中药透皮吸收制剂青龙贴剂的处方筛选及药物动力学
作者：张奇 邓英杰 刘令勉
单位：沈阳药科大学药学系(张奇 邓英杰)；黑龙江中医药大学药剂教研室(刘令勉)
关键词：中药透皮吸收；透皮促进剂；青龙贴；小青龙汤；药物动力学
沈阳药科大学学报990406 摘 要 对月桂氮酮(azone,Az)、丙二醇(propylene-glycol,PG)、冰片(borneol)、薄荷油(peppermint oil,Poil)4种透皮吸收促进剂单独应用和任意两种合用的促进效果进行考察.采用高效液相色谱法，以青龙贴主要有效成分盐酸麻黄碱为测定指标，以青龙汤为对照，以大鼠为实验对象，测定青龙贴和青龙汤单剂量给药后的血药浓度.进行药物动力学及生物利用度研究.结果表明，青龙贴作用效果优于青龙汤.
分类号 R94
A Study on the Preparation and Pharmacokinetics of the Qing Long Plaster，A Transdermal Delivery Form of a Chinese Drug
, 百拇医药
Zhang Qi,Deng Yingjie,Liu Lingmian,Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract The promotive effectiveness of our enhancers were studied when they were used separately or two of them were mixed together.The plasma level data determined by HPLC were fitted with 3p87 program on the computer.There was no difference between Cmax of the plaster and the decoction.But the AUC of the plaster is twice that of the decoction.So the plaster is better than the decoction.
, 百拇医药
Key words transdermal delivery of Chinese drugs;penetration enhancer;the Qing Long plaster;the Xiao Qing Long decoction;pharmacokinetics
经皮给药历史悠久，但直到近几十年才逐渐受到重视，并在理论和技术上被逐步完善.国内外研究工作主要集中在化学及化学合成药，而由于中药成分复杂等原因对中国传统药物方剂的研究较少.作者尝试将已被哈尔滨市中医院临床应用有效的青龙膏精制成粘胶型长效青龙贴片(组方为麻黄、芍药、乌头、五味子、蜈蚣、甘草等)，并以方中君药麻黄中有效成分麻黄碱为定量指标，利用紫外分光光度法和高效液相色谱法，对青龙贴进行处方筛选及大鼠体内药物动力学研究.
1 药品与仪器
Franz扩散池(自制)；日本岛津LC-4A液相色谱仪；紫外分光光度计(721-A型，浙江仪表厂)；超级恒温水浴(重庆实验设备厂).
, 百拇医药
青龙贴(6 cm×6 cm，厚0.08 mm,11.73 g/贴)全方的中药材由哈尔滨市中医院提供，经黑龙江中医药大学中药鉴定室王喜军教授鉴定为正品.健康Wistar大鼠，雌雄不限，体重150～200 g(黑龙江中医药大学实验动物中心提供).其它药品及试剂均为药用或分析纯规格.
2 透皮促进剂促进效果考察
根据文献方法处理大鼠背皮〔1〕.
精密称取干燥至恒重的盐酸麻黄素对照品，制备标准溶液(1.93 mg/mL)，紫外分光光度计418 nm处测吸光度A〔2〕，由C-A线性回归得回归方程：A=0.003 691 C+0.006 5(r=0.999 9).
将贮备鼠皮蒙于双室扩散池之间(d=2.2 cm)，有效扩散面积为6.033 cm2.药膏加入扩散池中，接受液为10 mL生理盐水，磁力搅拌器搅拌(200 r/min)，温度由恒温水浴维持在(37±1)℃，在一定的时间间隔从接受池中取样1 mL同时补加同体积生理盐水以保持池内溶液体积恒定，见图1.
