妊娠高血压综合征孕妇血浆VWF变化及其胎盘螺旋小动脉超微结构研究
作者：易建萍 张红真 陈文妹 陈小中 姜 杰 张 晶 雷建章 王丽珍
单位：063000 河北医科大学附属唐山工人医院 易建萍 张红真 陈文妹 陈小中 姜 杰 张 晶；河北医科大学电镜室 雷建章；河北医科大学第二附属医院 王丽珍
关键词：
中国综合临床990651 妊娠高血压综合征(妊高征)是与血管痉挛、多器官系统病理性血管损伤有关的产科常见病[1]，至今病因和发病机制不清。血管性假血友病因子(Von Willbrand Facfor,VWF)为血管内皮细胞损伤的重要标记物，我们测定了正常晚期妊娠及妊高征患者血浆VWF水平，并对其胎盘螺旋小动脉进行扫描和透射电镜观察，旨在通过血管内皮生化指标及血管形态学变化，探讨血管内皮细胞受损在妊高征发病中的作用及其临床意义。
1 资料与方法
, 百拇医药
1.1 研究对象 选择1995年10月～1997年3月住院的妊高征孕妇(妊高征组)43例，轻度10例，中度12例，重度21例。正常晚期妊娠孕妇(晚孕组)34例，两组年龄22～35岁，平均孕期分别为(38.9±1.72)周及(40.3±1.40)周。均为初孕。妊高征分类及诊断标准以乐杰主编《妇产科学》第四版为标准[2]。对照组34例，为健康非孕育龄妇女，年龄23～40岁。
1.2 血浆VWF测定 采空腹静脉血1.8ml，加入含0.2ml3.8%枸椽酸钠的试管中，离心15分(4℃、3000r/min)分离血浆，置-20℃～-30℃保存待测。产后72小时再采血1.8ml，标本处理同上。VWF测定采用双抗体固相酶免疫试验固相化的抗VWF单抗与血浆或标准血浆中的VWF结合，该VWF可以再结合酶标记的另一种抗VWF单抗，加入底物后，显色程度与标本中VWF浓度成正比，通过标准曲线求其含量。试剂盒由苏州医学院血栓与止血研究室提供。
1.3 电镜标本制备及观察 扫描及透射电镜标本分别取自30例妊高征孕妇及20例正常孕妇之胎盘。分娩后于母面胎盘小叶中央迅速取约0.5cm×0.5cm×0.5cm基蜕膜，用生理盐水清洗后，分别置预冷的2.5%及4.0%戌二醛中固定。扫描电镜标本经缓冲液浸洗，4%锇酸固定，系列梯度乙醇脱水，最后经临界点干燥，金属喷镀而成。扫描电镜为日立S-520型，加速电压25kV，放大倍数400～7 000倍。透射电镜标本经系列梯度的丙酮脱水，环氧树脂812包埋，钻石刀超薄切片，醋酸铀及枸椽酸铅双染色。透射电镜为日立H-300型，加速电压75kV，放大倍数400～15 000倍。内皮细胞大小的测量：在扫描电镜的高倍镜照片上，随机取一点，以该点所在的细胞开始，自左至右连续测量5个细胞的长度，如此测量10次共50个细胞，以长和宽的乘积代表细胞的大小。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 各测定值采用
±s，统计处理采用t检验。
2 结果
2.1 三组血浆VWF水平比较 对照组、晚孕组及妊高征孕妇组血浆VWF水平分别为(127.98±32.21)%、(162.31±38.30)%及(217.59±54.17)%。晚孕组及妊高征孕妇组血浆VWF水平明显高于对照组(P<0.05及P<0.001)；妊高征孕妇组血浆VWF水平高于晚孕组，二者比较有显著性差异(P<0.01)。
2.2 不同程度妊高征孕妇血浆VWF水平比较 轻度、中度及重度妊高征孕妇血浆VWF水平分别为(171.15±43.28)%、(202.85±19.31)%及(258.78±41.45)%，中度及重度妊高征孕妇血浆VWF水平明显高于轻度妊高征孕妇(P<0.01及P<0.001)；轻度妊高征孕妇血浆VWF水平与晚孕组无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.3 晚孕组与妊高征孕妇组产前与产后血浆VWF水平比较 见表1。
表1 晚孕组及妊高征孕妇产前及产后
72小时血浆VWF水平%
产 前
产后72小时
P
晚 孕 组
162.31±38.30
136.35±27.49
<0.05
妊高征孕妇组
, http://www.100md.com
217.59±54.17
171.42±52.03
<0.01
2.4 正常妊娠及妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构
