重度妊娠高血压综合征的子宫、胎盘血管病变的观察
作者：马鸿达 韩吉 王欣 尹利荣 赵天如 张乃鑫
单位：300070 天津医科大学病理学教研室(马鸿达、王欣、赵天如、张乃鑫)，第二医院产科(韩吉、尹利荣)
关键词：
中国医科990517 摘要 目的：调查原因不明性肝炎的TTV感染状况。方法：设计TTV基因的特异性引物，应用PCR反应检测48例原因不明性肝炎血清中的TTV DNA。结果：48例原因不明性肝炎中13例TTV DNA阳性(27.1%)，其中急性肝炎9例，慢性肝炎3例，亚急性重型肝炎1例。结论：TTV感染是原因不明性肝炎的致病因子，TTV感染能引起急性、慢性以及重型肝炎。
Detection of TTV Infection and Clinical Investigation in Patientswith Hepatitis of Unknown Etiology
, 百拇医药
Shu Bo, Dou Xiaoguang, Liu Pei, et al
Department of Infectious Diseases, The Second Clinical College, China Medical Unviersity, Shenyang, 110003
ABSTRACT Objective: We investigated investigate the presence of TTV infection among patients with hepatitis of unknown etiology. Methods: Forty-eight serum samples from patients with hepatitis of unknown etiology were detected for TTV DNA by PCR methods. Results: The positive rate of TTV DNA accounted for 27.1% (13/48) in patients with hepatitis of unknown etiology. Among 13 patients with TTV DNA positive response, 7 were acute hepatitis, 5 were chronic hepatitis and 1 was subfulminant hepatitis. Conclusion: TTV infection could be associated with occurence of hepatitis, and could result in acute, chronic and fulminant hepatitis.
, 百拇医药
KEY WORDS TTV infection; PCR; hepatitis of unknown etiology
继1995年发现庚型肝炎病毒(HGV)[1]后，1997年12月日本学者Nishizawa等[2]应用代表性差异分析法(RDA)发现了一种可能与输血后肝炎相关的致病因子，暂称为输血传播病毒(TTV)。我们应用PCR反应检测了本地区48例原因不明性肝炎血清中的TTV DNA。
1 材料与方法
1.1 检测对象 病例选自1995年～1998年6月中国医科大学第二临床学院收治的48例原因不明性肝炎，其中男40例，女8例，平均年龄(30.3±7.1)岁。全部病例甲、乙、丙、丁、戍和庚型肝炎病毒以及EBV、CMV均为阴性，全部病例均符合1995年全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订的诊断标准。
, http://www.100md.com
1.2 引物合成和主要试剂 根据Okamoto[3]等报道的TTV DNA序列，在ORF1保守区设计了3个引物，委托北京军事医学科学院生物工程研究所合成，引物序列如下：P1：5′-GCAGCAGCATATGGA-TATGT-3′；P2：5′-TGACTGTGCTAAAGCCTC-TA-3′；P3：5′-CATACACATGAATGCCAGGC-3′。P1、P2为外引物，P3为内引物，其反义引物仍用P2不变，扩增产物长度217 bp。
Taq DNA聚合酶购自华美公司，dNTPs和Φ174 Marker购自Promega公司。
1.3 TTV DNA的检测
采用蛋白酶K法提取血清中DNA：取50 μl血清，加裂解液25 μl，95℃，15 min变性后，离心15 000 r/min，15 min，取上清进行PCR检测。
, 百拇医药
第1次PCR体系：加提取的DNA上清10 μl,引物P1和P2各20 pmol/L，0.2 mmol/L dNTPs 3 μl，Taq酶2 u，10×PCR缓冲液3 μl，反应体积30 μl，依94℃、40 s，56℃、35 s，72℃、45 s顺序进行35个循环，最后72℃延伸7 min。
第2次PCR体系：加第1次PCR产物5 μl，以引物P3和P2进行第2次PCR扩增，具体条件同第1次PCR扩增。
聚丙烯酰胺凝胶电泳：每份第2次PCR扩增样品10 μl与DNA上样缓冲液2 μl混合，迅速上样于凝胶梳齿之间，电压70 V，电泳3 h，胶条经溴乙锭染色，紫外线灯下观察，出现217 bp DNA扩增带，判为TTV阳性。
2 结果
, 百拇医药 聚丙烯酰胺电泳结果，见图1。48例原因不明性肝炎血清中13例TTV DNA阳性(27.1%)，其中男10例，女3例。平均年龄(35.2±3.1)岁；13例中急性肝炎9例，慢性肝炎3例，亚急性重型肝炎1例；12例病人ALT高于正常值3倍以上，3例总胆红素异常增高；3例有明确输血史。