, 百拇医药
Fig.1 Double-cell permeation apparatus
A—Donor cell;B—Receiver cell;C—Sample outlet;D—Water bath;E—Qing Long plaster;F—Megnetic stirring bar
取6份青龙膏浓缩液，按体积比分别加入6种不同组成的透皮促进剂，分别为：2%月桂氮酮和2%丙二醇；2%月桂氮酮和2%冰片；2%月桂氮酮和2%薄荷油；2%丙二醇和2%冰片；2%丙二醇和2%薄荷油；2%薄荷油和2%冰片.将混合好的药膏加入夹有鼠皮的扩散池中，样品按标准曲线制备方法处理后用紫外分光光度计测定.见图2.
Fig.2 The effect of the interaction of enhancers on the permeation of EP
, 百拇医药
1—Azone+1,2-PG;2—Azone+Borneol;3—Azone+Peppermint oil;4—Borneol+1,2-PG;5—Peppermint oil+1,2-PG;6—Borneol+Peppermint oil
由图2可见，当月桂氮酮和丙二醇合用时促进药物透皮吸收效果最好.
按粘胶型贴片制备工艺制备青龙贴，其纵切剖面图由下向上依次为背衬层、含药粘胶层和防粘层.
3 青龙贴大鼠体内的药动学
色谱条件〔3〕：20 nbax ODS柱(4.6 mm×250 mm)；流速1.0 mL/min.流动相为甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH 2.5，体积比96∶4).
血浆样品处理〔4〕：1 mL抗凝鼠血浆加入8 mL甲醇，超声2 min，3 000 r/min离心10 min，分取上清液，70℃水浴挥干，残渣用甲醇溶解定容至1 mL，进样10 μL HPLC分析.
, 百拇医药
标准曲线和最低检测浓度：同血样处理方法，进样10 μL.以EP浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得标准曲线：A=0.104 232+0.115 373C(r=0.999 5).线性范围1～20 μg，最低检测限浓度为1 μg/mL. 回收率和精确度：量取加有空白血浆的0.1、0.5、1.0 mg/mL标准溶液各3份，按标准曲线法测得回收率为93.56%，日内精度RSD(%)为4.51±0.62，日间精度RSD(%)为4.25±0.54.
12只大鼠随机分为两组.A组大鼠实验前禁食饮水1 d，用剃须刀将背部毛小心剃干净，每只鼠给青龙贴1贴，给药后于1.5、3.5、5.5、8.5、12、16、72 h用肝素抗凝毛细管大鼠眼眶取血1 mL，盛于肝素化离心管中；B组大鼠青龙汤5.87 g/kg灌胃给药后于0.5、1.5、3.5、4.5、5.5、6.5、8.5、24 h取血1 mL，盛于肝素化离心管中，并立即处理.如图3.
, 百拇医药
Fig.3 EP concetration in blood after decoction /TDS
was given to mice
1—TDS;2—Decoction
A组贴片组大鼠血药浓度-时间数据用3P87程序处理，按一级吸收和一级消除的一室模型处理.见表1、2.
