活化造血-免疫细胞回输对高剂量化疗恶性肿瘤患者的免疫保护作用
作者：刘绍基 杜剑锋 钟雪云 陈运贤 郭坤元 陈国强
单位：(刘绍基 杜剑锋)广东省石龙博爱医院，东莞 511721；(钟雪云)暨南大学医学院，广州510630；(陈运贤)中山医科大学附属第一医院，广州 510080；(郭坤元 陈国强)第一军医大学珠江医院，广州 510282
关键词：高剂量化疗；造血细胞活化；免疫细胞活化；恶性肿瘤；治疗
广东医学院学报990406 摘要 目的：探讨活化的造血-免疫细胞回输对高剂量化疗患者的免疫保护作用。方法：经过3～6个疗程的常规化疗或常规放疗未完全缓解或缓解后复发的恶性肿瘤26例，随机分为造血-免疫细胞活化组(简称活化组)16例和未活化组10例。活化组患者化疗前用GM-CSF动员5 d后，从外周血分离出单个核细胞，用GM-CSF、抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体、IL-2在体外活化和扩增粒系祖细胞和免疫细胞，在亚去髓性化疗后回输给患者。结果：(1)与未活化组相比，活化组患者的中性粒细胞绝对数(ANC)从<0.1×109/L升至>0.5×109/L的时间缩短6.1 d；(2)体外培养CFU-GM增加9.8倍，有核细胞数增加3.4倍；(3)T淋巴细胞对抵抗NK活性的肺癌细胞株PC 84045的杀伤率从10%提高至55%，对K 562细胞杀伤率从28%提高至46%。结论：用活化的造血-免疫细胞回输能加快高剂量化疗后造血和免疫功能的重建。
, 百拇医药
Immunoprotection of patients with malignancy receiving high-dose
chemotherapy by activated immuno-hematopoietic cell infusion
Lu Shaoji Du Jianfeng Zhong Xueyun et al
Bo Ai Hospital，Shilong，Dongguan Gaungdong 511721
Abstract Objective：To investigate the immunoprotection of patients with malignancy receiving high-dose chemotherapy by activated immuno-hematopoietic cell infusion.Methods：Twenty-six patients with malignancy，whose responses were incomplete remission or relapse after chemotherapy or radiotherapy for 3-6 courses，were randomly divided into infusion group(16 cases)and non-infusion group(10 cases).In infusion group，peripheral mononuclear cells were isolated after mobilized by granulocyte-monocyte colony-stimulating，factor(GM-CSF)for five days，then activated and amplified with GM-CSF，bispecific monoclonal antibody against tumor and T lymphocytes，and interleukin-2(IL-2).At last，the granulocyte lineage progenitors and other immune cells were infused into patients who had received submarrow-ablating chemotherapy.Results：(1)Compared with non-infusion group，the time for which neutrophil account in infusion group increased from 0.1×109/L to over 0.5×10/L had been shorten 6.1 days.(2)In vitro，CFU-GM increased by 9.8 fold，and nucleated cells by 3.4 fold.(3)The killing rate of T lymphocytes to NK-resistant lung cancer cell line increased from 10% to 55%，K562 cell line 28% to 46%.Conclusion：Activated immuno-hematopoietic cell infusion could promote the reconstitution of immune and hematopoietic function after high-dose chemotherapy.
