甲硝唑环氧乙烷残留量的检测
作者：冯晓明 马家贞
单位：北京 100050 中国药品生物制品检定所
关键词：甲硝唑；环氧乙烷；残留
中国现代应用药学990517摘要 目的：建立甲硝唑中残留环氧乙烷的测定方法。方法：采用顶空气相色谱法，以SE-30毛细管柱为色谱柱，FID检测器。用模拟基质进行校正因子的测定，以氯仿为内标测定甲硝唑中的环氧乙烷。结果：日内精密度为0.31%，方法平均回收率为101.4%，最低检测限为0.02μg/g。结论：简化了测定水不溶物中环氧乙烷(标准加入法)的方法，排除由于药物吸水性和顶空体积变化带来的方法误差，方法简便、准确。
Determinationfor rseidue of ethylene oxide on metronidazole
Feng Xiaoming(Feng XM),Ma Jiazhen(Ma JZ)
, 百拇医药
NICPBP,Beijing 100050
ABSTRACT OBJECTIVE：To established a method for the determination of ethylene oxide in metronidazole.METHOD:Headspace GC method was adopted for the determination with SE-30 capillary column and FID detector.The correct factor in metronidazole which is free of ethylene oxide,chloroform was used as internal standard.RESULTS:The average was determined recovey was 101.4%(S=3.3%),precision was 0.31% and the limit of quantiation was 0.02μg/g.CONCLUSION:The method reduced the error come from the hydrophilic character of drug and the variation of headspace volume.It was simple and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS metronidazole,ethylene oxide,residue
甲硝唑中的环氧乙烷是在灭菌过程中引入的，由于毒性作用，其残留量必须加以控制(不得过10μg/g)，但由于甲硝唑只溶于酸性介质，而环氧乙烷遇酸则水解为乙二醇，难以测定。对于不溶物中残留有机溶剂的测定，常采用标准加入法以消除标准曲线和样品测定基质不一致(或干扰)所带来的误差，方法繁锁，不利于常规检测，本方法采用内标法，以二氯甲烷为内标，以甲硝唑原料作为基质测定校正因子，方法快速简便、准确。
1 仪器与试药
1.1 仪器
气相色谱仪：Autosystem 9000,顶空进样器(带22ml样品瓶):SH-40,积分仪:1022型，以上仪器均为Perkin Elmer公司制造。
, 百拇医药
1.2 试剂和材料
环氧乙烷：含量100%,3M Surgical公司制造，二氯甲烷(AR级)，双蒸馏水，甲硝唑原料：天津河北制药厂一分厂提供(和样品同一批号、不含环氧乙烷)。
2 色谱条件
色谱柱：毛细管柱,SE-30(或类似柱),polydimethylsiloxane涂渍，长约30m,内径:0.32mm;液膜厚度:1.25μm；检测器:FID;载气：氮气(纯度95.5%以上)；载气流量:2～4ml/min;压力控制20PSI；分流比1∶20,燃气流量：空气350ml/min,氢气：35ml/min；温度：检测器:190℃,汽化室:200℃,炉温:40℃,保持1.5min,按30℃/min升至180℃保持4min;顶空送样器条件：样品温度:70℃;传送温度:110℃;进样针温度:100℃;加热时间:15min,加压时间:1min,进样时间:0.08min。
, 百拇医药
3 实验方法
3.1 溶液配制
3.1.1 环氧乙烷储备液的配制 在100ml量瓶中加入80ml双蒸馏水，具塞称重(精确至0.0001g),迅速加入1～1.5ml环氧乙烷后摇匀，加塞后再次称重，两次重量之差即为加入的环氧乙烷重量，稀释至刻度，计算此储备液环氧乙烷的含量(11.34mg/ml)存放于冰箱中备用。
3.1.2 内标溶液的配制 取250ml量瓶加入少量双蒸水，用微量注射器加入5μl(相当于6.8mg)二氯甲烷，用双蒸水定容，摇匀备用。
