急性髓细胞性白血病骨髓切片原癌基因c-myc的表达
作者：石军 浦权 杨梅如 刘蕙芝 陶英 李晓
单位：上海市第六人民医院、上海第二医科大学市六临床医学院 血液科 上海市，200233
关键词：白血病，急性/髓细胞；骨髓塑包切片；c-myc原癌基因
临床血液学杂志990610 c-myc是参与调控细胞增殖与分化的原癌基因，已知其表达水平与急性髓性白血病(AML)的发生与预后有关〔1〕。作者采用本室自行研制的简易Hemapun 959丙酮塑包切片，检测治疗前AML患者髓内白血病细胞c-myc原癌基因的表达水平，并与同一塑包切片切割之常染色切片进行同步观察，以期探讨塑包切片白血病细胞内c-myc蛋白水平的临床意义。
1 材料和方法
1.1 病例选择 1997年10月～1998年8月，8例经临床、血象和骨髓象按国内习用标准而确诊为AML。其中，男6例，女2例，年龄23～72(中位49)岁，均采用常规剂量DA或HA方案化疗。
, 百拇医药
1.2 取材、处理与切片 以B65-01型活检针于髂后上棘采集治疗前骨髓活检标本。活组织块于冷丙酮中固定2 h后包埋于本室自制的Hemapun 959包埋剂中，4℃下聚合过夜。包埋块切割成3～5 μm厚之切片，常规贴片。
1.3 切片常染色 采用苏木素-Giemsa-酸性品红(HCG)染色〔2〕。
1.4 切片c-myc蛋白检测 用APAAP法进行c-myc蛋白免疫组化染色，c-myc为鼠多抗，1∶50稀释。
1.5 观察方法 ①细胞内c-myc基因表达强度共分四级，-：未着色；+：粉红色弱阳性；
：红色中度阳性；
：深红色强阳性。②常染色切片：观察c-myc免疫组化染色阳性细胞在对应的常染色切片上之细胞分类。③切片上c-myc蛋白半定量：将骨髓切片分为小梁旁区、间区及中央区〔2〕，于每个区域至少计算200个有核细胞，算出不同表达强度的c-myc阳性细胞百分比，按下式计算切片内c-myc蛋白半定量值。c-myc蛋白半定量=(%+X1)+(%X2)+(%+X3)。
, 百拇医药
2 结果
2.1 同一塑包块切割之切片上c-myc蛋白免疫组化染色与常染色的同步观察 c-myc阳性细胞分布与常染色下原始细胞分布范围基本相当，均呈弥漫分布，原始细胞间c-myc染色强度不等。另外c-myc染色强阳性的细胞中偶见中、晚幼粒细胞，位于小梁旁区。
2.2 治疗前AML骨髓切片上c-myc蛋白半定量值与疗效关系 见附表。8例AML骨髓切片c-myc半定量值平均100(60～152)，其中例1、例2 c-myc值较高，治疗后未缓解，其余6例化疗后均有不同程度缓解。
附表 AML骨髓切片上c-myc基因表达及疗效 例别
myc阳性细胞(%)
myc蛋白
半定量值
, 百拇医药
疗效
总计
+
1
78
25
33
20
151
NR
2
, 百拇医药
45
25
5
15
80
CR
3
74
22
26
26
152
NR
4
, 百拇医药
48
36
10
2
60
CR
5
61
49
7
6
81
CR
6
, 百拇医药
53
40
8
5
71
CR
7
51
38
10
3
74
PR
8
, 百拇医药
66
32
23
11
101
PR
3 讨论 c-myc是参与细胞增殖与分化的调控基因，在增殖能力旺盛的细胞中呈高表达〔1〕。AML患者增殖旺盛的白血病细胞粘着力强，常分布于小梁旁区，不易被抽吸，加之AML患者骨髓常伴有不同程度的骨髓网硬蛋白纤维增生，使得抽取物涂片不能真实反映髓内主质结构与细胞分布的全貌，从而影响了c-myc蛋白的检测水平。故骨髓活检标本就显得尤为重要。近年来，在骨髓切片上进行癌基因蛋白检测时有报道〔4〕，但均采用石蜡包埋或冰冻切片。石蜡包埋的缺点是同一患者一次取材之活检块必须纵向分割为二，一半作塑包进行常规染色，供组织学检查用；另一半石蜡包埋供免疫组化检测用，无法进行常规染色与免疫组化染色的同步观察；而冰冻切片上虽能进行部分免疫组化染色，但切片主质内的组织构型和细胞形态模糊，难以准确判定恶性细胞的来源与标记物反应。而骨髓塑包切片就能避免上述弊端。
参考文献
1 Blick M,Westin E,Gutterman J,et al.Oncogene expression in human leukemia.Blood,1984,64:1234～1239
2 浦权，编著.骨髓活检病理学.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993.14