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Key words：high-dose chemotherapy；activated immuno-hematopoietic cell；malignancy
部份恶性肿瘤存在药物剂量和治疗效果之间的量效关系，剂量越大，肿瘤细胞杀伤率越高，疗效越好。对某些有耐药的癌细胞，也可通过提高药物剂量来部分克服，但高剂量化疗的药物细胞毒性会抑制甚至摧毁患者的造血-免疫功能，并对心、肝、肺、肾等器官造成损害。患者的造血-免疫功能抑制使患者反复感染、出血和残留癌细胞扩散，导致治疗失败。为了克服高剂量化疗对患者造血-免疫功能的损害，提高肿瘤患者的治疗效果，我们用活化患者自身造血祖细胞和免疫细胞的方法对高剂量化疗的恶性肿瘤患者进行造血-免疫功能保护，促使其造血-免疫功能的恢复。
1 病例与方法
1.1 病例选择 1996年10月至1998年6月，选自东莞石龙博爱医院、中山医科大学附属第一医院和第一军医大学珠江医院住院病人共26例，其中经过3个疗程的常规化疗或常规放疗未完全缓解的恶性实体瘤19例(乳腺癌6例，鼻咽癌7例，肺鳞癌4例，骨肉瘤2例)，经过6个疗程常规化疗未完全缓解的恶性淋巴瘤7例(霍奇金病2例，非霍奇金氏淋巴瘤5例)。全部病例均经病理确诊，无心、肝、肾、肺功能不全。26例中男性15例，女性11例，年龄16～70岁。随机分为造血-免疫细胞活化组(简称活化组，16例)和未活化组(10例)。
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1.2 高剂量化疗方案 两组病例均按不同病种分别采用如下方案：乳腺癌和鼻咽癌用FED方案，每一疗程剂量5-氟尿嘧啶(5-FU)7500mg/m2，鬼臼乙叉甙(VP16)600mg/m2，顺氯氨铂(DDP)150mg/m2，加用亚叶酸钙(CF)200mg/m2增加疗效；肺癌用CAED方案，每一疗程环磷酰胺(CTX)160mg/m2，阿霉素(ADM)90mg/m2，VP16 600mg/m2，DDP 150mg/m2；骨肉瘤用IDE方案，每一疗程用异环磷酰胺(IFO)12g/m2，VP 16600mg/m2，DDP 150mg/m2；恶性淋巴瘤用ADE方案，每一疗程用阿糖胞苷(Ara-C)1g/m2，ADM 80mg/m2，VP16 300mg/m2为预防出血性膀胱炎，在应用CTX或IFO时，加用美司钠，并适当水化与碱化尿液。
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1.3 造血-免疫保护
1.3.1 造血-免疫细胞的动员和采集 造血-免疫细胞的动员用GM-CSF 5μg/(kg.d)皮下注射，连用5d。用CS 3000-Plus血细胞分离机从患者外周血分离单个核细胞，有核细胞数≥2.5×108/kg，CD 34+细胞≥2×105/kg。
1.3.2 活化造血-免疫细胞 用IMDM培养液调整细胞浓度为1.5×109/L，加入GM-CSF 100μg/L，培养24h后加入抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体200μg/L，IL-2106U/L，37℃，CO2体积分数为0.05培养5d后收集细胞。抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体的制备参照文献[1]。活化的造血-免疫细胞除留取部份做体外检测外，于高剂量化疗结束48h后回输给患者。
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1.3.3 造血祖细胞集落培养 30%小牛血清，G-CSF 2.5×105U/L，2×105 MNC，9.0g/L甲基纤维素，混匀后加入96孔板，每孔0.1mL，于37℃、CO2体积分数0.05条件下培养14d。倒置显微镜下计数CFU-GM，每个集落由≥40个透明细胞组成。
1.3.4 CD 34+细胞检测 2×108/L细胞悬液中加入20μg PE-CD 34单克隆抗体，室温下孵育45min，PBS洗涤并重新悬浮细胞，用流式细胞仪FACS-CaliburTM检测。
1.3.5 细胞毒活性测定[2] 以K 562、PC 84045细胞为靶细胞，用3 H释放法和MTT法测定细胞毒活性。
1.3.6 免疫功能测定[3] (1)T淋巴细胞功能体内测定：取62.5mg/L PHA 0.1mL接种于前臂皮下，24h后皮肤发红直径大于16mm为T细胞免疫反应恢复正常的标准。(2)巨噬细胞吞噬功能测定：巨噬细胞吞噬率达到65%、吞噬指数达到1.058以上为吞噬细胞功能恢复的指标。
