细胞涂片免疫组织化学染色体会
作者：朱晓梅 鲍扬漪 何皖伟 彭丽娟 甄长庆
单位：朱晓梅 鲍扬漪 何皖伟 彭丽娟 甄长庆(合肥市第一人民医院肿瘤血液科 230061)
关键词：细胞涂片；细胞去除术；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990537
分类号 R446 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0469-01
细胞涂片免疫组织化学染色法，具有取材方便，易行，病人痛苦小，而用于临床。但常因内源性血浆蛋白以及红细胞干扰。使背景出现非特异性染色，不利于观察阳性结果〔1〕。作者采用淋巴细胞分离液处理标本后进行涂片，免疫组化染色可克服上述缺点并能取得比较满意的阳性结果，介绍如下。
1 方法
1.1 新鲜肝素抗凝胸、腹水(自然沉淀后)2 ml，或骨髓液2 ml加无Ca
-MgHank液(pH7.2～7.6)2 ml。
1.2 取淋巴细胞分离液2 ml于10 ml试管中。
1.3 将稀释的骨髓液或胸、腹水，轻轻铺在分离液表面，形成清淅液面，稀释液与分离液大约3∶2。
1.4 水平离心机2 000 r.min-1，10 min，此时液体分为3层，从上至下为血浆层，有核细胞层和红细胞层，单个核细胞悬于分离液面上，呈白膜状。
1.5 用毛细吸管轻轻插到单个核细胞层上，将细胞吸到管内并移到另一试管中，加2 ml无Ca-Mg Hank液800 r.min-1, 5 min，倾去上清液加20%小牛血清20 μl做细胞涂片。
1.6 冷风吹干，即用90%乙醇室温固定10 min，固定后的涂片即可染色，亦可用锡纸包裹置4℃冰箱内贮存备用。
1.7 Harris苏木精染色1～2 min，自来水中浸洗5 min，显微镜下观察在有癌细胞或最佳视野处划圈〔2〕。
1.8 采用免疫组织化学S-P法染色，按试剂盒操作说明进行。DAB显色。
2 结果
阳性部位明确，以胞浆，胞膜着色，呈褐色颗粒，细胞核呈淡蓝色，背景基本无色。未经淋巴细胞分离液处理的涂片，背景常出现非特异性染色大量的红细胞。
3 讨论
使用淋巴细胞分离液处理标本将瘤细胞与红细胞以及血浆蛋白分离开，这样达到去除红细胞和血浆蛋白的目的，减少背景着色。同时制备成细胞悬液，使成团的肿瘤细胞易分散，利于免疫组化染色和阳性细胞计数。
在使用S-P方法中，最好加入第一抗体后在4℃冰箱内过夜，适当的延长孵育时间染色效果较为理想，如能使用微波Envision免疫组化技术染色〔3〕，效果则更佳。
作者简介：朱晓梅，女，41岁，副主任医师
参考文献
1，纪小龙.诊断免疫组织化学.北京：军事医学科学出版社，1997
2，孟 刚.细胞涂片免疫组化染色的一点体会.临床与实验病理学杂志，1992；8(2)：152
3，马大烈，郑青前，李全华.微波Envision免疫组织化学技术及其应.中华病理学杂志，1998；27(4)：153
收稿日期：1999-03-28, http://www.100md.com
单位：朱晓梅 鲍扬漪 何皖伟 彭丽娟 甄长庆(合肥市第一人民医院肿瘤血液科 230061)
关键词：细胞涂片；细胞去除术；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990537
分类号 R446 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0469-01
细胞涂片免疫组织化学染色法，具有取材方便，易行，病人痛苦小，而用于临床。但常因内源性血浆蛋白以及红细胞干扰。使背景出现非特异性染色，不利于观察阳性结果〔1〕。作者采用淋巴细胞分离液处理标本后进行涂片，免疫组化染色可克服上述缺点并能取得比较满意的阳性结果，介绍如下。
1 方法
1.1 新鲜肝素抗凝胸、腹水(自然沉淀后)2 ml，或骨髓液2 ml加无Ca
-MgHank液(pH7.2～7.6)2 ml。1.2 取淋巴细胞分离液2 ml于10 ml试管中。
1.3 将稀释的骨髓液或胸、腹水，轻轻铺在分离液表面，形成清淅液面，稀释液与分离液大约3∶2。
1.4 水平离心机2 000 r.min-1，10 min，此时液体分为3层，从上至下为血浆层，有核细胞层和红细胞层，单个核细胞悬于分离液面上，呈白膜状。
1.5 用毛细吸管轻轻插到单个核细胞层上，将细胞吸到管内并移到另一试管中，加2 ml无Ca
-Mg Hank液800 r.min-1, 5 min，倾去上清液加20%小牛血清20 μl做细胞涂片。1.6 冷风吹干，即用90%乙醇室温固定10 min，固定后的涂片即可染色，亦可用锡纸包裹置4℃冰箱内贮存备用。
1.7 Harris苏木精染色1～2 min，自来水中浸洗5 min，显微镜下观察在有癌细胞或最佳视野处划圈〔2〕。
1.8 采用免疫组织化学S-P法染色，按试剂盒操作说明进行。DAB显色。
2 结果
阳性部位明确，以胞浆，胞膜着色，呈褐色颗粒，细胞核呈淡蓝色，背景基本无色。未经淋巴细胞分离液处理的涂片，背景常出现非特异性染色大量的红细胞。
3 讨论
使用淋巴细胞分离液处理标本将瘤细胞与红细胞以及血浆蛋白分离开，这样达到去除红细胞和血浆蛋白的目的，减少背景着色。同时制备成细胞悬液，使成团的肿瘤细胞易分散，利于免疫组化染色和阳性细胞计数。
在使用S-P方法中，最好加入第一抗体后在4℃冰箱内过夜，适当的延长孵育时间染色效果较为理想，如能使用微波Envision免疫组化技术染色〔3〕，效果则更佳。
作者简介：朱晓梅，女，41岁，副主任医师
参考文献
1，纪小龙.诊断免疫组织化学.北京：军事医学科学出版社，1997
2，孟 刚.细胞涂片免疫组化染色的一点体会.临床与实验病理学杂志，1992；8(2)：152
3，马大烈，郑青前，李全华.微波Envision免疫组织化学技术及其应.中华病理学杂志，1998；27(4)：153
收稿日期：1999-03-28, http://www.100md.com