Tab.1 Comparision between observed and
calculated concentrations of TDS Time
/h
C(obs)/
, 百拇医药
μg.mL-1
C(cal)/
μg.mL-1
Diff/
μg.mL-1
Diff/%
1.500 0
10.438
10.624
-0.186 6
-1.787 7
, 百拇医药
3.500 0
13.627
14.713
-1.085 6
-7.966 6
5.500 0
15.370
13.813
1.556 4
10.126 3
8.500 0
9.978
, http://www.100md.com
9.978
-0.000 4
-0.004 0
12.000
6.048
5.903
0.144 4
2.388 4
24.000
0.490
0.679
-0.188 2
, 百拇医药
-38.378 8
72.000
0.305
0.000
0.304 7
99.979 5
Tab.2 Pharmacokinetic parameters of TDS Parameter
Unit
Value
A
μg.mL-1
, 百拇医药
74.385 09
Ke
h-1
0.194 28
Ka
h-1
0.335 71
t1/2(ka)
h
2.064 71
t1/2(ke)
, 百拇医药 h
3.567 70
T(peak)
h
3.867 2
C(max)
μg/mL
14.782 53
AUC
(μg/mL).h
161.292 48
CL/F(s)
, http://www.100md.com
mg.h-1/μg.mL-1
1.239 98
V/F(c)
mg/μg.mL-1
6.382 32
B组灌胃组大鼠血药浓度-时间数据用3P87程序处理，按一级吸收和一级消除的一室模型处理.见表3、4.Tab.3 Comparision between observed and
calculated concentrations of decoction Time
/h
, 百拇医药
C(obs)/
μg.mL-1
C(cal)/
μg.mL-1
Diff/
μg.mL-1
Diff/%
1.500 0
10.215
10.877
-0.661 6
, 百拇医药
-6.476 7
2.500 0
14.555
8.395
6.160 1
42.323 0
2.500 0
6.394
6.173
0.221 6
3.456 6
3.500 0
, http://www.100md.com
3.764
4.539
-0.774 0
-20.561 5
4.500 0
3.092
3.337
-0.244 9
-7.920 4
5.500
2.516
2.453
, 百拇医药
0.062 2
2.472 1
6.500
1.913
1.804
0.108 8
5.689 6
8.500 0
0.948
0.975
-0.027 5
-2.897 3
, 百拇医药
24.000
0.601
0.008
0.592 6
98.620 0
Tab.4 Pharmacokinetic parameters
of Qing Long Decoction Parameter
Unit
Value
A
μg.mL-1
, 百拇医药
13.317 45
Ke
h-1
0.307 56
Ka
h-1
6.401 02
t1/2(ka)
h
0.108 29
t1/2(ke)
, http://www.100md.com h
2.253 68
T(peak)
h
0.498 16
C(max)
μg/mL
10.87664
AUC
(μg/mL).h
41.219 40
CL/F(s)
, http://www.100md.com
mg.h-1/μg.mL-1
2.426 04
V/F(c)
mg/μg.mL-1
7.887 96
由表2、4可见青龙贴的吸收和消除都较青龙汤缓慢而持久，青龙贴的吸收半衰期为2.06 h，消除半衰期为3.57 h，而青龙汤的吸收半衰期为0.11 h，消除半衰期为2.25 h.两者峰浓度相当，但青龙贴的血浆总清除率为1.24 mg.h-1/μg.mL-1，明显慢于小青龙汤2.43 mg.h-1/μg.mL-1，由于青龙贴药量是青龙汤的两倍，所以青龙贴生物利用度(AUC)161.29(μg/mL).h是小青龙汤生物利用度(AUC)41.2(μg/mL).h的两倍.4 讨论
, http://www.100md.com
a.药物的透皮吸收过程分为3个阶段：药物从基质中释放、药物穿透角质层屏障、药物通过表皮和真皮被血管吸收〔5〕.月桂氮酮和丙二醇单独应用促渗效果并不强，但两者合用，月桂氮酮可使丙二醇更多进入角质细胞，同时丙二醇又可延长月桂氮酮在角质层中的滞留时间，从而使渗透量大增〔6〕.由于中药复方精制后既有大量水溶性成分又有脂溶性成分，而月桂氮酮的脂溶性和丙二醇的水溶性几乎对所有药物透皮均有促进作用〔7〕.
b.从大鼠单次应用青龙汤和青龙贴的药时曲线上看，两者峰浓度相当.但青龙贴吸收慢、消除慢，并且生物利用度远高于青龙贴，此结果与临床应用结果相似，说明青龙贴药效持续平稳，可避免肝脏的首过效应，并可避免对胃肠道的刺激作用，使用方便，病人易于接受.
