两种方法检测成人下呼吸道感染病例中合胞病毒的比较
作者：陈凤莲 王冬梅 田万里
单位：陈凤莲 王冬梅(黑龙江省医院)；田万里(哈尔滨医科大学附属医院)
关键词：
黑龙江医学990559 为了寻找一种更适合于临床诊断成人下呼吸道合胞病毒(RSV)感染的方法，我们分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测气管分泌物中的RSV RNA和酶联免疫法(ELISA)检测患者血清中RSV特异性的IgM抗体，并对两种方法进行比较，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 病例选择。
被检测的392例标本均选自1997-10～1998-02，我院门诊及住院的成人急性肺感染病例，病种包括：慢性肺心病、慢性阻塞性肺病、支气管哮喘、大叶性肺炎、肺结核、肺癌及间质性肺炎。
, 百拇医药
1.2 试剂来源。
RT-PCR检测RSV RNA试剂盒购自上海复生生物工程研究所，扩增产物片段为256bp。ELISA法检测RSV IgM抗体试剂盒购自上海华都医学科技发展有限公司。
1.3 标本采集。
气管分泌物标本以无菌导管从鼻腔插入15cm左右，将气管分泌物抽吸入装有PBS缓冲液的玻璃管中备用，标本采集时间在急性肺感染第1周内。血清标本为空腹抽取静脉血2ml于无菌管中备用，标本采集时间在急性肺感染第1周以后。
1.4 RT-PCR方法检测RSV RNA。
按试剂盒上操作说明进行。扩增产物于2%琼脂糖凝胶(含EB0.5μg/ml)上电泳，在紫外灯下观察结果，有与阳性对照处于同一位置的特异性区带而阴性对照无特异性扩增者，即为RSV RNA阳性结果。
, 百拇医药
1.5 ELISA法检测血清中RSV IgM抗体。
按照试剂盒说明书进行操作。反应结果经酶标仪比色测定，样品与阴性对照吸光度值的比值≥2.1者为RSV IgM阳性结果。
2 结果
表1 各病种RT-PCR方法与ELISA法检测结果 病 种
例数
RSV RNA
阳性率(%)
RSV IgM
阳性率(%)
P值
, 百拇医药
肺心病急性肺感染
82
34.1(28/82)
31.7(26/82)
COPD急性肺感染
36
33.3(12/36)
30.6(11/36)
支气管哮喘肺感染
42
14.3(6/42)
11.9(5/42)
, 百拇医药
急性细菌性肺炎
72
12.5(9/72)
12.5(9/72)
肺结核急性肺感染
28
35.7(10/28)
28.6(8/28)
肺癌急性肺感染
82
37.8(31/82)
36.6(30/82)
, 百拇医药
急性间质性肺炎
50
44(22/50)
42(21/50)
合 计
392
30.1(118/392)
28.1(110/392)
P>0.05
表2 两种检测方法结果的比较 RSV IgM抗体
RT-PCR∶RSV RNA
合 计
, 百拇医药
阳性例数
阴性例数
阳性例数
106
4
110
阴性例数
12
270
282
合 计
118
274
, 百拇医药
392
X2＝3.06 P>0.05
3 讨论
对成人下呼吸道急性感染病例中RSV检测，国内外很少报道。已有报道RSV IgM抗体的测定结果多在8.1%～46.2%〔1、2〕，与我们本次实验结果28.1%相接近。成人在RSV感染后7～10d内出现血清特异性IgM抗体，持续3～6月〔3〕。此次血清标本采集时间限定在急性肺感染第1周以后。对于在3～6月内未患急性肺感染病例，血清特异性IgM抗体测定可作为RSV急性或近期感染的诊断依据，但对于3～6月内反复发生感染病例，血清特异性IgM抗体测定只能作为RSV近期感染的标志。
RT-PCR方法检测RSV RNA，应用RSV特异引物对病毒进行检测，使具有相关序列的病毒得以扩增，通过检测病毒RNA相关序列的存在，提供RSV直接感染的诊断依据。理论上讲，即使只有单拷贝病毒存在，就可以得到阳性结果〔4〕。此方法可排除分泌物中可能存在的细菌及特异性中和抗体的影响。由于RSV感染潜伏期较短，起病急骤，感染2～3d后病情加重，感染RSV的呼吸道分泌物中排毒时间1～8d不等〔5〕，因此，标本采集时间限定在急性感染第1周内。RT-PCR操作可在标本采集后当天出结果。具有灵敏度高、特异性强、快速、简便、观察结果客观等优点。且可检测呼吸道分泌物标本，易被患者接受，因此，可作为临床RSV感染的确定诊断依据。
, http://www.100md.com
从检出阳性率比较，RT-PCR方法30.1%(118例)稍高于血清特异性IgM抗体方法28.1%(110例)。经配对资料X2检验，二者差异无显著意义(P>0.05)。前者要求设备条件较高，而后者无需特殊实验设备，可在一般医院普遍采用。
参考文献
1 张忠鲁，等.成人呼吸道合胞病毒感染.中华医学杂志，1991，71(5)：279～280
2 陈杭薇，等.呼吸道合胞病毒在成人急性呼吸道感染患者中的分布.中华结核和呼吸杂志，1990；13：348
3 Schmidt NJ,et al.Antiviral agents and viral diseases of man,2nd ed.New York:Raven Press,179-206：1984
4 Okamoto Y,kudo Y,shirotori K,et al.Detection of genomic sequence of respiratory synctytial virus in otitis media with effusion in children.Ann otol Rhinol Laryngol,7:101,1992
5 Hall C B,et al.N Eng1 J Med 300:393,1979