2.4.1 正常孕妇胎盘螺旋小动脉结构特点 扫描电镜下，内皮细胞为扁平状，大小一致，表面光滑，细胞沿血管纵轴呈叠瓦状，结合紧密，内皮细胞大小为(95.37±9.18)μm2；透射电镜下，血管内皮基底膜厚度约1μm，细胞膜完整，核清晰，胞质线粒体发达，嵴丰富，可见初级溶酶体，高尔基复合体结构正常。
2.4.2 妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构 扫描电镜下，内皮细胞失去正常形态，细胞肿胀增大，可见多个灶性缺损及凹陷，细胞间隙增宽，叠瓦状排列消失，内皮细胞大小为(154.97±49.14)μm2，大于正常组(P<0.05)；透射电镜下，血管内皮基底膜明显增厚，约3～6μm，内皮细胞破损并解体成碎片，使含大量脂质的次级溶酶体增多，线粒体肿胀，嵴模糊甚至消失，粗面内质网扩张。
, http://www.100md.com
3 讨论
3.1 正常晚期妊娠孕妇血浆VWF变化及其意义 VWF是由血管内皮细胞合成并贮存于其棒管状小体(Weible-Palade body)内的一种大分子糖蛋白，与Ⅷ∶C(Ⅷ因子促凝活性部分)共同组成因子Ⅷ复合物，当内皮细胞受损时，VWF可迅速粘附到受损的血管内皮下，作为Ⅷ∶C的载体蛋白而发挥作用[3]。本研究结果显示，晚孕组血浆VWF水平高于对照组，可能由于血液中凝血因子含量随着妊娠的进展而增高，使机体处于高凝状态，继发Ⅷ:C代偿性增高，因而促进作为Ⅷ∶C载体的VWF的释放。
3.2 妊高征孕妇血浆VWF水平变化及其意义 研究结果表明：妊高征孕妇血浆VWF水平显著高于正常孕妇；重度妊高征孕妇血浆VWF水平高于轻、中度妊高征孕妇。其原因可能由于妊高征时血管内皮细胞受损，导致VWF释放增多；其次妊高征时异常的高凝状态，加重了机体慢性血管内凝血，一方面使Ⅷ∶C因子消耗增多；另一方面又促进Ⅷ∶C因子在血管内皮的合成和释放，故妊高征时血浆VWF水平增高[4]，提示病情愈重，血管内皮细胞损伤愈严重。产后72小时妊高征孕妇血浆VWF水平尚未恢复正常，表明血管内皮尚未完全修复。
, 百拇医药
3.3 妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构 血管内皮基底膜增厚，细胞增大，有灶性缺损，线粒体肿胀，嵴消失，内含大量脂质的次级溶酶体增多，表明血管内皮细胞有变性、缺氧及动脉硬化。其原因为正常妊娠时子宫蜕膜及肌层螺旋小动脉粗大、蜷曲，以利增加子宫-胎盘血液供应；妊高征时其变化仅限于蜕膜层内部分血管，而肌层及蜕膜其它部分血管发生急性动脉硬化，使管径减至正常妊娠时的1/2，造成血液受阻，血管内皮细胞缺血、缺氧，细胞内渗透压改变，使细胞内水钠潴留，致线粒体肿胀、嵴消失，血管管腔狭窄，随后肿胀的线粒体自内皮细胞表面膨出、破裂，将胞浆暴露于管腔中，造成细胞灶性缺损，最终整个细胞损伤。正常孕妇子宫微血管无此变化。而妊高征胎盘血管的损害，必然导致胎盘灌流量减少，组织缺氧，胎盘脂质过氧化物过多，使母体产生过氧化损害。本研究结果与Shanklin等[5]电镜观察一致。总之，由于妊高征孕妇血管内皮细胞受损释放VWF，增加了血液中VWF含量，加重机体高凝状态，使慢性血管内凝血进一步发展，导致血管内皮细胞广泛性损伤。而妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构显示血管内皮细胞受损为妊高征患者存在高凝状态提供了组织学证据。
, 百拇医药
参考文献
1 Zeeman GG.Pathogensis of preeclampsia:A Agpothesis.Clin
Obstet Gynecol，1992,35(2):317
2 乐 杰.妇产科学.第4版.北京：人民卫生出版社，1996.113
3 王振义.血栓与止血基础与临床.湖南：湖南科学技术出版社，1991.68
4 Bergmann F.The role of von willebrand factor in preeclamp-
sia. Thromb Haemost，1991,66(2):528
5 Shanklin DR,Sibai BM.Ultrastructure aspects of preeclampsia.Am Obstet Gynecol,1989,161(3):735
