血液透析对尿毒症患者血小板粘附聚集功能及膜糖蛋白Ib的作用
作者：严海东 赵丽娟 项永迁 李祖卿
单位：中国医科大学第一附属医院肾内科(沈阳，110001)
关键词：血液透析；血小板功能；血小板膜糖蛋白Ib
肾脏病与透析肾移植杂志990412
尿毒症患者的出血倾向主要与血小板功能的障碍有关。血液透析能否改善患者的血小板功能尚有不同观点。本研究通过对尿毒症患者血液透析前后的血小板粘附率(AdhR)，血小板最大聚集(MA)功能以及膜糖蛋白Ib(GPIb)的观察来了解血液透析对尿毒症患者血小板功能的影响。
1 对象和方法
1.1 对象 维持性血透患者30例。男16例，女14例，平均34.9岁。每周透析10～12h，采用碳酸氢盐透析液、血仿膜中空纤维透析器。均为原发性肾小球疾病所致尿毒症。对照组为30例健康献血员。男13例，女17例，平均年龄39.1岁。
, 百拇医药
1.2 标本收集 所有受检者在两周前停用影响血小板功能的药物。尿毒症患者在透析前后抽取抗凝静脉血。对照组晨空腹以相同方法收集血标本。
1.3 试剂及测定方法
1.3.1 血小板AdhR测定[1] 取1.5ml枸橼酸钠抗凝血。计数血小板数目(PLT)后，吸取于玻球内，在37℃下以3 r/min速度在粘附仪上旋转15min，再计数血小板数(PLT′)。结果以AdhR表示。
1.3.2 血小板 MA 测定[2] 血液采集同前。将抗凝血0.5ml置于Chromo-Log 560型全血聚集仪(美国)中，加入诱导剂ADP(Sigma)9.09 ml/L，连续描记5～8min，取其最大值。结果以0hm表示。
, 百拇医药
1.3.3 血小板膜GPIb测定[3] 将ACD抗凝血以800 r/min之速度离心6～7min。抽取上层血浆为富含血小板血浆(PRP)。计数血小板数后加入等量4%多聚甲醛固定。置入4℃冰箱20h。离心弃上清，用A液将其配制成1×1011/L血小板悬液，取1ml加入10 mg/L SZ-2(抗血小板膜糖蛋白Ib单克隆抗体，苏州医学院)，于37℃下孵育40 min。离心弃上清，用A液配成1×1011/L悬液，再向管内加凝胶过柱后的900 mg/L F-RAMIgG(北京军事科学院)1 ml，在37℃下孵育40min，用PBS洗涤并配制成3.3×1011/L悬液，在λe495nm，λem517nm下检测其荧光强度。
2 结 果
, http://www.100md.com 2.1 血液透析前后的血小板AdhR、MA结果 见表1。2.2 血液透析前后的血小板膜GPIb测定结果 见表2。
表1 尿毒症组与对照组AdhR、MA(
±s)
对照组
(n＝30)
尿毒症组(n＝30)
血透前
血透后
AdhR(%)
20.9±5.5
10.7±6.5*
, http://www.100md.com
15.1±3.8
MA(Ohm)
13.3±3.9
5.0±2.2*
9.01±5.1＃
*与正常对照组相比，P<0.01。＃与尿毒症血透前相比，P<0.05表2 尿毒症组与对照组的GPIb(±s)
对照组
(n＝30)
尿毒症组(n＝30)
, 百拇医药
血透前
血透后
GPIb(1×104/PLT)
5.1±2.2
2.9±1.6*
4.3±1.8＃
*与正常对照组比较，P<0.01.＃与尿毒症血透前比较，P<0.01
3 讨 论
尿毒症患者出血的原因除了与血管内皮损伤、凝血因子的减少有关外，与血小板功能异常的关系更为密切。关于血液透析能否改善尿毒症患者的血小板功能问题，一直存在争论。
, http://www.100md.com
