bcl-2、bax和c-myc基因在前列腺增生症中表达的意义
作者：蔡文清 凌亦凌 张勇 黎伟 王东彬 左连富
单位：河北医科大学第二医院泌尿外科石家庄050000；凌亦凌：河北医科大学病理生理学教研室；左连富：河北省肿瘤研究所
关键词：前列腺肥大；基因；基因表达，基因，myc
河北医科大学学报990521 中图号 R697+.3
良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)是老年男性常见病,随年龄增长发病率不断增加,但其真正的发病机制至今尚不清楚。1972年McNeal将前列腺的功能、病理变化与形态学联系起来,将其分为周边区(peripheral zone,PZ),移行区(transitional zone,TZ)和中央区(central zone,CZ)。并提出周边区为前列腺癌最常发生的区域,而移行区则是前列腺增症发生的唯一部位。经多年的研究,这一结论已得到多数学者的认可。本研究通过对BPH 3个区的bcl-2、bax和c-myc基因表达分别进行检测,探讨bcl-2、bax和c-myc基因表达在BPH发病中的意义。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料:33例前列腺增生症的88份标本均取自经膀胱前列腺摘除术的患者,全部患者术后光镜病理证实为BPH,年龄58～83岁,平均66.4岁。取出前列腺后立即按McNeal解剖分区取材,分别用70 %酒精固定,4 ℃冰箱保存。
1.2 单细胞样品制备:将70 %酒精固定的标本用生理盐水冲洗后,用搓网法制备单细胞样品,置0～4 ℃冰箱备检。
1.3 试剂:①bcl-2,克隆100,鼠抗人单抗,效价1∶100,No sc-509;②bax,bax(N-20),鼠抗人单抗,效价1∶100,No sc-493;③c-myc,9E10,鼠抗人单抗,效价1∶100;④羊抗鼠(二抗)FITC-IgG批号JF-0309和羊抗兔(二抗)FITC-IgG批号ZF-0308。以上各种试剂均由美国Santa Cruz Biotechnology公司生产。
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1.4 流式细胞免疫荧光检测的样品制备:采用间接免疫荧光标记法,取1×106/ml细胞,用PBS液洗涤2次,每次2 min,1 000 r/min离心去上清液,加入1∶100的鼠抗人单抗,在37 ℃水浴中温育30 min,用PBS离心洗涤2次,弃上清,加入1∶100稀释的羊抗鼠(或羊抗兔)FITC-IgG 100 μl,37 ℃温育30 min,离心洗涤2次,弃上清,除去未结合的多余荧光抗体,上机检测前加入1.0 ml PBS液,经400目筛网过滤,即上机分析。同时设有①PBS代替一抗的阴性对照;②只加一抗的阳性对照;③只加1∶100 FITC-IgG(二抗)的阳性对照;④用小鼠血清或兔血清的同型对照。
1.5 方法:应用FACS-420型流式细胞仪(美国BD公司)对3区的bcl-2、bax及c-myc的标记率和表达量进行检测。数据和图像送入HP-300Consort 30计算机,应用相应的程序软件分别进行资料处理。测定前以鸡红细胞作为标准样品调整仪器的CV值在5 %以内。
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1.6 数据处理:所得数据标记率的中位值(%)和单细胞表达量的中位值(pg)采用SPSS软件多个样本两两比较的秩和检验(非参数统计)进行统计学处理。
2 结果
2.1 3个区中3种基因的标记率:见表1。
表1 3个区中3种基因的标记率
(%)
组织部位
bcl-2
bax
c-myc
PZ
17.50
, 百拇医药
15.10
13.90
TZ
25.40*
18.00
16.60
CZ
17.70
16.00
17.80
* P<0.01,与PZ和CZ比较;P均>0.05,其余各组两两比较
2.2 3个区中3种基因的表达量:见表2。
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表2 3个区中3种基因的表达量
(m/pg)
组织部位
bcl-2
bax
c-myc
PZ
54.00
44.96
44.96
TZ
73.00*
, 百拇医药
48.00
52.00**
CZ
44.96
45.00
46.03
*P<0.01与PZ和CZ比较,** P<0.05与PZ比较,P均>0.05其余各组两两比较
3 讨论
本研究采用免疫流式细胞光度术对33例患者3个区域的88份BPH标本进行了检测,结果发现TZ细胞bcl-2基因的标记率和表达量均明显高于PZ和CZ;bal基因的标记率和表达量在3个区无明显差异;c-myc基因的表达量TZ高于PZ。这些结果充分说明,前列腺良性增生症主要由于抗凋亡基因bcl-2和增殖基因c-myc在移行区的过量表达,而凋亡基因bax没有相应增加表达,致使增殖与凋亡失衡发生前列腺增生症。
以往研究结果表明,BPH的发生除与增殖基因、凋亡基因及抗凋亡基因的异常表达有关之外,很可能还与雄、雌激素的失衡和各种生长因子的相互作用有关。而老年人雄激素水平下降后抗凋亡基因bcl-2的高表达致使前列腺细胞凋亡下降,很可能是发生BPH的主要因素。本研究观察到老年BPH患者TZ区抗凋亡基因和增殖基因的高表达进一步在具体部位证实了这一观点,但在诸多因素中哪个是起动环节以及它们之间的相互关系将是BPH发生机制研究的重要课题。