3..3 校正溶液的配制 精密量取环氧乙烷储备液44μl,加至50ml量瓶中，用内标溶液定容(含环氧乙烷10μg/ml),此溶液须在1d内使用。
3.2 系统适应性试验
, 百拇医药
3.2.1 柱效 Allech Associates,Inc制造，批测试柱,n>1000。
3.2.2 分离度 R>1.5。
3.2.3 日内精密度 平行精密称取5份同一批号甲硝唑原料各1000mg,精密量取校正溶液1ml(10μg/ml),置样品瓶中，密塞，按2所述条件在8h内测定，结果相对标准偏差(RSD)为0.31%。
3.3 校正因子的测定
操作同3.2.3法(色谱图见图1)，计算校正因子。
图1 校正溶液色谱图
A-内标峰；B-环氧乙烷(氯仿)
, 百拇医药
3.4 样品中环氧乙烷的测定
取甲硝唑样品1000mg,加入内标溶液1ml，密塞，按2所述条件测定，记录峰面积(色谱图见图2)，计算样品中环氧乙烷的含量，结果批号为98048，96190，98049，96189，96191和98050的EO含量(μg/g)均为0.0。
图2 样品色谱图
A-内标峰3.5 加样回收率的测定
精密称取以下3个批号的样品中各1000mg,分别加入含内标和环氧乙烷5.5,7.5和17.5μg/ml的溶液1ml,测定环氧乙烷(平行测定3次)，计算加入的环氧乙烷量，结果见表1。
3.6 最低检测浓度
, 百拇医药
以色谱信号衰减度为2，信噪比为4∶1,最低检测浓度为0.02μg/g。
4 结果与讨论
试验结果证实，采用顶空气相色谱法按以上方法检测甲硝唑残留环氧乙烷，其系统适应性、方法精密度符合《美国药典》1995年版要求，方法加样回收率、精密度均可满足测试要求。检测6个批号样品均未检出残留环氧乙烷(不大于10μg/g),符合限量要求。
表1 加样回收率测试结果 样品/批号
测得值
标准加入量/μg
测得值/μg
回收率/%
标准偏差/%
, 百拇医药
平均回收率/%
98050
0.0
5.5
5.6
5.8
5.4
101.8
3.6
98048
0.0
7.5
7.7
, 百拇医药
7.2
7.4
99.1
3.4
101.4
96191
0.0
17.5
18.8
18.0
17.8
104.0
2.9
收稿日期：1998-05-25, http://www.100md.com
单位：北京 100050 中国药品生物制品检定所
关键词：甲硝唑；环氧乙烷；残留
中国现代应用药学990517摘要 目的：建立甲硝唑中残留环氧乙烷的测定方法。方法：采用顶空气相色谱法，以SE-30毛细管柱为色谱柱，FID检测器。用模拟基质进行校正因子的测定，以氯仿为内标测定甲硝唑中的环氧乙烷。结果：日内精密度为0.31%，方法平均回收率为101.4%，最低检测限为0.02μg/g。结论：简化了测定水不溶物中环氧乙烷(标准加入法)的方法，排除由于药物吸水性和顶空体积变化带来的方法误差，方法简便、准确。
Determinationfor rseidue of ethylene oxide on metronidazole
Feng Xiaoming(Feng XM),Ma Jiazhen(Ma JZ)
, 百拇医药
NICPBP,Beijing 100050
ABSTRACT OBJECTIVE：To established a method for the determination of ethylene oxide in metronidazole.METHOD:Headspace GC method was adopted for the determination with SE-30 capillary column and FID detector.The correct factor in metronidazole which is free of ethylene oxide,chloroform was used as internal standard.RESULTS:The average was determined recovey was 101.4%(S=3.3%),precision was 0.31% and the limit of quantiation was 0.02μg/g.CONCLUSION:The method reduced the error come from the hydrophilic character of drug and the variation of headspace volume.It was simple and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS metronidazole,ethylene oxide,residue
