格林-巴利综合征患者血清中髓鞘脂自身抗体水平的测定
作者：戚其学 李玉芬
单位：中国医科大学第一临床学院神经内科实验室
关键词：格林-巴利综合症；髓鞘脂自身抗体
格林摘要 应用免疫学方法检测了格林-巴利综合征(GBS)病人和正常对照组各30例的血清中髓鞘脂自身抗体含量，并进行了动态观察。结果显示，GBS病人血清中髓鞘脂自身抗体水平明显高于正常对照组(P<0.01)。GBS患者髓鞘脂自身抗体出现的阳性率为20%。动态观察发现，GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平的下降与临床症状的改善相一致。
Serum level of anti-myelin sheath antibody in patients with Guillain-Barre syndrome
QI Qixue,LI Yufen(Laboratory of Neurology,The First Clinical College,China Medical University,Shenyang 110001)
, http://www.100md.com
Abstract To determine the serum anti-myelin sheath antibody in 30 patients with Guillain-Barre syndrome and 30 healthy subjects.A dynamic observation was performed in 5 patients with GBS.The result showed that the serum antimyelin sheath antibody increased signiflcantly in patients with GBS,compared with normal control(P<0.01).The positive rate of serum antimyelin sheath antibody titers in GBS patients was 20%,dynamic observation shows that the decrease of serum anti-myelin sheath antibody is correlated with clinical symptomatic improvement.
, 百拇医药
Key words Guillain-Barre syndrome； antimyelin sheath antibody
格林-巴利综合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)的病因及发病机制至今尚不很清楚。近年来国外学者在GBS发病机制方面作了深入研究，推测是机体对自身周围神经髓鞘的异常免疫反应所致[1，2]。在髓鞘脂自身抗体的研究方面，国外已取得了较大的进展，发现GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平升高，以神经节苷脂抗体增高为主。为探讨抗髓鞘脂的自身抗体在GBS发病中的作用，我们检测了30例GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平。
1 材料与方法
1.1 检测对象 30例GBS病人，男性17例，女性13例，年龄16～58(岁)，平均年龄31±11.8(岁)，全部符合Asbury 1990年修订的诊断标准[3]。正常对照组系健康志愿者，共30例，男16例，女14例，年龄22～43(岁)，平均年龄31.8±5.5(岁)。病人首次采血均在发病后7～15(天)进行。两组性别、年龄匹配有可比性。
, 百拇医药
1.2 临床分级 按照Asbury 1990年修订的诊断标准将病人分为5级[3]：0级健康；1级症状、体征轻微，可行走或进行日常工作；2级可独立行走5 m；3级需扶助行走5 m；4级需卧位或卧椅；5级需辅助人工通气。
1.3 检测方法
1.3.1 标本采集 取GBS病人和健康志愿者静脉血各3 ml，凝固后离心2 000 r/min分离血清。将待测血清储-80°C。对30例GBS患者首次采血时间在7～8(天)内进行，其中16例住院治疗后第4周采血进行动态观察。
1.3.2 试剂与仪器 髓鞘脂标准品(Sigma公司)、辣根过氧化物酶标记羊抗人IgM结合物(北京生物制品研究所)，所用的化学试剂均为分析纯。Sigma 960型酶标测定仪、波长490 nm。
1.3.3 抗原的制备与标定 将新鲜人坐骨神经100 mg去除神经鞘膜及外周组织，装入匀浆器中，加3倍容积的蒸溜水，在冰浴中匀浆。在匀浆液中加入10倍容积的甲醇，20°C下边搅拌边注入5倍体积的氯仿。经2 000 r/min离心10 min后、收集上清液。将得到的沉淀用4倍体积的蒸溜水再悬浮后加入15倍体积的氯仿-甲醇(1∶2)。此混合物再2 000 r/min离心10 min，将上清液收集在一起，注入旋转蒸发器在40°C下蒸发，得到神经髓鞘脂。将其与髓鞘脂标准品分别进行稀释，进行薄层层析，用间-苯二酚染色，对提取的髓鞘脂进行标定。提取的髓鞘脂与标准品均被染色、两者位于同一高度，说明提取的人坐骨神经髓鞘脂即为髓鞘脂。其分子量为845 kD。此抗原髓鞘脂为白色板状结晶，可溶于热甲醇、热乙醇、氯仿，不溶于乙醚、丙酮。在水中形成乳浊液。
