结果 分组
n
阳性
n
%
喉癌患者组
非癌患者组
正常对照组
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53
51
48
38
6
4
71.70
11.76
8.33
2.2 不同分级的喉癌患者血清癌相关蛋白检测结果 见表2。
表2 不同分级的喉癌患者血清癌相关蛋白检测结果 分组
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阳性
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T1
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50.00
71.43
73.68
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由表2可见,除T1血清癌相关蛋白检出率较低外,T2～T4血清癌相关蛋白检出阳性率差别不大,但是T1～T4各级间经统计学处理χ2=1.05,P>0.05,差异无显著性,表明血清癌相关蛋白检出阳性率与喉癌分级无关。
2.3 喉癌转移与非转移患者血清癌相关蛋白检测结果比较 喉癌淋巴结及其它部位转移患者与非转移患者的血清癌相关蛋白检测结果经统计学处理χ2=4.20,P<0.05,表明转移喉癌与非转移喉癌之间差异有显著性,转移喉癌的血清癌相关蛋白的检出率高于非转移喉癌,见表3。表3 喉癌转移与非转移患者血清癌相关蛋白的检测结果 分组
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n
阳性
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转移喉癌组
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92.86
非转移喉癌组
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64.10
2.4 喉癌患者手术前后血清癌相关蛋白检测结果 38例血清癌相关蛋白阳性的喉癌患者中,20例患者于手术后1月复查,9例转为阴性,转阴率为45%,见表4。表4 喉癌患者手术前后血清癌相关蛋白检测结果 分组
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转阴率%
喉癌手术前
20
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喉癌手术后
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3 讨 论
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目前,尚未发现特异的头颈部鳞状细胞癌的肿瘤标志物。因此,非特异肿瘤标志物的研究受到重视。文献报道的肿瘤标志物多为蛋白质,可由恶性细胞合成,也可由肿瘤侵犯或代谢改变的宿主组织反应产生〔1〕。由于这些标志物具有敏感性、特异性以及个体差异等问题,很难使用某种标志物用于所有患者的诊断。目前又无一次检测多种肿瘤的标志物,因此,这些肿瘤标志物的应用价值不高,尤其是头颈部肿瘤〔6～8〕。联合检测则具有较大的应用价值,我们采用了超薄垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳检测喉癌的多种癌相关蛋白。结果表明,喉癌患者血清癌相关蛋白的阳性率为71.7%,较非喉癌患者和正常人的11.76%和8.33%差异有显著性。这与其他肿瘤的肿瘤标志物检测阳性率相近〔9～11〕。一般情况是,病变范围越广,血清癌相关蛋白的检出率越高。但本研究结果表明,喉癌不同分级之间相比虽有一定差异,但统计学上无显著性,这也与有关报道相符〔12，13〕,说明本方法对早期喉癌具有诊断意义。
本研究还表明,转移喉癌患者的血清癌相关蛋白的阳性率显著高于非转移喉癌患者。手术前血清癌相关蛋白阳性的20例患者手术后1月复查,9例转为阴性,转阴率为45.00%,说明血清癌相关蛋白的出现与喉癌的发生、发展有关。
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本方法可用于喉癌的辅助诊断,喉癌的普查,也可用于观察喉癌预后及发展。本研究方法不需特殊仪器,试剂成本低,操作简便,便于基层单位开展工作,因此,利用本方法检测喉癌患者血清癌相关蛋白诊断喉癌有实用价值。
参考文献
1 Michdel H T.肿瘤标志物.国外医学肿瘤学分册,1989;16(1):37
2 任惠敏,等.超薄板状聚丙烯酰胺凝胶电泳.生物化学与生物物理学进展,1985;4:77
3 曹兴建,等.超薄PAGE检测癌相关蛋白技术和临床应用.临床检验杂志,1989;7(4):175
4 Uicc international union against cancer.TNM classification of malignant tumors.4th ed,1987
, 百拇医药
5 Akima K,et al.Jpn J Cancer Res(Gann),1985;76:541
6 Hanna EYN,et al.Serum tumor markers of head and neck current status.Head Neck Surg,1990;12:50
7 Gustafsson H,et al.Glycoprotein tumor markers in head and neck neoplasms-A consecutive study on CA-50,CA19-9 and CEA.J Cancer Res Clin Oncol,1988;114:394
8 陈佩君,等.唾液酸与急性蛋白对鼻咽癌的诊断价值.耳鼻咽喉-头颈外科,1995;2(4):239
9 Kubota S,et al.The value of urinary polyamine assay in stomach cancer.Comparison with serum carcinoembryonic antigen.Cancer,1985;56:1630
, 百拇医药
10 Paganuzzi M,et al.Clinical evaluation of new tumor-associated antigens.In:Cimino F,et al.Human tumor markers.Berlin,NY:Walter de Gruyter,1987:643
11 Krolikowski FJ.et al.Serum sialic acid levels in lung cancer patients.Pharmacology,1976;14:47
12 张彬,等.肿瘤标志物CA-50 CA-242和唾液精脒在头颈部肿瘤病人中的测定.耳鼻咽喉-头颈外科,1994;1(2):95
13 崔鸿鸾,等.喉及喉咽癌雄激素受体的研究.耳鼻咽喉-头颈外科,1995;2(3):167
(收稿日期 1999-08-16), 百拇医药