昆明小鼠舌体内毛细淋巴管的分布及组织计量学研究
作者:宣鸣 李小箐 温玉明
单位:广东佛山市第二人民医院(528000)
关键词:淋巴管;酶组织化学;小鼠
口腔颌面外科杂志990407 摘 要:目的 观察小鼠舌体内淋巴管的细微解剖分布,获取淋巴管分布的组织计量学参数。方法 通过5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶双重组化染色法分别显示和区分毛细淋巴管和毛细血管,利用半自动体视学形态定理方法对淋巴管的面数密度,平均开放面积及平均管径进行统计分析。结果 小鼠舌体组织内仅有约10%左右的淋巴管处于开放状态;舌体粘膜层毛细淋巴管密度大于肌层,而肌层内有腔淋巴管的平均面积及管径均比粘膜层大且具有统计学差异(P<0.05)。结论 正常生理状况下,小鼠舌体组织内多数淋巴管均处于塌陷闭锁的功能储备状态。
中图分类号:R739.8 文献标识码:A 文章编号:1005-4979(1999)04-303-03
HISTOLOGIC MEASUREMENT AND MORPHOLOGIC STUDY OF LYMPHATIC CAPILLARIES IN THE TONGUE OF RAT
XUAN Ming, LI Xiao-qing, WEN Yu-ming
The Second Hospital,Foshan,Guangdong Province 528000
Abstract:Objective Inorder to obscvve lymphatic and vuscular capillaries in the fongue of mice.Method We employed a enzyme-histochemical double staining technique,using 5′-nucleotidase in conjunction with alkaline phosphatase to demonstrate both lymphatic and vascular capillaries in the tongue of mice.With the aid of semiautomatic microimage analyzing apparatus,we were be able to record area number density,mean value of opening area and diameter of lymphatic capillaries both in mucosa and muscle layer.Results 10% of lymphatic capillaries in rat tongue were found to have dilated cavity in normal physical state.The density of lymphatics in mucosa is larger than that in muscle of rat tongue,however,both average area and diameter of lymphatics in the latter tissue are larger than those in the former.Conclusion Most of the lymphatic capillaries in rat tongue have no active function with collapsed cavity in normal physical state.
Key words: Lymphatic capillary; Enzyme-Histochemistry; Rat
毛细淋巴管是淋巴管道系统深入到组织或器官占数量最多,管壁最薄的微小淋巴管,它们执行着从组织间隙中移除组织液、细胞、脂质、蛋白质等大分子物质的功能,与毛细血管一起共同维持体内微环境的稳定[1]。但由于受研究方法的限制,特别是普通光镜观察难以准确识别并区分毛细淋巴管,组织间隙及毛细血管[2],而电镜观察的视野有限,因此有关组织器官内毛细淋巴管细微分布的报道极少[3]。自Werner[4]利用5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶(5′-NASE-ALP)双重染色法在同一张切片上分别显示毛细淋巴管及毛细血管以来,已有部分应用该法研究观察了不同动物的组织器官内毛细淋巴管的分布特点[5~7],但尚未见有关小鼠舌体组织的报道。本实验应用了改良的5′-NASE-ALP双重染色法研究了正常昆明小鼠舌体组织内毛细淋巴管的分布特点,并对毛细淋巴管密度,平均开放面积及平均管径等参数进行了测量,为研究不同动物器官内淋巴管的微细分布积累了参数资料。
1 材料与方法
1.1 实验动物
昆明小鼠8只,雌雄各半,体重25~30g,鼠龄8~10周。
1.2 标本处理