, 百拇医药
1.3.4 髓鞘脂自身抗体的检测 提取的人坐骨神经髓鞘脂为抗原，用包被缓冲液1∶100稀释，在聚苯乙烯微量反应板的每孔加0.2 ml。4°C过夜，用洗涤液洗3次。设复孔、空白孔，每孔加入100倍稀释的待测血清0.2 ml，4°C 4 h后加入新配制的1 000倍稀释的辣根过氧化物酶羊抗人IgM结合物每孔0.2 ml，最后以0.5 mol/L H2SO4终止反应，用酶标仪测定A值。
1.3.5 统计学方法 A值用
±s表示。两组抗体值用t检验进行统计学处理。以正常对照组的+2s为标准，抗体值超过此标准为阳性。两组抗体阳性率用χ2进行统计学处理。
, 百拇医药
2 结果
2.1 GBS组与正常对照组血清中髓鞘脂自身抗体水平比较(±s)，30例GBS病人血清中髓鞘脂自身抗体水平为0.338±0.164，正常对照组为0.215±0.082。两组间有显著性差异(P<0.01)。以正常对照组的+2 s为标准，则30例GBS患者中仅6例升高。
2.2 GBS病人病症严重程度与血清中髓鞘脂自身抗体水平之间的关系，血清中髓鞘脂自身抗体水平，病情属于4～5级者(0.351±0.043)高于1～3级者(0.310±0.142)。病情重者髓鞘脂自身抗体水平高于病情轻者，但各级别间的差别不显著，无统计学意义(P>0.05)。
, 百拇医药
2.3 患者血清中抗体值的动态变化 对30例GBS患者中的16例住院患者进行了抗体值的动态观察。患者入院首次采血后，每隔7～10(天)采血1次,计4次。结果16例中5例髓鞘脂自身抗体呈阳性者列于表1。从这5例患者抗体值的变化，发现随着临床症状的改善其抗体值的水平逐渐下降。从表1中可见第3例患者入院后肢体瘫痪加重并伴呼吸困难、抗体值上升，经治疗病情好转后抗体值又逐渐下降。
表1 血清髓鞘脂自身抗体阳性GBS病人抗体A值动态变化
Table 1 Dynamic changes of antibody A value in GBS patients whose serum antimyelin sheath antibody in positive
Case
number of times(A value)
, http://www.100md.com
1
2
3
4
1
2
3
4
5
0.868
0.479
0.302
0.687
0.568
, http://www.100md.com
0.468
0.467
0.490
0.308
0.456
0.348
0.379
0.248
0.282
0.281
0.157
0.188
0.149
, 百拇医药
0.174
0.106
3 讨论
本文观察到GBS病人髓鞘脂自身抗体水平增高，因而髓鞘脂自身抗体水平的检测可做为GBS诊断提供一个有意义的依据。髓鞘脂自身抗体水平在GBS病程中的动态变化，Quarles等人[4]有报告但病例不多。本文30例GBS病人中6例抗体值阳性，4例入院后随着症状的好转、肢体功能的恢复，抗体值逐渐下降；另1例随着病情先加重后好转，其抗体值在入院后先上升后下降。这提示GBS病人抗体值的变化与临床症状的改善相一致。髓鞘脂自身抗体水平变化的观测，可能对了解GBS病人的发病机理、治疗效果及预后有一定的临床意义。
参考文献
1 Winer J B,Hughes R A C,Osmond C.A prospective study of acute idiopathic neuropathy I.Clinical features and their prognostic value.J Neuro Neurosurg Psychiat,1988，51(5)：605
, http://www.100md.com
2 Brosnan C F,Claudio L,Tansey F A,et al.Mechanisms of autoimmune neuropathies.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 75
3 Asbury A K.Guillain-Barre Syndrome:historical aspects.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S2
4 Quarles R H,llyas A A,Willison H J.Antibodies to gangliosides and myelin protein in Guillain-Barre syndrome.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 48