图1 聚丙烯酰胺电泳结果
1、2、3、5、6为TTV DNA阳性标本；4为阴性对照；7为HBV DNA阳性标本；左为Maker
3 讨论
继甲、乙、丙、丁和戍型肝炎病毒被发现后，仍有10%左右的肝炎病例原因不明，而新近研究发现1995年发现的HGV[1]也不是非甲至非戍型肝炎的主要致病因素，临床资料及流行病学研究提示可能还存在尚未发现的在甲型至庚型肝炎病毒以外的其它致病因子，1997年12月Nishizawa等[2]发现TTV可能与输血后肝炎及ALT异常均相关。
, http://www.100md.com
TTV为单股DNA病毒，基因全长3739 bp，目前尚未确定TTV属于DNA病毒中的哪一种，有迹象表明，TTV具有微小病毒DNA的某些特征[3]。
Okamoto[3]等检测了90例非甲至非庚型慢性肝病，28例血友病和35例静脉注射毒品成瘾者的血清，其TTV DNA阳性例分别为41(46%)，19(68%)和14(46%)，均高于献血员的阳性率12%。
我们对48例原因不明性肝炎的检测发现，27.1%的原因不明性肝炎TTV DNA阳性，表明TTV是本地区部分原因不明性肝炎的致病因子。TTV DNA阳性病例中既有急性肝炎和慢性肝炎，又有亚急性重型肝炎，表明TTV感染能引起急性、慢性和重型肝炎。
TTV属于经输血传播病毒，但我们检测的13例TTV DNA阳性病例中仅3例有明确输血史，有关TTV的感染途径有待于进一步研究。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Linnen J, Wages J, Zhang-keck ZY, et al. Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: a transfusion-transmissible agent. Science, 1996,271:505—508
2 Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, et al. A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophys Res Commun, 1997,24(1):92—97
3 Okamoto H, Nishizawa T, Kato N, et al. Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus (TTV) associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Hepatology Research, 1998,10:1—16
1998-09-07收稿, http://www.100md.com
单位：300070 天津医科大学病理学教研室(马鸿达、王欣、赵天如、张乃鑫)，第二医院产科(韩吉、尹利荣)
关键词：
中国医科990517 摘要 目的：调查原因不明性肝炎的TTV感染状况。方法：设计TTV基因的特异性引物，应用PCR反应检测48例原因不明性肝炎血清中的TTV DNA。结果：48例原因不明性肝炎中13例TTV DNA阳性(27.1%)，其中急性肝炎9例，慢性肝炎3例，亚急性重型肝炎1例。结论：TTV感染是原因不明性肝炎的致病因子，TTV感染能引起急性、慢性以及重型肝炎。
Detection of TTV Infection and Clinical Investigation in Patientswith Hepatitis of Unknown Etiology
, 百拇医药
Shu Bo, Dou Xiaoguang, Liu Pei, et al
Department of Infectious Diseases, The Second Clinical College, China Medical Unviersity, Shenyang, 110003
ABSTRACT Objective: We investigated investigate the presence of TTV infection among patients with hepatitis of unknown etiology. Methods: Forty-eight serum samples from patients with hepatitis of unknown etiology were detected for TTV DNA by PCR methods. Results: The positive rate of TTV DNA accounted for 27.1% (13/48) in patients with hepatitis of unknown etiology. Among 13 patients with TTV DNA positive response, 7 were acute hepatitis, 5 were chronic hepatitis and 1 was subfulminant hepatitis. Conclusion: TTV infection could be associated with occurence of hepatitis, and could result in acute, chronic and fulminant hepatitis.