[收稿：1998-10-12], http://www.100md.com
单位：063000 河北医科大学附属唐山工人医院 易建萍 张红真 陈文妹 陈小中 姜 杰 张 晶；河北医科大学电镜室 雷建章；河北医科大学第二附属医院 王丽珍
关键词：
中国综合临床990651 妊娠高血压综合征(妊高征)是与血管痉挛、多器官系统病理性血管损伤有关的产科常见病[1]，至今病因和发病机制不清。血管性假血友病因子(Von Willbrand Facfor,VWF)为血管内皮细胞损伤的重要标记物，我们测定了正常晚期妊娠及妊高征患者血浆VWF水平，并对其胎盘螺旋小动脉进行扫描和透射电镜观察，旨在通过血管内皮生化指标及血管形态学变化，探讨血管内皮细胞受损在妊高征发病中的作用及其临床意义。
1 资料与方法
, 百拇医药
1.1 研究对象 选择1995年10月～1997年3月住院的妊高征孕妇(妊高征组)43例，轻度10例，中度12例，重度21例。正常晚期妊娠孕妇(晚孕组)34例，两组年龄22～35岁，平均孕期分别为(38.9±1.72)周及(40.3±1.40)周。均为初孕。妊高征分类及诊断标准以乐杰主编《妇产科学》第四版为标准[2]。对照组34例，为健康非孕育龄妇女，年龄23～40岁。
1.2 血浆VWF测定 采空腹静脉血1.8ml，加入含0.2ml3.8%枸椽酸钠的试管中，离心15分(4℃、3000r/min)分离血浆，置-20℃～-30℃保存待测。产后72小时再采血1.8ml，标本处理同上。VWF测定采用双抗体固相酶免疫试验固相化的抗VWF单抗与血浆或标准血浆中的VWF结合，该VWF可以再结合酶标记的另一种抗VWF单抗，加入底物后，显色程度与标本中VWF浓度成正比，通过标准曲线求其含量。试剂盒由苏州医学院血栓与止血研究室提供。
1.3 电镜标本制备及观察 扫描及透射电镜标本分别取自30例妊高征孕妇及20例正常孕妇之胎盘。分娩后于母面胎盘小叶中央迅速取约0.5cm×0.5cm×0.5cm基蜕膜，用生理盐水清洗后，分别置预冷的2.5%及4.0%戌二醛中固定。扫描电镜标本经缓冲液浸洗，4%锇酸固定，系列梯度乙醇脱水，最后经临界点干燥，金属喷镀而成。扫描电镜为日立S-520型，加速电压25kV，放大倍数400～7 000倍。透射电镜标本经系列梯度的丙酮脱水，环氧树脂812包埋，钻石刀超薄切片，醋酸铀及枸椽酸铅双染色。透射电镜为日立H-300型，加速电压75kV，放大倍数400～15 000倍。内皮细胞大小的测量：在扫描电镜的高倍镜照片上，随机取一点，以该点所在的细胞开始，自左至右连续测量5个细胞的长度，如此测量10次共50个细胞，以长和宽的乘积代表细胞的大小。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 各测定值采用
±s，统计处理采用t检验。2 结果
2.1 三组血浆VWF水平比较 对照组、晚孕组及妊高征孕妇组血浆VWF水平分别为(127.98±32.21)%、(162.31±38.30)%及(217.59±54.17)%。晚孕组及妊高征孕妇组血浆VWF水平明显高于对照组(P<0.05及P<0.001)；妊高征孕妇组血浆VWF水平高于晚孕组，二者比较有显著性差异(P<0.01)。
2.2 不同程度妊高征孕妇血浆VWF水平比较 轻度、中度及重度妊高征孕妇血浆VWF水平分别为(171.15±43.28)%、(202.85±19.31)%及(258.78±41.45)%，中度及重度妊高征孕妇血浆VWF水平明显高于轻度妊高征孕妇(P<0.01及P<0.001)；轻度妊高征孕妇血浆VWF水平与晚孕组无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
2.3 晚孕组与妊高征孕妇组产前与产后血浆VWF水平比较 见表1。
表1 晚孕组及妊高征孕妇产前及产后
72小时血浆VWF水平%
产 前
产后72小时
P
晚 孕 组
162.31±38.30
136.35±27.49
<0.05
妊高征孕妇组
, http://www.100md.com
217.59±54.17
171.42±52.03
<0.01
2.4 正常妊娠及妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构