(收稿日期：1999-04-20), 百拇医药
单位：陈凤莲 王冬梅(黑龙江省医院)；田万里(哈尔滨医科大学附属医院)
关键词：
黑龙江医学990559 为了寻找一种更适合于临床诊断成人下呼吸道合胞病毒(RSV)感染的方法，我们分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测气管分泌物中的RSV RNA和酶联免疫法(ELISA)检测患者血清中RSV特异性的IgM抗体，并对两种方法进行比较，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 病例选择。
被检测的392例标本均选自1997-10～1998-02，我院门诊及住院的成人急性肺感染病例，病种包括：慢性肺心病、慢性阻塞性肺病、支气管哮喘、大叶性肺炎、肺结核、肺癌及间质性肺炎。
, 百拇医药
1.2 试剂来源。
RT-PCR检测RSV RNA试剂盒购自上海复生生物工程研究所，扩增产物片段为256bp。ELISA法检测RSV IgM抗体试剂盒购自上海华都医学科技发展有限公司。
1.3 标本采集。
气管分泌物标本以无菌导管从鼻腔插入15cm左右，将气管分泌物抽吸入装有PBS缓冲液的玻璃管中备用，标本采集时间在急性肺感染第1周内。血清标本为空腹抽取静脉血2ml于无菌管中备用，标本采集时间在急性肺感染第1周以后。
1.4 RT-PCR方法检测RSV RNA。
按试剂盒上操作说明进行。扩增产物于2%琼脂糖凝胶(含EB0.5μg/ml)上电泳，在紫外灯下观察结果，有与阳性对照处于同一位置的特异性区带而阴性对照无特异性扩增者，即为RSV RNA阳性结果。
, 百拇医药
1.5 ELISA法检测血清中RSV IgM抗体。
按照试剂盒说明书进行操作。反应结果经酶标仪比色测定，样品与阴性对照吸光度值的比值≥2.1者为RSV IgM阳性结果。
2 结果
表1 各病种RT-PCR方法与ELISA法检测结果 病 种
例数
RSV RNA
阳性率(%)
RSV IgM
阳性率(%)
P值
, 百拇医药
肺心病急性肺感染
82
34.1(28/82)
31.7(26/82)
COPD急性肺感染
36
33.3(12/36)
30.6(11/36)
支气管哮喘肺感染
42
14.3(6/42)
11.9(5/42)
, 百拇医药
急性细菌性肺炎
72
12.5(9/72)
12.5(9/72)
肺结核急性肺感染
28
35.7(10/28)
28.6(8/28)
肺癌急性肺感染
82
37.8(31/82)
36.6(30/82)
, 百拇医药
急性间质性肺炎
50
44(22/50)
42(21/50)
合 计
392
30.1(118/392)
28.1(110/392)
P>0.05
表2 两种检测方法结果的比较 RSV IgM抗体
RT-PCR∶RSV RNA
合 计
, 百拇医药
阳性例数
阴性例数
阳性例数
106
4
110
阴性例数
12
270
282
合 计
118
274
, 百拇医药
392
X2＝3.06 P>0.05
3 讨论
对成人下呼吸道急性感染病例中RSV检测，国内外很少报道。已有报道RSV IgM抗体的测定结果多在8.1%～46.2%〔1、2〕，与我们本次实验结果28.1%相接近。成人在RSV感染后7～10d内出现血清特异性IgM抗体，持续3～6月〔3〕。此次血清标本采集时间限定在急性肺感染第1周以后。对于在3～6月内未患急性肺感染病例，血清特异性IgM抗体测定可作为RSV急性或近期感染的诊断依据，但对于3～6月内反复发生感染病例，血清特异性IgM抗体测定只能作为RSV近期感染的标志。
RT-PCR方法检测RSV RNA，应用RSV特异引物对病毒进行检测，使具有相关序列的病毒得以扩增，通过检测病毒RNA相关序列的存在，提供RSV直接感染的诊断依据。理论上讲，即使只有单拷贝病毒存在，就可以得到阳性结果〔4〕。此方法可排除分泌物中可能存在的细菌及特异性中和抗体的影响。由于RSV感染潜伏期较短，起病急骤，感染2～3d后病情加重，感染RSV的呼吸道分泌物中排毒时间1～8d不等〔5〕，因此，标本采集时间限定在急性感染第1周内。RT-PCR操作可在标本采集后当天出结果。具有灵敏度高、特异性强、快速、简便、观察结果客观等优点。且可检测呼吸道分泌物标本，易被患者接受，因此，可作为临床RSV感染的确定诊断依据。
, http://www.100md.com
从检出阳性率比较，RT-PCR方法30.1%(118例)稍高于血清特异性IgM抗体方法28.1%(110例)。经配对资料X2检验，二者差异无显著意义(P>0.05)。前者要求设备条件较高，而后者无需特殊实验设备，可在一般医院普遍采用。
参考文献
1 张忠鲁，等.成人呼吸道合胞病毒感染.中华医学杂志，1991，71(5)：279～280
2 陈杭薇，等.呼吸道合胞病毒在成人急性呼吸道感染患者中的分布.中华结核和呼吸杂志，1990；13：348
3 Schmidt NJ,et al.Antiviral agents and viral diseases of man,2nd ed.New York:Raven Press,179-206：1984
4 Okamoto Y,kudo Y,shirotori K,et al.Detection of genomic sequence of respiratory synctytial virus in otitis media with effusion in children.Ann otol Rhinol Laryngol,7:101,1992
5 Hall C B,et al.N Eng1 J Med 300:393,1979
(收稿日期：1999-04-20), 百拇医药