我们的实验结果是尿毒症患者的血小板AdhR、MA功能较对照组明显障碍。血透后均有不同程度的改善，其中 MA 的改善尤为显著。这符合多数报道[4，5]，亦有不同见解[6]。我们还观察了血小板膜GPIb的变化。血小板膜是由脂质和蛋白质组成，其中蛋白质则多为糖蛋白，按分子量大小分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五组，每组又以a、b、c命名不同的组分。近年已证实，血小板膜糖蛋白与血小板功能关系密切。其中GPIb是VWF(又称Ⅷ因子相关蛋白)的受体，在血小板粘附聚集过程中起着重要的桥梁作用。本实验中所见尿毒症组的AdhR、MA、GPIb值均显著降低，符合膜糖蛋白Ib与血小板粘附聚集功能之间正相关的生理规律。因此我们认为尿毒症患者血小板膜糖蛋白的异常，是血小板功能低下的原因和病理基础。而血透后上述指标均有改善，则说明尿毒症的这种血小板膜结构组成和功能的改变是获得性的，与血中毒性代谢产物的积聚有直接关系。
我们的研究结果提示，血液透析能部分改善尿毒症患者的血小板功能。
, http://www.100md.com
参考文献
1 陈兆乐，申玉章.改良玻球法-血小板粘附仪的探讨.全国血液病病理生理通讯，1985，2：6
2 Cardinl D.Flower RJ.The electronic aggregameter：a novel device for assessing platelet behavior in blood.J Pharm Meth，1980，3：135
3 宋 敏，李 进.用单克隆抗体SZ-2定量血小板膜糖蛋白I分子数.中华血液学杂志，1988，9(3)：177
4 Livio M，Benigni A，Remuzzi G et al.Coagulation abnormality in uremia.Semin Nephron，1985，5：82
5 Di Minno G，Martinez J，Mckean ML et al.Platelet dysfunction in uremia：Multifaceted defect partially corrected by dialysis.Am J Med，1985，79：552
6 张玉金、沈 迪、邹 荣等.血液透析对尿毒症患者血小板功能及膜糖蛋白的影响.中华肾脏病杂志，1997，13(4)：229
(1999-04-17收稿，1999-05-17修回), http://www.100md.com
单位：中国医科大学第一附属医院肾内科(沈阳，110001)
关键词：血液透析；血小板功能；血小板膜糖蛋白Ib
肾脏病与透析肾移植杂志990412
尿毒症患者的出血倾向主要与血小板功能的障碍有关。血液透析能否改善患者的血小板功能尚有不同观点。本研究通过对尿毒症患者血液透析前后的血小板粘附率(AdhR)，血小板最大聚集(MA)功能以及膜糖蛋白Ib(GPIb)的观察来了解血液透析对尿毒症患者血小板功能的影响。
1 对象和方法
1.1 对象 维持性血透患者30例。男16例，女14例，平均34.9岁。每周透析10～12h，采用碳酸氢盐透析液、血仿膜中空纤维透析器。均为原发性肾小球疾病所致尿毒症。对照组为30例健康献血员。男13例，女17例，平均年龄39.1岁。
, 百拇医药
1.2 标本收集 所有受检者在两周前停用影响血小板功能的药物。尿毒症患者在透析前后抽取抗凝静脉血。对照组晨空腹以相同方法收集血标本。
1.3 试剂及测定方法
1.3.1 血小板AdhR测定[1] 取1.5ml枸橼酸钠抗凝血。计数血小板数目(PLT)后，吸取于玻球内，在37℃下以3 r/min速度在粘附仪上旋转15min，再计数血小板数(PLT′)。结果以AdhR表示。
1.3.2 血小板 MA 测定[2] 血液采集同前。将抗凝血0.5ml置于Chromo-Log 560型全血聚集仪(美国)中，加入诱导剂ADP(Sigma)9.09 ml/L，连续描记5～8min，取其最大值。结果以0hm表示。
, 百拇医药
1.3.3 血小板膜GPIb测定[3] 将ACD抗凝血以800 r/min之速度离心6～7min。抽取上层血浆为富含血小板血浆(PRP)。计数血小板数后加入等量4%多聚甲醛固定。置入4℃冰箱20h。离心弃上清，用A液将其配制成1×1011/L血小板悬液，取1ml加入10 mg/L SZ-2(抗血小板膜糖蛋白Ib单克隆抗体，苏州医学院)，于37℃下孵育40 min。离心弃上清，用A液配成1×1011/L悬液，再向管内加凝胶过柱后的900 mg/L F-RAMIgG(北京军事科学院)1 ml，在37℃下孵育40min，用PBS洗涤并配制成3.3×1011/L悬液，在λe495nm，λem517nm下检测其荧光强度。