甲硝唑中的环氧乙烷是在灭菌过程中引入的，由于毒性作用，其残留量必须加以控制(不得过10μg/g)，但由于甲硝唑只溶于酸性介质，而环氧乙烷遇酸则水解为乙二醇，难以测定。对于不溶物中残留有机溶剂的测定，常采用标准加入法以消除标准曲线和样品测定基质不一致(或干扰)所带来的误差，方法繁锁，不利于常规检测，本方法采用内标法，以二氯甲烷为内标，以甲硝唑原料作为基质测定校正因子，方法快速简便、准确。
1 仪器与试药
1.1 仪器
气相色谱仪：Autosystem 9000,顶空进样器(带22ml样品瓶):SH-40,积分仪:1022型，以上仪器均为Perkin Elmer公司制造。
, 百拇医药
1.2 试剂和材料
环氧乙烷：含量100%,3M Surgical公司制造，二氯甲烷(AR级)，双蒸馏水，甲硝唑原料：天津河北制药厂一分厂提供(和样品同一批号、不含环氧乙烷)。
2 色谱条件
色谱柱：毛细管柱,SE-30(或类似柱),polydimethylsiloxane涂渍，长约30m,内径:0.32mm;液膜厚度:1.25μm；检测器:FID;载气：氮气(纯度95.5%以上)；载气流量:2～4ml/min;压力控制20PSI；分流比1∶20,燃气流量：空气350ml/min,氢气：35ml/min；温度：检测器:190℃,汽化室:200℃,炉温:40℃,保持1.5min,按30℃/min升至180℃保持4min;顶空送样器条件：样品温度:70℃;传送温度:110℃;进样针温度:100℃;加热时间:15min,加压时间:1min,进样时间:0.08min。
, 百拇医药
3 实验方法
3.1 溶液配制
3.1.1 环氧乙烷储备液的配制 在100ml量瓶中加入80ml双蒸馏水，具塞称重(精确至0.0001g),迅速加入1～1.5ml环氧乙烷后摇匀，加塞后再次称重，两次重量之差即为加入的环氧乙烷重量，稀释至刻度，计算此储备液环氧乙烷的含量(11.34mg/ml)存放于冰箱中备用。
3.1.2 内标溶液的配制 取250ml量瓶加入少量双蒸水，用微量注射器加入5μl(相当于6.8mg)二氯甲烷，用双蒸水定容，摇匀备用。
3..3 校正溶液的配制 精密量取环氧乙烷储备液44μl,加至50ml量瓶中，用内标溶液定容(含环氧乙烷10μg/ml),此溶液须在1d内使用。
3.2 系统适应性试验
, 百拇医药
3.2.1 柱效 Allech Associates,Inc制造，批测试柱,n>1000。
3.2.2 分离度 R>1.5。
3.2.3 日内精密度 平行精密称取5份同一批号甲硝唑原料各1000mg,精密量取校正溶液1ml(10μg/ml),置样品瓶中，密塞，按2所述条件在8h内测定，结果相对标准偏差(RSD)为0.31%。
3.3 校正因子的测定
操作同3.2.3法(色谱图见图1)，计算校正因子。
图1 校正溶液色谱图
A-内标峰；B-环氧乙烷(氯仿)
, 百拇医药
3.4 样品中环氧乙烷的测定
取甲硝唑样品1000mg,加入内标溶液1ml，密塞，按2所述条件测定，记录峰面积(色谱图见图2)，计算样品中环氧乙烷的含量，结果批号为98048，96190，98049，96189，96191和98050的EO含量(μg/g)均为0.0。
图2 样品色谱图
A-内标峰3.5 加样回收率的测定
精密称取以下3个批号的样品中各1000mg,分别加入含内标和环氧乙烷5.5,7.5和17.5μg/ml的溶液1ml,测定环氧乙烷(平行测定3次)，计算加入的环氧乙烷量，结果见表1。
3.6 最低检测浓度
, 百拇医药
以色谱信号衰减度为2，信噪比为4∶1,最低检测浓度为0.02μg/g。
4 结果与讨论
试验结果证实，采用顶空气相色谱法按以上方法检测甲硝唑残留环氧乙烷，其系统适应性、方法精密度符合《美国药典》1995年版要求，方法加样回收率、精密度均可满足测试要求。检测6个批号样品均未检出残留环氧乙烷(不大于10μg/g),符合限量要求。
表1 加样回收率测试结果 样品/批号
测得值
标准加入量/μg
测得值/μg
回收率/%
标准偏差/%
, 百拇医药
平均回收率/%
98050
0.0
5.5
5.6
5.8
5.4
101.8
3.6
98048
0.0
7.5
7.7
, 百拇医药
7.2
7.4
99.1
3.4
101.4
96191
0.0
17.5
18.8
18.0
17.8
104.0
2.9
收稿日期：1998-05-25, http://www.100md.com