(1998-12-27 收稿), http://www.100md.com
单位：上海市第六人民医院、上海第二医科大学市六临床医学院 血液科 上海市，200233
关键词：白血病，急性/髓细胞；骨髓塑包切片；c-myc原癌基因
临床血液学杂志990610 c-myc是参与调控细胞增殖与分化的原癌基因，已知其表达水平与急性髓性白血病(AML)的发生与预后有关〔1〕。作者采用本室自行研制的简易Hemapun 959丙酮塑包切片，检测治疗前AML患者髓内白血病细胞c-myc原癌基因的表达水平，并与同一塑包切片切割之常染色切片进行同步观察，以期探讨塑包切片白血病细胞内c-myc蛋白水平的临床意义。
1 材料和方法
1.1 病例选择 1997年10月～1998年8月，8例经临床、血象和骨髓象按国内习用标准而确诊为AML。其中，男6例，女2例，年龄23～72(中位49)岁，均采用常规剂量DA或HA方案化疗。
, 百拇医药
1.2 取材、处理与切片 以B65-01型活检针于髂后上棘采集治疗前骨髓活检标本。活组织块于冷丙酮中固定2 h后包埋于本室自制的Hemapun 959包埋剂中，4℃下聚合过夜。包埋块切割成3～5 μm厚之切片，常规贴片。
1.3 切片常染色 采用苏木素-Giemsa-酸性品红(HCG)染色〔2〕。
1.4 切片c-myc蛋白检测 用APAAP法进行c-myc蛋白免疫组化染色，c-myc为鼠多抗，1∶50稀释。
1.5 观察方法 ①细胞内c-myc基因表达强度共分四级，-：未着色；+：粉红色弱阳性；
：红色中度阳性；：深红色强阳性。②常染色切片：观察c-myc免疫组化染色阳性细胞在对应的常染色切片上之细胞分类。③切片上c-myc蛋白半定量：将骨髓切片分为小梁旁区、间区及中央区〔2〕，于每个区域至少计算200个有核细胞，算出不同表达强度的c-myc阳性细胞百分比，按下式计算切片内c-myc蛋白半定量值。c-myc蛋白半定量=(%+X1)+(%X2)+(%+X3)。, 百拇医药
2 结果
2.1 同一塑包块切割之切片上c-myc蛋白免疫组化染色与常染色的同步观察 c-myc阳性细胞分布与常染色下原始细胞分布范围基本相当，均呈弥漫分布，原始细胞间c-myc染色强度不等。另外c-myc染色强阳性的细胞中偶见中、晚幼粒细胞，位于小梁旁区。
2.2 治疗前AML骨髓切片上c-myc蛋白半定量值与疗效关系 见附表。8例AML骨髓切片c-myc半定量值平均100(60～152)，其中例1、例2 c-myc值较高，治疗后未缓解，其余6例化疗后均有不同程度缓解。
附表 AML骨髓切片上c-myc基因表达及疗效 例别
myc阳性细胞(%)
myc蛋白
半定量值
, 百拇医药
疗效
总计
+
1
78
25
33
20
151
NR
2
, 百拇医药
45
25
5
15
80
CR
3
74
22
26
26
152
NR
4
, 百拇医药
48
36
10
2
60
CR
5
61
49
7
6
81
CR
6
, 百拇医药
53
40
8
5
71
CR
7
51
38
10
3
74
PR
8
, 百拇医药
66
32
23
11
101
PR
3 讨论 c-myc是参与细胞增殖与分化的调控基因，在增殖能力旺盛的细胞中呈高表达〔1〕。AML患者增殖旺盛的白血病细胞粘着力强，常分布于小梁旁区，不易被抽吸，加之AML患者骨髓常伴有不同程度的骨髓网硬蛋白纤维增生，使得抽取物涂片不能真实反映髓内主质结构与细胞分布的全貌，从而影响了c-myc蛋白的检测水平。故骨髓活检标本就显得尤为重要。近年来，在骨髓切片上进行癌基因蛋白检测时有报道〔4〕，但均采用石蜡包埋或冰冻切片。石蜡包埋的缺点是同一患者一次取材之活检块必须纵向分割为二，一半作塑包进行常规染色，供组织学检查用；另一半石蜡包埋供免疫组化检测用，无法进行常规染色与免疫组化染色的同步观察；而冰冻切片上虽能进行部分免疫组化染色，但切片主质内的组织构型和细胞形态模糊，难以准确判定恶性细胞的来源与标记物反应。而骨髓塑包切片就能避免上述弊端。
参考文献
1 Blick M,Westin E,Gutterman J,et al.Oncogene expression in human leukemia.Blood,1984,64:1234～1239
2 浦权，编著.骨髓活检病理学.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993.14
(1998-12-27 收稿), http://www.100md.com