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1.4 统计学处理 用Student's t 检验作统计学显著性分析。
2 结果
2.1 活化后的造血能力变化 加入GM-CSF培养5 d，CFU-GM增加了9.8倍，有核细胞数增加3.4倍，而CD34+细胞减少1/3，说明GM-CSF可促进CD 34+细胞向粒系祖细胞分化、增殖和成熟。
2.2 活化后免疫功能变化 经过5d培养，T淋巴细胞对K 562细胞杀伤率由最初的(28±11)%升高到(46±18)%；对PC 84045细胞杀伤率由最初的(10±2)%升高到(55±16)%，培养前后比较差异均有显著性(P<0.05)。
2.3 血像恢复
2.3.1 中性粒细胞绝对数(ANC) 活化组ANC恢复比未活化组明显加快，见表1。
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表1 中性粒细胞绝对数变化对比(
±s， t/d) 组别
n
中性粒细胞绝对数(ANC)
从正常降至0.1×109/L
维持<0.1×109/L
从0.1×109/L恢复到>0.5×109/L
活化组
16
5.6±1.8
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3.2±2.2*
7.3±3.6*
未活化组
10
5.4±2.1
8.1±3.0*
13.4±3.8*
*两组比较： P<0.05
2.3.2 血小板 活化组患者血小板下降及恢复时间与未活化组比较差异无显著性(P>0.05)。
2.4 抗菌素应用与住无菌层流室时间 活化组抗生素应用时间和住无菌层流室的时间分别为(3.3±1.5)d和(16.7±4.3)d；而未活化组分别为(6.9±2.3)d和(25.6±6.1)d，两组比较差异有显著性(P<0.05)。
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2.5 免疫功能恢复比较 活化组患者巨噬细胞吞噬功能恢复时间及对PHA反应恢复的时间分别为(2.4±0.8)d和(3.6±1.3)d；而未活化组分别为(4.5±2.3)d和(5.9±1.6)d，两组比较差异有显著性(P<0.05)，提示用IL-2，双功能抗体激活的造血-免疫细胞回输可以加快免疫功能的恢复。
3 讨论
体外实验证明，某些抗癌药物与肿瘤细胞的杀伤率成正比关系，但抗肿瘤药物对骨髓的毒性限制了其剂量的提高。外周血造血干细胞移植(PBSCT)实体瘤的治疗和造血生长刺激因子对化疗的支持，使化疗药物应用剂量得到提高。有报道认为，用造血生长刺激因子支持，可使化疗药物剂量提高3～4倍，加用PBSCT则可使药物剂量提高10倍，但在大剂量化疗后的造血-免疫功能恢复期，病人仍有细菌和霉菌感染的危险，而且这种危险随着造血-免疫功能抑制时间的延长及严重程度的增加而增加。当中性粒细胞绝对值降到0.1×109/L以下，2～5 d内即会出现发热。缩短造血-免疫功能恢复期能大大减少大剂量化疗的并发症，降低病死率。
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在应用亚去髓性化疗时，体内存在可再生的造血干细胞，但恢复时间比较长，此时配合外周血干细胞回输，12～15 d后中性粒细胞可达到0.5×109/L水平。本研究采用的化疗剂量属于亚去髓性剂量，未活化细胞回输组结果显示，平均13.4 d中性粒细胞恢复至0.5×109/L水平。化疗后白细胞降低主要是缺乏比较成熟的造血祖细胞。根据造血祖细胞对细胞因子反应的时间动力学，本研究在体外应用GM-CSF培养，促进CD34+细胞向粒、单系细胞定向分化和加快增殖、成熟。经过5 d的培养，粒、单系祖细胞增加了9.8倍。Pedrazzoli用G-CSF培养CFU-GM扩增了5～20倍[4]。本研究回输培养后的造血祖细胞，中性粒细胞恢复到0.5×109/L的时间，从对照组13.4d缩短到7.3d，结果显示在亚去髓性化疗时，用祖细胞治疗要比用干细胞治疗更能缩短白细胞减少期。Brugger报告，用CD34+外周血细胞培养，增殖后回输，明显加快了高剂量化疗后(Vp 16 1 500 mg/m2、IFO 12g/m2、Carboplatin 750 mg/m2、Epirubicin 150 mg/m2)造血的重建[5]。