参考文献
1 阮丽萍，郑俊民.硝苯啶膜剂的研究.药学学报，1992，26：286
, 百拇医药
2 罗国安，兰其田.薄层-酸性染料比色法测定九分散中麻黄碱的含量.中草药，1988，19(6)：13
3 梁宏唏.HPLC测定止咳化痰丸中麻黄碱、伪麻黄碱的含量.中成药，1990，12(10)：13
4 王喜军.高效液相色谱在中药研究中的应用.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1995.30
5 郑俊民主编.药物透皮吸收新剂型.北京：人民卫生出版社，1990.33
6 Hadgraft J.Percutaneous absorption:possiblites and problems.Int J Pharm，1983,116:255
7 梁秉文主编.经皮给药制剂.北京：中国医学科技出版社，1992.144
收稿日期:1998-10-10, 百拇医药
单位：沈阳药科大学药学系(张奇 邓英杰)；黑龙江中医药大学药剂教研室(刘令勉)
关键词：中药透皮吸收；透皮促进剂；青龙贴；小青龙汤；药物动力学
沈阳药科大学学报990406 摘 要 对月桂氮酮(azone,Az)、丙二醇(propylene-glycol,PG)、冰片(borneol)、薄荷油(peppermint oil,Poil)4种透皮吸收促进剂单独应用和任意两种合用的促进效果进行考察.采用高效液相色谱法，以青龙贴主要有效成分盐酸麻黄碱为测定指标，以青龙汤为对照，以大鼠为实验对象，测定青龙贴和青龙汤单剂量给药后的血药浓度.进行药物动力学及生物利用度研究.结果表明，青龙贴作用效果优于青龙汤.
分类号 R94
A Study on the Preparation and Pharmacokinetics of the Qing Long Plaster，A Transdermal Delivery Form of a Chinese Drug
, 百拇医药
Zhang Qi,Deng Yingjie,Liu Lingmian,Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract The promotive effectiveness of our enhancers were studied when they were used separately or two of them were mixed together.The plasma level data determined by HPLC were fitted with 3p87 program on the computer.There was no difference between Cmax of the plaster and the decoction.But the AUC of the plaster is twice that of the decoction.So the plaster is better than the decoction.
, 百拇医药
Key words transdermal delivery of Chinese drugs;penetration enhancer;the Qing Long plaster;the Xiao Qing Long decoction;pharmacokinetics
经皮给药历史悠久，但直到近几十年才逐渐受到重视，并在理论和技术上被逐步完善.国内外研究工作主要集中在化学及化学合成药，而由于中药成分复杂等原因对中国传统药物方剂的研究较少.作者尝试将已被哈尔滨市中医院临床应用有效的青龙膏精制成粘胶型长效青龙贴片(组方为麻黄、芍药、乌头、五味子、蜈蚣、甘草等)，并以方中君药麻黄中有效成分麻黄碱为定量指标，利用紫外分光光度法和高效液相色谱法，对青龙贴进行处方筛选及大鼠体内药物动力学研究.
1 药品与仪器
Franz扩散池(自制)；日本岛津LC-4A液相色谱仪；紫外分光光度计(721-A型，浙江仪表厂)；超级恒温水浴(重庆实验设备厂).
, 百拇医药
青龙贴(6 cm×6 cm，厚0.08 mm,11.73 g/贴)全方的中药材由哈尔滨市中医院提供，经黑龙江中医药大学中药鉴定室王喜军教授鉴定为正品.健康Wistar大鼠，雌雄不限，体重150～200 g(黑龙江中医药大学实验动物中心提供).其它药品及试剂均为药用或分析纯规格.
2 透皮促进剂促进效果考察
根据文献方法处理大鼠背皮〔1〕.
精密称取干燥至恒重的盐酸麻黄素对照品，制备标准溶液(1.93 mg/mL)，紫外分光光度计418 nm处测吸光度A〔2〕，由C-A线性回归得回归方程：A=0.003 691 C+0.006 5(r=0.999 9).
将贮备鼠皮蒙于双室扩散池之间(d=2.2 cm)，有效扩散面积为6.033 cm2.药膏加入扩散池中，接受液为10 mL生理盐水，磁力搅拌器搅拌(200 r/min)，温度由恒温水浴维持在(37±1)℃，在一定的时间间隔从接受池中取样1 mL同时补加同体积生理盐水以保持池内溶液体积恒定，见图1.