(1998-12-10收稿，1999-05-23修回), 百拇医药
单位：中国医科大学第一临床学院神经内科实验室
关键词：格林-巴利综合症；髓鞘脂自身抗体
格林摘要 应用免疫学方法检测了格林-巴利综合征(GBS)病人和正常对照组各30例的血清中髓鞘脂自身抗体含量，并进行了动态观察。结果显示，GBS病人血清中髓鞘脂自身抗体水平明显高于正常对照组(P<0.01)。GBS患者髓鞘脂自身抗体出现的阳性率为20%。动态观察发现，GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平的下降与临床症状的改善相一致。
Serum level of anti-myelin sheath antibody in patients with Guillain-Barre syndrome
QI Qixue,LI Yufen(Laboratory of Neurology,The First Clinical College,China Medical University,Shenyang 110001)
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Abstract To determine the serum anti-myelin sheath antibody in 30 patients with Guillain-Barre syndrome and 30 healthy subjects.A dynamic observation was performed in 5 patients with GBS.The result showed that the serum antimyelin sheath antibody increased signiflcantly in patients with GBS,compared with normal control(P<0.01).The positive rate of serum antimyelin sheath antibody titers in GBS patients was 20%,dynamic observation shows that the decrease of serum anti-myelin sheath antibody is correlated with clinical symptomatic improvement.
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Key words Guillain-Barre syndrome； antimyelin sheath antibody
格林-巴利综合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)的病因及发病机制至今尚不很清楚。近年来国外学者在GBS发病机制方面作了深入研究，推测是机体对自身周围神经髓鞘的异常免疫反应所致[1，2]。在髓鞘脂自身抗体的研究方面，国外已取得了较大的进展，发现GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平升高，以神经节苷脂抗体增高为主。为探讨抗髓鞘脂的自身抗体在GBS发病中的作用，我们检测了30例GBS患者血清中髓鞘脂自身抗体水平。
1 材料与方法
1.1 检测对象 30例GBS病人，男性17例，女性13例，年龄16～58(岁)，平均年龄31±11.8(岁)，全部符合Asbury 1990年修订的诊断标准[3]。正常对照组系健康志愿者，共30例，男16例，女14例，年龄22～43(岁)，平均年龄31.8±5.5(岁)。病人首次采血均在发病后7～15(天)进行。两组性别、年龄匹配有可比性。
, 百拇医药
1.2 临床分级 按照Asbury 1990年修订的诊断标准将病人分为5级[3]：0级健康；1级症状、体征轻微，可行走或进行日常工作；2级可独立行走5 m；3级需扶助行走5 m；4级需卧位或卧椅；5级需辅助人工通气。
1.3 检测方法
1.3.1 标本采集 取GBS病人和健康志愿者静脉血各3 ml，凝固后离心2 000 r/min分离血清。将待测血清储-80°C。对30例GBS患者首次采血时间在7～8(天)内进行，其中16例住院治疗后第4周采血进行动态观察。
1.3.2 试剂与仪器 髓鞘脂标准品(Sigma公司)、辣根过氧化物酶标记羊抗人IgM结合物(北京生物制品研究所)，所用的化学试剂均为分析纯。Sigma 960型酶标测定仪、波长490 nm。
