严重烧伤后肠道细菌移位于痂下水肿液的实验研究
作者：荣新洲 陈惠英 肖光夏 李志清 张雅萍 周一平
单位：荣新洲 陈惠英 李志清 周一平 第一军医大学南方医院烧伤科，广州，510515；肖光夏 张雅萍 第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆，400038
关键词：严重烧伤；细菌移位；痂下水肿液
第一军医大学学报990503 摘要：目的 证实严重烧伤后肠道细菌能移位至痂下水肿液的推想。方法 采用Wistar大鼠40只，分为实验组(30只)和对照组(10只)，实验组大鼠造成30%TBSA度烫伤模型，胃肠道导入产灵菌红素的粘质沙雷氏菌作为示踪菌，对照组与实验组采用同一烧伤模型，而胃肠道导入生理盐水。在严格防止外界污染的条件下，对其痂下水肿液作细菌普通和定量培养。结果 实验组30只大鼠中15只的痂下水肿液出现示踪菌，而最早出现的时间为伤后12 h，24 h示踪菌量达到1.67×109 cfu/L，对照组中无阳性发现。结论 严重烧伤早期肠道细菌可移位于痂下水肿液，而且在较短的时间内能达到对生命造成威胁的数量。
, http://www.100md.com
中图分类号：R644
An experimental study on bacterial translocation of subeschar edema fluid from gut following severe burns
Rong Xinzhou1, Chen Huiying1, Xiao Guangxia2, Li Zhiqing1, Zhang Yaping2, Zhou Yiping1
1Department of Burns, Nangfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515; 2Institute of Burns Research, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400038
, 百拇医药
Abstract: Objective To verify whether the gut flora translocate into the subeschar edema fluid (SEF) following severe burns. Methods Forty Wistar rats were divided into two groups: experimental group (30 rats) and control group (10 rats). A model of 30% TBSA full thickness scald was created on the back of rats in the two groups simultaneously. Serratia marcescens were introduced in the gastrointestinal tract in the experimental group, and normal saline in control group. The samples of SEF collected by puncture and suction with syringe were sent for ordinary and quantitative bacterial culture. Results The tracing bacteria appeared in the SEF sample of 15 in the 30 rats, and the earliest bacterial translocation occurred 12 h after burns. Translocated bacteria counted for 1.67×109 cfu/L at 24 h. No positive finding was detected in the control group. Conclusion Intraintestinal microbes could translocate into the SEF and reach up to the number which threatens the life of patients following severe burns.
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Key words: severe burn; bacterial translocation; subeschar edema fluid
烧伤痂下水肿液的毒性研究不断见有报道。其毒性因子有中分子物质、肿瘤坏死因子和细菌因子IL-1、IL-6等，而且还发现水肿液内有较高水平的内毒素，甚至发现细菌生长[1～4]。最近，我们在痂下水肿液中检出的细菌以G- 杆菌为主，70%与创面培养结果一致，有30%与创面结果不一致，因而我们推测这与内源性感染特别是肠源性感染有关[5]。严重烧伤后肠源性感染的概念已为临床医师所广泛接受[6]。烧伤后肠道细菌移位至痂下水肿液中，由于两处均有相对隐匿之特点，一旦发生，会对患者构成生命威胁，故探讨这一问题具有重要的临床意义。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 动物模型与分组 本实验采用Wistar 大鼠40只，体质量(200±20)g，制成30% TBSA °背部烫伤，创面以磺胺嘧啶银(SD-Ag)涂抹。然后将动物随机分成两组：(1)实验组即烫伤肠道给细菌组，旨在验证严重烧伤后肠道示踪细菌能否到达痂下水肿液。(2)对照组即烫伤肠道给生理盐水组，为了验证有无接触性污染的可能。两组动物混笼喂养，实验组动物头顶部以黄色标记。