2 结 果
, http://www.100md.com 2.1 血液透析前后的血小板AdhR、MA结果 见表1。2.2 血液透析前后的血小板膜GPIb测定结果 见表2。
表1 尿毒症组与对照组AdhR、MA(
±s)对照组
(n＝30)
尿毒症组(n＝30)
血透前
血透后
AdhR(%)
20.9±5.5
10.7±6.5*
, http://www.100md.com
15.1±3.8
MA(Ohm)
13.3±3.9
5.0±2.2*
9.01±5.1＃
*与正常对照组相比，P<0.01。＃与尿毒症血透前相比，P<0.05表2 尿毒症组与对照组的GPIb(
±s)对照组
(n＝30)
尿毒症组(n＝30)
, 百拇医药
血透前
血透后
GPIb(1×104/PLT)
5.1±2.2
2.9±1.6*
4.3±1.8＃
*与正常对照组比较，P<0.01.＃与尿毒症血透前比较，P<0.01
3 讨 论
尿毒症患者出血的原因除了与血管内皮损伤、凝血因子的减少有关外，与血小板功能异常的关系更为密切。关于血液透析能否改善尿毒症患者的血小板功能问题，一直存在争论。
, http://www.100md.com
我们的实验结果是尿毒症患者的血小板AdhR、MA功能较对照组明显障碍。血透后均有不同程度的改善，其中 MA 的改善尤为显著。这符合多数报道[4，5]，亦有不同见解[6]。我们还观察了血小板膜GPIb的变化。血小板膜是由脂质和蛋白质组成，其中蛋白质则多为糖蛋白，按分子量大小分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五组，每组又以a、b、c命名不同的组分。近年已证实，血小板膜糖蛋白与血小板功能关系密切。其中GPIb是VWF(又称Ⅷ因子相关蛋白)的受体，在血小板粘附聚集过程中起着重要的桥梁作用。本实验中所见尿毒症组的AdhR、MA、GPIb值均显著降低，符合膜糖蛋白Ib与血小板粘附聚集功能之间正相关的生理规律。因此我们认为尿毒症患者血小板膜糖蛋白的异常，是血小板功能低下的原因和病理基础。而血透后上述指标均有改善，则说明尿毒症的这种血小板膜结构组成和功能的改变是获得性的，与血中毒性代谢产物的积聚有直接关系。
我们的研究结果提示，血液透析能部分改善尿毒症患者的血小板功能。
, http://www.100md.com
参考文献
1 陈兆乐，申玉章.改良玻球法-血小板粘附仪的探讨.全国血液病病理生理通讯，1985，2：6
2 Cardinl D.Flower RJ.The electronic aggregameter：a novel device for assessing platelet behavior in blood.J Pharm Meth，1980，3：135
3 宋 敏，李 进.用单克隆抗体SZ-2定量血小板膜糖蛋白I分子数.中华血液学杂志，1988，9(3)：177
4 Livio M，Benigni A，Remuzzi G et al.Coagulation abnormality in uremia.Semin Nephron，1985，5：82
5 Di Minno G，Martinez J，Mckean ML et al.Platelet dysfunction in uremia：Multifaceted defect partially corrected by dialysis.Am J Med，1985，79：552
6 张玉金、沈 迪、邹 荣等.血液透析对尿毒症患者血小板功能及膜糖蛋白的影响.中华肾脏病杂志，1997，13(4)：229
(1999-04-17收稿，1999-05-17修回), http://www.100md.com