内毒素对离体鼠肝细胞的致伤作用*
作者：周仁荣 梁兵
单位：周仁荣 解放军81医院消化科 江苏省南京市 210002； 梁兵 第四军医大学西京医院 现在澳大利亚墨尔本医学中心 陕西省西安市 710033
关键词：细胞；培养；鼠/肝细胞；内毒素
世界华人消化杂志990523 Subject headings cell culture/mice; hepatocytes; endotoxin
中国图书馆分类号 R 512.6
内毒素血症在病毒性肝炎，尤其是重症病毒性肝炎的发生发展中越来越引起人们的重视. 我们采用不同浓度的大肠杆菌(E. Coli, O111,B4)，内毒素攻击离体鼠肝细胞，观察其相关肝损指标，以便进一步了解内毒素在肝损害中所起的作用.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 分离肝细胞在罗树宏et al[1，2]方法的基础上加入P物质即成DMEM应用液. 取第2代鼠肝细胞培养至16 d(50 mL/ L CO2孵箱中).
1.2 方法 分别取内毒素(E. Coli O111 B4上海生物制品所)4，8，12，40，80，120 mg/ L，加入上述离体肝细胞培养管中，每个浓度2管，后混合培养6，12，24 h. 在这3个不同时间取出培养液离心(800 r/ min,10min)沉淀，取上清液0.5 mL检测AST,ALT,BIL,ALB,TP. 对照组除不加以内毒素外，其他相同.
2 结果
当内毒素攻击鼠肝细胞24 h，ALT高于6 h和12 h ALT值，同时随着内毒素质量浓度增加，ALT值也随之升高. 当内毒素质量浓度在40 mg/ L时ALT值最高，攻击6，12 h较为突出，而后随着内毒素浓度的增高而缓慢下降. 但始终处于异常水平(图1～5).
, 百拇医药
图1 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中ALT的影响.
图2 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中BIL的影响.
图3 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中ALB的影响.
图4 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中TP的影响.
图5 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中AST的影响.
, 百拇医药
3 讨论
通过不同质量浓度内毒素(E. Coli O111 B4)对离体鼠肝细胞作用不同时间的研究，发现用不同浓度的内毒素攻击鼠肝细胞后，肝细胞致伤作用[3]主要表现为ALT，AST，BIL值随着内毒素质量浓度的增高而升高，增高的程度与内毒素浓度相关，在一定范围内呈正相关，ALB,TP则随着内毒素质量浓度的增加而下降，当内毒素质量浓度达40 mg/ L时，ALT，AST，BIL各数值增高最为显著，而后随着内毒素质量浓度的增加上述肝损伤指标并没有进一步增加，而始终处于一个较高水平的异常状态. TP则随着内毒素质量浓度的增大而下降，下降的程度与内毒素质量浓度密切相关. 此外，用不同质量浓度的内毒素，不同的攻击时间对离体肝细胞进行攻击，攻击后培养时间越长，其肝损伤越明显. 当内毒素分别攻击鼠肝细胞6，12，24 h三个不同培养时间时，其ALT，AST，BIL,ALB，TP均有明显改变，以攻击后培养24 h的ALT，AST,BIL值升高最为显著，ALB，TP下降也相应明显. 实验提示内毒素所致的肝损伤确切，且与剂量及作用时间的长短密切相关. 在重症病毒性肝炎及肝硬变晚期，血中肠源性内毒素不断进入血液，造成内毒素血症. 血中内毒素的急剧增高，使原有的肝脏病变更加恶化，大量肝细胞受损，酶学、胆红质、糖、蛋白质及脂肪代谢失控[2，3].
, 百拇医药
由于内毒素引起局部Shwartzman反应，导致肝脏微循环障碍，不但加重了肝细胞的损伤，同时影响了整个凝血功能，易致急性重症病毒性肝炎出血[4]. 本研究进一步证明了内毒素具有对肝细胞的致伤作用，同时也发现内毒素作用时间越长，肝损伤越明显. 因而在重症病毒性肝炎或肝硬变晚期患者，在病原治疗的基础上，及时早期地控制内毒素对肝细胞的损害十分重要.
*参加1996年香港第七届国际传染病会议交流
通讯作者：周仁荣
4 参考文献
[1] Furukawa k, Mochizuki Y, Sawada N. Properities of peroxisomes and their induction by clofibrate in normal adult rat hepatocytes in primary culture in vitro. 1994；20：572-584
[2] 罗树宏，舒衡来，刘多. 鼠肝细胞的培养和传代. 湖南医科大学学报，1991；16：189-192
[3] 王宇明，丁建，顾长海. 内毒素/ 肿瘤坏死因子所致肝细胞损害机制的体外研究. 中华传染病杂志，1986；14：1-3
[4] 王宇明. 内毒素所致肝损害机理的研究进展. 国外医学流传分册，1994；21：12-15
收稿日期：1999-02-01, 百拇医药
单位：周仁荣 解放军81医院消化科 江苏省南京市 210002； 梁兵 第四军医大学西京医院 现在澳大利亚墨尔本医学中心 陕西省西安市 710033
关键词：细胞；培养；鼠/肝细胞；内毒素
世界华人消化杂志990523 Subject headings cell culture/mice; hepatocytes; endotoxin
中国图书馆分类号 R 512.6
内毒素血症在病毒性肝炎，尤其是重症病毒性肝炎的发生发展中越来越引起人们的重视. 我们采用不同浓度的大肠杆菌(E. Coli, O111,B4)，内毒素攻击离体鼠肝细胞，观察其相关肝损指标，以便进一步了解内毒素在肝损害中所起的作用.