收稿日期：1999-04-06, 百拇医药
单位：河北医科大学第二医院泌尿外科石家庄050000；凌亦凌：河北医科大学病理生理学教研室；左连富：河北省肿瘤研究所
关键词：前列腺肥大；基因；基因表达，基因，myc
河北医科大学学报990521 中图号 R697+.3
良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)是老年男性常见病,随年龄增长发病率不断增加,但其真正的发病机制至今尚不清楚。1972年McNeal将前列腺的功能、病理变化与形态学联系起来,将其分为周边区(peripheral zone,PZ),移行区(transitional zone,TZ)和中央区(central zone,CZ)。并提出周边区为前列腺癌最常发生的区域,而移行区则是前列腺增症发生的唯一部位。经多年的研究,这一结论已得到多数学者的认可。本研究通过对BPH 3个区的bcl-2、bax和c-myc基因表达分别进行检测,探讨bcl-2、bax和c-myc基因表达在BPH发病中的意义。
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1 材料和方法
1.1 材料:33例前列腺增生症的88份标本均取自经膀胱前列腺摘除术的患者,全部患者术后光镜病理证实为BPH,年龄58～83岁,平均66.4岁。取出前列腺后立即按McNeal解剖分区取材,分别用70 %酒精固定,4 ℃冰箱保存。
1.2 单细胞样品制备:将70 %酒精固定的标本用生理盐水冲洗后,用搓网法制备单细胞样品,置0～4 ℃冰箱备检。
1.3 试剂:①bcl-2,克隆100,鼠抗人单抗,效价1∶100,No sc-509;②bax,bax(N-20),鼠抗人单抗,效价1∶100,No sc-493;③c-myc,9E10,鼠抗人单抗,效价1∶100;④羊抗鼠(二抗)FITC-IgG批号JF-0309和羊抗兔(二抗)FITC-IgG批号ZF-0308。以上各种试剂均由美国Santa Cruz Biotechnology公司生产。
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1.4 流式细胞免疫荧光检测的样品制备:采用间接免疫荧光标记法,取1×106/ml细胞,用PBS液洗涤2次,每次2 min,1 000 r/min离心去上清液,加入1∶100的鼠抗人单抗,在37 ℃水浴中温育30 min,用PBS离心洗涤2次,弃上清,加入1∶100稀释的羊抗鼠(或羊抗兔)FITC-IgG 100 μl,37 ℃温育30 min,离心洗涤2次,弃上清,除去未结合的多余荧光抗体,上机检测前加入1.0 ml PBS液,经400目筛网过滤,即上机分析。同时设有①PBS代替一抗的阴性对照;②只加一抗的阳性对照;③只加1∶100 FITC-IgG(二抗)的阳性对照;④用小鼠血清或兔血清的同型对照。
1.5 方法:应用FACS-420型流式细胞仪(美国BD公司)对3区的bcl-2、bax及c-myc的标记率和表达量进行检测。数据和图像送入HP-300Consort 30计算机,应用相应的程序软件分别进行资料处理。测定前以鸡红细胞作为标准样品调整仪器的CV值在5 %以内。
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1.6 数据处理:所得数据标记率的中位值(%)和单细胞表达量的中位值(pg)采用SPSS软件多个样本两两比较的秩和检验(非参数统计)进行统计学处理。
2 结果
2.1 3个区中3种基因的标记率:见表1。
表1 3个区中3种基因的标记率
(%)
组织部位
bcl-2
bax
c-myc
PZ
17.50
, 百拇医药
15.10
13.90
TZ
25.40*
18.00
16.60
CZ
17.70
16.00
17.80
* P<0.01,与PZ和CZ比较;P均>0.05,其余各组两两比较
2.2 3个区中3种基因的表达量:见表2。
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表2 3个区中3种基因的表达量
(m/pg)
组织部位
bcl-2
bax
c-myc
PZ
54.00
44.96
44.96
TZ
73.00*
, 百拇医药
48.00
52.00**
CZ
44.96
45.00
46.03
*P<0.01与PZ和CZ比较,** P<0.05与PZ比较,P均>0.05其余各组两两比较
3 讨论
本研究采用免疫流式细胞光度术对33例患者3个区域的88份BPH标本进行了检测,结果发现TZ细胞bcl-2基因的标记率和表达量均明显高于PZ和CZ;bal基因的标记率和表达量在3个区无明显差异;c-myc基因的表达量TZ高于PZ。这些结果充分说明,前列腺良性增生症主要由于抗凋亡基因bcl-2和增殖基因c-myc在移行区的过量表达,而凋亡基因bax没有相应增加表达,致使增殖与凋亡失衡发生前列腺增生症。
以往研究结果表明,BPH的发生除与增殖基因、凋亡基因及抗凋亡基因的异常表达有关之外,很可能还与雄、雌激素的失衡和各种生长因子的相互作用有关。而老年人雄激素水平下降后抗凋亡基因bcl-2的高表达致使前列腺细胞凋亡下降,很可能是发生BPH的主要因素。本研究观察到老年BPH患者TZ区抗凋亡基因和增殖基因的高表达进一步在具体部位证实了这一观点,但在诸多因素中哪个是起动环节以及它们之间的相互关系将是BPH发生机制研究的重要课题。
收稿日期：1999-04-06, 百拇医药