1.3.3 抗原的制备与标定 将新鲜人坐骨神经100 mg去除神经鞘膜及外周组织，装入匀浆器中，加3倍容积的蒸溜水，在冰浴中匀浆。在匀浆液中加入10倍容积的甲醇，20°C下边搅拌边注入5倍体积的氯仿。经2 000 r/min离心10 min后、收集上清液。将得到的沉淀用4倍体积的蒸溜水再悬浮后加入15倍体积的氯仿-甲醇(1∶2)。此混合物再2 000 r/min离心10 min，将上清液收集在一起，注入旋转蒸发器在40°C下蒸发，得到神经髓鞘脂。将其与髓鞘脂标准品分别进行稀释，进行薄层层析，用间-苯二酚染色，对提取的髓鞘脂进行标定。提取的髓鞘脂与标准品均被染色、两者位于同一高度，说明提取的人坐骨神经髓鞘脂即为髓鞘脂。其分子量为845 kD。此抗原髓鞘脂为白色板状结晶，可溶于热甲醇、热乙醇、氯仿，不溶于乙醚、丙酮。在水中形成乳浊液。
, 百拇医药
1.3.4 髓鞘脂自身抗体的检测 提取的人坐骨神经髓鞘脂为抗原，用包被缓冲液1∶100稀释，在聚苯乙烯微量反应板的每孔加0.2 ml。4°C过夜，用洗涤液洗3次。设复孔、空白孔，每孔加入100倍稀释的待测血清0.2 ml，4°C 4 h后加入新配制的1 000倍稀释的辣根过氧化物酶羊抗人IgM结合物每孔0.2 ml，最后以0.5 mol/L H2SO4终止反应，用酶标仪测定A值。
1.3.5 统计学方法 A值用
±s表示。两组抗体值用t检验进行统计学处理。以正常对照组的+2s为标准，抗体值超过此标准为阳性。两组抗体阳性率用χ2进行统计学处理。, 百拇医药
2 结果
2.1 GBS组与正常对照组血清中髓鞘脂自身抗体水平比较(
±s)，30例GBS病人血清中髓鞘脂自身抗体水平为0.338±0.164，正常对照组为0.215±0.082。两组间有显著性差异(P<0.01)。以正常对照组的+2 s为标准，则30例GBS患者中仅6例升高。2.2 GBS病人病症严重程度与血清中髓鞘脂自身抗体水平之间的关系，血清中髓鞘脂自身抗体水平，病情属于4～5级者(0.351±0.043)高于1～3级者(0.310±0.142)。病情重者髓鞘脂自身抗体水平高于病情轻者，但各级别间的差别不显著，无统计学意义(P>0.05)。
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2.3 患者血清中抗体值的动态变化 对30例GBS患者中的16例住院患者进行了抗体值的动态观察。患者入院首次采血后，每隔7～10(天)采血1次,计4次。结果16例中5例髓鞘脂自身抗体呈阳性者列于表1。从这5例患者抗体值的变化，发现随着临床症状的改善其抗体值的水平逐渐下降。从表1中可见第3例患者入院后肢体瘫痪加重并伴呼吸困难、抗体值上升，经治疗病情好转后抗体值又逐渐下降。
表1 血清髓鞘脂自身抗体阳性GBS病人抗体A值动态变化
Table 1 Dynamic changes of antibody A value in GBS patients whose serum antimyelin sheath antibody in positive
Case
number of times(A value)
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3 讨论
本文观察到GBS病人髓鞘脂自身抗体水平增高，因而髓鞘脂自身抗体水平的检测可做为GBS诊断提供一个有意义的依据。髓鞘脂自身抗体水平在GBS病程中的动态变化，Quarles等人[4]有报告但病例不多。本文30例GBS病人中6例抗体值阳性，4例入院后随着症状的好转、肢体功能的恢复，抗体值逐渐下降；另1例随着病情先加重后好转，其抗体值在入院后先上升后下降。这提示GBS病人抗体值的变化与临床症状的改善相一致。髓鞘脂自身抗体水平变化的观测，可能对了解GBS病人的发病机理、治疗效果及预后有一定的临床意义。
参考文献
1 Winer J B,Hughes R A C,Osmond C.A prospective study of acute idiopathic neuropathy I.Clinical features and their prognostic value.J Neuro Neurosurg Psychiat,1988，51(5)：605
, http://www.100md.com
2 Brosnan C F,Claudio L,Tansey F A,et al.Mechanisms of autoimmune neuropathies.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 75
3 Asbury A K.Guillain-Barre Syndrome:historical aspects.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S2
4 Quarles R H,llyas A A,Willison H J.Antibodies to gangliosides and myelin protein in Guillain-Barre syndrome.Ann Neurol,1990,27(Suppl):S 48
(1998-12-10收稿，1999-05-23修回), 百拇医药