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在去髓性化疗条件下，免疫功能的恢复至少需要8个月以上，如此长时间的免疫功能低下，可能是导致残存癌细胞复发和容易多重感染的因素之一。因此加快移植后免疫功能重建非常重要。有学者在移植后应用IL-2刺激淋巴细胞增殖，以求缩短免疫功能低下时间。其实，外周血干细胞悬液中含有大量的T淋巴细胞，其中包含有对抗原特异性反应性细胞。在本研究的培养体系中，GM-CSF可以提高成熟粒、单细胞吞噬和杀伤细菌的能力，抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体和IL-2可以诱导T淋巴细胞成为特异性杀伤细胞。与未活化细胞回输组相比，接受活化的细胞回输治疗的患者，抗感染和抗肿瘤的能力得到了尽早的恢复和提高。因此，回输后抗菌素用量少，住空气层流室时间短，吞噬细胞功能和T细胞功能恢复快，对肿瘤治疗效果好。造血细胞治疗和过继性免疫治疗相结合将是肿瘤高剂量化学治疗中一种新的保护方法。
基金项目：本课题系广东省科委重点攻关项目与东莞市科委基金项目
4 参考文献
, 百拇医药
1 Donohue JH，Ramsey PS，Kerr LT，et al.Enhanced in vitro lysis of human ovarian carcinomas with activated peripheral blood lymphocytes and bifuncional immune heteroaggregates.Cancer Res，1990，50：6508～6514
2 吴厚生，谢琪，吴少玲，等.用3 H-TDR释放法测定细胞毒功能。上海免疫学杂志，1987，7：230
3 余贺，谢少文，主编.临床免疫技术.上海：上海科学技术出版社，1982.135～139
4 Pedrazzoli P，Poggi G，Zambelli A，et al.In vivo growth of human progenitor cells：effect of rHG-CSFs alone，or in combination with other growth factors.Int J Hematol，1996，64(s2)：19
5 Brugger W，Heimfeld S，Berenson RJ，et al.Reconstitution of hematopoiesis after high dose chemotherapy by autologous progenitor cells generaled ex vivo.N Engl J Med，1995，333：283～287
收稿日期：1998-11-11, 百拇医药
单位：(刘绍基 杜剑锋)广东省石龙博爱医院，东莞 511721；(钟雪云)暨南大学医学院，广州510630；(陈运贤)中山医科大学附属第一医院，广州 510080；(郭坤元 陈国强)第一军医大学珠江医院，广州 510282
关键词：高剂量化疗；造血细胞活化；免疫细胞活化；恶性肿瘤；治疗
广东医学院学报990406 摘要 目的：探讨活化的造血-免疫细胞回输对高剂量化疗患者的免疫保护作用。方法：经过3～6个疗程的常规化疗或常规放疗未完全缓解或缓解后复发的恶性肿瘤26例，随机分为造血-免疫细胞活化组(简称活化组)16例和未活化组10例。活化组患者化疗前用GM-CSF动员5 d后，从外周血分离出单个核细胞，用GM-CSF、抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体、IL-2在体外活化和扩增粒系祖细胞和免疫细胞，在亚去髓性化疗后回输给患者。结果：(1)与未活化组相比，活化组患者的中性粒细胞绝对数(ANC)从<0.1×109/L升至>0.5×109/L的时间缩短6.1 d；(2)体外培养CFU-GM增加9.8倍，有核细胞数增加3.4倍；(3)T淋巴细胞对抵抗NK活性的肺癌细胞株PC 84045的杀伤率从10%提高至55%，对K 562细胞杀伤率从28%提高至46%。结论：用活化的造血-免疫细胞回输能加快高剂量化疗后造血和免疫功能的重建。
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Immunoprotection of patients with malignancy receiving high-dose
chemotherapy by activated immuno-hematopoietic cell infusion
Lu Shaoji Du Jianfeng Zhong Xueyun et al
Bo Ai Hospital，Shilong，Dongguan Gaungdong 511721
