疣克净擦剂质量标准的研究
作者：郑笑为 马双成 林瑞超
单位：中国药品生物制品检定所 (北京 100050)
关键词：疣克净擦剂；鸦胆子；虎杖；桃儿七；桉叶油；苦参碱
990411摘 要 报道 疣克净擦剂中鸦胆子、虎杖、桃儿七、桉叶油的薄层鉴别方法，以及苦参碱的含量测定方法。经实验表明，各项方法均具有良好的重复性。含量测定回收率可达98.78%，样品测定RSD为3.65%。
疣克净擦剂是由苦参、鸦胆子、虎杖、桃儿七、桉叶油、土茯苓等十几味中药，以一定的工艺制成的擦剂。该药具有清热燥湿，解毒化疣等功效，主治尖锐湿疣等症。为控制该药的质量，建立了苦参碱的含量测定方法，及鸦胆子、虎杖、桃儿七、桉叶油的薄层鉴别方法。经实验证明，各法均具有良好的重复性，操作简单，便于进行常规检查。
, 百拇医药 1 仪器与试药
薄层自动铺板仪(重庆南岸新力实验电器厂)；岛津CS-9000型薄层扫描仪；薄层硅胶G(青岛海洋化工厂)；羧甲基纤维素钠；其它试剂均为分析纯。疣克净擦剂由昆明华都制药有限公司提供。对照品、对照药材由中国药品生物制品检定所和昆明华都制药有限公司提供。
2 鸦胆子的薄层鉴别
2.1 供试品溶液的制备：取本品3 mL,加水3 mL混匀，用稀盐酸调pH至2～3后，用石油醚(60℃～90℃)提取4 次(15、10、10、10 mL)，合并石油醚液，用水20 mL洗涤1次，弃去水洗液，置水浴上蒸干，残渣加石油醚3 mL使溶解，做为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备：取鸦胆子油对照品0.2 mL，加3 mL石油醚使溶解，作为对照品溶液。
2.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除鸦胆子以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
, 百拇医药
2.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯(10∶0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白无干扰(图1-Ⅰ)。
3 虎杖的薄层鉴别
3.1 供试品溶液的制备：取本品3 mL，加水3 mL混匀，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。
3.2 对照品溶液的制备：取虎杖对照药材0.5 g，加无水乙醇5 mL，冷浸30 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。
3.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除虎杖以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
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3.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10 μL和对照药材溶液2 μL分别点于同一薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，置氨气中熏后，斑点变为红色。空白无干扰(图1-Ⅱ)。
4 桃儿七的薄层鉴别
4.1 供试品溶液的制备：同虎仗的薄层鉴别供试品溶液的制备。
4.2 对照品溶液的制备：取桃儿七对照药材0.5 g，加乙醇5 mL，冷浸30 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。
4.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除桃儿七以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
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4.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录VIB)试验，吸取鉴别(3)项下的供试品溶液和上述对照药材溶液各5 μL分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯(6∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以50%硫酸乙醇溶液，在110℃烘约5 min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白无干扰(图1-Ⅲ)。
5 桉叶油的薄层鉴别
5.1 供试品溶液的制备：取本品0.5 mL，加无水乙醇10 mL，作为供试品溶液。
5.2 对照品溶液的制备：取桉叶油对照品0.5 mL，同法制成对照品溶液。
5.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除桉叶油以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
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5.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液2 μL和对照品溶液1 μL，分别点于同一薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白无干扰(图1-Ⅳ)。
Ⅰ-鸦胆子 Ⅱ-虎杖 Ⅲ-桃儿七 Ⅳ-桉叶油 Ⅴ-苦参 A-鸦胆子油 B-虎杖 C-桃儿七 D-桉叶油 E-苦参碱
图1 疣克净擦剂中各成分的TLC图
6 苦参碱的含量测定
6.1 供试品溶液的制备：精密吸取本品5 mL，加水5 mL混匀，用稀盐酸调pH至2～3后，用石油醚(60℃～90℃)提取3次，每次10 mL，弃去石油醚液，水层用氨水调pH至9～10后，用氯仿提取4 次，每次10 mL，合并氯仿液，加水20 mL洗涤一次，弃去水洗液、氯仿液置水浴上蒸干，残渣加乙醇使溶解，定量转移至2 mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
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6.2 对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
6.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除苦参以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
6.4 薄层层析：用定量毛细管吸取上述对照品溶液2 μL和4 μL，供试品溶液5 μL，分别交叉点于同一预制硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨水(4∶4∶1∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，至斑点显色清晰。层析结果见图1-Ⅴ。