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1 材料和方法
1.1 材料 分离肝细胞在罗树宏et al[1，2]方法的基础上加入P物质即成DMEM应用液. 取第2代鼠肝细胞培养至16 d(50 mL/ L CO2孵箱中).
1.2 方法 分别取内毒素(E. Coli O111 B4上海生物制品所)4，8，12，40，80，120 mg/ L，加入上述离体肝细胞培养管中，每个浓度2管，后混合培养6，12，24 h. 在这3个不同时间取出培养液离心(800 r/ min,10min)沉淀，取上清液0.5 mL检测AST,ALT,BIL,ALB,TP. 对照组除不加以内毒素外，其他相同.
2 结果
当内毒素攻击鼠肝细胞24 h，ALT高于6 h和12 h ALT值，同时随着内毒素质量浓度增加，ALT值也随之升高. 当内毒素质量浓度在40 mg/ L时ALT值最高，攻击6，12 h较为突出，而后随着内毒素浓度的增高而缓慢下降. 但始终处于异常水平(图1～5).
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图1 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中ALT的影响.
图2 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中BIL的影响.
图3 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中ALB的影响.
图4 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中TP的影响.
图5 不同质量浓度内毒素对不同作用时间鼠肝细胞培养液中AST的影响.
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3 讨论
通过不同质量浓度内毒素(E. Coli O111 B4)对离体鼠肝细胞作用不同时间的研究，发现用不同浓度的内毒素攻击鼠肝细胞后，肝细胞致伤作用[3]主要表现为ALT，AST，BIL值随着内毒素质量浓度的增高而升高，增高的程度与内毒素浓度相关，在一定范围内呈正相关，ALB,TP则随着内毒素质量浓度的增加而下降，当内毒素质量浓度达40 mg/ L时，ALT，AST，BIL各数值增高最为显著，而后随着内毒素质量浓度的增加上述肝损伤指标并没有进一步增加，而始终处于一个较高水平的异常状态. TP则随着内毒素质量浓度的增大而下降，下降的程度与内毒素质量浓度密切相关. 此外，用不同质量浓度的内毒素，不同的攻击时间对离体肝细胞进行攻击，攻击后培养时间越长，其肝损伤越明显. 当内毒素分别攻击鼠肝细胞6，12，24 h三个不同培养时间时，其ALT，AST，BIL,ALB，TP均有明显改变，以攻击后培养24 h的ALT，AST,BIL值升高最为显著，ALB，TP下降也相应明显. 实验提示内毒素所致的肝损伤确切，且与剂量及作用时间的长短密切相关. 在重症病毒性肝炎及肝硬变晚期，血中肠源性内毒素不断进入血液，造成内毒素血症. 血中内毒素的急剧增高，使原有的肝脏病变更加恶化，大量肝细胞受损，酶学、胆红质、糖、蛋白质及脂肪代谢失控[2，3].
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由于内毒素引起局部Shwartzman反应，导致肝脏微循环障碍，不但加重了肝细胞的损伤，同时影响了整个凝血功能，易致急性重症病毒性肝炎出血[4]. 本研究进一步证明了内毒素具有对肝细胞的致伤作用，同时也发现内毒素作用时间越长，肝损伤越明显. 因而在重症病毒性肝炎或肝硬变晚期患者，在病原治疗的基础上，及时早期地控制内毒素对肝细胞的损害十分重要.
*参加1996年香港第七届国际传染病会议交流
通讯作者：周仁荣
4 参考文献
[1] Furukawa k, Mochizuki Y, Sawada N. Properities of peroxisomes and their induction by clofibrate in normal adult rat hepatocytes in primary culture in vitro. 1994；20：572-584
[2] 罗树宏，舒衡来，刘多. 鼠肝细胞的培养和传代. 湖南医科大学学报，1991；16：189-192
[3] 王宇明，丁建，顾长海. 内毒素/ 肿瘤坏死因子所致肝细胞损害机制的体外研究. 中华传染病杂志，1986；14：1-3
[4] 王宇明. 内毒素所致肝损害机理的研究进展. 国外医学流传分册，1994；21：12-15
收稿日期：1999-02-01, 百拇医药