Abstract Objective：To investigate the immunoprotection of patients with malignancy receiving high-dose chemotherapy by activated immuno-hematopoietic cell infusion.Methods：Twenty-six patients with malignancy，whose responses were incomplete remission or relapse after chemotherapy or radiotherapy for 3-6 courses，were randomly divided into infusion group(16 cases)and non-infusion group(10 cases).In infusion group，peripheral mononuclear cells were isolated after mobilized by granulocyte-monocyte colony-stimulating，factor(GM-CSF)for five days，then activated and amplified with GM-CSF，bispecific monoclonal antibody against tumor and T lymphocytes，and interleukin-2(IL-2).At last，the granulocyte lineage progenitors and other immune cells were infused into patients who had received submarrow-ablating chemotherapy.Results：(1)Compared with non-infusion group，the time for which neutrophil account in infusion group increased from 0.1×109/L to over 0.5×10/L had been shorten 6.1 days.(2)In vitro，CFU-GM increased by 9.8 fold，and nucleated cells by 3.4 fold.(3)The killing rate of T lymphocytes to NK-resistant lung cancer cell line increased from 10% to 55%，K562 cell line 28% to 46%.Conclusion：Activated immuno-hematopoietic cell infusion could promote the reconstitution of immune and hematopoietic function after high-dose chemotherapy.
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Key words：high-dose chemotherapy；activated immuno-hematopoietic cell；malignancy
部份恶性肿瘤存在药物剂量和治疗效果之间的量效关系，剂量越大，肿瘤细胞杀伤率越高，疗效越好。对某些有耐药的癌细胞，也可通过提高药物剂量来部分克服，但高剂量化疗的药物细胞毒性会抑制甚至摧毁患者的造血-免疫功能，并对心、肝、肺、肾等器官造成损害。患者的造血-免疫功能抑制使患者反复感染、出血和残留癌细胞扩散，导致治疗失败。为了克服高剂量化疗对患者造血-免疫功能的损害，提高肿瘤患者的治疗效果，我们用活化患者自身造血祖细胞和免疫细胞的方法对高剂量化疗的恶性肿瘤患者进行造血-免疫功能保护，促使其造血-免疫功能的恢复。
1 病例与方法
1.1 病例选择 1996年10月至1998年6月，选自东莞石龙博爱医院、中山医科大学附属第一医院和第一军医大学珠江医院住院病人共26例，其中经过3个疗程的常规化疗或常规放疗未完全缓解的恶性实体瘤19例(乳腺癌6例，鼻咽癌7例，肺鳞癌4例，骨肉瘤2例)，经过6个疗程常规化疗未完全缓解的恶性淋巴瘤7例(霍奇金病2例，非霍奇金氏淋巴瘤5例)。全部病例均经病理确诊，无心、肝、肾、肺功能不全。26例中男性15例，女性11例，年龄16～70岁。随机分为造血-免疫细胞活化组(简称活化组，16例)和未活化组(10例)。