6.5 扫描条件：双波长反射法锯齿扫描波长λS＝540 nm，λR＝650 nm，狭缝0.4 mm×0.4 mm；Sx＝3；结果表明空白样品在苦参碱相应的位置处无干扰。
, 百拇医药 6.6 线性范围考察：准确吸取对照品溶液1、2、3、4、5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，依法展开，扫描，测定，以对照品重量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝131030.14X+10629.37，r＝0.9994，结果表明苦参碱在1.1～5.3 μg范围内呈良好线性关系。
6.7 精密度试验；取同一供试品溶液在同一硅胶G薄层板上点多个斑点，测定结果表明同板精密度良好，RSD＝1.72%。
6.8 斑点稳定性实验：在硅胶G薄层板上点适量苦参碱对照品溶液，按上述条件展开，显色，每间隔一定时间扫描测定一次，结果RSD＝4.33%。
6.9 重现性试验：取同一批号样品，按前述方法平行测定5份，结果为11.7 mg/100 mL，RSD＝6.10%。
6.10 回收率试验：采用加样回收法，精密吸取已知含量的样品2.5 mL，加入苦参碱对照品，按含量测定项下供试品溶液的制备方法进行制备，测定，结果回收率为98.78%，RSD＝3.56%。
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6.11 样品测定结果：分别称取3批样品各5份，按供试品制备方法制备供试品溶液。准确吸取供试品溶液5 μL，对照品溶液2 μL和4 μL，分别交叉点于同一预制硅胶G薄层板上，依法展开，显色扫描测定。以外标二点法计算含量，结果见表1。
表1 3批样品含量测定结果 批号
含量mg/100 mL
RSD%
970508
11.8
4.52
970610
11.2
5.13
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970623
12.2
4.26
7 讨论
鸦胆子、苦参均为本处方中君药，由于鸦胆子有效成分单体对照品未得到，故选用测定苦参中苦参碱建立含量测定方法。苦参碱的含量测定方法文献报道有薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法等多种较为成熟的方法。本品选用的薄层扫描法，前处理简单，灵敏度较高，重现性好，适用于工厂常规分析检验。实验过程中，经反复摸索，选择了文中所述展开系统，且阴性对照无干扰。苦参碱在薄层展开后，要充分阴干，均匀地喷稀碘化铋钾试液，盖上同样大小的薄层板，1.5 h内完成扫描测定，以保证测定结果的准确性。
*Address:Zheng Xiaowei ,National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products the People's Repblic of China Beijing
郑笑为 女，27岁,1994年毕业于沈阳药科大学药学系,获工学学士学位.现在中国药品生物制检定所中药室工作,药师.主要从事中药分析,质量标准研究及植化方面的工作,已发表论文3篇.
(1998-03-23收稿), 百拇医药
单位：中国药品生物制品检定所 (北京 100050)
关键词：疣克净擦剂；鸦胆子；虎杖；桃儿七；桉叶油；苦参碱
990411摘 要 报道 疣克净擦剂中鸦胆子、虎杖、桃儿七、桉叶油的薄层鉴别方法，以及苦参碱的含量测定方法。经实验表明，各项方法均具有良好的重复性。含量测定回收率可达98.78%，样品测定RSD为3.65%。
疣克净擦剂是由苦参、鸦胆子、虎杖、桃儿七、桉叶油、土茯苓等十几味中药，以一定的工艺制成的擦剂。该药具有清热燥湿，解毒化疣等功效，主治尖锐湿疣等症。为控制该药的质量，建立了苦参碱的含量测定方法，及鸦胆子、虎杖、桃儿七、桉叶油的薄层鉴别方法。经实验证明，各法均具有良好的重复性，操作简单，便于进行常规检查。
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薄层自动铺板仪(重庆南岸新力实验电器厂)；岛津CS-9000型薄层扫描仪；薄层硅胶G(青岛海洋化工厂)；羧甲基纤维素钠；其它试剂均为分析纯。疣克净擦剂由昆明华都制药有限公司提供。对照品、对照药材由中国药品生物制品检定所和昆明华都制药有限公司提供。
2 鸦胆子的薄层鉴别
2.1 供试品溶液的制备：取本品3 mL,加水3 mL混匀，用稀盐酸调pH至2～3后，用石油醚(60℃～90℃)提取4 次(15、10、10、10 mL)，合并石油醚液，用水20 mL洗涤1次，弃去水洗液，置水浴上蒸干，残渣加石油醚3 mL使溶解，做为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备：取鸦胆子油对照品0.2 mL，加3 mL石油醚使溶解，作为对照品溶液。
2.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除鸦胆子以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
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2.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯(10∶0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白无干扰(图1-Ⅰ)。
3 虎杖的薄层鉴别
3.1 供试品溶液的制备：取本品3 mL，加水3 mL混匀，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。
3.2 对照品溶液的制备：取虎杖对照药材0.5 g，加无水乙醇5 mL，冷浸30 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。
3.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除虎杖以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
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3.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10 μL和对照药材溶液2 μL分别点于同一薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，置氨气中熏后，斑点变为红色。空白无干扰(图1-Ⅱ)。
4 桃儿七的薄层鉴别
4.1 供试品溶液的制备：同虎仗的薄层鉴别供试品溶液的制备。
4.2 对照品溶液的制备：取桃儿七对照药材0.5 g，加乙醇5 mL，冷浸30 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。