1.2 示踪菌及制备 选用粘质沙雷氏菌(产灵菌红素，四川医学检验中心提供)，制成浓度为1012 cfu/L的菌悬液，4℃保存，备用。
1.3 给菌方法 动物单纯奶粉液喂养12 h后，禁食12 h，以硅胶管胃饲1.5% NaHCO3，剂量0.5 ml/100 g b.w.；1 min后再饲示踪菌，剂量1 ml/100 g b.w.。
1.4 取材与检测 以1 ml一次性注射器抽吸创周痂下水肿液，0.5～0.7 ml/次，送作普通细菌培养和细菌定量培养，其细菌阳性结果以玫瑰红色菌落为准。取材的规定为伤后6、12、24、48、72 h。
, http://www.100md.com
1.5 对外界污染的监控 空气用紫外线照射，1次/d，1 h/次，实验室地面以5%来苏尔溶液拖洗，每日一次。每日行空气粉尘和喂养笼壁棉拭子细菌培养。
2 结果
2.1 对环境的细菌监控 动物受伤48 h以内未检出空气粉尘和喂养笼壁棉拭子示踪菌阳性生长。
2.2 痂下水肿液中示踪菌普通培养结果 实验组30只大鼠中2只于伤后12 h被检出示踪菌阳性生长，24 h则有9只，到48 h已达到半数的阳性率，而对照组各时相点均无示踪菌被检出(见表1)。
表1 痂下水肿液中示踪菌检出率(%)
Tab.1 The positive rate of tracing-bacteria in SEF(%)
, 百拇医药
Group
n
Post burn (h)
6
12
24
48
72
Experi.
30
0
6.7
30
, http://www.100md.com
50*
50*
Control
10
0
0
0
0
0
* P<0.05 vs the control group
2.3 痂下水肿液中示踪菌定量培养结果 实验组中的痂下水肿液伤后12 h示踪菌数量最高可达3.3×107 cfu/L，24 h可达1.67×109 cfu/L(表2)。
, http://www.100md.com
表2 各时相点中痂下水肿液示踪菌的最高菌量(cfu/L)
Tab.2 The most amounts of tracing bacteria of SEF in different phase (cfu/L)
Group
n
Post burn (h)
6
12
24
48
72
, 百拇医药
Experi.
30
<106
3.3×107
1.67×109
1.8×109
>1011
Control
10
<106
<106
, http://www.100md.com
<106
<106
<106
3 讨论
严重烧伤后，全身性的微血管的病理生理改变使大量的体液在第三间隙异常贮留，创面深部至深筋膜浅层的体液即所谓的痂下水肿液聚集尤为突出。动物实验表明，SEF中常有细菌生长，并表现出明显的内毒素血症。SEF中细菌来源主要与创面感染有关[4]。临床调查结果显示，约有1/3痂下水肿液标本细菌培养阳性，菌种大多与创面培养结果一致。少数结果不一致，说明另存其它感染途径[5]。
本实验采用大鼠严重烧伤模型(30% TBSA Ⅲo烫伤)，并以产灵菌红素的粘质沙雷氏菌作为示踪菌，旨在揭示肠道活性菌能否到达痂下水肿液中并且生存、繁殖。粘质沙雷氏(产灵菌红素)菌为自我菌落显色(玫瑰红)，不需要外加标记物，作为示踪菌其活性不受影响，平皿培养时很容易识别。实验组大鼠创面外用了SD-Ag，而且对外界环境的细菌作了严格监控，为了排除大鼠背部创面接触性污染，我们特地设置了烧伤对照组。结果显示，30% TBSA Ⅲ°烫伤大鼠肠道导入示踪菌，伤后12 h可见痂下水肿液中示踪菌生长(2/30)。48 h有半数大鼠的SEF示踪菌培养阳性，说明肠道菌群于伤后早期即可移位至痂下水肿液，2 d内其发生率达到最高峰。同笼喂养观察的对照组大鼠痂下水肿液无示踪菌生长，说明防护监控措施是有效的。实验结果还显示，肠道菌在痂下水肿液中定植，24 h即能繁殖到威胁生命的菌量(1.67×109 cfu/L)，因为烧伤创面脓毒症发生时，其痂下组织菌量的临界值为108 cfu/kg，反言之，超过这一临界菌量，就可能导致严重后果。上述现象一方面提示可能短时间内有大量示踪菌的移位，另一方面表明痂下水肿液可能特别适合细菌的生长。表2中少于106 cfu/L是一种无菌生长的表示，因为凡细菌少于106 cfu/L时，用该定量方法无法检测到。
, 百拇医药
烧伤创面的感染问题一直为人们所重视，也容易被发现和处理。肠道细菌移位则具有一定的隐蔽性。痂下水肿液具有大量、深在的特点，若发生肠源性细菌感染，其危险程度当然可想而知了。本研究结果提示，伤后早期合理使用广谱高效抗生素，是提高大面积严重烧伤患者救治成功率的关键措施之一。
注：军队九五医药卫生攻关项目
作者简介：荣新洲，男，1962年出生；1991年毕业于第三军医大学；博士，副教授，副主任医师，硕士生导师；电话85141852
参考文献
1 Ferrara JJ, Dyess DL, Luterman A et al. Transportation of immunosuppressive substance produced at the site of burn injury into the systemic circulation: The role of lymphatics. J Burn Care Rehabil, 1990, 11:281