2.4.1 正常孕妇胎盘螺旋小动脉结构特点 扫描电镜下，内皮细胞为扁平状，大小一致，表面光滑，细胞沿血管纵轴呈叠瓦状，结合紧密，内皮细胞大小为(95.37±9.18)μm2；透射电镜下，血管内皮基底膜厚度约1μm，细胞膜完整，核清晰，胞质线粒体发达，嵴丰富，可见初级溶酶体，高尔基复合体结构正常。
2.4.2 妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构 扫描电镜下，内皮细胞失去正常形态，细胞肿胀增大，可见多个灶性缺损及凹陷，细胞间隙增宽，叠瓦状排列消失，内皮细胞大小为(154.97±49.14)μm2，大于正常组(P<0.05)；透射电镜下，血管内皮基底膜明显增厚，约3～6μm，内皮细胞破损并解体成碎片，使含大量脂质的次级溶酶体增多，线粒体肿胀，嵴模糊甚至消失，粗面内质网扩张。
, http://www.100md.com
3 讨论
3.1 正常晚期妊娠孕妇血浆VWF变化及其意义 VWF是由血管内皮细胞合成并贮存于其棒管状小体(Weible-Palade body)内的一种大分子糖蛋白，与Ⅷ∶C(Ⅷ因子促凝活性部分)共同组成因子Ⅷ复合物，当内皮细胞受损时，VWF可迅速粘附到受损的血管内皮下，作为Ⅷ∶C的载体蛋白而发挥作用[3]。本研究结果显示，晚孕组血浆VWF水平高于对照组，可能由于血液中凝血因子含量随着妊娠的进展而增高，使机体处于高凝状态，继发Ⅷ:C代偿性增高，因而促进作为Ⅷ∶C载体的VWF的释放。
3.2 妊高征孕妇血浆VWF水平变化及其意义 研究结果表明：妊高征孕妇血浆VWF水平显著高于正常孕妇；重度妊高征孕妇血浆VWF水平高于轻、中度妊高征孕妇。其原因可能由于妊高征时血管内皮细胞受损，导致VWF释放增多；其次妊高征时异常的高凝状态，加重了机体慢性血管内凝血，一方面使Ⅷ∶C因子消耗增多；另一方面又促进Ⅷ∶C因子在血管内皮的合成和释放，故妊高征时血浆VWF水平增高[4]，提示病情愈重，血管内皮细胞损伤愈严重。产后72小时妊高征孕妇血浆VWF水平尚未恢复正常，表明血管内皮尚未完全修复。
, 百拇医药
3.3 妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构 血管内皮基底膜增厚，细胞增大，有灶性缺损，线粒体肿胀，嵴消失，内含大量脂质的次级溶酶体增多，表明血管内皮细胞有变性、缺氧及动脉硬化。其原因为正常妊娠时子宫蜕膜及肌层螺旋小动脉粗大、蜷曲，以利增加子宫-胎盘血液供应；妊高征时其变化仅限于蜕膜层内部分血管，而肌层及蜕膜其它部分血管发生急性动脉硬化，使管径减至正常妊娠时的1/2，造成血液受阻，血管内皮细胞缺血、缺氧，细胞内渗透压改变，使细胞内水钠潴留，致线粒体肿胀、嵴消失，血管管腔狭窄，随后肿胀的线粒体自内皮细胞表面膨出、破裂，将胞浆暴露于管腔中，造成细胞灶性缺损，最终整个细胞损伤。正常孕妇子宫微血管无此变化。而妊高征胎盘血管的损害，必然导致胎盘灌流量减少，组织缺氧，胎盘脂质过氧化物过多，使母体产生过氧化损害。本研究结果与Shanklin等[5]电镜观察一致。总之，由于妊高征孕妇血管内皮细胞受损释放VWF，增加了血液中VWF含量，加重机体高凝状态，使慢性血管内凝血进一步发展，导致血管内皮细胞广泛性损伤。而妊高征孕妇胎盘螺旋小动脉超微结构显示血管内皮细胞受损为妊高征患者存在高凝状态提供了组织学证据。
, 百拇医药
参考文献
1 Zeeman GG.Pathogensis of preeclampsia:A Agpothesis.Clin
Obstet Gynecol，1992,35(2):317
2 乐 杰.妇产科学.第4版.北京：人民卫生出版社，1996.113
3 王振义.血栓与止血基础与临床.湖南：湖南科学技术出版社，1991.68
4 Bergmann F.The role of von willebrand factor in preeclamp-
sia. Thromb Haemost，1991,66(2):528
5 Shanklin DR,Sibai BM.Ultrastructure aspects of preeclampsia.Am Obstet Gynecol,1989,161(3):735
[收稿：1998-10-12], http://www.100md.com