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1.2 高剂量化疗方案 两组病例均按不同病种分别采用如下方案：乳腺癌和鼻咽癌用FED方案，每一疗程剂量5-氟尿嘧啶(5-FU)7500mg/m2，鬼臼乙叉甙(VP16)600mg/m2，顺氯氨铂(DDP)150mg/m2，加用亚叶酸钙(CF)200mg/m2增加疗效；肺癌用CAED方案，每一疗程环磷酰胺(CTX)160mg/m2，阿霉素(ADM)90mg/m2，VP16 600mg/m2，DDP 150mg/m2；骨肉瘤用IDE方案，每一疗程用异环磷酰胺(IFO)12g/m2，VP 16600mg/m2，DDP 150mg/m2；恶性淋巴瘤用ADE方案，每一疗程用阿糖胞苷(Ara-C)1g/m2，ADM 80mg/m2，VP16 300mg/m2为预防出血性膀胱炎，在应用CTX或IFO时，加用美司钠，并适当水化与碱化尿液。
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1.3 造血-免疫保护
1.3.1 造血-免疫细胞的动员和采集 造血-免疫细胞的动员用GM-CSF 5μg/(kg.d)皮下注射，连用5d。用CS 3000-Plus血细胞分离机从患者外周血分离单个核细胞，有核细胞数≥2.5×108/kg，CD 34+细胞≥2×105/kg。
1.3.2 活化造血-免疫细胞 用IMDM培养液调整细胞浓度为1.5×109/L，加入GM-CSF 100μg/L，培养24h后加入抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体200μg/L，IL-2106U/L，37℃，CO2体积分数为0.05培养5d后收集细胞。抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体的制备参照文献[1]。活化的造血-免疫细胞除留取部份做体外检测外，于高剂量化疗结束48h后回输给患者。
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1.3.3 造血祖细胞集落培养 30%小牛血清，G-CSF 2.5×105U/L，2×105 MNC，9.0g/L甲基纤维素，混匀后加入96孔板，每孔0.1mL，于37℃、CO2体积分数0.05条件下培养14d。倒置显微镜下计数CFU-GM，每个集落由≥40个透明细胞组成。
1.3.4 CD 34+细胞检测 2×108/L细胞悬液中加入20μg PE-CD 34单克隆抗体，室温下孵育45min，PBS洗涤并重新悬浮细胞，用流式细胞仪FACS-CaliburTM检测。
1.3.5 细胞毒活性测定[2] 以K 562、PC 84045细胞为靶细胞，用3 H释放法和MTT法测定细胞毒活性。
1.3.6 免疫功能测定[3] (1)T淋巴细胞功能体内测定：取62.5mg/L PHA 0.1mL接种于前臂皮下，24h后皮肤发红直径大于16mm为T细胞免疫反应恢复正常的标准。(2)巨噬细胞吞噬功能测定：巨噬细胞吞噬率达到65%、吞噬指数达到1.058以上为吞噬细胞功能恢复的指标。
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1.4 统计学处理 用Student's t 检验作统计学显著性分析。
2 结果
2.1 活化后的造血能力变化 加入GM-CSF培养5 d，CFU-GM增加了9.8倍，有核细胞数增加3.4倍，而CD34+细胞减少1/3，说明GM-CSF可促进CD 34+细胞向粒系祖细胞分化、增殖和成熟。
2.2 活化后免疫功能变化 经过5d培养，T淋巴细胞对K 562细胞杀伤率由最初的(28±11)%升高到(46±18)%；对PC 84045细胞杀伤率由最初的(10±2)%升高到(55±16)%，培养前后比较差异均有显著性(P<0.05)。
2.3 血像恢复
2.3.1 中性粒细胞绝对数(ANC) 活化组ANC恢复比未活化组明显加快，见表1。
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表1 中性粒细胞绝对数变化对比(
±s， t/d) 组别n
中性粒细胞绝对数(ANC)
从正常降至0.1×109/L
维持<0.1×109/L
从0.1×109/L恢复到>0.5×109/L
活化组
16
5.6±1.8
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3.2±2.2*
7.3±3.6*
未活化组
10
5.4±2.1
8.1±3.0*
13.4±3.8*
*两组比较： P<0.05