, 百拇医药
2 李志清，周一平，荣新洲等. 豚鼠烧伤后痂下水肿液和血浆TNF、IL-6和IL-8的变化. 中华整形烧伤外科杂志, 1999, 15(2)：158
3 周一平. 烧伤痂下水肿液成分分析. 中华整形烧伤外科杂志, 1988, 9：584
4 杨 磊，周一平. 烫伤豚鼠早期痂下水肿液内毒素水平的研究. 中华整形烧伤外科杂志, 1997, 13(6)：421
5 荣新洲，周一平，吴永恒等. 烧伤患者痂下水肿液感染源的初步分析. 第一军医大学学报, 1999, 19(3)：245
6 Deitch EA, Xu DZ, Qi L et al. Bacterial translocation from the gut impair systemic immunity. Surgery, 1991, 109(3 pt 1):269
(收稿日期：1998-12-22), 百拇医药
单位：荣新洲 陈惠英 李志清 周一平 第一军医大学南方医院烧伤科，广州，510515；肖光夏 张雅萍 第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆，400038
关键词：严重烧伤；细菌移位；痂下水肿液
第一军医大学学报990503 摘要：目的 证实严重烧伤后肠道细菌能移位至痂下水肿液的推想。方法 采用Wistar大鼠40只，分为实验组(30只)和对照组(10只)，实验组大鼠造成30%TBSA度烫伤模型，胃肠道导入产灵菌红素的粘质沙雷氏菌作为示踪菌，对照组与实验组采用同一烧伤模型，而胃肠道导入生理盐水。在严格防止外界污染的条件下，对其痂下水肿液作细菌普通和定量培养。结果 实验组30只大鼠中15只的痂下水肿液出现示踪菌，而最早出现的时间为伤后12 h，24 h示踪菌量达到1.67×109 cfu/L，对照组中无阳性发现。结论 严重烧伤早期肠道细菌可移位于痂下水肿液，而且在较短的时间内能达到对生命造成威胁的数量。
, http://www.100md.com
中图分类号：R644
An experimental study on bacterial translocation of subeschar edema fluid from gut following severe burns
Rong Xinzhou1, Chen Huiying1, Xiao Guangxia2, Li Zhiqing1, Zhang Yaping2, Zhou Yiping1
1Department of Burns, Nangfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515; 2Institute of Burns Research, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400038
, 百拇医药
Abstract: Objective To verify whether the gut flora translocate into the subeschar edema fluid (SEF) following severe burns. Methods Forty Wistar rats were divided into two groups: experimental group (30 rats) and control group (10 rats). A model of 30% TBSA full thickness scald was created on the back of rats in the two groups simultaneously. Serratia marcescens were introduced in the gastrointestinal tract in the experimental group, and normal saline in control group. The samples of SEF collected by puncture and suction with syringe were sent for ordinary and quantitative bacterial culture. Results The tracing bacteria appeared in the SEF sample of 15 in the 30 rats, and the earliest bacterial translocation occurred 12 h after burns. Translocated bacteria counted for 1.67×109 cfu/L at 24 h. No positive finding was detected in the control group. Conclusion Intraintestinal microbes could translocate into the SEF and reach up to the number which threatens the life of patients following severe burns.