4.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除桃儿七以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
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4.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录VIB)试验，吸取鉴别(3)项下的供试品溶液和上述对照药材溶液各5 μL分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯(6∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以50%硫酸乙醇溶液，在110℃烘约5 min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白无干扰(图1-Ⅲ)。
5 桉叶油的薄层鉴别
5.1 供试品溶液的制备：取本品0.5 mL，加无水乙醇10 mL，作为供试品溶液。
5.2 对照品溶液的制备：取桉叶油对照品0.5 mL，同法制成对照品溶液。
5.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除桉叶油以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
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5.4 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》1995版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液2 μL和对照品溶液1 μL，分别点于同一薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白无干扰(图1-Ⅳ)。
Ⅰ-鸦胆子 Ⅱ-虎杖 Ⅲ-桃儿七 Ⅳ-桉叶油 Ⅴ-苦参 A-鸦胆子油 B-虎杖 C-桃儿七 D-桉叶油 E-苦参碱
图1 疣克净擦剂中各成分的TLC图
6 苦参碱的含量测定
6.1 供试品溶液的制备：精密吸取本品5 mL，加水5 mL混匀，用稀盐酸调pH至2～3后，用石油醚(60℃～90℃)提取3次，每次10 mL，弃去石油醚液，水层用氨水调pH至9～10后，用氯仿提取4 次，每次10 mL，合并氯仿液，加水20 mL洗涤一次，弃去水洗液、氯仿液置水浴上蒸干，残渣加乙醇使溶解，定量转移至2 mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
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6.2 对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
6.3 空白对照溶液的制备：按处方称取除苦参以外的各味药材适量，依成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制得空白对照溶液。
6.4 薄层层析：用定量毛细管吸取上述对照品溶液2 μL和4 μL，供试品溶液5 μL，分别交叉点于同一预制硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨水(4∶4∶1∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，至斑点显色清晰。层析结果见图1-Ⅴ。
6.5 扫描条件：双波长反射法锯齿扫描波长λS＝540 nm，λR＝650 nm，狭缝0.4 mm×0.4 mm；Sx＝3；结果表明空白样品在苦参碱相应的位置处无干扰。
, 百拇医药 6.6 线性范围考察：准确吸取对照品溶液1、2、3、4、5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，依法展开，扫描，测定，以对照品重量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝131030.14X+10629.37，r＝0.9994，结果表明苦参碱在1.1～5.3 μg范围内呈良好线性关系。
6.7 精密度试验；取同一供试品溶液在同一硅胶G薄层板上点多个斑点，测定结果表明同板精密度良好，RSD＝1.72%。
6.8 斑点稳定性实验：在硅胶G薄层板上点适量苦参碱对照品溶液，按上述条件展开，显色，每间隔一定时间扫描测定一次，结果RSD＝4.33%。
6.9 重现性试验：取同一批号样品，按前述方法平行测定5份，结果为11.7 mg/100 mL，RSD＝6.10%。
6.10 回收率试验：采用加样回收法，精密吸取已知含量的样品2.5 mL，加入苦参碱对照品，按含量测定项下供试品溶液的制备方法进行制备，测定，结果回收率为98.78%，RSD＝3.56%。
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6.11 样品测定结果：分别称取3批样品各5份，按供试品制备方法制备供试品溶液。准确吸取供试品溶液5 μL，对照品溶液2 μL和4 μL，分别交叉点于同一预制硅胶G薄层板上，依法展开，显色扫描测定。以外标二点法计算含量，结果见表1。
表1 3批样品含量测定结果 批号
含量mg/100 mL
RSD%
970508
11.8
4.52
970610
11.2
5.13
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970623
12.2
4.26
7 讨论
鸦胆子、苦参均为本处方中君药，由于鸦胆子有效成分单体对照品未得到，故选用测定苦参中苦参碱建立含量测定方法。苦参碱的含量测定方法文献报道有薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法等多种较为成熟的方法。本品选用的薄层扫描法，前处理简单，灵敏度较高，重现性好，适用于工厂常规分析检验。实验过程中，经反复摸索，选择了文中所述展开系统，且阴性对照无干扰。苦参碱在薄层展开后，要充分阴干，均匀地喷稀碘化铋钾试液，盖上同样大小的薄层板，1.5 h内完成扫描测定，以保证测定结果的准确性。
*Address:Zheng Xiaowei ,National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products the People's Repblic of China Beijing
郑笑为 女，27岁,1994年毕业于沈阳药科大学药学系,获工学学士学位.现在中国药品生物制检定所中药室工作,药师.主要从事中药分析,质量标准研究及植化方面的工作,已发表论文3篇.
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