2.3.2 血小板 活化组患者血小板下降及恢复时间与未活化组比较差异无显著性(P>0.05)。
2.4 抗菌素应用与住无菌层流室时间 活化组抗生素应用时间和住无菌层流室的时间分别为(3.3±1.5)d和(16.7±4.3)d；而未活化组分别为(6.9±2.3)d和(25.6±6.1)d，两组比较差异有显著性(P<0.05)。
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2.5 免疫功能恢复比较 活化组患者巨噬细胞吞噬功能恢复时间及对PHA反应恢复的时间分别为(2.4±0.8)d和(3.6±1.3)d；而未活化组分别为(4.5±2.3)d和(5.9±1.6)d，两组比较差异有显著性(P<0.05)，提示用IL-2，双功能抗体激活的造血-免疫细胞回输可以加快免疫功能的恢复。
3 讨论
体外实验证明，某些抗癌药物与肿瘤细胞的杀伤率成正比关系，但抗肿瘤药物对骨髓的毒性限制了其剂量的提高。外周血造血干细胞移植(PBSCT)实体瘤的治疗和造血生长刺激因子对化疗的支持，使化疗药物应用剂量得到提高。有报道认为，用造血生长刺激因子支持，可使化疗药物剂量提高3～4倍，加用PBSCT则可使药物剂量提高10倍，但在大剂量化疗后的造血-免疫功能恢复期，病人仍有细菌和霉菌感染的危险，而且这种危险随着造血-免疫功能抑制时间的延长及严重程度的增加而增加。当中性粒细胞绝对值降到0.1×109/L以下，2～5 d内即会出现发热。缩短造血-免疫功能恢复期能大大减少大剂量化疗的并发症，降低病死率。
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在应用亚去髓性化疗时，体内存在可再生的造血干细胞，但恢复时间比较长，此时配合外周血干细胞回输，12～15 d后中性粒细胞可达到0.5×109/L水平。本研究采用的化疗剂量属于亚去髓性剂量，未活化细胞回输组结果显示，平均13.4 d中性粒细胞恢复至0.5×109/L水平。化疗后白细胞降低主要是缺乏比较成熟的造血祖细胞。根据造血祖细胞对细胞因子反应的时间动力学，本研究在体外应用GM-CSF培养，促进CD34+细胞向粒、单系细胞定向分化和加快增殖、成熟。经过5 d的培养，粒、单系祖细胞增加了9.8倍。Pedrazzoli用G-CSF培养CFU-GM扩增了5～20倍[4]。本研究回输培养后的造血祖细胞，中性粒细胞恢复到0.5×109/L的时间，从对照组13.4d缩短到7.3d，结果显示在亚去髓性化疗时，用祖细胞治疗要比用干细胞治疗更能缩短白细胞减少期。Brugger报告，用CD34+外周血细胞培养，增殖后回输，明显加快了高剂量化疗后(Vp 16 1 500 mg/m2、IFO 12g/m2、Carboplatin 750 mg/m2、Epirubicin 150 mg/m2)造血的重建[5]。
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在去髓性化疗条件下，免疫功能的恢复至少需要8个月以上，如此长时间的免疫功能低下，可能是导致残存癌细胞复发和容易多重感染的因素之一。因此加快移植后免疫功能重建非常重要。有学者在移植后应用IL-2刺激淋巴细胞增殖，以求缩短免疫功能低下时间。其实，外周血干细胞悬液中含有大量的T淋巴细胞，其中包含有对抗原特异性反应性细胞。在本研究的培养体系中，GM-CSF可以提高成熟粒、单细胞吞噬和杀伤细菌的能力，抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体和IL-2可以诱导T淋巴细胞成为特异性杀伤细胞。与未活化细胞回输组相比，接受活化的细胞回输治疗的患者，抗感染和抗肿瘤的能力得到了尽早的恢复和提高。因此，回输后抗菌素用量少，住空气层流室时间短，吞噬细胞功能和T细胞功能恢复快，对肿瘤治疗效果好。造血细胞治疗和过继性免疫治疗相结合将是肿瘤高剂量化学治疗中一种新的保护方法。
基金项目：本课题系广东省科委重点攻关项目与东莞市科委基金项目
4 参考文献
, 百拇医药
1 Donohue JH，Ramsey PS，Kerr LT，et al.Enhanced in vitro lysis of human ovarian carcinomas with activated peripheral blood lymphocytes and bifuncional immune heteroaggregates.Cancer Res，1990，50：6508～6514
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收稿日期：1998-11-11, 百拇医药