, http://www.100md.com
Key words: severe burn; bacterial translocation; subeschar edema fluid
烧伤痂下水肿液的毒性研究不断见有报道。其毒性因子有中分子物质、肿瘤坏死因子和细菌因子IL-1、IL-6等，而且还发现水肿液内有较高水平的内毒素，甚至发现细菌生长[1～4]。最近，我们在痂下水肿液中检出的细菌以G- 杆菌为主，70%与创面培养结果一致，有30%与创面结果不一致，因而我们推测这与内源性感染特别是肠源性感染有关[5]。严重烧伤后肠源性感染的概念已为临床医师所广泛接受[6]。烧伤后肠道细菌移位至痂下水肿液中，由于两处均有相对隐匿之特点，一旦发生，会对患者构成生命威胁，故探讨这一问题具有重要的临床意义。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 动物模型与分组 本实验采用Wistar 大鼠40只，体质量(200±20)g，制成30% TBSA °背部烫伤，创面以磺胺嘧啶银(SD-Ag)涂抹。然后将动物随机分成两组：(1)实验组即烫伤肠道给细菌组，旨在验证严重烧伤后肠道示踪细菌能否到达痂下水肿液。(2)对照组即烫伤肠道给生理盐水组，为了验证有无接触性污染的可能。两组动物混笼喂养，实验组动物头顶部以黄色标记。
1.2 示踪菌及制备 选用粘质沙雷氏菌(产灵菌红素，四川医学检验中心提供)，制成浓度为1012 cfu/L的菌悬液，4℃保存，备用。
1.3 给菌方法 动物单纯奶粉液喂养12 h后，禁食12 h，以硅胶管胃饲1.5% NaHCO3，剂量0.5 ml/100 g b.w.；1 min后再饲示踪菌，剂量1 ml/100 g b.w.。
1.4 取材与检测 以1 ml一次性注射器抽吸创周痂下水肿液，0.5～0.7 ml/次，送作普通细菌培养和细菌定量培养，其细菌阳性结果以玫瑰红色菌落为准。取材的规定为伤后6、12、24、48、72 h。
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1.5 对外界污染的监控 空气用紫外线照射，1次/d，1 h/次，实验室地面以5%来苏尔溶液拖洗，每日一次。每日行空气粉尘和喂养笼壁棉拭子细菌培养。
2 结果
2.1 对环境的细菌监控 动物受伤48 h以内未检出空气粉尘和喂养笼壁棉拭子示踪菌阳性生长。
2.2 痂下水肿液中示踪菌普通培养结果 实验组30只大鼠中2只于伤后12 h被检出示踪菌阳性生长，24 h则有9只，到48 h已达到半数的阳性率，而对照组各时相点均无示踪菌被检出(见表1)。
表1 痂下水肿液中示踪菌检出率(%)
Tab.1 The positive rate of tracing-bacteria in SEF(%)
, 百拇医药
Group
n
Post burn (h)
6
12
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Experi.
30
0
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Control
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* P<0.05 vs the control group
2.3 痂下水肿液中示踪菌定量培养结果 实验组中的痂下水肿液伤后12 h示踪菌数量最高可达3.3×107 cfu/L，24 h可达1.67×109 cfu/L(表2)。
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表2 各时相点中痂下水肿液示踪菌的最高菌量(cfu/L)
Tab.2 The most amounts of tracing bacteria of SEF in different phase (cfu/L)
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Post burn (h)
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Experi.