, 百拇医药
Fig.1 Double-cell permeation apparatus
A—Donor cell;B—Receiver cell;C—Sample outlet;D—Water bath;E—Qing Long plaster;F—Megnetic stirring bar
取6份青龙膏浓缩液，按体积比分别加入6种不同组成的透皮促进剂，分别为：2%月桂氮酮和2%丙二醇；2%月桂氮酮和2%冰片；2%月桂氮酮和2%薄荷油；2%丙二醇和2%冰片；2%丙二醇和2%薄荷油；2%薄荷油和2%冰片.将混合好的药膏加入夹有鼠皮的扩散池中，样品按标准曲线制备方法处理后用紫外分光光度计测定.见图2.
Fig.2 The effect of the interaction of enhancers on the permeation of EP
, 百拇医药
1—Azone+1,2-PG;2—Azone+Borneol;3—Azone+Peppermint oil;4—Borneol+1,2-PG;5—Peppermint oil+1,2-PG;6—Borneol+Peppermint oil
由图2可见，当月桂氮酮和丙二醇合用时促进药物透皮吸收效果最好.
按粘胶型贴片制备工艺制备青龙贴，其纵切剖面图由下向上依次为背衬层、含药粘胶层和防粘层.
3 青龙贴大鼠体内的药动学
色谱条件〔3〕：20 nbax ODS柱(4.6 mm×250 mm)；流速1.0 mL/min.流动相为甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH 2.5，体积比96∶4).
血浆样品处理〔4〕：1 mL抗凝鼠血浆加入8 mL甲醇，超声2 min，3 000 r/min离心10 min，分取上清液，70℃水浴挥干，残渣用甲醇溶解定容至1 mL，进样10 μL HPLC分析.
, 百拇医药
标准曲线和最低检测浓度：同血样处理方法，进样10 μL.以EP浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得标准曲线：A=0.104 232+0.115 373C(r=0.999 5).线性范围1～20 μg，最低检测限浓度为1 μg/mL. 回收率和精确度：量取加有空白血浆的0.1、0.5、1.0 mg/mL标准溶液各3份，按标准曲线法测得回收率为93.56%，日内精度RSD(%)为4.51±0.62，日间精度RSD(%)为4.25±0.54.
12只大鼠随机分为两组.A组大鼠实验前禁食饮水1 d，用剃须刀将背部毛小心剃干净，每只鼠给青龙贴1贴，给药后于1.5、3.5、5.5、8.5、12、16、72 h用肝素抗凝毛细管大鼠眼眶取血1 mL，盛于肝素化离心管中；B组大鼠青龙汤5.87 g/kg灌胃给药后于0.5、1.5、3.5、4.5、5.5、6.5、8.5、24 h取血1 mL，盛于肝素化离心管中，并立即处理.如图3.
, 百拇医药
Fig.3 EP concetration in blood after decoction /TDS
was given to mice
1—TDS;2—Decoction
A组贴片组大鼠血药浓度-时间数据用3P87程序处理，按一级吸收和一级消除的一室模型处理.见表1、2.