动物处死切取舌体组织后,立即放入-170℃液氮中骤冷,再置于恒冷切片机内(-15℃)切片,片厚10μm。每个舌体组织标本均做连续切片直到切完整个标本厚度,然后从前向后进行等距随机抽样,每个标本抽取10张切片作淋巴管和血管的改良5′-NASE-ALP双重酶组化染色,即先按Stutte法作ALP染色反应,再按Wachstein法作5′-NASE染色反应,苏木素复染后封片。
1.3 组织学定量分析
采用四川联大图象图形研究所研制的MIAS-2000型显微图象分析系统进行毛细淋巴管的体视学参数测定。将酶组化染色切片置于MIAS-2000显微图像半自动分析仪下进行测量。高倍镜下(10×40)视野面积为0.5024mm2,以等距随机抽样的方法分别于舌体组织的粘膜层及肌层两个区域内各选取10个视野,由摄像头捕获后输入计算机并显示于屏幕上,然后根据颜色差别,人工半自动选择毛细淋巴管及淋巴管后,由计算机分别自动计算出总体毛细淋巴管及淋巴管(TNa,包括闭锁及开放在内)、开放淋巴管的面数密度(ONa,面数密度=单位面积中毛细淋巴管及淋巴管数目)以及开放淋巴管的平均截面积(Area)和平均管径(Diameter)等参数值。
1.4 统计学处理
用SPSS统计软件包作单因素卡方检验,比较分析舌体组织的粘膜层及肌层总体淋巴管、开放淋巴管的面数密度以及开放淋巴管的平均截面积和平均管径之间的差异。
2 结果
2.1 小鼠舌部毛细淋巴管的形态学观察
5′-NASE-ALP双重染色的切片,可见同一张切片上毛细淋巴管和淋巴管呈褐或深褐色,而毛细血管则呈鲜艳的红色,两者区别非常明显。小鼠舌体的粘膜和肌层内均有丰富的毛细淋巴管和毛细血管,毛细血管的数量明显比毛细淋巴管多,绝大多数毛细淋巴管和毛细血管均呈闭锁的条索状结构,仅有少数表现为开放的管腔(图1)。
不同部位的毛细淋巴管的分布有所不同。小鼠舌体粘膜固有层仅可见少量的闭锁的毛细淋巴管呈纵向伸入乳头层内,而粘膜下层较疏松的结缔组织内毛细淋巴管数目明显增多,多呈横向排列,还可见少量的开放毛细淋巴管腔(图1)。舌部肌层中毛细淋巴管主要位于各层肌肉之间及同一肌层的肌纤维束间的结缔组织内。其中位于肌纤维束间的毛细淋巴管均呈闭锁状,走向多与肌纤维方向一致。仅在肌肉层间组织间隙相对疏松处可见到少量的呈管腔状的毛细淋巴管及淋巴管(图2)。
图1 5′-ALP-NASE双重染色显示舌体粘膜和肌肉
图2 淋巴管及毛细血管:管壁染成棕色者为淋巴管,染成红色者为血管
2.2 小鼠舌体组织毛细淋巴管的组织学计量结果见附表
由附表可见粘膜层总体淋巴管面数密度平均值为(5.68±1.65)个/mm2,肌层平均值为(2.86±0.75)个/mm2,经单因素方差分析F=14.91,P=0.001,两者间有显著性差异;粘膜层有腔淋巴管面数密度平均值为(0.45±0.18)个/mm2,肌层平均值为(0.35±0.09)个/mm2,经单因素方素分析F=2.17,P=0.16,两者间无显著性差异;粘膜层开放淋巴管平均面积为(1534.07±438.93)μm2,肌层为(2456.91±594.92)μm2,经单因素方差分析F=8.03,P=0.01,两者间有显著性差异。粘膜层开放淋巴管平均管径为(18.15±7.77)μm,肌层为(27.99±7.98)μm,经单因素方差分析F=5.34,P=0.03,两者间有显著性差异。
附表 正常小鼠舌体粘膜层及肌层内淋巴管计量学测量数据(
总体淋巴管面数密度(个/mm2)
有腔淋巴管面数密度(个/mm2)
开放淋巴管截面积(μm2)
开放淋巴管直径(μm)
粘膜组织
5.68±1.65
0.45±0.18
1534.07±438.93
18.15±7.77
肌肉组织
2.86±0.75
0.35±0.09
2456.91±594.92
27.99±7.98
3 讨论
有研究[8~10]显示在正常生理状态下,微循环系统中仅有极少部份的毛细血管和毛细淋巴管处于功能状态而呈开放状态,其余大部份毛细管道均处于静息塌陷的无功能状态,只有在某些特殊情况下,如发生炎症,过敏性休克等病理改变时开放的毛细血管和毛细淋巴管才会随之增加。本研究结果表明小鼠舌体粘膜层和肌层总体淋巴管面数密度分别为5.68个/mm2和2.86个/mm2,有腔淋巴管的面数密度分别为0.45个/mm2和0.35个/mm2,后者仅为前者的7.92%和12.23%,平均值为10.08%。说明在单位面积内开放淋巴管仅占淋巴管总数的10%左右,从数据上客观地反映了大多数淋巴管特别是毛细淋巴管在正常生理情况下仅作为一种功能储备而呈闭锁状态的规律。
小鼠舌体淋巴管分布的特点是粘膜层淋巴管密度(5.68±1.65个/mm2)大于肌层(2.86±0.75个/mm2),这与景纯对人体舌部淋巴管的观察结果一致[11]。粘膜层和肌层开放淋巴管的密度无明显差别(P>0.05),但肌层内淋巴管腔的面积和管径却大于粘膜层,说明较大的毛细淋巴管分布于肌层内并在肌层内行程较长。
国家自然科学基金(957076)
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收稿日期:1998-11-09
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