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3.3×107
1.67×109
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3 讨论
严重烧伤后，全身性的微血管的病理生理改变使大量的体液在第三间隙异常贮留，创面深部至深筋膜浅层的体液即所谓的痂下水肿液聚集尤为突出。动物实验表明，SEF中常有细菌生长，并表现出明显的内毒素血症。SEF中细菌来源主要与创面感染有关[4]。临床调查结果显示，约有1/3痂下水肿液标本细菌培养阳性，菌种大多与创面培养结果一致。少数结果不一致，说明另存其它感染途径[5]。
本实验采用大鼠严重烧伤模型(30% TBSA Ⅲo烫伤)，并以产灵菌红素的粘质沙雷氏菌作为示踪菌，旨在揭示肠道活性菌能否到达痂下水肿液中并且生存、繁殖。粘质沙雷氏(产灵菌红素)菌为自我菌落显色(玫瑰红)，不需要外加标记物，作为示踪菌其活性不受影响，平皿培养时很容易识别。实验组大鼠创面外用了SD-Ag，而且对外界环境的细菌作了严格监控，为了排除大鼠背部创面接触性污染，我们特地设置了烧伤对照组。结果显示，30% TBSA Ⅲ°烫伤大鼠肠道导入示踪菌，伤后12 h可见痂下水肿液中示踪菌生长(2/30)。48 h有半数大鼠的SEF示踪菌培养阳性，说明肠道菌群于伤后早期即可移位至痂下水肿液，2 d内其发生率达到最高峰。同笼喂养观察的对照组大鼠痂下水肿液无示踪菌生长，说明防护监控措施是有效的。实验结果还显示，肠道菌在痂下水肿液中定植，24 h即能繁殖到威胁生命的菌量(1.67×109 cfu/L)，因为烧伤创面脓毒症发生时，其痂下组织菌量的临界值为108 cfu/kg，反言之，超过这一临界菌量，就可能导致严重后果。上述现象一方面提示可能短时间内有大量示踪菌的移位，另一方面表明痂下水肿液可能特别适合细菌的生长。表2中少于106 cfu/L是一种无菌生长的表示，因为凡细菌少于106 cfu/L时，用该定量方法无法检测到。
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烧伤创面的感染问题一直为人们所重视，也容易被发现和处理。肠道细菌移位则具有一定的隐蔽性。痂下水肿液具有大量、深在的特点，若发生肠源性细菌感染，其危险程度当然可想而知了。本研究结果提示，伤后早期合理使用广谱高效抗生素，是提高大面积严重烧伤患者救治成功率的关键措施之一。
注：军队九五医药卫生攻关项目
作者简介：荣新洲，男，1962年出生；1991年毕业于第三军医大学；博士，副教授，副主任医师，硕士生导师；电话85141852
参考文献
1 Ferrara JJ, Dyess DL, Luterman A et al. Transportation of immunosuppressive substance produced at the site of burn injury into the systemic circulation: The role of lymphatics. J Burn Care Rehabil, 1990, 11:281
, 百拇医药
2 李志清，周一平，荣新洲等. 豚鼠烧伤后痂下水肿液和血浆TNF、IL-6和IL-8的变化. 中华整形烧伤外科杂志, 1999, 15(2)：158
3 周一平. 烧伤痂下水肿液成分分析. 中华整形烧伤外科杂志, 1988, 9：584
4 杨 磊，周一平. 烫伤豚鼠早期痂下水肿液内毒素水平的研究. 中华整形烧伤外科杂志, 1997, 13(6)：421
5 荣新洲，周一平，吴永恒等. 烧伤患者痂下水肿液感染源的初步分析. 第一军医大学学报, 1999, 19(3)：245
6 Deitch EA, Xu DZ, Qi L et al. Bacterial translocation from the gut impair systemic immunity. Surgery, 1991, 109(3 pt 1):269
(收稿日期：1998-12-22), 百拇医药