Tab.1 Comparision between observed and
calculated concentrations of TDS Time
/h
C(obs)/
, 百拇医药
μg.mL-1
C(cal)/
μg.mL-1
Diff/
μg.mL-1
Diff/%
1.500 0
10.438
10.624
-0.186 6
-1.787 7
, 百拇医药
3.500 0
13.627
14.713
-1.085 6
-7.966 6
5.500 0
15.370
13.813
1.556 4
10.126 3
8.500 0
9.978
, http://www.100md.com
9.978
-0.000 4
-0.004 0
12.000
6.048
5.903
0.144 4
2.388 4
24.000
0.490
0.679
-0.188 2
, 百拇医药
-38.378 8
72.000
0.305
0.000
0.304 7
99.979 5
Tab.2 Pharmacokinetic parameters of TDS Parameter
Unit
Value
A
μg.mL-1
, 百拇医药
74.385 09
Ke
h-1
0.194 28
Ka
h-1
0.335 71
t1/2(ka)
h
2.064 71
t1/2(ke)
, 百拇医药 h
3.567 70
T(peak)
h
3.867 2
C(max)
μg/mL
14.782 53
AUC
(μg/mL).h
161.292 48
CL/F(s)
, http://www.100md.com
mg.h-1/μg.mL-1
1.239 98
V/F(c)
mg/μg.mL-1
6.382 32
B组灌胃组大鼠血药浓度-时间数据用3P87程序处理，按一级吸收和一级消除的一室模型处理.见表3、4.Tab.3 Comparision between observed and
calculated concentrations of decoction Time
/h
, 百拇医药
C(obs)/
μg.mL-1
C(cal)/
μg.mL-1
Diff/
μg.mL-1
Diff/%
1.500 0
10.215
10.877
-0.661 6
, 百拇医药
-6.476 7
2.500 0
14.555
8.395
6.160 1
42.323 0
2.500 0
6.394
6.173
0.221 6
3.456 6
3.500 0
, http://www.100md.com
3.764
4.539
-0.774 0
-20.561 5
4.500 0
3.092
3.337
-0.244 9
-7.920 4
5.500
2.516
2.453
, 百拇医药
0.062 2
2.472 1
6.500
1.913
1.804
0.108 8
5.689 6
8.500 0
0.948
0.975
-0.027 5
-2.897 3
, 百拇医药
24.000
0.601
0.008
0.592 6
98.620 0
Tab.4 Pharmacokinetic parameters
of Qing Long Decoction Parameter
Unit
Value
A
μg.mL-1
, 百拇医药
13.317 45
Ke
h-1
0.307 56
Ka
h-1
6.401 02
t1/2(ka)
h
0.108 29
t1/2(ke)
, http://www.100md.com h
2.253 68
T(peak)
h
0.498 16
C(max)
μg/mL
10.87664
AUC
(μg/mL).h
41.219 40
CL/F(s)
, http://www.100md.com
mg.h-1/μg.mL-1
2.426 04
V/F(c)
mg/μg.mL-1
7.887 96
由表2、4可见青龙贴的吸收和消除都较青龙汤缓慢而持久，青龙贴的吸收半衰期为2.06 h，消除半衰期为3.57 h，而青龙汤的吸收半衰期为0.11 h，消除半衰期为2.25 h.两者峰浓度相当，但青龙贴的血浆总清除率为1.24 mg.h-1/μg.mL-1，明显慢于小青龙汤2.43 mg.h-1/μg.mL-1，由于青龙贴药量是青龙汤的两倍，所以青龙贴生物利用度(AUC)161.29(μg/mL).h是小青龙汤生物利用度(AUC)41.2(μg/mL).h的两倍.4 讨论
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a.药物的透皮吸收过程分为3个阶段：药物从基质中释放、药物穿透角质层屏障、药物通过表皮和真皮被血管吸收〔5〕.月桂氮酮和丙二醇单独应用促渗效果并不强，但两者合用，月桂氮酮可使丙二醇更多进入角质细胞，同时丙二醇又可延长月桂氮酮在角质层中的滞留时间，从而使渗透量大增〔6〕.由于中药复方精制后既有大量水溶性成分又有脂溶性成分，而月桂氮酮的脂溶性和丙二醇的水溶性几乎对所有药物透皮均有促进作用〔7〕.
b.从大鼠单次应用青龙汤和青龙贴的药时曲线上看，两者峰浓度相当.但青龙贴吸收慢、消除慢，并且生物利用度远高于青龙贴，此结果与临床应用结果相似，说明青龙贴药效持续平稳，可避免肝脏的首过效应，并可避免对胃肠道的刺激作用，使用方便，病人易于接受.
参考文献
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收稿日期:1998-10-10, 百拇医药