, 百拇医药
KEY WORDS TTV infection; PCR; hepatitis of unknown etiology
继1995年发现庚型肝炎病毒(HGV)[1]后，1997年12月日本学者Nishizawa等[2]应用代表性差异分析法(RDA)发现了一种可能与输血后肝炎相关的致病因子，暂称为输血传播病毒(TTV)。我们应用PCR反应检测了本地区48例原因不明性肝炎血清中的TTV DNA。
1 材料与方法
1.1 检测对象 病例选自1995年～1998年6月中国医科大学第二临床学院收治的48例原因不明性肝炎，其中男40例，女8例，平均年龄(30.3±7.1)岁。全部病例甲、乙、丙、丁、戍和庚型肝炎病毒以及EBV、CMV均为阴性，全部病例均符合1995年全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订的诊断标准。
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1.2 引物合成和主要试剂 根据Okamoto[3]等报道的TTV DNA序列，在ORF1保守区设计了3个引物，委托北京军事医学科学院生物工程研究所合成，引物序列如下：P1：5′-GCAGCAGCATATGGA-TATGT-3′；P2：5′-TGACTGTGCTAAAGCCTC-TA-3′；P3：5′-CATACACATGAATGCCAGGC-3′。P1、P2为外引物，P3为内引物，其反义引物仍用P2不变，扩增产物长度217 bp。
Taq DNA聚合酶购自华美公司，dNTPs和Φ174 Marker购自Promega公司。
1.3 TTV DNA的检测
采用蛋白酶K法提取血清中DNA：取50 μl血清，加裂解液25 μl，95℃，15 min变性后，离心15 000 r/min，15 min，取上清进行PCR检测。
, 百拇医药
第1次PCR体系：加提取的DNA上清10 μl,引物P1和P2各20 pmol/L，0.2 mmol/L dNTPs 3 μl，Taq酶2 u，10×PCR缓冲液3 μl，反应体积30 μl，依94℃、40 s，56℃、35 s，72℃、45 s顺序进行35个循环，最后72℃延伸7 min。
第2次PCR体系：加第1次PCR产物5 μl，以引物P3和P2进行第2次PCR扩增，具体条件同第1次PCR扩增。
聚丙烯酰胺凝胶电泳：每份第2次PCR扩增样品10 μl与DNA上样缓冲液2 μl混合，迅速上样于凝胶梳齿之间，电压70 V，电泳3 h，胶条经溴乙锭染色，紫外线灯下观察，出现217 bp DNA扩增带，判为TTV阳性。
2 结果
, 百拇医药 聚丙烯酰胺电泳结果，见图1。48例原因不明性肝炎血清中13例TTV DNA阳性(27.1%)，其中男10例，女3例。平均年龄(35.2±3.1)岁；13例中急性肝炎9例，慢性肝炎3例，亚急性重型肝炎1例；12例病人ALT高于正常值3倍以上，3例总胆红素异常增高；3例有明确输血史。
图1 聚丙烯酰胺电泳结果
1、2、3、5、6为TTV DNA阳性标本；4为阴性对照；7为HBV DNA阳性标本；左为Maker
3 讨论
继甲、乙、丙、丁和戍型肝炎病毒被发现后，仍有10%左右的肝炎病例原因不明，而新近研究发现1995年发现的HGV[1]也不是非甲至非戍型肝炎的主要致病因素，临床资料及流行病学研究提示可能还存在尚未发现的在甲型至庚型肝炎病毒以外的其它致病因子，1997年12月Nishizawa等[2]发现TTV可能与输血后肝炎及ALT异常均相关。
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TTV为单股DNA病毒，基因全长3739 bp，目前尚未确定TTV属于DNA病毒中的哪一种，有迹象表明，TTV具有微小病毒DNA的某些特征[3]。
Okamoto[3]等检测了90例非甲至非庚型慢性肝病，28例血友病和35例静脉注射毒品成瘾者的血清，其TTV DNA阳性例分别为41(46%)，19(68%)和14(46%)，均高于献血员的阳性率12%。
我们对48例原因不明性肝炎的检测发现，27.1%的原因不明性肝炎TTV DNA阳性，表明TTV是本地区部分原因不明性肝炎的致病因子。TTV DNA阳性病例中既有急性肝炎和慢性肝炎，又有亚急性重型肝炎，表明TTV感染能引起急性、慢性和重型肝炎。
TTV属于经输血传播病毒，但我们检测的13例TTV DNA阳性病例中仅3例有明确输血史，有关TTV的感染途径有待于进一步研究。
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参考文献
1 Linnen J, Wages J, Zhang-keck ZY, et al. Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: a transfusion-transmissible agent. Science, 1996,271:505—508
2 Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, et al. A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophys Res Commun, 1997,24(1):92—97
3 Okamoto H, Nishizawa T, Kato N, et al. Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus (TTV) associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Hepatology Research, 1998,10:1—16
1998-09-07收稿, http://www.100md.com